Báo cáo thực hành kiểm nghiệm vi sinh thực phẩm

Nội dung thực hiện Phân tích và đánh giá mẫu bằng phương pháp đếm khuẩn lạc dựa trên một số chỉ tiêu vi sinh: Coliforms và E.coli CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Khái quát về đặc điểm của

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM Ngành học : Công nghệ sinh học Giáo viên hướng dẫn : Ths Trương Phước Thiên Hoàng Ths Võ Trần Quốc Thắng Sinh viên thực : Nguyễn Tấn Tài - 20126347 Lê Tuyết Nhi - 20126325 Lê Xuân Lan - 20126419 Nguyễn Trần Danh – 20126214 Trần Quốc Cường – 20126199 Niên khóa : 2020 – 2024 TP Thủ Đức, tháng năm 2022 MỤC LỤC BÀI 1: ĐỊNH LƯỢNG COLIFORMS VÀ E COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Quy trình định lượng Coliforms phương pháp đếm khuẩn lạc – thực theo tiêu chuẩn quốc gia: TCVN:6848:2007 (ISO 4832:2007) 3.2 Quy trình định lượng E coli phương pháp đếm khuẩn lạc – thực theo tiêu chuẩn quốc gia: TCVN 7924-2:2008 (ISO 16649-2:2001) CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN BÀI ĐỊNH LƯỢNG COLIFORM VÀ E coli BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN .9 CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 13 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 16 BÀI 3: ĐỊNH TÍNH SALMONELLA 17 CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ 17 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 BÀI 4-5: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI KHUẨN HIẾU KHÍ VÀ TỔNG NẤM MEN-NẤM MỐC 22 CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ 22 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT BGBL: Brilliant Green Bile Broth Lactose BWP: Buffered Pepton Water DRBC: Dichloan Rose bengal Chloramphenicol Agar EC: E.coli medium EMB: Eosin Methylene Blue Agar HE: Hektoen Entric Agar KIA: Kliger Iron Agar MPN: Most Probable Number MR-VP: Glucose Phosphate PCA: Plate Agar RV: Rappaport-Vassiliadis Soya Pepton SPM: Saline Peptone Water TBX: Thạch tryton-mật-glucuronid TSA: Tryptone Soya Agar VRBL: Thạch lactoza mật độ trung tính tím tinh thể XLD: Xylone Lysine Desoxycholate DANH SÁCH HÌNH Hình 1.1 Đĩa petri nồng độ ghi nhận xuất khuẩn lạc điển hình đỏ tía Hình 2.1 Quy trình thực kiểm tra mật độ vi sinh theo phương pháp MPN Hình 2.2 Cấy mẫu vào canh LSB, nồng độ có ống lặp lại, ủ 37oC sau 48 Vi sinh vật tăng sinh nồng độ khác Hình 2.3 Cấy mẫu vào canh BGBL, nồng độ có ống lặp lại, ủ 37oC sau 48 Vi sinh vật tăng sinh nồng độ khác Hình 2.4 Cấy mẫu vào canh EC, nồng độ có ống lặp lại, ủ 44,5oC sau 24 Vi sinh vật tăng sinh nồng độ khác Hình 2.5 Khuẩn lạc mơi trường EMB Hình 3.1 10 g mẫu gan heo Hình 3.2 Mẫu mơi trường BPW Hình 3.3 0,1 ml dịch tăng sinh RVS Hình 3.4 Khuẩn lạc mơi trường XLD Hình 3.5 Khuẩn lạc mơi trường HE Hình 4.1 10g mẫu cá khơ Hình 4.2 Khuẩn lạc đĩa thứ Hình 4.3 Khuẩn lạc đĩa thứ Hình 4.4 Ở độ pha lỗng 10-1 Hình 4.5 Ở độ pha lỗng 10Hình 4.6 Ở độ pha lỗng 10-3 BÀI 1: ĐỊNH LƯỢNG COLIFORMS VÀ E COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ Ở nước ta việc chợ diễn ngày vừa truyền thống vừa để phục vụ nhu cầu người dân, đặt vấn đề thực phẩm chợ có chắn phù hợp an tồn thực phẩm Hằng năm có hàng trăm vụ việc đưa lên báo đài vệ sinh an toàn thực phẩm chứng tỏ thực phẩm chợ nhiễm vi sinh gây bệnh cho người Ở đề cập đến ăn phổ biến đến người trà sữa, người sử dụng chưa an tồn thực phẩm cho sử dụng Do cần phải đánh giá mức độ vệ sinh an toàn thực phẩm đưa khuyến cáo cho người, báo cáo “ Định lượng Coliforms E.coli phương pháp đếm khuẩn lạc” để đánh giá mức độ vệ sinh an toàn thực phẩm với mẫu kiểm tra trà sữa trân châu chợ Mục tiêu đề tài Định lượng Coliforms E.coli phương pháp đếm khuẩn lạc để đánh giá mức độ vệ sinh an toàn thực phẩm mẫu trà sữa trân châu Nội dung thực Phân tích đánh giá mẫu phương pháp đếm khuẩn lạc dựa số tiêu vi sinh: Coliforms E.coli CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Khái quát đặc điểm Coliforms E.coli Coliforms trực khuẩn gram âm, khơng sinh bào tử, hiếu khí kỵ khí tùy ý, có khả lên men lactose sinh acid sinh 37℃ 24 - 48 Coliforms xem sinh vật thị: số lượng diện chúng thực phẩm, nước hay loại mẫu môi trường dùng để thị khả diện loại vi sinh vật khác Nhóm Coliforms gồm giống là: E.coli, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter Escherichia coli hay viết tắt E.coli trực khuẩn gram âm, kí sinh đường ruột, ngồi cịn có mặt thực phẩm, nguồn nước, Chúng xem vi sinh vật thị sinh học đại CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Phương pháp đếm khuẩn lạc Phương pháp đếm khuẩn lạc cho phép xác định mật độ tế bào cịn sống diện mẫu, tế bào có khả phân chia tạo thành khuẩn lạc môi trường chọn lọc Trong phương pháp cần thực pha loãng mẫu thành nhiều độ pha loãng bậc 10 liên tiếp Số lượng khuẩn lạc tối ưu khoảng từ 25 - 250 khuẩn lạc/đĩa Dụng cụ Quy trình Phân tích Mẫu trà sữa chân châu mua khu giang Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh Dụng cụ: ống nghiệm, đĩa petri, Micropipette, que cấy trang vi sinh thủy tinh tất dụng cụ phải hấp khử trùng nhiệt độ 121℃ vịng 15 phút Các mơi trường nuôi cấy khuẩn lạc: môi trường Colifroms thạch lactoza mật đỏ trung tính tím tinh thể (VRBL) môi trường không hấp môi trường trước cấy, môi trường E coli thạch tryton-mật-glucuronid (TBX) 3.1 Quy trình định lượng Coliforms phương pháp đếm khuẩn lạc – thực theo tiêu chuẩn quốc gia: TCVN:6848:2007 (ISO 4832:2007) - Bước 1: chuẩn bị dịch đồng pha loãng ml mẫu trà sữa 90 ml nước cất nước muối sinh lí hấp khử trùng với nồng độ 10−1 sau pha lỗng nồng độ 10−2, 10−3 - Bước 2: hút 1ml dung dịch mẫu nồng độ vào đĩa petri với nồng độ lặp lại lần Sau đổ mơi trường VRBL (44 – 47℃) khoảng 15ml Trộn môi trường với dịch mẫu, để hỗn hợp đông lại đem ủ 30℃ 37℃ vòng 24h - Bước 3: chọn đĩa có khuẩn lạc từ 10 – 150 khuẩn lạc điển hình có màu đỏ tía có đường kính khoảng 0,5 mm trở lên (đơi có vùng mật tủa đỏ bao quanh) Coliform → Xác định mật số Coliform Sau xác định mật độ vi sinh vật công thức tính Phạm vi áp dụng: mẫu thực phẩm thức ăn chăn nuôi, mấu môi trường khu vực sản xuất chế biến thực phẩm kĩ thuật đếm khuẩn lạc môi trường đặc ủ 30℃ 37℃ sữa nhiệt độ 30℃ 3.2 Quy trình định lượng E coli phương pháp đếm khuẩn lạc – thực theo tiêu chuẩn quốc gia: TCVN 7924-2:2008 (ISO 16649-2:2001) - Bước 1: chuẩn bị dịch đồng pha loãng ml mẫu trà sữa 90 ml nước cất nước muối sinh lí hấp khử trùng với nồng độ 10−1 sau pha lỗng nồng độ 10−2, 10−3 - Bước 2: hút 0,1 ml dung dịch mẫu nồng độ vào đĩa petri với nồng độ lặp lại lần Cấy trải đĩa khô, lật ngược đĩa petri ủ nhiệt độ 44℃ từ 18 – 24 (không ủ 24 giờ) - Bước 3: chọn đĩa petri có số lượng khuẩn lạc điển hình (có màu xanh) nhỏ 150 tổng số khuẩn lạc không 300 (gồm điển hình khơng điển hình) Phạm vi áp dụng: tiêu chuẩn quy định phương pháp dương tính βglucuronidaza thực phẩm thức ăn chăn nuôi Phương pháp sử dụng kỹ thuật đếm khuẩn lạc 44 ℃ mơi trường đặc có chứa thành phần tạo sắc để phát enzym β-glucuronidaza Cơng thức tính mật độ vi sinh vật Đếm tất khuẩn lạc xuất đĩa sau ủ Chọn số đĩa có số đếm khoảng 25 – 250 Coliforms khoảng 10 – 150 để tính kết Mật độ tổng vi khuẩn Coliforms E coli tính sau: 𝐴= 𝑁 𝑛1 × 𝑉 × 𝑓1 + +𝑛𝑖 + 𝑉 + 𝑓𝑖 Trong đó: A: số tế bào (đơn vị hình thành khuẩn lạc) vi khuẩn g hay ml mẫu (CFU/g CFU/ml) N: tổng số khuẩn lạc đếm đĩa chọn 𝑛𝑖 : số lượng đĩa cấy độ pha lỗng thứ i V: thể tích dịch mẫu (ml) cấy vào đĩa 𝑓𝑖 : độ pha loãng thứ i Kết biện luận kết Mật độ vi sinh vật Coliform Đĩa Đĩa shape a Hình 1.1 Đĩa petri nồng độ 10−1 ghi nhận xuất khuẩn lạc điển hình đỏ tía CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết đêm khuẩn lạc đĩa 85 khuẩn lạc đĩa khuẩn lạc chấp nhận đĩa áp dụng công thức tổng qt tính mật độ vi sinh vật ta có: 𝐴= 𝑁 = 85 𝑛1 ×𝑉×𝑓1 + +𝑛𝑖 +𝑉+𝑓𝑖 1×1×10−1 = 8,5 × 102 (CFU/ml) Biện luận kết thí nghiệm thực gồm đĩa petri với nồng độ khác ghi nhận thấy đĩa nồng độ 10−1 xuất khuẩn lạc đặc trưng Coliform chứng tỏ thao tác cấy đổ sai, trộn mẫu khơng chưa có kinh nghiệm việc cấy mẫu mơi trường cịn q nóng, thời gian ủ chưa đảm bảo cho vi sinh vật phát triển khuẩn lạc, mẫu trà sữa có vi sinh vật xuất Giải pháp thực lại thí nghiệm thực kĩ việc đồng mẫu pha môi trường ủ nhiệt độ, cải thiện tay nghề người thực Mật độ Mật độ E coli khơng thể tính kết đĩa petri khơng xuất khuẩn lạc đặc trưng màu xanh nồng độ thí nghiệm Biện luận q trình cấy khơng đồng mẫu pha lỗng, hấp mơi trường cịn q nóng mẫu trà sữa cấy xong trang không ủ 24 khiến E coli phát triển khuẩn lạc cần xem lại yếu tố để thực lại thí nghiệm kiểm tra lại quy trình sai đâu khắc phục BÀI ĐỊNH LƯỢNG COLIFORM VÀ E coli BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ Thời gian nghiên cứu ngày – 12/8/2022, nhà A1 Khoa Khoa Học Sinh Học CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu phương pháp nghiên cứu Phương pháp Most Probable Number (MPN), phương pháp định lượng dựa kết định tính loạt thí nghiệm lặp lại số độ pha lỗng khác Thơng thường, việc định lượng thực lặp lại lần độ pha loãng bậc 10 liên tiếp, tổng cộng x = ống nghiệm Đa số bảng MPN cung cấp số liệu dạng số MPN 100 ml dung dịch sử dụng để phân tích liều lượng 10ml, 1ml, 0,1 ml Trên thực tế phân tích, người ta thường dùng 1ml cho mẫu pha loãng 10-1, 10-2, 10-3 Lượng mẫu với độ pha loãng tương đương với 1/100 lượng mẫu sử dụng theo bảng MPN/100ml tính theo lượng mẫu 10 ml, ml, 0,1 ml nêu Vậy số liệu bảng MPN/100 ml tính theo lượng mẫu 10 ml, ml, 0,1 ml tương đương với MPN/ml mẫu chưa pha loãng ml dung dịch có độ pha lỗng 10-1, 10-2, 10-3 dùng để phân tích Trường hợp mật độ vi sinh vật cao, cần phải sử dụng loạt nồng độ pha loãng cần phải nhân trị số tra bảng MPN nêu với hệ số pha loãng Ví dụ: sử dụng 1ml cho độ pha lỗng 10-2, 10-3, 10-4 tức sử dụng 1/10 lượng mẫu nồng độ so với trường hợp dùng ml mẫu độ pha loãng 10-1, 10-2, 10-3 Do vậy, trị số tra bảng MPN cần nhân thêm hệ số pha lỗng 10 Hình 2.1 Quy trình định lƣợng Coliforms E coli phƣơng pháp MPN - Thực hiên theo tiêu chuẩn quốc gia: TCVN:6846:2007 (ISO 4832:2007) ❖ Các bước tiến hành thí nghiệm Mẫu phân tích: trà sữa Bước 1: Pha mơi trường: (nếu mơi trường tổng hợp cân số lượng hóa chất theo nhà sản xuất ghi bao bì, thông thường khối lượng/1lit môi trường Lưu ý: tính khối lượng hóa chất cần dùng tương ứng với tổng thể tích mơi trường cần pha) 10 trùng Pancreatic digest of gelatin: 10 EMB g (Eosin Lactose: 10 g Methylene K2HPO4: g Blue Eosin Y: 0,4 g Agar) Methylene blue: 65 mg Agar: 15g 1000 ml nước Phân phối cất 100 ml EMB cho tổ pH 7,1 ± 0,2 1000 ml nước Tryptone Tryptone trypticase:10g water cất pH 7.2 ± 0.2 Môi trường 1: (Glucose Phosphate) K2HPO4: g Both dùng 20 ml, phân phối 10 ml/ống nghiệm dùng 30 ml, 1000 ml phân phối 10 Glucose: g MR-VP Mỗi tổ Mỗi tổ Buffered peptone-water powder: g (20 ml/petri) Môi trường 2: Casein Pancreatic Digest: 3,5 g Peptic digest of animal tissue: 3,5g Dextrose: g Potassium phosphate: g nước ml/ống cất nghiệm Kiểm tra lại pH 6,9 ± 0,2 môi trường cung cấp để pha môi trường Bước 2: khử trùng dụng cụ môi trường pha Bao gói dụng cụ phân phối mơi trường vào dụng cụ, gắn nút bao gói Hấp tiệt trùng 121°C 15 phút Bước 3: pha loãng mẫu 12 Bước 4: Cấy mẫu vào canh LSB Chuyển 1ml dung dịch 10-1, 10-2, 10-3 vào ống 10ml canh LSB, nồng độ có ống lặp lại, ủ 37°C, 48 Bước 5: Định lượng Coliform E coli Định lượng Coliform Định lượng E coli Ghi nhận số ống có sinh (+) Ghi nhận số ống có sinh (+) Dùng micropipet hút 10µl dịch mẫu Dùng micropipet hút 1ml dịch mẫu từ ống LSB (+) sang ống có chứa từ ống LSB (+) sang môi trường canh canh BGBL ủ 37°C ± 1°C, 48 EC, ủ 44,5°C, 24 Ghi nhận số ống có sinh (+) ứng với Ghi nhận số ống có sinh (+) ứng với độ pha lỗng độ pha lỗng Tính kết (xem muc 1.4) Dùng que cấy vòng ria dịch mẫu từ ống (+) canh EC sang môi trường thạch đĩa EMB Ủ 37°C, 24 Chọn khuẩn lạc đường kính lớn mm (trịn, dẹt hình đĩa có ánh kim xanh) (xem hình 2), cấy vào Trypton, MR-VP, SC Citrate, ủ 44,5°C, 24 Bước 6: thử nghiệm IMViC - Thử nghiệm Indol (I): - Thử nghiệm Methyl Red (MR): - Thử nghiệm Voges-Proskauer (VP): - Thử nghiệm Citrate (iC) 1.1 Xử lý số liệu Tra bảng Mac Crady, bảng số MPN giới hạn tin cậy (95%) sử dụng ba phần mẫu thử 1g (ml), ba phần mẫu thử 0,01 g (ml) CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết 2.1.1 Cấy mẫu vào canh LSB 13 Định lượng Coliforms E coli phương pháp MPN, ghi nhận số ống nghiệm có chuyển đục sinh ống nghiệm dương tính Hình 2.2 Cấy mẫu vào canh LSB, nồng độ có ống lặp lại, ủ 37oC sau 48 Vi sinh vật tăng sinh nồng độ khác Bảng 2.1 Ghi nhận số lượng ống nghiệm dương tính mơi trường LBS Độ pha loãng 10 - 10 - 10 - + + - + + - + + - Lần lặp lại 2.1.2 Định lượng Coliform E coli Ghi nhận số ống nghiệm có chuyển đục sinh ống nghiệm dương tính 14 Bảng 2.2 Ghi nhận số lượng ống nghiệm dương tính mơi trường BGBL Độ pha lỗng 10-1 10-2 + + + + + + Lần lặp lại Tra bảng Mac Crary cho thấy số lượng ống nghiệm dương tính với nồng độ pha Hình 2.3 Cấy mẫu vào canh BGBL, nồng độ có ống lặp lại, ủ 37oC sau 48 Vi sinh vật tăng sinh nồng độ khác loãng liên tiếp 10-1 10-2 Nên mật độ Coliform là: 24 x 10 = 240 MPN/100ml Bảng 2.3 Ghi nhận số lượng ống nghiệm dương tính mơi trường EC Độ pha lỗng 10-1 10-2 + + + + + + Lần lặp lại 15 Hình 2.4 Cấy mẫu vào canh EC, nồng độ có ống lặp lại, ủ 44,5oC sau 24 Vi sinh vật tăng sinh nồng độ khác 2.2 Thảo luận Theo Hình 2.2, ta thấy nồng độ pha loãng 10-1 10-2 cho kết dương tính có cho dấu hiệu nhận biết làm cho nước môi trường LSB trở nên đục lại Vì vi sinh vật lấy dinh dưỡng từ môi trường LSB để tăng sinh Ở nồng độ 10-3 lần lặp lại cho kết âm tính nồng độ pha lỗng có mật độ vi sinh vật thấp để vi sinh vật tăng sinh thời gian ngắn Theo Hình 2.3, ta thấy nồng độ pha lỗng 10-1 10-2 cho kết dương tính có cho dấu hiệu nhận biết làm cho nước môi trường BGBL trở nên đục lại Điều chứng tỏ ống nghiệm có xuất Coliforms Theo Hình 2.4, ta thấy nồng độ pha loãng 10-1 10-2 cho kết dương tính có cho dấu hiệu nhận biết làm cho nước môi trường EC trở nên đục lại Điều nghi ngờ ống nghiệm có xuất E.coli Điều cho thấy vi sinh vật mơi trường EC khơng phải E coli Hoặc q trình thao tác cấy ria môi trường đĩa thạch EMB dụng cụ cấy bị nhiễm vi sinh vật khác CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 16 4.1 Kết luận Sau trình thực nghiên cứu định lượng Coliforms E coli phương pháp MPN, kết nghiên cứu cho thấy mẫu trà sữa có xuất Coliforms vi sinh vật khác 4.2 Đề nghị Những nghiên cứu định lượng Coliforms E coli phương pháp MPN, cần cẩn thận thao tác thực thí nghiệm chuẩn bị mẫu, mơi trường, kỹ thuật cấy kết mong muốn nhất, tránh sai số q trình tính tốn Kết nghiên cứu cho thấy độ an toàn thực phẩm trà sữa thị trường nay, từ ý an tồn vệ sinh thực phẩm q trình chế biến trà sữa BÀI 3: ĐỊNH TÍNH SALMONELLA CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ Salmonella trực trùng gram âm, hiếu khí kị khí tùy ý, có khả di động không tạo bào tử, lên men glucose mannitol sinh acid không lên men saccharose lactose, không sinh Indole, khơng phân giải ure, khơng có khả tách nhóm amine từ tryptophane, hầu hết chủng sinh H2S Salmonella phân tích định tính mộ quy trình gồm bước: tăng sinh, tăng sinh chọn lọc, phân lập khẳng định Salmonella thường có mặt mẫu với số lượng nhỏ, bị tổn thương diện chung với số lượng lớn với lồi vi khuẩn khác thuộc họ Enterobacteriaceae có tính cạnh tranh mạnh ức chế tăng trưởng Salmonella CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Quy trình thực định tính Salmonella thực phẩm 17 Bước 1: Tăng sinh Hình 3.1 10 g mẫu gan heo Hình 3.2 Mẫu mơi trường BPW Tiến hành cân 10 g mẫu (gan heo) 90 ml môi trường tăng sinh BPW, ủ 370C, 18 – 24 Bước 2: Tăng sinh chọc lọc Hình 3.3 0,1 ml dịch tăng sinh RVS Lắc để trộn dịch tăng sinh, chuyển 0,1 ml sang 10 ml môi trường tăng sinh RVS, ủ 420C, 18 – 24 18 Bước 3: Phân lập nhận diện Dùng que cấy vòng thực kỹ thuật cấy (cấy ria) phân lập khuẩn lạc đơn với giống từ dịch tăng sinh chọn lọc lên đĩa môi trường chọn lọc phân biệt đặc trưng cho Salmonella XLD HE, ủ 370C, 18 – 24 - Biểu Salmonella môi trường sau: + Mơi trường XLD: khuẩn lạc có màu hồng suốt, có hay khơng có tâm đen Một số dịng Salmonella có tâm đen bóng lớn chiếm gần hết khuẩn lạc + Môi trường HE: khuẩn lạc Salmonella có màu thay đổi từ xanh dương đến màu xanh lục, có hay khơng có tâm đen Một số dịng Salmonella có tâm đen bóng lớn chiếm gần hết khuẩn lạc Kết quả: Thu từ đĩa petri môi trường XLD HE Hình 3.4 Khuẩn lạc mơi trường XLD 19 Mơi trường XLD: Ta thấy có xuất khuẩn lạc không phát khuẩn lạc đặc trưng cho Salmonella (khuẩn lạc có màu hồng suốt, có hay khơng có tâm đen) Hình 3.5 Khuẩn lạc mơi trường HE Mơi trường HE: Ta thấy có xuất khuẩn lạc đặc trưng nghi ngờ Salmonella (khuẩn lạc màu xanh, có tâm đen) Nên khuẩn lạc sử dụng cho thử nghiệm sinh hoá Bước 4: Khẳng định Chọn cấy khuẩn lạc đặc trưng nghi ngờ Salmonella mơi trường HE vào thử nghiệm sinh hố kết Indol (-), Urea (-), VP (-), KIA (+) khuẩn lạc Salmonella 20