Báo Cáo Thực Hành Hoá Sinh Học.pdf

Kết quả và thảo luận: Kết quả thí nghiệm ml Nước cất ml Thuốc thử Biure ml Lượng protein mg...  Sau 30 phút, đem các dung dịch đi so màu bằng máy so màu ở bước sóng 540nm, thu được kết

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH – MÔI TRƯỜNG

MỤC LỤC

BÀI THỰC HÀNH 1: 2

BÀI THỰC HÀNH 2: 6

BÀI THỰC HÀNH 3: 14

màu xanh tím có độ hấp thụ cực đại ở bước sóng 540nm Cường độ màu của phản ứng tỉ tệ với số lượng liên kết peptit (- CO – NH -).

2 Nguyên liệu và hóa chất:

 Albumin 1%

 Dung dịch protein (lòng trắng trứng)

 cho vào bình định mức 1 lít, cho thêm 30g NaOH 30%, 2g KI và dẫn nước đến vạch

 ngấn Dung dịch giữ trong lọ sẫm màu, đậy bằng nút cao su

 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu: Dùng 4ml lòng trắng trứng gà cho vào bình định mức50ml, dùng NaCl 0,9% dẫn đến vạch định mức

 Lập đồ thị chuẩn: lấy 6 ống nghiệm, đánh số từ 1-6, sau đó cho vào từng ốngnghiệm các chất tham gia phản ứng

 Lắc đều, để yên các ống nghiệm trong 30 phút ở nhiệt độ phòng So màu dungdịch trong các ống ở bước sóng 540nm, ghi mật độ quang tương ứng với cácống, xây dựng đồ thị chuẩn.

III Kết quả và thảo luận:

Kết quả thí nghiệm

(ml) Nước cất (ml)

Thuốc thử Biure (ml)

Lượng protein (mg)

 Sau 30 phút, đem các dung dịch đi so màu bằng máy so màu ở bước sóng 540nm, thu được kết quả như bảng dưới:

STT ống nghiệm OD (mật độ quang) Lượng protein (mg)

 Xây dựng sơ đồ đường chuẩn dựa trên số liệu thu được trong bảng trên:

0 0.1

LƯỢNG PROTEIN (mg)

Phương trình đường chuẩn Albumin là: y = 0,0483x + 0,0001

Trong đó: y là mật độ quang; x là lượng protein.

Hàm lượng protein trong 1ml mẫu phân tích là :

Cu 2 O +Fe 2 (SO 4 ) 3 + H 2 SO 4 à 2CuSO 4 + 2 FeSO 4 + H 2 0

Fe 2+ sinh ra có tính khử lại tác dụng với KMnO 4 là chất oxi hoá nên dùng KMnO 4

để chuẩn độ Fe 2+ trong môi trường acid:

10FeSO 4 + KMnO 4 + 8H 2 SO 4 à K 2 SO 4 +2MnSO 4 +5Fe 2 (SO 4 ) 3 +8H 2 0

Dựa vào lượng KMnO 4 sử dụng ta có thể tính được hàm lượng Cu 2 O và từ đó tính được lượng đường khử trong dung dịch bằng cách tra bảng tỉ lệ giữa dung dịch KMnO 4 và đường khử của Bertrand.

2 Chuẩn bị hóa chất

 Thuốc thử Fehling

+ Fehling 1: 10g CuSO 4 5H 2 0 trong 250ml nước cất.

+ Fehling 2: 37.5 NaOH trong nước cất, cho 12.5ml muối Kali Natri Tactrat vào Khuấy đều và dẫn nước đến vạch 250ml.

 Dung dịch Fe 2 (SO 4 ) trong H 2 SO 4 (250ml): 12,5g Fe2(SO 4 ) 3 + 5g H 2 SO 4 à Thêm nước cất đến 250ml

 Dung dịch KMNO 4 1/30N (500ml): 0.53g KMnO4 à Hoà tan trong 500ml nước cất à Đựng trong bình tối màu và đạy kín.

 Dung dịch Pb(NO 3 ) 2 10%: 100g dung dịch

 Dung dich Na 2 SO 4 bão hoà

 Đun cách thuỷ 70-80°C trong 35 phút Kết tủa protein và các tạp chất bằng 5ml dung dịch chì nitrat Pb(NO 3 ) 2 10% Sau đó loại bỏ lượng chì dư bằng 5ml dung dịch

Na 2 HPO 4 bão hoà, chuyển toàn bộ hỗn hợp vào bình định mức 100ml để yên hỗn hợp

Hình 3: Lọc mẫu chuối và táo

Sau khi có dịch lọc của mẫu táo và chuối:

 Lấy 10ml dịch lọc (táo, chuối) cho vào bình tam giác.

 Thêm vào 10ml dung dịch fehling I và 10ml fehling II vào mỗi bình à Đun sôi 3 phút trên bếp có lưới amiăng

 Để nguội, lắng kết tủa à Rửa kết tủa bằng nước cất ấm đã được đun sôi, rửa nhiều lần cho đến khi lấy được lượng Cu 2 O.

 Hoà tan kết tủa đồng (I) oxit bằng cách cho những lượng nhỏ (5ml) dung dịch sắt (III) sunfat trong môi trường H 2 SO 4 và dùng đũa thuỷ tinh khuấy thật cẩn thận để hoà tan hoàn toàn kết tủa đồng oxit

 Chuẩn độ dung dịch thu được bằng KMnO 4 1/30N cho đến khi xuất hiện màu hồng nhạt bền khoảng 20-30 giây.

 Từ lượng KMnO4 1/30N dùng để chuẩn độ, tra Bảng 2.1 để suy ra lượng đường

có trong mẫu phân tích Song song làm thí nghiệm đối chứng bằng cách thaydung dịch đường bằng nước cất

Bảng 2.1 Tỉ lệ giữa KMnO 4 1/30N và lượng đường khử KMnO 4 1/30N Glucose(mg) KMnO 4 1/30N Glucose(mg)

Hình 1: Chuẩn độ KMnO4 trong mẫu táo

Hình 2: Chuẩn độ KMnO4 trong mẫu chuối

Hàm lượng đường khử:

X =

Trong đó:

X: hàm lượng đường khử tính theo %

không

V: thể tích pha loãng mẫu (100ml)

m: lượng mẫu đem phân tích

Enzyme có trong tế bào của các cơ thể sống, nhờ sự hiện diện của enzyme

mà các phản ứng sinh hóa trong cơ thể xảy ra rất nhanh, nhạy ở điều kiện sinh lýbình thường của cơ thể sống

Khảo sát hoạt tính của Enzim amylase.

 Amylase là hệ enzyme rất phổ biến trong thế giới sinh vật Các enzyme nàythuộc nhóm các enzyme thủy phân (hydrolase), chuyên xúc tác sự phân giải cácliên kết glycoside trong phân tử polysaccharide với sự tham gia của nước

 Cơ chất tác dụng của amylase là tinh bột và glycogen

 Sản phẩm thủy phân của amylase coa các thành phần đơn giản như maltose,glucose, dextrin…

Enzyme amylase có từ nhiều nguồn gốc: trong nước bọt, trong dịch tiếu hoá củanguòi và động vật, trong hạt nảy mầm, nấm mốc, nấm men, vi khuẩn

 Tuỳ theo tính chất và khả năng tác dụng, người ta phân biệt: α amylase, βamylase và γ amylase

 Kém bền dưới tác dụng của rượu ethylic, aceton.

Trong bài thí nghiệm chúng ta dùng phức hệ amylase của mầm lúa để khảo sát sựthủy phân dung dịch hồ tinh bột

 Dùng khoảng 200 hạt lúa nẩy mầm cho vào cối sứ, nghiền nhuyễn với 3-5mlnước cất Tiếp tục nghiền và thêm dần đến hết 50 ml nước cất để hòa tanenzyme Lọc dung dịch bằng giấy lọc Thu dịch lọc có chứa enzyme amylase.

 Mỗi thí nghiệm chuẩn bị 4 ống nghiệm cùng những hóa chất như bảng dưới, sau

dịch enzyme vào

3.1 Khảo sát nồng độ

Ống nghiệm 1 2 3 4

III Kết quả và thảo luận

 Dung dịch amylase thu được có hoạt tính xúc tác ít ổn định Nó thay đổi tùytheo vào điều kiện thí nghiệm và các yếu tố môi trường.

 pH tối thích của enzyme amylase mầm lúa trong bài TN là 6.5 ( theo lý thuyết

hãm là Cu2+