báo cáo thực hành hóa sinh lâm sàng 2

Mục đích- Xác định nguyên nhân khi có phosphatase kiềm cao ALP- Phát hiện nguyên nhân bệnh của gan và ống mật do chèn ép- Biết tình trạng lạm dụng rượu mạn tính- Mặc dù mô thận là nơi có

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH KHOA ĐIỀU DƯỠNG – KỸ THUẬT Y HỌC

BỘ MÔN XÉT NGHIỆM

-

-BÁO CÁO THỰC HÀNH HÓA SINH LÂM SÀNG 2

BÀI 1:ĐỊNH HOẠT ĐỘ GOT- GPT

I Tổng quan:

- Ở người khoẻ mạnh, mức độ ALT và AST trong máu thấp Khi gan bịviêm hay tổn thương, ALT và AST được phóng thích vào máu, thường tăngtrước khi xảy ra các triệu chứng, tăng rõ ràng nhất là khi có tổn thươnggan, chẳng hạn như vàng da

- ALT được tìm thấy chủ yếu trong gan, do đó nó khá đặc hiệu cho tổnthương gan

- Xét nghiệm ALT và AST có ích nhất trong việc phát hiện các loạithuốc hoặc các chất khác gây độc cho gan, mức độ tăng nhẹ và tăng vừacũng có thể được nhìn thấy trong các nguyên nhân gây ảnh hưởng đến các

bộ phận khác của cơ thể

II Mục địch:

- Phát hiện tổn thương gan, viêm gan

- Theo dõi diễn tiến bệnh với điều trị

- Tỷ lệ AST/ALT có thể được sử dụng để phân biết giữa các nguyên nhân khác nhau gây ra tổn thương gan

III Nguyên tắc:

- Sơ đồ phản ứng ALT:

L-Alanine + 2-Oxoglutarate Pyruvate+ L-Glutamate

Pyruvate + NADH + H+ L-Lactate + NAD+

Sơ đồ phản ứng AST:

L-Aspartate + 2-Oxoglutarate Oxaloacetate + L- GlutamateOxa;oacetate + NADH+ H + L-Malate + NAD+

- Sự giảm độ hấp thu khi NADH bị biến đổi thành NAD+, tỷ lệ với hoạt

độ của ALT và AST trong mẫu thử, được đo ở quang phổ kế ở bước sóng 340nm

IV Quy trình kỹ thuật:

ASTMDH

Huyết thanh hoặc huyết tương đựng trong ống heparin

4 Ổn định, bảo quản, an toàn thận trọng:

- Các thành phần phải được bảo quản ở 2-8ºC và tránh xa ánh sáng

- Thuốc thử ổn định cho đến thời hạn sử dụng được ghi trên nhãn của

bộ thuốc thử khi được lưu trữ và sử dụng theo đúng qui định

- Khi sử dụng chú ý tránh vây vào da hoặc mắt, rữa kỹ vùng bị ảnh hưởng với nhiều nước

- Với hệ số lý thuyết: Hoạt độ ALT (IU/L) =ΔA/min x 1746

- 1746 là hệ số factor (K) do nhà sản xuất cung cấp

- Với đa hiệu chuẩn huyết thanh :

Hoạt độ ALT (U/L) =

- Ngưỡng tiến tính đến 350 IU/L Nếu ΔA/min > 0,200 thì pha loãng mẫu thử với nước muối sinh lý và thực hiện lại kết quả, kết quả này nhân với hệ số pha loãng

V Giá trị sinh học của ALT và AST:

VI Ý nghĩa xét nghiệm:

- Mức độ AST, ALT rất cao (hơn gấp 10 lần bình thường) do viêm gan cấp tính, nhiễm virus

- Trong viêm gan mạn, mức AST và ALT thường không tăng cao, bình thường hoặc tăng nhẹ

- Các nguyên nhân làm ALT và AST tăng: do sử dụng thuốc, các chất gây độc gan, tắc nghẽn mật, xơ gan, khối u trong gan, cơn đau tim,

- AST và ALT thường được thực hiện cùng nhau, như là một phần của bảng thử nghiệm về chức năng gan

Hoạt độ GOT = 22,993 UI/L

Hoạt độ GOT = 31,817 UI/L

Hoạt độ GOT = 34,314 UI/L

BÀI 2: ĐỊNH HOẠT ĐỘ AMYLASE

I Tổng quan:

- α-amylase là enzyme hydrolase, sản xuất chủ yếu ở tuỵ, tuyến nước bọt, ngoài ra còn có ở gan, niêm mạc ruột non, buồng trứng, vòi trứng…

- Được định lượng thường qui trong chuẩn đoán nghi ngờ viêm tuỵ cấp

- Hai cơ quan chính taọ ra amylase là tuỵ và tuyến nước bọt

II Mục đích:

- Chuẩn đoán và theo dõi viêm tụy cấp, các đợt cấp của viêm tụy mạn

và bệnh lú khác của tuyến tụy

- Theo dõi và điều trị các bệnh liên quan đến tuyến nước bọt và các bệnh lý khác

III Chỉ định xét nghiệm

- Trong trường hợp đau vùng thượng vị có nghi ngờ viêm tuỵ cấp

- Theo dõi bệnh nhân viêm tuỵ mạn

- Quai bị và viêm tuyến mang tai

 Lọ R2 Substrate:

Potassium thocyanate 900 mmol/L

Hoạt độ α- amylase (IU/L) = ΔA/min x3178

3178 là hệ số Factor do nhà sản xuất cung cấp

- Với đa hiệu chuẩn huyết thanh:

Hoạt độ α- amylase( IU/L) =

Giới hạn tuyến tính : 6-2000 IU/L

VI Giá trị sinh học:

- Khoảng tham chiếu :

 Huyết thanh/ huyết tương : 22-85 IU/L

 Nước tiểu 24h: 22-450 IU/24 giờ

- Mỗi phòng xét nghiệm nên có một giá trị tham chiếu riêng

VII Ý nghĩa xét nghiệm:

- Viêm tụy cấp amylase tăng cao 4-6 lần

- Tăng trong khoảng 12-72 giờ

- Về bình thường sau vài ngày

- Mức độ amylase trong nước tiểu giúp phát hiện các vấn đề của chức năng thận

- Amylase tăng cao trong các trường hợp sau:

 Tụy: viêm cấp , áp xe, ung thư

 Tuyến nước bọt: viêm

 Nhồi máu ruột, viêm phúc mạc

t120= 0,238

U4: t30= 0,202

T120= 0,243 Hoạt độ α – amylase = 88,839

BÀI 3: XÉT NGHIỆM GAMMA GLUTAMYL

TRANSFERASE

(GGT)

1 Mục đích

- Xác định nguyên nhân khi có phosphatase kiềm cao (ALP)

- Phát hiện nguyên nhân bệnh của gan và ống mật do chèn ép

- Mặc dù mô thận là nơi có nồng độ GGT cao nhat trong cơ thể

- Tổn thương gan cap tính hoặc ống dẫn mật : GGT tăng

- GGT nhạy cảm với những thay đổi chức năng gan

- GGT là men gan nhạy cảm trong việc phát hiện van đề ống mật

- Uống một lượng rượu nhỏ cũng tăng GGT

3 Nguyên tắc

L-G-Glutamyle-p-nitroamilide + Glycylglycine L-G-Glutamyl-glycylglycine +p-nitroamiline

- Tốc độ hình thành p-nitroamiline tỉ lệ với nồng độ của GGT trong mẫu

- Đo độ hap thụ quang b bước sóng 405nm

- Huyết thanh hoặc huyết tương chống đông EDTA

- Không uống rượu trước xét nghiệm 24h

- Heparin tạo độ đục trong hỗn hợp phản ứng

- Citrate, oxalate, fluoride làm giảm hoạt động GGT khoảng 10%

6 Quy trình kĩ thuật

Kỹ thuật MACRO Kỹ thuật MICRO

GGT

BÀI 4: XÉT NGHIỆM LDH (LACTATE

DEHYDROGENASE) PHƯƠNG PHÁP: KINETIC

1 Mục đích.

- Xác định hoạt độ enzym LDH trong huyết thanh để đánh giá tình trạng phá hủy môgặp trong một số bệnh lý như bệnh gan, tim, thiếu máu, tổn thương cơ, gãy xương,ung thư và nhiễm trùng như viêm màng não, viêm não, HIV

- LDH là một trong những chỉ dau giúp sàng lọc, theo dõi và điều trị một số loại ung thư

2 Tóm tắt

- LDH là một loại enzym được tìm thay trong hầu hết các tế bào của cơ thể, nhưng chỉ có một lượng nhỏ lưu hành trong máu

- LDH được phóng thích từ các tế bào vào máu khi các tế bào bị hư hỏng hoặc

bị phá hủ xét nghiệm LDH có thể được sử dụng như một dau hiệu chung của yyyyyyyyyyyyy y

- (IFCC-International Federation of Clinical Chemistry)

- LDH xúc tác phản ứng khử pyruvate thành lactate Hoạt độ của LDH được xác địnhbbi sự giảm độ hap thu của Coenzym NADH b bước sóng 340nm

4 Thuốc thử

- Thành phần thuốc thử

Lọ R1:

 Tris buffer pH:7.2 80mmol/L

 Sodium chloride 200 mmol/L

Kỹ thuật MACRO KỸ THUẬT MICRO

BÀI 5: XÉT NGHIỆM ALKALINE

- Ngoài ra, trong các khối u như b gan, ung thư tụy, ung thư phổi thì ALP tìm thay

- Đa số hoạt tính ALP b các cơ quan khác nhau bền với nhiệt

- ALP tham gia thủy phân các este phosphate trong môi trường pH kiềm

- Thời gian bán hủy của ALP là 7-10 ngày

3 Nguyên tắc

- Trong môi trường kiềm, ALP tham gia thủy phân nitrophenyl phosphate thành nitrophenol và phosphate:

p-ALPp-nitrophenyl phosphate —————> p-nitrophenyl + phosthate

(môi trường kiềm)

- Đo độ hap thụ b bước sóng 405nm

4 Thuốc thử

 Lọ R1: BUFFER

- DEA(Diethanolamine) buffer pH 10 (25℃ 1mol/L)

- Magnesium Chlorine 0.5 mmol/L

- Với hệ số K (lý thuyết): IU/L=(Abs/min) x 5450

- Với huyết thanh chuẩn (serum multicalibrator)

- Tính ổn định của nồng độ natri máu là một yếu tố cơ bản giúp duy trì hằng định nội môi trong cơ thể

- Bình thường, cơ thể sử dụng natri từ khẩu phần ăn, lượng natri dư thừa sẽ được bài tiếtqua nước tiểu

 Mục đích

- Đánh giá tình trạng điện giải của cơ thể: mat cân bằng Natri hoặc các rối loạn kết hợp với bat thường nồng độ Natri

- XN này cùng với các chat điện giải khác giúp xác định một sự mat cân bằng điện giải

có liên quan đến các bệnh thận, tuyến thượng thận, não, phổi, gan, tim, tuyến giáp

Ammonium thioglycolat: 550mmol/L

Sodium standard: Sodium (Na+): 150 mmol/L

2 Mẫu thử: Huyết thanh được làm ngay trong vòng 24h sau khi lay hoặc 2 tuần khi bảo

quản b ngăn đông

3 Tiến hành:

Bước 1: Tủa Natri dưới dạng muối sodium magnesium uranyl

Trắng (B) Chuẩn (S) Mẫu thử (U) Thuốc thử R1

- Cẩn thận lay các ống ra tránh làm vẩn đục, dùng pipette hút phần dịch nổi bên trên.

Bước 2: Phản ứng sinh màu

Trắng (B) Chuẩn (S) Mẫu thử (U) Thuốc thử R1 (Precipitating

solution) 20 µl

Dung dịch nổi sau ly tâm

(supernatant) 20µl 20µlThuốc thử R2 1000µl 1000µl 1000µl

- Trộn, ủ khoảng 5 phút b 37℃ hoặc 5 phút b 25℃, sau đó đọc Asb

- Giảm nồng độ natri máu

- Giảm lượng natri cung cap trong chế độ ăn

- Do mat natri quá mức: nôn, tiêu chảy, bỏng, ra nhiều mồ hôi, nguyên nhân b thận (dùng thuốc lợi tiểu, ĐTĐ, tổn thương ống thận, bệnh Addison), chọc dịch cổ chướng liên tiếp

- Giảm natri máu do hòa loãng: truyền quá nhiều dịch (dịch không có chat điện giải), suy tim mat bù, suy thận, HC thận hư, xơ gan, suy thượng thận, HC tiết hormon chốngbài niệu, tăng tiết yếu tố gây thải natri qua nước tiểu

- Tăng nồng độ natri máu

- Nguyên nhân chính thường gặp: mat nước, đái tháo nhạt, hôn mê tăng thẩm thau, cường aldosterol, cường cortisol, gắng sức quá mức, điều trị bằng corticoid, truyền quá nhiều dịch muối, khẩu phần ăn chứa nhiều muối nhat là b bệnh nhân suy giảm chức năng thận

- Nồng độ natri nước tiểu được đánh giá gắn với nồng độ trong máu

- Giảm natri nước tiểu có thể thay trong mat nước, suy tim sung huyết, bệnh gan, hội chứng thận hư.

- Tăng natri nước tiểu: dùng thuốc lợi tiểu hoặc bệnh Addison

Kết quả đo của nhóm

BÀI 9: XÉT NGHIỆM CREATININE Phương pháp: Picric acid/Fixed time kinetic

1 MỤC ĐÍCH

Đánh giá chức năng lọc cầu thận, theo dõi tiến triển của thận

2 TÓM TẮT

- Sự chuyển đổi giữa phosphocreatine và creatine là 1 quá trình đặc trưng của sự co

cơ Tỉ lệ creatine tự do trong cơ (khoảng 1-2%/ngày) biến đổi thành sản phẩm thải

tự nhiên và không thay đổi, đó chính là creatinine Creatinine có mặt trong các dịch cơ thể, dịch bài tiết và được lọc hoàn toàn bbi cầu thận

- Do đó việc sản xuat creatinine hàng ngày phụ thuộc vào khối lượng cơ và được bàitiết hoàn toàn qua thận

- Creatinine có thể đo được trong máu và trong nước tiểu, từ đó có thể tính độ thanh thải creatinine (Creatinine clearance) để đánh giá chức năng lọc của thận

3 NGUYÊN TẮC

Phản ứng màu của creatinine (phản ứng Jaffe) với alkalin picrate được đo động học b bước sóng 490 nm (490 – 510 nm) Cường độ màu hình thành trong thời gian cố định (fixed time) tỉ lệ thuận với lượng creatinine có trong mẫu thử

4 THUỐC THỬ

- Lọ R1:

+ Disodium phosphate 6,4 mmol/L

+ Sodium hydroxide 150 mmol/L

- Lọ R2:

+ Sodium dodecyl sulfate 0,75 mmol/L

+ Acid picric 4 mmol/L

+ pH 0,4

- Lọ R3:

+ Creatinine standard 2 mg/dL (177 µmol/L)

5 MẪU THỬ

- Huyết thanh không tiêu huyết hoặc huyết tương với kháng đông heparin

- Nước tiểu thu thập chính xác 4, 12 hay 24h: pha loãng 1/20 với nước cat

- Creatinine bền trong mẫu thử 24 giờ b 2-8 C Nếu để đông thì có thể giữ được lâu o

Mẫu thử(A)

Trắng(B)

Chuẩn(S)

Mẫu thử(A)

Nước cat 100

Ucrea: nồng độ creatinine trong nước tiểu (mg/dl, )

Pcrea: nồng độ creatinine trong huyết tương (mg/dl, )V: thể tích nước tiểu bài tiết trong 24 giờ (ml)BSA (body surface area): diện tích bề mặt cơ thể (m )2

+ Trong trường hợp khó thu thập mẫu nước tiểu 24 giờ, có thể sử dụng công thức Cockroft-Gault:

K = 1 (đối với nam)

K = 0,85 (đối với nữ)Kết quả mẫu nước tiểu nhân với hệ số pha loãng: 20

- Giới hạn khoảng đo:

Crea= 264,4 mg/dL

MCrea= 5,288 gTâm:

Crea= 155,2 mg/dL

MCrea= 3,104 gTrúc:

Trong nước tiểu mg/kg/24 giờ

GFR (Glomerular filtration rate) mL/phút

Người lớn < 40 tuổi 120 (100 – 140)

Người lớn > 40 tuổi tăng 1% mỗi năm

Mỗi phòng xét nghiệm nên xây dưng giá trị tham chiếu riêng

9 ĐỘ THANH THẢI CREATININE

 Độ thanh thải creatinin tăng đôi khi có thể được nhìn thay trong khi mang thai, tập thể dục và có chế độ ăn nhiều thịt, mặc dù thử nghiệm này không thường được sử dụng để giám sát các nguyên nhân này

Kết quả đo của nhóm

Giới tinh: Nam

Hệ số thanh thải creatinine

út

Độ lọc cầu thận (Cockcroft-Gault):

Kết quả hệ số thanh thải creatinine và độ lọc cầu thận có sự chênh nhau lớn là do nước tiểu được sử dụng ở đây là nước tiểu giữa dòng không phải nước tiểu 24h nên kết quả chưa được chính xác

BÀI 9: ĐỊNH LƯỢNG MICROALBUMIN - NƯỚC

TIỂU

1 MỤC ĐÍCH

Định lượng microalbumin nước tiểu hay còn gọi là albumin nước tiểu vi lượng xuathiện khi thận rò rỉ một lượng nhỏ albumin vào trong nước tiểu Những chỉ định xétnghiệm: Sàng lọc b bệnh nhân bị các bệnh mạn tính như đái tháo đường, tăng huyết áp

để đánh giá nguy cơ tổn thương thận và suy thận tiến triển

2 TÓM TẮT

- Bình thường thận không đào thải protein vào nước tiểu, có hai cơ chế thực hiện quátrình này là: màng đáy cầu thận giữ hầu hết protein lớn trong lòng mạch và nhữngprotein nhỏ hơn có thể được tái hap thu hoàn toàn b ống thận

- Protein xuat hiện trong nước tiểu khi có tổn thương cầu thận hoặc ống thận Tronghầu hết các trường hợp cả albumin và creatinine được đo trong nước tiểu bat chợt vàtính tỉ lệ albumin/creatinine

- Một số yếu tố có thể làm sai lệch chỉ số xét nghiệm mà bạn cần chú ý trước khi thựchiện như: máu trong nước tiểu, các loại thuốc đang dùng, nhiễm trùng đường tiết niệu,sốt,

3 NGUYÊN TẮC

- Xét nghiệm Microalbumin là xét nghiệm đo độ đục miễn dịch sử dụng kháng thể đadòng kháng albumin người Khi mẫu được trộn với thuốc thử, albumin trong mẫu kếthợp với kháng thể kháng albumin người trong thuốc thử tạo thành khối ngưng kếtkhông tan, làm tăng độ đục trong dung dịch Mức độ của độ đục tỉ lệ với nồng độalbumin trong mẫu

- Đo điểm cuối tại bước sóng 340 nm

4 THUỐC THỬ

- Thành phần thuốc thử

+ Lọ R1 (Dung dịch đệm)

• Nước muối, sodium azide 0.95 g/L

+Lọ R2 (Anti-Albumin)

• Kháng thể đa dòng kháng albumin người

• Đệm phosphate, nước muối

+ Sử dụng có bảo vệ đầy đủ (áo choàng, găng tay, kính)

+ Trong trường hợp tiếp xúc với da hoặc mắt, phải rửa kỹ với nước nhiều lần và tìm tưvan y tế

+ Không hút pipette bằng miệng

5 MẪU THỬ

- Nước tiểu 24 giờ hoặc ba mẫu nước tiểu bat chợt được lay trong tuần

- Mẫu ổn định 2 ngày b nhiệt độ phòng thí nghiệm, 14 ngày b 2-8oC

- Nên ly tâm nước tiểu trước khi sử dụng

- Nhận xét: Kết quả của 2 ống U của cùng 1 mẫu thử cho thay các kết quả có độ tuyến

tính nằm trong khoảng gần bằng nhau, kết quả nằm trong giới hạn bình thường

- Nguyên nhân sai lầm:

+ Ống nghiệm chưa sạch

+ Hạn sử dụng thuốc thử đã hết

+ Sai số do dụng cụ: pipette, máy đo

+ Thao tác thực hiện không chuẩn

+ Thời gian ủ chưa đủ hoặc vượt quá thời gian

9 GIÁ TRỊ SINH HỌC

- Nước tiểu bat chợt:

+ Người lớn: < 20 mg Alb/g creatinine hoặc 2,26 g Alb/mol creatinine

+ Trẻ nhỏ từ 3 đến 5 tuổi: < 20 mg/L Alb hoặc < 37 mg Alb/g creatinine

- Nước tiểu 24h: < 20 mg/L hoặc < 30 mg/24h

10 CHỈ ĐỊNH XÉT NGHIỆM

- Những trường hợp mắc bệnh đái tháo đường hoặc huyết áp cao

- Người bệnh có nguy cơ cao hoặc xuat hiện dau hiệu nghi ngờ thận đang bị tổnthương

• Sau khi ăn nhiều thực phẩm giàu protein.

• Nhiễm trùng đường tiết niệu

• Có tình trạng mat kiểm soát glucose máu nghiêm trọng

• Có tình trạng thay đổi và dao động trong kết quả xét nghiệm microalbumin nướctiểu qua các ngày, theo nhịp ngày đêm trên cùng một bệnh nhân

BÀI 10: TỔNG PHÂN TÍCH NƯỚC TIỂU – XÉT NGHIỆM HEROIN TRONG NƯỚC

+ Quá trình tái hap thu các chat từ ống thận vào máu

+ Quá trình bài tiết một số chat từ máu vào ống thận.

- Xét nghiệm nước tiểu là xác định và các đo lường một số sản

phẩm phụ của quá trình chuyển đổi bình thường và bat thường, các tế bào, các mạnh vỡ tế bào và vi khuẩn trong nước tiểu.

- Một số bệnh có thể được chuẩn đoán b giai đoạn đầu của nó

bằng cách phát hiện những bat thường trong nước tiểu.

- Một xét nghiệm nước tiểu hoàn toàn gồm 3 giai đoạn thử

nghiệm riêng biệt:

+ Kiểm tra trực quan

+ Kiểm tra hoá học

+ Soi kính hiển vi

- Ngày nay, một phân tích nước tiểu thường qui bao gồm khảo sát

trực quan và các xét nghiệm hoá học Nếu có phát hiện bat thường, mẫu nước tiểu có thể được kiểm tra thêm dưới kính hiển vi.