(Tiểu luận) báo cáo thí nghiệm kiểm nghiệm vi sinh thực phẩm bài 5 kiểm nghiệm salmonella

i TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG BÁO CÁO THÍ NGHIỆM KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM Bài 5: KIỂM NGHIỆM Salmonella GVHD: NGUYỄN NGỌC TUẤN, Ph.D Nhóm thực – S6-N3 Thành viên 1/ Trần Phạm Thanh Thảo - 620H0130 2/ Đoàn Lê Ngọc Thanh Thúy– 620H0141 3/ Trần Phạm Thanh Tuyền – 620H0169 4/ Nguyễn Phạm Mỹ Dung – 620H0265 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2023 i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC HÌNH ii DANH MỤC BẢNG .iii CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Định nghĩa 1.2 Nguyên tắc CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu 2.2 Dụng cụ thiết bị 2.3 Cách tiến hành .3 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 10 3.1 Kết sau cấy mẫu thịt vào môi trường HE .10 3.2 Kết cấy mẫu vào môi trường HE 10 3.3 Kết cấy mẫu thịt vào môi trường XLD .11 3.4 Kết cấy mẫu vào môi trường XLD 11 3.5 Kết ống nghiệm thử nghiệm sinh hóa .12 3.6 Kết đĩa BHI sau thử nghiệm sinh hóa 15 ii DANH MỤC HÌ Hình Cân 0,56g LDC dạng bột dùng để pha với 40 ml nước cất Hình 2 Cân 0,36 g ODC dạng bột dùng để pha với 40 ml nước cất .4 Hình Cân 0,6g Trypton dạng bột dùng để pha với 40ml nước cất Hình Cân 3,6g BHI dạng bột dùng để pha với 40 ml nước cất Hình Cân 7,667g HE dạng bột dùng để pha 100 ml nước cất Hình Cân 3,87g TSI dạng bột dùng để pha 60ml nước cất .6 Hình Cân 0,4g urea dạng bột dùng để pha 20ml nước cất Hình Cân 5,668g XLD dạng bột dùng để pha 100ml nước cất Hình Urea đổ đĩa sau hấp khử trùng Hình 10 Cân 3,64g BHI với 0,7g Sorbitol vào 70ml nước cất Hình 11 Cân 3,64g BHI với 1,47g Manitol vào 70ml nước cất Hình 12 Quá trình thử nghiệm YHình Kết sau cấy mẫu thịt vào môi trường HE 10 Hình Kết cấy mẫu vào mơi trường HE .10 Hình 3 Kết cấy mẫu thịt vào mơi trường XLD 11 Hình Kết cấy mẫu vào môi trường XLD 11 Hình Kết sau cấy hỗn hợp BHI Manitol 12 Hình Kết sau cấy hỗn hợp BHI Sorbitol 12 Hình Ống urea thử nghiệm sinh hóa .13 Hình Ống urea mẫu 13 iii DANH MỤC BẢNG Bảng Môi trường mẫu Bảng 2 Dụng cụ thiết bị CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Định nghĩa Salmonella trực khuẩn gram (-), hiếu khí kị khí tùy ý, 0.6x2µm, di động, không tạo bào tử Lên men glucose mannitol sinh acid không lên men saccharose lactose, khơng có khả tách nhóm amin từ trytophan, khơng sinh Indol, không phân giải urea, hầu hết chủng sinh H2S Đã xác định có 2339 kiểu huyết (serotype), serotype chia dựa kháng nguyên O (kháng nguyên somatic) kháng nguyên H (flagella) 1.2 Nguyên tắc Salmonella thường diện mẫu với lượng nhỏ, bị tổn thương diện với sinh vật khác thuộc họ Enterobacteriaceae, có tính cạnh tranh mạnh ức chế tăng trưởng Salmonella Quy trình phát gồm bước tăng sinh, tăng sinh chọn lọc, phân lập khẳng định test sinh hóa phù hợp CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Bảng 2.1 Môi trường mẫu Nước đệm Peptone (BPW) Rappaport Vasilisdis (RV) Xylose Lysine Desoxycholate (XLD) Hektone Antric Agar (HE) Nước muối sinh lý Brain Heart Infusion (BHI) Canh Urea Canh Trytone MR-VP ODC LDC Manitol + BHI Sorbitol + BHI 2.2 Dụng cụ thiết bị 225 ml 15 ml 100 ml 100 ml 50 ml 50 ml 20 ml 40 ml 40 ml 40 ml 40 ml 70 ml 70 ml Bảng 2.2 Dụng cụ Số lượng Đĩa Petri 11 Micropipette Ống nghiệm 46 ống Đèn cồn Pipette 10ml Que cấy vòng Bao dập mẫu Erlen Eppendof Document continues below Discover more Công nghệ sinh from: học CNSH01 Đại học Tôn Đức… 249 documents Go to course Atsh - Đề cương 19 Công nghệ sinh học 100% (5) THÍ NGHIỆM SINH 31 HỌC TẾ BÀO Công nghệ sinh học 100% (5) Dược động - dược 25 động học Công nghệ sinh học 100% (4) Seminar-SHTB26 27 Nhóm5 đại học tơn… Cơng nghệ sinh học 100% (4) Sinh đai cương tới C13 2.3 Cách tiến hành Công nghệ sinh học 100% (3) Công nghệ sinh học 100% (3) Hoa - thực vật dược 39 Đồng 225 ml môi trường tăng sinh (BPW), ủ 37oC 18-24h Cấy 0.1 ml dung dịch tăng sinh sang môi trường tăng sinh chọn lọc (RV), 42°C, 18-24 Phân lập khuẩn lạc đơn hai môi trường chọn lọc phân biệt (XLD, HE) ủ 37oC 24 Chọn lọc khuẩn đặc trưng cho Samorella cấy sang BHI, ủ qua đêm C 24 Thử nghiệm sinh hóa Hình Cân 0,56g LDC dạng bột dùng để pha với 40 ml nước cất Hình 2 Cân 0,36 g ODC dạng bột dùng để pha với 40 ml nước cất Hình Cân 0,6g Trypton dạng bột dùng để pha với 40ml nước cất Hình Cân 3,6g để pha với 40 ml BHI dạng bột dùng nước cất Hình Cân 7,667g HE dạng bột dùng để pha 100 ml nước cất Hình 12 Quá trình thử nghiệm 10 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 Kết sau cấy mẫu thịt gà vào mơi trường HE Hình Kết sau cấy mẫu thịt vào môi trường HE Biện luận Sau ủ mẫu thịt gà môi trường HE 37 oC 24 giờ, ta thấy xuất có nhiều vệt đen tâm màu đen mơi trường Vì vậy, ta xác định đĩa môi trường xuất vi khuẩn Salmonella đa số dịng Salmonella có khả sinh khí H 2S nên xuất vệt đen bề mặt môi trường, cịn cho ta thấy mẫu thịt gà mang kiểm định có mật độ vi khuẩn Salmonella cao 11 3.2 Kết cấy mẫu vào mơi trường HE Hình Kết cấy mẫu vào môi trường HE Biện luận Ở mẫu đối chứng môi trường HE sau ủ 37oC 24 giờ, ta không thấy xuất vệt đen Từ đó, ta xác định mẫu đối chứng khơng có xuất vi khuẩn Salmonella 12 3.3 Kết cấy mẫu vào mơi trường XLD Hình 3 Kết cấy mẫu vào môi trường XLD Biện luận Ở mẫu đối chứng môi trường XLD sau ủ 37 oC 24 giờ, ta không thấy xuất vệt đen mẫu thịt gà Từ đó, ta xác định mẫu đối chứng khơng có xuất vi khuẩn Salmonella khơng có khí H 2S sinh môi trường 13 3.4 Kết cấy mẫu thịt gà vào mơi trường XLD Hình Kết cấy mẫu thịt gà vào môi trường XLD Biện luận Sau ủ mẫu thịt gà môi trường XLD 37 oC 24 giờ, ta thấy đĩa thạch xuất nhiều vệt đen, chiếm tồn mơi trường Qua đó, ta xác định đĩa mơi trường có xuất vi khuẩn Salmonella đa số dịng Salmonella có khả sinh khí H2S khiến cho môi trường nuôi cấy chuyển sang màu đen, cịn cho ta thấy mẫu thịt gà mang kiểm định có chứa mật độ vi khuẩn Salmonella cao 14 3.5 Kết ống nghiệm thử nghiệm sinh hóa Hình Kết sau cấy hỗn hợp BHI Manitol Hình Kết sau cấy hỗn hợp BHI Sorbitol Biện luận Ở môi trường hỗn hợp BHI Manitol ta thấy có phát triển vi sinh vật từ cho mẫu dương tính Vì có vi khuẩn phát triển mơi trường hỗn hợp BHI Manitol, so sánh với mẫu đối chứng, ta ghi nhận kết dương tính ống cịn lại 15 Phản ứng môi trường hỗn hợp BHI Sorbitol ta thấy có phát triển vi sinh vật xác định mẫu dương tính Vì có vi khuẩn phát triển môi trường hỗn hợp BHI Sorbitol, so sánh với mẫu đối chứng, ta ghi nhận kết dương tính ống cịn lại 16 Hình Ống urea thử nghiệm sinh hóa Hình Ống urea đối chứng Biện luận Ở ống urea sau thử nghiệm hóa sinh cho thấy ống mẫu đối chứng ống chứa mẫu thịt chuyển từ màu đỏ sang màu hồng đỏ hồng Từ cho kết ống dương tính, phản ứng thường xuất sau 2h đến 4h 17 Biện luận thử nghiệm hóa sinh ODC, ta thấy ống đối chứng chuyển sang màu đỏ tía (hình bên dưới) mẫu đối chứng dương tính dương tính Cịn lại ống có ống âm tính ống dương tính Mơi trường Trytone 18 Biện luận Thử nghiệm hóa sinh Trytone cho giọt thuốc thử Kovac’s ống nghiệm, ta thấy có ống có xuất vịng màu đỏ chứng tỏ phản ứng dương tính Bốn ống cịn lại cho ống nâu ống vàng chứng tỏ phản ứng âm tính 19 3.6 Kết đĩa BHI sau thử nghiệm sinh hóa Biện luận Ở môi trường BHI vùng cấy đĩa có vi sinh vật xuất từ ta xác định vùng cấy kể vùng cấy mẫu đối chứng dương tính 20 Biện luận Ở thử nghiệm hóa sinh MR-VP ta thấy ống đối chứng (ống thứ từ trái qua) suốt so với ống mẫu thịt gà lại Ta xác định ống dương tính 21 Biện luận Ở thử nghiệm hóa sinh LDC ta thấy ống đối chứng (ống thứ từ trái qua phải) chưa chuyển sang màu vàng hoàn toàn Suy ống mẫu đối chứng âm tính Cịn lại ống chuyển từ tím sang vàng Vì lượng acid sinh trình lên men dẫn đến làm thay đổi màu sắc môi trường (tím sang vàng) có chất Bromocresol purple làm thị Vì ống mẫu thịt gà cịn lại dương tính 22 Biện luận Ở thử nghiệm hóa sinh TSI ta thấy tồn ống nghiệm kể ống mẫu đối chứng dần chuyển sang đen có khí H2S sinh Ta xác định ống TSI dương tính 23 Mơi trường hỗn hợp BHI Manitol hỗn hợp BHI Sorbitol Urea ODC Tryptone MR-VP TSI LDC (+) ống (+) ống (+) ống (+) ống (+) (˗) ống (-)