Khảo sát hoạt tính độc tế bào của cao chiết lá Xạ đen (Ehretia asperula Zoll. &Mor) ở Hòa Bình .pdf

NTTU-NCKH-04 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ NĂM 2020 - 2021 Tên đề tài: Khảo sát hoạt tính độc tế bào cao chiết Xạ đen (Ehretia asperula Zoll & Mor.) Hịa Bình Số hợp đồng: 2021.01.92 /HĐ-KHCN Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Linh Tuyền Đơn vị công tác: Khoa Dược – Trường Đại học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: Tháng 05 năm 2021 đến tháng 01 năm 2022 TP Hồ Chí Minh, ngày 15 tháng 05 năm 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ NĂM 2020 - 2021 Tên đề tài: Khảo sát hoạt tính độc tế bào cao chiết Xạ đen (Ehretia asperula Zoll & Mor.) Hịa Bình Số hợp đồng: 2021.01.92 /HĐ-KHCN Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Linh Tuyền Đơn vị công tác: Khoa Dược – Trường Đại học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: Tháng 05 năm 2021 đến tháng 01 năm 2022 Các thành viên phối hợp cộng tác: STT Họ tên Chuyên ngành Cơ quan cơng tác Bùi Hồng Minh Dược liệu Khoa Dược ĐH Nguyễn Tất Thành Ký tên MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH i DANH MỤC BẢNG ii TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU iii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 THỰC VẬT HỌC 1.1.1 Vị trí phân loại thực vật học 1.1.2 Đặc điểm họ Vòi voi (Boraginaceae) 1.1.3 Đặc điểm chi Ehretia P Browne 1.1.4 Đặc điểm loài Ehretia asperula Zoll et Mor 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.2.1 Thành phần hóa học số lồi thuộc chi Ehretia 1.2.2 Thành phần hóa học loài Ehretia asperula 11 1.3 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI Ehretia 12 1.3.1 Chống oxy hóa 12 1.3.2 Kháng khuẩn 12 1.3.3 Kháng viêm, chống dị ứng 13 1.3.4 Hạ đường huyết 13 1.3.5 Độc tế bào, chống khối u 13 1.3.6 Làm lành vết thương 14 1.4 CÔNG DỤNG 14 1.5 SÀNG LỌC HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ IN VITRO 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 18 2.2 DUNG MƠI, HĨA CHẤT, DỤNG CỤ 18 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.3.1 Định danh mẫu thực vật 19 2.3.2 Giải trình tự ADN 20 2.3.3 Phân tích sơ thành phần hóa thực vật 22 2.3.4 Chiết cao thử sinh học 23 2.3.5 Sàng lọc hoạt tính kháng ung thư in vitro 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 25 3.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT HỌC 25 3.1.1 Khảo sát đặc điểm hình thái 25 3.1.2 Bóc tách biểu bì Xạ đen 28 3.1.3 Vi phẫu 29 3.1.4 Vi phẫu cuống Xạ đen 31 3.1.5 Soi bột Xạ đen 32 3.1.6 Vi phẫu thân 34 3.1.7 Soi bột thân Xạ đen 36 1.3.8 Vi phẫu rễ 37 3.2 ĐỊNH DANH BẰNG PHƯƠNG PHÁP GIẢI TRÌNH TỰ ADN 39 3.3 SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA THỰC VẬT 40 3.4 SÀNG LỌC HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ IN VITRO 42 BÀN LUẬN 44 ĐỊNH DANH DƯỢC LIỆU 44 SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA THỰC VẬT 44 SÀNG LỌC HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ IN VITRO 44 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 4.1 KẾT LUẬN 46 4.2 ĐỀ NGHỊ 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 PHỤ LỤC 52 DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Hình ảnh mặt đất mẫu Ehretia Asperula 25 Hình 3.2 Hình ảnh (mặt mặt dưới) mẫu Ehretia asperula 26 Hình 3.3 Đặc điểm hoa mẫu Ehretia Asperula 27 Hình 3.4 Quả hạch mẫu Ehretia Asperula 28 Hình 3.5 Bóc tách biểu bì Xạ đen 29 Hình 3.6 Vi phẫu mẫu Ehretia Asperula: A-Tổng quát, B-Sơ đồ, C-Chi tiết 31 Hình 3.7 Vi phẫu cuống mẫu Ehretia Asperula: A-Tổng quát, B-Sơ đồ, C-Chi tiết 32 Hình 3.8 Một số cấu tử có bột Ehretia Asperula 33 Hình 3.9 Vi phẫu thân mẫu Ehretia Asperula: A-Tổng quát, B-Sơ đồ, C-Chi tiết 35 Hình 3.10 Một số cấu tử bột thân Ehretia Asperula 36 Hình 3.11 Vi phẫu thân mẫu Ehretia Asperula: A-Tổng quát, B-Sơ đồ, C-Chi tiết 38 Hình 3.12 Kết điện di mẫu DNA ly trích sản phẩm PCR 39 Hình 3.13 Khả gây độc tế bào mẫu, chứng dương tế bào MDA-MB231………………………………………………………………………………… 43 i DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Kết tra cứu khóa phân loại thực vật mẫu 28 Bảng 3.2 Kết sơ thành phần hóa thực vật Xạ đen 41 Bảng 3.3 Kết hoạt tính độc tế bào MDA-MB-231 mẫu thử 42 Bảng 3.4 Kết hoạt tính độc tế bào MDA-MB-231 đối chứng dương Doxorubicin 42 ii TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU STT Kết quà đạt Công việc thực Kết hợp định danh phương pháp thực vật học giải trình tự gen, xác Thu hái định danh đối tượng nghiên cứu nhận mẫu Xạ đen thực nghiên cứu loài Ehretia asperula Zoll & Mor Khảo sát đặc điểm thực vật học Sơ hóa thực vật Xạ đen Hịa Bình Chiết xuất, đánh giá độc tính tế bào STT Sản phẩm đăng ký Báo cáo tổng kết Bài cáo đăng tạp chí khoa học Mơ tả cấu tạo giải phẩu rể, thân, Bảng tổng hợp thành phần hóa thực vật lồi Ehretia asperula Zoll & Mor Cao chiết nước, cồn dạng sệt Số liệu đánh giá hoạt tính độc tế bào ung thư vú người MBA-MB-231 cao nước, cao cồn với mẫu đối chứng dương Doxorubicin Sản phẩm đạt Cuốn báo cáo tổng kết Bài báo gửi tạp chí KHCN Trường Đại học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: Tháng 05 năm 2021 đến tháng 01 năm 2022 Thời gian nộp báo cáo: Tháng 06 năm 2022 iii MỞ ĐẦU Trong năm gần đây, tỷ lệ mắc bệnh ung thư ngày gia tăng mức đáng báo động giới Việt Nam Theo Tổ chức Y tế Thế giới, ung thư nguyên nhân tử vong hàng đầu tồn cầu, ước tính có khoảng 1/6 trường hợp tử vong ung thư Trong năm 2018 có khoảng 9,6 triệu ca tử vong ung thư Khoảng 70% trường hợp tử vong ung thư xảy nước có thu nhập thấp trung bình Phần lớn ca tử vong ung thư nguy hàng đầu thói quen chế độ ăn uống béo phì, ăn trái rau quả, lười vận động, sử dụng thuốc rượu Trong thuốc yếu tố nguy hàng đầu nguyên nhân gây khoảng 22% ca tử vong ung thư Các bệnh nhiễm trùng gây ung thư, chẳng hạn viêm gan virus HPV, nguyên nhân tới 25% trường hợp ung thư nước thu nhập thấp trung bình Phần lớn trường hợp chẩn đoán phát muộn Chỉ có khoảng 30% quốc gia thu nhập thấp có dịch vụ điều trị so với 90% quốc gia thu nhập cao Tác động kinh tế bệnh ung thư đáng kể ngày gia tăng Tổng chi phí kinh tế hàng năm cho bệnh ung thư năm 2010 ước tính khoảng 1,16 nghìn tỷ la Mỹ [2] Theo thống kê năm 2018, Việt Nam có khoảng 165 nghìn ca ung thư khoảng 115 nghìn ca tử vong ung thư năm Tỷ lệ tử vong ung thư chuẩn hóa theo độ tuổi Việt Nam 104 100.000 người, xếp thứ 57 toàn cầu [2] Việc điều trị ung thư tiến hành phương pháp đặc trưng phẫu thuật, xạ trị, hóa trị, … nhiên chi phí lớn, trở thành gánh nặng cho số bệnh nhân có hồn cảnh khó khăn nên ngày xu hướng điều trị bệnh ung thư sử dụng dược liệu Dược liệu nguồn nguyên liệu dễ kiếm, chi phí rẻ, có tác dụng tốt tác dụng không mong muốn [1] Đến nay, nhiều hợp chất thiên nhiên sản phẩm tổng hợp, bán tổng hợp từ hợp chất tự nhiên sử dụng cách hiệu việc điều trị, phòng ngừa bệnh ung thư bệnh tật khác giúp người chống lại bệnh tật, nâng cao sức khỏe cộng đồng Nhiều loại thuốc chữa trị ung thư sử dụng hoạt chất phân lập từ tự nhiên nhóm hợp chất vinca alkaloid vinblastine, vincristine phân lập từ Dừa cạn (Catharanthus roseus, họ Trúc đào - Apocynaceae), paclitaxel (Taxol) diterpenoid phân lập từ lồi Thơng đỏ Taxus brevifolia (Taxaceae) hay số hợp chất khác podophyllotoxin, camptothecin, berbamine, beta-lapachone, acid betulinic, colchicine, curcumin, daphnoretin, ellipticine,… dẫn xuất bán tổng hợp chúng vinflunine, docetaxel (Taxotere), Cùng với phát triển cơng nghệ tổng hợp hóa dược tạo biệt dược, nhà khoa học cố gắng tìm hiểu, khám phá tác dụng độc tế bào ung thư hoạt tính sinh học khác hợp chất có nguồn gốc từ nhiều lồi thực vật khác [3] Việt Nam nằm trung tâm Đơng Nam Á với 3/4 diện tích đồi núi, thuộc khu vực khí hậu nhiệt đới gió mùa có hai mùa rõ rệt thay đổi theo địa hình Lượng mưa năm vào khoảng 1200 - 2800 mm với độ ẩm tương đối cao Với đặc thù khí hậu thiên nhiên vậy, Việt Nam có hệ thực vật phong phú đa dạng với 12.000 lồi, có 3.200 lồi thực vật sử dụng làm thuốc Y học dân gian; mở tiềm nghiên cứu hợp chất tự nhiên từ loài thực vật Việt Nam [3] Cây Xạ đen theo cách gọi tên dân tộc Mường Hịa Bình thực tế gồm số khác như: Celastrus hindsii, Ehretia asperula, Ehretia dentata… có tác dụng chữa bệnh liên quan đến ung bướu thành phần chủ yếu thuốc gia truyền gồm 30 vị khác Việc sử dụng thuốc cổ truyền nhiều năm trước cho kết tương đối khả quan [4] Sử dụng Xạ đen để chữa bệnh ung thư ngày cành phổ biến Việt Nam Tuy nhiên thực tế, người dân thường nhầm lần hai loài Xạ đen Celastrus hindsii Benth Ehretia asperula Zoll & Mor Cho đến nay, có 20 báo cáo nước nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý Xạ đen Celastrus hindsii, nhiều nghiên cứu hoạt tính độc tế bào dịng tế bào ung thư khác lồi [1], [5-7] Mặt khác, nghiên cứu Xạ đen Ehretia asperula cịn hạn chế, có vài tài liệu cơng bố, thành phần hóa học tác dụng dược lý mơ hồ Do đề tài tiến hành với mục tiêu sau: - Thu hái định danh đối tượng nghiên cứu - Sơ thành phần hóa thực vật - Chiết xuất, đanh giá hoạt tính độc tế bào ... KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ NĂM 2020 - 2021 Tên đề tài: Khảo sát hoạt tính độc tế bào cao chiết Xạ đen (Ehretia asperula Zoll & Mor.) Hịa Bình Số hợp đồng: 2021.01.92 /HĐ-KHCN Chủ... nghiên cứu nhận mẫu Xạ đen thực nghiên cứu loài Ehretia asperula Zoll & Mor Khảo sát đặc điểm thực vật học Sơ hóa thực vật Xạ đen Hịa Bình Chiết xuất, đánh giá độc tính tế bào STT Sản phẩm đăng... 28 Bảng 3.2 Kết sơ thành phần hóa thực vật Xạ đen 41 Bảng 3.3 Kết hoạt tính độc tế bào MDA-MB-231 mẫu thử 42 Bảng 3.4 Kết hoạt tính độc tế bào MDA-MB-231 đối chứng dương Doxorubicin