TỔNG QUAN
Tinh trùng
Tinh trùng là tế bào sinh sản của nam giới, mang 23 nhiễm sắc thể đơn bội và có kích thước từ 65 - 70 µm Tinh trùng bao gồm ba phần chính: đầu, cổ và đuôi, được biệt hóa cao độ để di chuyển trong đường sinh dục nữ, nhận biết và thụ tinh cho trứng Bình thường, tinh trùng được sinh ra từ các ống sinh tinh trong tinh hoàn, trải qua nhiều giai đoạn để trưởng thành và hoàn thiện cấu trúc cũng như chức năng cần thiết cho quá trình thụ tinh.
Tinh trùng trưởng thành dài khoảng 50 - 60 μm, có 3 phần: đầu, cổ và đuôi
Phần đầu tinh trùng có hình dạng giọt nước dẹt, chứa nhân mang bộ nhiễm sắc thể đơn bội với 23 nhiễm sắc thể, bao gồm một nhiễm sắc thể giới tính (X hoặc Y), tạo nên bộ gen riêng biệt cho mỗi tinh trùng Trên nhân có túi cực hình đầu mũ, chứa enzyme giúp tiêu hủy chướng ngại vật xung quanh trứng, hỗ trợ tinh trùng xâm nhập vào bên trong để thực hiện quá trình thụ tinh.
Cổ tinh trùng nằm giữa đầu và đuôi, có cấu trúc mềm mại, giúp đầu tinh trùng dễ dàng quay từ bên này sang bên kia, tương tự như động tác bơi.
Đuôi tinh trùng được chia thành ba đoạn: đoạn giữa, đoạn chính và đoạn cuối Đoạn giữa là phần lớn nhất, chứa các ty thể sử dụng glucose và fructose để tạo năng lượng cho sự di chuyển của tinh trùng Ở đoạn cuối, các sợi đặc và lớp bao đuôi mỏng dần, chỉ còn lại một lớp tế bào mỏng bao bọc phần cuối Hình dạng mỏng và thon của đuôi giúp tinh trùng quẫy đuôi và bơi một cách hiệu quả.
Hình 1.1 Cấu tạo tinh trùng [12]
1.1.3 Quá trình hình thành tinh trùng
Tinh trùng được sản xuất tại tinh hoàn, trong các ống sinh tinh dài tới 250m Giữa các ống này có tế bào Leydig, có nhiệm vụ sản xuất hormone testosterone, hormone sinh dục nam quan trọng.
Quá trình sinh tinh khởi đầu từ các tế bào gốc, gọi là tinh nguyên bào Khi nam giới bước vào tuổi dậy thì, các tinh nguyên bào sẽ tiến hành phân chia và biệt hóa để hình thành các tinh bào.
Tinh trùng được sản xuất từ các tinh bào trong ống sinh tinh và sau đó di chuyển vào mào tinh để hoàn tất quá trình trưởng thành trước khi được xuất tinh.
Khi bị kích thích tình dục, quá trình xuất tinh ở nam giới bắt đầu Tinh trùng từ mào tinh hoàn di chuyển qua ống dẫn tinh, được trộn với dịch tiết từ tuyến tiền liệt (30%), túi tinh (60%) và các tuyến hành niệu đạo (10%), trước khi được tống xuất qua niệu đạo Nếu không xảy ra xuất tinh, tinh trùng sẽ chết và được hấp thụ bởi biểu mô của mào tinh.
Quá trình sinh tinh bắt đầu từ dậy thì và kéo dài suốt cuộc đời, sản sinh hàng triệu tinh trùng ở mỗi tinh hoàn Tuy nhiên, thụ tinh lại là một quá trình kém hiệu quả, khi chỉ một tinh trùng trong hàng triệu tinh trùng được phóng vào đường sinh dục nữ có thể thụ tinh với trứng Do đó, nếu quá trình sinh tinh suy giảm, nguy cơ vô sinh nam sẽ tăng cao, dẫn đến sự giảm sút về cả chất lượng và số lượng tinh trùng.
Quá trình phát triển từ tinh nguyên bào đến tinh trùng mất khoảng 70 ngày, sau đó tinh trùng cần thêm 12-21 ngày ở mào tinh hoàn để hoàn thiện chức năng Tổng thời gian cho quá trình sinh tinh hoàn thiện dao động từ 10-12 tuần.
Mỗi ngày, mỗi tinh hoàn sản sinh ra hàng trăm triệu tinh trùng, và khi xuất tinh qua niệu đạo, số lượng tinh trùng trong tinh dịch có thể đạt tới 500 triệu.
Hình 1.2 Quá trình hình thành tinh trùng [12]
Phân mảnh ADN tinh trùng
1.2.1 Định nghĩa phân mảnh ADN tinh trùng
Phân mảnh ADN tinh trùng là tình trạng tổn thương cấu trúc di truyền, ảnh hưởng đến khả năng sinh sản của nam giới và kết quả điều trị thụ tinh trong ống nghiệm ADN tinh trùng có thể bị phân mảnh trong quá trình sản xuất, tiếp xúc với môi trường độc hại, hoặc do xạ trị và hóa trị liệu Khoảng 30% nam giới vô sinh có chỉ số tinh dịch bình thường nhưng lại có mức phân mảnh ADN tinh trùng vượt ngưỡng.
1.2.2 Lịch sử nghiên cứu phân mảnh ADN tinh trùng
Năm 1946, Pollister và Mirsky phát hiện rằng phần lớn protein bao quanh ADN trong tinh trùng là protamine, không phải histones, với chỉ 5 - 15% protein chất nhiễm sắc trong tinh trùng là histones Đến năm 1953, Leuchtenberger chỉ ra rằng chất lượng mẫu tinh trùng không chỉ phụ thuộc vào số lượng và khả năng vận động mà còn có sự khác biệt về chất lượng ADN giữa nam giới vô sinh và nam giới bình thường, ảnh hưởng đến khả năng sinh sản.
Sự quan tâm ngày càng tăng về mối liên hệ giữa phơi nhiễm các tác nhân gây tổn hại ADN và khả năng sinh sản Năm 1970, Ringertz và cộng sự đã thực hiện một nghiên cứu cho thấy tinh trùng bò bị đốt nóng dẫn đến tổn thương ADN, được phát hiện qua nhuộm màu cam acridine Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng sự ổn định ADN của tinh trùng tăng dần trong quá trình trưởng thành.
Năm 1980, Evenson và cộng sự đã phát triển phương pháp khảo sát cấu trúc chromatin tinh trùng (Sperm Chromatin Structure Assay - SCSA) bằng công nghệ sinh học phân tử, cho phép phát hiện sự phân mảnh ADN trong tinh trùng.
Sau đó, trong nhiều thập kỷ, hàng loạt các phương pháp giúp phát hiện sự phân mảnh ADN tinh trùng ra đời như COMET (1980), TUNEL (1990), DBD - FISH
Nghiên cứu năm 2003 đã chỉ ra tầm quan trọng của việc phân mảnh ADN tinh trùng và ảnh hưởng của nó đến sức khỏe sinh sản Hiện tại, nhiều phương pháp mới để xác định phân mảnh ADN tinh trùng đang được phát triển và nghiên cứu.
Nghiên cứu về phân mảnh ADN tinh trùng không chỉ tập trung vào việc xác định các phương pháp phân tích mà còn điều tra nguyên nhân và mối liên hệ giữa phân mảnh ADN tinh trùng với sức khỏe sinh sản Các nghiên cứu này cũng đã chỉ ra tầm quan trọng của việc lựa chọn các phương pháp hỗ trợ sinh sản phù hợp cho các cặp vợ chồng khi người chồng có tỷ lệ phân mảnh ADN tinh trùng cao, mang lại nhiều kết quả khả quan.
1.2.3 Cấu trúc ADN tinh trùng
Tinh trùng người là một đơn vị sinh học có cấu trúc tổ chức cao, với nhiễm sắc thể (NST) được đóng gói chặt chẽ và kích thước chỉ bằng 1/6 so với NST ở tế bào sinh dưỡng Để bảo toàn cấu trúc và chức năng, NST của tinh trùng có tính chất trơ về mặt hóa học trong suốt quá trình tạo ra và di chuyển trong cơ quan sinh dục nam và nữ Cấu trúc của NST tinh trùng gồm ba vùng chính: phần lớn ADN tinh trùng xoắn cuộn và liên kết với protamine, tạo thành cấu trúc toroid, mỗi toroid chứa khoảng 50kb ADN.
(2) một phần nhỏ ADN liên kết với histone tạo cấu trúc lỏng lẻo hơn, (3) phần ADN còn lại liên kết với chất nền nhân tinh trùng [22]
Liên kết giữa protamine và ADN tạo ra cấu trúc toroid, đặc biệt quan trọng trong quá trình trưởng thành của tinh trùng, khi khoảng 85% histone được chuyển đổi thành protamine Sự hiện diện của protamine, với gốc arginine mang điện tích dương, giúp trung hòa điện tích âm của gốc phosphate trên ADN, từ đó giảm lực đẩy khung ADN và tăng cường liên kết giữa ADN và protamine Quá trình này cho phép tinh trùng gấp cuộn ADN tối đa, hình thành cấu trúc toroid, bảo vệ ADN khỏi tác động của enzyme nuclease Sự sắp xếp này tạo ra một phức hợp trung tính, không dễ bị tổn thương, đồng thời kiểm soát sự biểu hiện gene bằng cách ngăn chặn phiên mã trong quá trình sinh tinh Chỉ khi tinh trùng xâm nhập vào noãn, protamine mới được thay thế, giúp bảo vệ ADN trong quá trình di chuyển qua đường sinh dục nữ để thụ tinh thành công.
Liên kết giữa histone với ADN
ADN gắn với histone là dạng cấu trúc ADN phổ biến thứ hai, với khoảng 4% ADN trong tinh trùng trưởng thành liên kết với histone Nghiên cứu cho thấy các trình tự ADN này bao gồm các vùng gene khởi động phiên mã, trình tự ADN vùng telomere, gene mã hóa chuỗi epsilon và gamma globin, cũng như các chùm gene phiên mã micro RNA và các gene điều hòa biểu hiện dịch mã cho protein quan trọng trong giai đoạn phát triển sớm của phôi Các vùng gene liên quan đến quá trình sinh tinh và thụ tinh cũng được xác định là liên kết với histone trong NST của tinh trùng, và chúng dễ bị ảnh hưởng bởi enzyme nuclease Đặc biệt, histone trong ADN tinh trùng không thể được thay thế bởi thành phần nào trong noãn sau thụ tinh, do đó, bất kỳ tổn thương nào liên quan đến histone sẽ di truyền trực tiếp cho phôi mà không được phát hiện và không có khả năng sửa chữa, ảnh hưởng lớn đến thế hệ sau.
Hình 1.3 Cấu trúc ADN tinh trùng [21]
Liên kết giữa ADN với chất nền nhân tinh trùng
Hình thức thứ ba của cấu tạo ADN tinh trùng là vùng liên kết chất nền hạt nhân, nơi các đoạn ADN kết nối với vùng xoắn cuộn của nhiễm sắc thể Vùng này gắn các miền vòng lặp của chất nhiễm sắc vào chất nền nhân tinh trùng Nằm giữa mỗi vòng protamine, các liên kết này được gọi là các liên kết hình xuyến, giữ cho các vòng ở vị trí cố định.
Các vùng chứa histone trong ADN tinh trùng nhạy cảm với enzyme nuclease và đóng vai trò quan trọng trong việc kiểm tra tính toàn vẹn của ADN sau thụ tinh Việc duy trì cấu trúc ổn định của chất nền nhân tinh trùng và sự liên kết với ADN là cần thiết để kích hoạt quá trình tái hoạt hóa gene di truyền cho chu kỳ sao chép ADN đầu tiên khi gặp noãn Các vùng ADN này mã hóa cho các protein thiết yếu trong việc điều hòa biểu hiện gene, sao chép ADN và tổ chức lại cấu trúc NST trong giai đoạn sinh tinh và sau thụ tinh.
1.2.4 Cơ chế gây phân mảnh ADN tinh trùng
Bốn cơ chế chính gây phân mảnh ADN tinh trùng bao gồm: tái tổ hợp không hoàn chỉnh trong quá trình hình thành tinh trùng, bất thường trong đóng gói chất nhiễm sắc, lỗi trong quá trình tự sửa chữa tế bào (hay sự chết theo chương trình), và mất cân bằng các phản ứng oxy hóa.
Tái tổ hợp không hoàn chỉnh trong quá trình hình thành tinh trùng
Enzyme đóng vai trò quan trọng trong việc phân mảnh mạch đôi ADN, hỗ trợ quá trình trao đổi chéo trong kỳ đầu giảm phân I Để hoàn thành phân mảnh giảm phân I, ADN tinh trùng cần được sửa chữa hoàn toàn và loại bỏ các tế bào có ADN bất thường Nếu các yếu tố kiểm tra không hoạt động, các tế bào với bất thường di truyền sẽ tiếp tục phân chia và phát triển.
Bất thường trong quá trình đóng gói chất nhiễm sắc
Chất nhiễm sắc của tinh trùng có cấu trúc cô đặc và nén chặt, giúp bảo vệ bộ gen trong quá trình di chuyển qua đường sinh dục nữ để thụ tinh Quá trình đóng gói chất nhiễm sắc diễn ra khi 85% protein histon được thay thế bằng protamin, loại protein có kích thước nhỏ hơn, giúp đầu tinh trùng gọn gàng hơn Quá trình này bao gồm ba giai đoạn: thay thế histon thường bằng histon đặc hiệu của tinh trùng, tiếp theo là thay thế histon bằng protein chuyển tiếp, và cuối cùng là thay thế protein chuyển tiếp bằng protamin Để quá trình này diễn ra, ADN cần được tháo xoắn và sửa chữa, nhưng sự hiện diện của các chất ức chế enzyme có thể cản trở quá trình sửa sai và dẫn đến phân mảnh ADN.
Cấu trúc nhiễm sắc thể (NST) tinh trùng chủ yếu hình thành trong quá trình biệt hóa trưởng thành tinh trùng, điều này rất quan trọng cho tính toàn vẹn di truyền của tinh trùng Sự thay đổi cấu trúc và hình thành cuộn xoắn diễn ra trong giai đoạn đặc biệt, với áp lực tạm thời được giải phóng thông qua phân mảnh ADN Những phân mảnh này dẫn đến việc thay thế các lõi histone của nucleosome bằng các protein chuyển tiếp trong quá trình biệt hóa Các phân mảnh được tạo ra bởi nuclease nội sinh và xuất hiện trong các tinh tử đang kéo dài Do đó, chuỗi ADN bị đứt trong quá trình sửa chữa NST là một phần của quá trình biệt hóa bình thường của tinh trùng Bất kỳ thay đổi nào trong quá trình trao đổi protein và tái cấu trúc NST có thể làm mất tính toàn vẹn của NST tinh trùng Sự xuất hiện của phá vỡ ADN nội sinh trong tinh trùng có thể chỉ ra sự bất thường trong quá trình sinh tinh và trưởng thành không hoàn chỉnh.
Tế bào chết theo chương trình (Apoptosis)
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng nghiên cứu
1488 mẫu tinh dịch từ các bệnh nhân nam nghi ngờ vô sinh đã được gửi đến Phòng xét nghiệm Viện Công nghệ Phacogen để thực hiện đánh giá phân mảnh tinh trùng trước khi tiến hành phương pháp thụ tinh trong ống nghiệm (IVF).
Thời gian tiến hành nghiên cứu
Phương pháp nghiên cứu
Nghiên cứu mô tả cắt ngang.
Thiết kế nghiên cứu
2.4.1 Thiết bị, hóa chất và vật tư tiêu hao
- Hệ thống phân tích tế bào theo dòng chảy flow cytometry DxFlex (Beckman Coulter)
- Tủ an toàn sinh ho ̣c (ATSH) cấp II
- Ống nghiệm polypropylene 5 mL kích thước 12x75 mm
- Pipette (1-10 μL, 10-100 μL, 20-200 μL, 100-1000 μL) và các loa ̣i đầu tip lọc tương ứng
- Đồ bảo hô ̣ (áo blouse, khẩu trang y tế)
- Bộ kit xét nghiệm phân mảnh tinh trùng PhacoSperm ® ADN Fragmentation Kit của nhà máy Phacogen gồm bốn lọ dung dịch: A, B, C, D
Nguyên tắc của bộ sinh phẩm PhacoSperm® ADN Fragmentation Kit dựa trên sự phát màu khác nhau của thuốc nhuộm huỳnh quang khi bám lên mạch đôi ADN (ds ADN) hoặc mạch đơn ADN (ssADN) Sau khi xác định mật độ tinh trùng, bộ kit này giúp đánh giá mức độ phân mảnh ADN trong mẫu.
Mẫu tinh dịch được pha trong dung dịch A với nồng độ làm việc, sau đó xử lý bằng dung dịch B để biến tính và tách rời các mạch đôi ADN Chromatin tinh trùng sẽ phân mảnh thành dạng mạch đơn, trong khi chromatin toàn vẹn vẫn ở dạng mạch đôi Phức hợp Acridine orange (AO) trong các dung dịch đệm C và D phát huỳnh quang màu xanh lá cây khi tương tác với dsADN dưới ánh sáng laser xanh dương, trong khi ánh sáng huỳnh quang màu đỏ phát ra khi AO bám vào ssADN Mức độ phân mảnh ADN tinh trùng được đánh giá thông qua chỉ số DFI, phản ánh tỉ lệ phân mảnh ADN của tinh trùng.
Thờm 480àL dung dịch D vào 80ml đệm C, đảo trộn đều
B Cài đă ̣t hệ thống flow cytometry
Trước khi phân tích, làm ấm hệ thống flow cytometry và hiệu chỉnh bằng hạt từ huỳnh quang chuẩn
Mở chương trình phân tích từ file mẫu đã được thiết lập
Chạy dung dịch đệm cõn bằng (bao gồm 200 àL đệm B trộn với 600 àL thuốc thử hỗn hợp đệm C và đệm D) trong khoảng 3 phút trước khi chạy phân tích mẫu
C Quy trình xử lý mẫu và chạy máy
Bước 1 Xác định mật độ tinh trùng của mẫu tinh dịch
Bước 2 Pha loãng mẫu tinh dịch trong dung dịch A đến mật độ 2 – 3 x 10 6 tinh trùng/mL
Cách tính pha loãng: Khi mật độ tinh trùng ban đầu là M x 10 6 tinh trựng/mL, thể tớch tinh dịch cần hỳt (àL) là N00/M
Ví dụ: Mật độ tinh trùng là 50 x 10 6 tinh trùng/mL, thì thể tích tinh dịch cần hỳt là 300/50=6 àL
Bước 3: Chuyển (100-N) µL dung dịch A vào ống nghiệm 5 mL có kích thước 12x75 mm, phù hợp với máy flow Sau đó, thêm lượng tinh dịch N µL đã chuẩn bị trước, sử dụng pipet để đảo trộn đều hỗn hợp.
Bước 4 Thờm 200 àL dung dịch B vào ống Trộn đều hỗn hợp bằng cỏch lắc hoặc búng nhẹ Bắt đầu tính thời gian Phản ứng trong 30 giây
Bước 5 Thờm 600 àL húa chất nhuộm C và D đó chuẩn bị, lắc nhẹ
Bước 6 Đặt ống mẫu vào buồng chứa mẫu của máy flow cytometry và tiến hành chạy máy (không quá 30 phút)
Bước 7: Kiểm tra tốc độ dòng chảy của mẫu, thường dao động từ 100 đến 300 tế bào/giây Nếu tốc độ vượt quá 300 tế bào/giây, cần tiến hành chạy lại mẫu mới với độ pha loãng phù hợp Hãy thu thập và ghi chép số liệu một cách cẩn thận.
5000 tế bào tinh trùng cho mỗi lượt phân tích
Dữ liệu thu thập từ 5000 tế bào tinh trùng sẽ được xử lý để loại bỏ các tín hiệu nhiễu và các tế bào HDS với tín hiệu xanh quá cao Chỉ số DFI, hay tỉ lệ phân mảnh ADN của tinh trùng, được tính toán theo công thức cụ thể.
DFI = Tín hiệu huỳnh quang màu đỏ
Tổng tín hiệu huỳnh quang (đỏ + xanh lá) (%)
- DFI 15 – 30%: phân mảnh trung bình
Tinh trùng được phân loại thành các quần thể dựa trên cường độ tín hiệu huỳnh quang xanh và đỏ Các vùng tinh trùng với tín hiệu khác nhau được thể hiện trong Hình 1 và Hình 2 dưới đây.
Hình 2.1 Các quần thể phát quang khi phân tích tinh trùng bằng SCSA
Dữ liệu SCSA của người thường có tính phức tạp cao, với khả năng dịch chuyển của các quần thể lên xuống và sang hai bên Do đó, người thực hiện cần được hướng dẫn sử dụng hệ thống flow để điều chỉnh các vùng gating cho phù hợp với từng mẫu.
Hình 2.2 Một số ví dụ các quần thể tế bào tinh trùng trong mẫu tinh dịch người khi phân tích trên hệ thống flow cytymetry DxFlex
(A, B: Tế bào tinh trùng đã được gating chia thành các vùng quần thể a,b: Tế bào tinh trùng chưa gating.)
Vùng 1: Intact ADN: Tinh trùng có cấu trúc ADN nguyên vẹn
Vùng 2: Fragmented ADN: ADN tinh trùng bị phân mảnh
Vùng 3: Debris: Mảnh vỡ tế bào và các tín hiệu nhiễu
Vùng 4: HDS (High ADN Staining): là giá trị % tinh trùng chưa trưởng thành trong chất nhiễm sắc
Phân tích và xử lý số liệu
Tất cả các số liệu nghiên cứu được xử lý trên máy vi tính bằng phần mềm phân tích và xử lý số liệu SPSS
Trong nghiên cứu này, các phương pháp thống kê như giá trị trung bình, độ lệch chuẩn và tỉ lệ phần trăm được áp dụng để mô tả đặc điểm của tuổi và phân mảnh ADN tinh trùng Để đánh giá mối quan hệ giữa tuổi và phân mảnh ADN tinh trùng, phân tích tương quan Spearman đã được sử dụng.
Sự khác biệt được coi là có ý nghĩa thống kê khi p 30% (cao) Trong tổng số 1488 bệnh nhân, có 1036 bệnh nhân có DFI < 15%, 336 bệnh nhân có DFI nằm trong khoảng 15% đến 30%, và 116 bệnh nhân có DFI > 30% Giá trị DFI trung bình được ghi nhận là 13,46% với độ lệch chuẩn là 10,04.
Bảng 3.1 Tỉ lệ các khoảng giá trị DFI
Giá trị DFI Số lượng bệnh nhân Tỉ lệ phần trăm (%)
Hình 3.1 Biểu đồ phân bố bệnh nhân theo tỉ lệ phân mảnh ADN tinh trùng
Nhận xét: Đa số bệnh nhân thuộc nhóm DFI < 15%, chiếm 69,62% Nhóm DFI > 30% chiếm tỉ lệ thấp nhất 7,79%, xấp xỉ bằng 1/9 nhóm DFI < 15% và 1/3 nhóm 15% ≤ DFI ≤ 30%.
Mối liên hệ giữa tuổi và phân mảnh ADN tinh trùng
Nghiên cứu được chia thành các nhóm tuổi: 30% chiếm tỉ lệ 7,79%
Nghiên cứu cho thấy 7,79% bệnh nhân cần phương pháp hỗ trợ sinh sản ICSI do chỉ số DFI vượt quá 30% Điều này có nghĩa là trong số 13 nam giới nghi ngờ vô sinh, có 1 người cần thực hiện ICSI.
Phương pháp hỗ trợ sinh sản IUI và IVF cho thấy hiệu quả rõ rệt, với 69,62% bệnh nhân có DFI dưới 15% có khả năng thành công cao hơn so với những bệnh nhân khác Điều này có nghĩa là trong số 10 nam giới nghi ngờ vô sinh, có đến 7 người có khả năng thành công cao hơn khi áp dụng các phương pháp này.
2 Tuổi bệnh nhân càng cao thì chỉ số phân mảnh tinh trùng càng tăng Mức độ phân mảnh tinh trùng có mối tương quan thuận với tuổi của nam giới, tương quan có ý nghĩa thống kê khi tuổi nam giới ≥ 35 tuổi Vì vậy, qua kết quả nghiên cứu, nhận thấy cần khuyến khích nam giới nên có kế hoạch lập gia đình và sinh con trước ngưỡng tuổi 35
3 Nam giới cần thay đổi lối sống lành mạnh hơn và không nên kết hôn muộn
4 Hiện nay, ở hầu hết các bệnh viện và trung tâm hỗ trợ sinh sản tại Việt Nam, việc đánh giá khả năng sinh sản của nam giới đang được quan tâm chủ yếu bởi những chỉ số trong tinh dịch đồ như hình thái tinh trùng, mật độ, độ di động Tuy nhiên xét nghiệm tinh dịch đồ không đánh giá sâu chất lượng, cũng không đủ để dự đoán khả năng sinh sản của nam giới và khả năng thành công của kỹ thuật hỗ trợ sinh sản Xét nghiệm phân mảnh ADN tinh trùng là xét nghiệm tin cậy đánh giá được chất lượng tinh trùng, nên được áp dụng đồng thời với xét nghiệm tinh dịch đồ trong đánh giá chức năng sinh sản nam Sử dụng kết quả phân mảnh ADN tinh trùng như một giá trị tham khảo để dự đoán kết quả thụ tinh trong ống nghiệm
1 Geneva, Switzerland 1 in 6 people globally affected by infertility: WHO WHO 2023
2 Nguyễn Viết Tiến, Ngô Huy Toàn và Bạch Huy Anh Nghiên cứu thực trạng vô sinh ở Việt Nam theo các vùng sinh thái Bệnh viện Phụ sản Trung ương 2009
3 Pourmasumi S, Nazari A, Fagheirelahee N, et al Cytochemical tests to investigate sperm DNA damage: Assessment and review 2019; 8(5): 1533
4 Sakkas D, Alvarez J G J F, sterility Sperm DNA fragmentation: mechanisms of origin, impact on reproductive outcome, and analysis 2010; 93(4): 1027-1036
5 Skakkebaek N E, Rajpert-De Meyts E, Buck Louis G M, et al Male reproductive disorders and fertility trends: influences of environment and genetic susceptibility 2016; 96(1): 55-97
6 Das M, Al-Hathal N, San-Gabriel M, et al High prevalence of isolated sperm DNA damage in infertile men with advanced paternal age 2013; 30: 843-848
7 Chen Q, Zhao J-Y, Xue X, et al The association between sperm DNA fragmentation and reproductive outcomes following intrauterine insemination, a meta analysis 2019; 86: 50-55
8 Teves M E, Roldan ERJPR Sperm bauplan and function and underlying processes of sperm formation and selection 2022; 102(1): 7-60
9 Lehti M S, Sironen AJB o r Formation and function of sperm tail structures in association with sperm motility defects 2017; 97(4): 522-536
10 van der Horst G, Maree L J M r, development Sperm form and function in the absence of sperm competition 2014; 81(3): 204-216
11 Amelar R D, Dubin L, Schoenfeld C J F, et al Sperm motility 1980; 34(3): 197-215
12 Dallai R J A S, Development Overview on spermatogenesis and sperm structure of Hexapoda 2014; 43(4): 257-290
13 Dutta S, Majzoub A, Agarwal AJA j o u Oxidative stress and sperm function: A systematic review on evaluation and management 2019; 17(2): 87-97
14 O'Donnell L, Nicholls P K, O’Bryan M K, et al Spermiation: the process of sperm release 2011; 1(1): 14-35
15 Lüpold S, de Boer R A, Evans J P, et al How sperm competition shapes the evolution of testes and sperm: a meta-analysis 2020; 375(1813): 20200064
16 Ribas-Maynou J, Benet J J G Single and double strand sperm DNA damage: different reproductive effects on male fertility 2019; 10(2): 105
17 Johnson G D, Lalancette C, Linnemann A K, et al The sperm nucleus: chromatin, RNA and the nuclear matrix 2011; 141(1): 21
18 Laberge R-M, Boissonneault G J B o r On the nature and origin of DNA strand breaks in elongating spermatids 2005; 73(2): 289-296
19 Hao S-L, Ni F-D, Yang W-X J G The dynamics and regulation of chromatin remodeling during spermiogenesis 2019; 706: 201-210
20 Asadi A, Ghahremani R, Abdolmaleki A, et al Role of sperm apoptosis and oxidative stress in male infertility: A narrative review 2021; 19(6): 493
21 Singh A, Agarwal A J T O R S J The role of sperm chromatin integrity and DNA damage on male infertility 2011; 3(1)
22 Fuentes-Mascorro G, Serrano H, Rosado A J A o a Sperm chromatin 2000; 45(3): 215-225
23 Ward W S J M B s o r m Function of sperm chromatin structural elements in fertilization and development 2009; 16(1): 30-36
24 Hammoud S S, Nix D A, Zhang H, et al Distinctive chromatin in human sperm packages genes for embryo development 2009; 460(7254): 473-478
25 Ajduk A, Yamauchi Y, Ward M A J B o r Sperm chromatin remodeling after intracytoplasmic sperm injection differs from that of in vitro fertilization 2006; 75(3): 442-451
26 van der Heijden G W, Ramos L, Baart E B, et al Sperm-derived histones contribute to zygotic chromatin in humans 2008; 8(1): 1-6
27 Gonsalves J, Sun F, Schlegel P N, et al Defective recombination in infertile men 2004; 13(22): 2875-2883
28 Said T M, Paasch U, Glander H J, et al Role of caspases in male infertility 2004; 10(1): 39-51
29 Sakkas D, Mariethoz E, John J C S J E c r Abnormal sperm parameters in humans are indicative of an abortive apoptotic mechanism linked to the Fas- mediated pathway 1999; 251(2): 350-355
30 Walczak-Jedrzejowska R, Wolski J K, Slowikowska-Hilczer J J C E J
U The role of oxidative stress and antioxidants in male fertility 2013; 66(1): 60-67
31 Aitken R J, Gibb Z, Baker M A, et al Causes and consequences of oxidative stress in spermatozoa 2016; 28(2): 1-10
32 Sabeti P, Pourmasumi S, Rahiminia T, et al Etiologies of sperm oxidative stress 2016; 14(4): 231
33 Gill K, Jakubik-Uljasz J, Rosiak-Gill A, et al Male aging as a causative factor of detrimental changes in human conventional semen parameters and sperm DNA integrity 2020; 23(5): 1321-1332
34 Vagnini L, Baruffi R, Mauri A, et al The effects of male age on sperm DNA damage in an infertile population 2007; 15(5): 514-519
35 Le M T, Nguyen D N, Le D D, et al Impact of body mass index and metabolic syndrome on sperm DNA fragmentation in males from infertile couples: A cross-sectional study from Vietnam 2020; 7: 100054
36 Eini F, Kutenaei M A, Zareei F, et al Effect of bacterial infection on sperm quality and DNA fragmentation in subfertile men with Leukocytospermia 2021; 22(1): 1-10
37 Agarwal A, Hamada A, Esteves S C J N R U Insight into oxidative stress in varicocele-associated male infertility: part 1 2012; 9(12): 678-690
38 Allamaneni S S, Naughton C K, Sharma R K, et al Increased seminal reactive oxygen species levels in patients with varicoceles correlate with varicocele grade but not with testis size 2004; 82(6): 1684-1686
39 Youssry M, Orief Y, Ozmen B, et al Human sperm DNA damage in the context of assisted reproductive techniques 2007
40 Krzastek S C, Farhi J, Gray M, et al Impact of environmental toxin exposure on male fertility potential 2020; 9(6): 2797
41 Sepaniak S, Forges T, Gerard H, et al The influence of cigarette smoking on human sperm quality and DNA fragmentation 2006; 223(1-2): 54-60
42 Pourmasumi S, Sabeti P, Rahiminia T, et al The etiologies of DNA abnormalities in male infertility: An assessment and review 2017; 15(6): 331
43 Sansone A, Di Dato C, de Angelis C, et al Smoke, alcohol and drug addiction and male fertility 2018; 16(1): 1-11
44 Lewis S E, Aitken R J, Conner S J, et al The impact of sperm DNA damage in assisted conception and beyond: recent advances in diagnosis and treatment 2013; 27(4): 325-337
45 Leach M, Aitken R J, Sacks G J A, et al Sperm DNA fragmentation abnormalities in men from couples with a history of recurrent miscarriage 2015; 55(4): 379-383
46 Erenpreiss J, Spano M, Erenpreisa J, et al Sperm chromatin structure and male fertility: biological and clinical aspects 2006; 8(1): 11-29