TỔNG QUAN
Tổn thương khứu giác
Khứu giác, một trong năm giác quan cơ bản của con người và động vật, đóng vai trò quan trọng trong cuộc sống hàng ngày Hệ thống khứu giác cung cấp thông tin về các chất hóa học trong môi trường, giúp phát hiện mối nguy hiểm từ thức ăn và môi trường Ngoài ra, khứu giác còn hỗ trợ duy trì dinh dưỡng cho cơ thể thông qua cảm giác thèm ăn, cũng như duy trì hành vi giữa các cá nhân và sức khỏe thần kinh.
Tổn thương khứu giác là tình trạng suy giảm hoặc mất chức năng khứu giác do nhiều nguyên nhân khác nhau Rối loạn chức năng khứu giác được phân loại thành hai loại chính: rối loạn cường độ và rối loạn khả năng nhận thức về mùi.
Bảng 1.1: Phân loại rối loạn chức năng khứu giác [10–13]
Rối loạn về cường độ
Chức năng khứu giác giảm nhưng hiện tại tình trạng này vẫn có ích cho bệnh nhân trong cuộc sống hàng ngày
Chức năng khứu giác giảm rõ rệt và hiện tại tình trạng này không có ích cho bệnh nhân trong cuộc sống hàng ngày
Hyperosmia Chức năng khứu giác tăng bất thường Anosmia Mất chức năng khứu giác
Parosmia Cảm nhận được mùi này khi có sự kích thích của mùi khác
Rối loạn khả năng nhận thức về mùi
Phantosmia Cảm nhận được mùi nhưng không có kích thích mùi đó
Cacosmia Cảm nhận được mùi khó chịu nhưng không có sự hiện diện của chất kích thích mùi
Tổn thương khứu giác có thể gây ra nhiều vấn đề cho sức khỏe và chất lượng cuộc sống, khiến người bệnh gặp khó khăn trong việc nấu nướng, giảm cảm giác thèm ăn và duy trì vệ sinh cá nhân Họ cũng phải đối mặt với thách thức trong các mối quan hệ xã hội và có nguy cơ cao gặp chấn thương, đặc biệt là liên quan đến hóa chất nguy hiểm và thực phẩm ôi thiu, dẫn đến tình trạng suy dinh dưỡng.
Nghiên cứu của Temmel và cộng sự trên 278 bệnh nhân mắc rối loạn chức năng khứu giác cho thấy hầu hết người tham gia gặp khó khăn trong sinh hoạt hàng ngày Cụ thể, 73% cho biết gặp khó khăn khi nấu ăn, 68% thay đổi tâm trạng, 56% chán ăn, 50% ăn đồ ôi thiu, 30% thích đồ ăn khét, 41% nhận thức kém về mùi cơ thể và 8% gặp vấn đề trong công việc.
Khảo sát Kiểm tra Dinh dưỡng và Sức khoẻ Quốc gia Hoa Kỳ (NHANES) cho thấy 12,4% người từ 40 tuổi trở lên gặp rối loạn chức năng khứu giác, tương đương với 13,3 triệu người lớn, trong đó 55% là nam và 45% là nữ Tỷ lệ mắc bệnh theo độ tuổi cụ thể là 4,2% ở nhóm 40-49 tuổi, 10% ở nhóm 50-59 tuổi, 12,7% ở nhóm 60-69 tuổi, 25% ở nhóm 70-79 tuổi và 39,4% ở người từ 80 tuổi trở lên Đặc biệt, tình trạng mất khứu giác ảnh hưởng đến 3,2% người trên 40 tuổi, tương đương với 3,4 triệu người.
74 % nam/26 % nữ) [16] và con số này lên đến 14%-22% ở những người trên
Tỷ lệ mắc rối loạn khứu giác cao nhưng thường bị bỏ qua hơn so với các giác quan khác, dẫn đến việc chẩn đoán muộn Đáng chú ý, có đến 74,2% người mắc rối loạn chức năng khứu giác không nhận thức được tình trạng của mình.
Tổn thương khứu giác có thể xuất phát từ nhiều nguyên nhân khác nhau, trong đó một số nguyên nhân phổ biến bao gồm: hậu nhiễm trùng đường hô hấp trên (18–45%), bệnh mũi/xoang (7–56%), chấn thương đầu (8–20%), tiếp xúc với chất độc/thuốc độc (2–6%) và chứng mất khứu giác bẩm sinh (0–4%).
1.1.3.1 Rối loạn chức năng khứu giác thứ phát sau bệnh xoang mũi
Viêm mũi xoang là tình trạng viêm niêm mạc mũi và các xoang cạnh mũi, được chia thành viêm mũi xoang cấp tính (dưới 12 tuần) và viêm mũi xoang mạn tính (trên 12 tuần) Tình trạng này thường dẫn đến rối loạn chức năng khứu giác, với triệu chứng chính là giảm hoặc mất khứu giác, cùng với các biểu hiện như chảy nước mũi, đau vùng mũi và tắc nghẽn mũi Đặc biệt, bệnh polyp mũi có liên quan đến ít nhất 25% trường hợp mất khứu giác và ảnh hưởng đến hơn 10 triệu người Mỹ Những khiếm khuyết khứu giác ở bệnh nhân viêm mũi xoang xuất phát từ việc giảm luồng khí và giảm vận chuyển chất tạo mùi đến khe khứu giác, dẫn đến lượng chất tạo mùi đến niêm mạc khứu giác giảm xuống dưới ngưỡng phát hiện Khám tai mũi họng có thể phát hiện polyp mũi và viêm niêm mạc mũi, trong khi thử nghiệm khứu giác cho thấy ngưỡng mùi và khả năng phân biệt mùi giảm, nhưng khả năng nhận biết mùi vẫn bình thường.
1.1.3.2 Rối loạn chức năng khứu giác sau nhiễm trùng PIOD
Tổn thương khứu giác thường xảy ra do nhiễm trùng đường hô hấp trên nghiêm trọng do virus, là một trong những nguyên nhân phổ biến gây suy giảm khứu giác Mất khứu giác có thể khởi phát đột ngột, và bệnh nhân thường trải qua triệu chứng parosmia, khi họ cảm nhận được một mùi khác khi có sự kích thích của mùi khác.
Sự bất thường về khứu giác thường bắt đầu sau khi nhiễm trùng, gây ra viêm cấp tính ở niêm mạc mũi và dẫn đến tình trạng nghẹt mũi Hiện tượng này làm giảm luồng không khí đi qua biểu mô khứu giác, từ đó giảm khả năng phát hiện các chất tạo mùi.
6 mùi Tuy nhiên, phần lớn chức năng khứu giác sẽ bình thường khi tình trạng viêm cấp tính được kiểm soát
Một số loại virus phổ biến như coronavirus, rhinovirus, parainfluenza virus và Epstein-Barr virus được xác định là nguyên nhân gây ra PIOD Những loại virus này có thể làm hỏng chức năng khứu giác thông qua các cơ chế khác nhau, bao gồm gây mất một phần tế bào thần kinh thụ thể khứu giác, thay đổi tế bào biểu mô khứu giác và hình thành tế bào thần kinh chưa trưởng thành, ảnh hưởng đến khả năng nhận thức mùi của con người.
Trong những năm gần đây, dịch bệnh SARS-CoV-2 đã bùng phát mạnh mẽ, với 765.903.278 ca mắc và 6.927.378 trường hợp tử vong tính đến ngày 10 tháng 5 năm 2023 Các triệu chứng phổ biến của COVID-19 bao gồm sốt, ho, khó thở, đau cơ, nhức đầu, đau họng, chảy nước mũi và nghẹt mũi Đặc biệt, rối loạn chức năng khứu giác là một biểu hiện lâm sàng rất phổ biến, ảnh hưởng đến 47,85% bệnh nhân Cơ chế bệnh sinh của rối loạn khứu giác liên quan đến COVID-19 vẫn chưa được làm rõ hoàn toàn, nhưng có thể do tổn thương thần kinh khứu giác, sự phá hủy lớp biểu mô khứu giác do phản ứng viêm nghiêm trọng, hoặc nhiễm trùng tế bào thần kinh cảm giác khứu giác qua trung gian thụ thể NRP-1.
1.1.3.3 Rối loạn chức năng khứu giác liên quan đến bệnh thần kinh
Một số rối loạn thần kinh có thể dẫn đến suy giảm chức năng khứu giác, nhưng điều này không đặc trưng cho một bệnh thần kinh cụ thể nào Trong các rối loạn này, khả năng xác định và phân biệt mùi thường giảm, trong khi ngưỡng phát hiện mùi vẫn bình thường Suy giảm chức năng khứu giác diễn ra từ từ và không kèm theo các chứng rối loạn khứu giác khác Hai bệnh thần kinh phổ biến nhất liên quan đến tình trạng này là bệnh Alzheimer (AD) và bệnh Parkinson (PD).
Rối loạn chức năng khứu giác là dấu hiệu tiền lâm sàng của bệnh Parkinson, với hơn 90% bệnh nhân mắc PD gặp phải tình trạng này Suy giảm chức năng khứu giác thường xuất hiện nhiều năm trước khi có các triệu chứng vận động như run, cứng đờ và dáng đi chậm Nguyên nhân gây ra rối loạn khứu giác do PD liên quan đến sự thay đổi của các chất dẫn truyền thần kinh như acetylcholine, dopamine, norepinephrine và serotonin Hơn nữa, tế bào thần kinh chứa α-synuclein rất dễ bị tổn thương trong PD, trong khi tế bào thần kinh của hệ thống khứu giác cũng chứa α-synuclein, dẫn đến tổn thương và rối loạn chức năng khứu giác ở bệnh nhân PD.
Rối loạn chức năng khứu giác có thể là triệu chứng lâm sàng sớm của bệnh Alzheimer (AD) và giúp đánh giá mức độ nghiêm trọng cũng như tiến triển của bệnh Nghiên cứu cho thấy rằng rối loạn này liên quan đến những thay đổi bệnh lý của protein tau trong hành khứu giác.
Ngoài ra, trầm cảm là một trong những rối loạn tâm thần phổ biến nhất, và tình trạng này cũng có thể gây suy giảm chức năng khứu giác [10]
1.1.3.4 Rối loạn chức năng khứu giác sau chấn thương
Suy giảm khứu giác có thể xảy ra đột ngột hoặc từ từ sau chấn thương [10,24], ở bất kỳ phần nào của đường khứu giác từ khoang mũi đến não
[26] Kiểm tra khứu giác cho thấy ngưỡng mùi và khả năng phân biệt mùi bị suy giảm, trong khi khả năng nhận biết mùi vẫn bình thường [10,24]
Chè đắng (Ilex kudingcha C.J Tseng)
1.2.1 Tên gọi, vị trí phân loại Ở Việt Nam, tên khoa học của cây Chè đắng mọc ở vùng núi đá vôi thuộc tỉnh Cao Bằng và một số địa phương khác là Ilex kudingcha C.J Tseng (với tên đồng nghĩa là Ilex kaushue S.Y Hu) [6] Tên Việt Nam là Chè đắng, Ché khôm, Khổ đinh trà Vị trí phân loại của cây Chè đắng được thể hiện như sau: [6,7]
Phân lớp: Hoa hồng (Rosidae)
Họ: Nhựa ruồi hay Trâm bùi (Aquifoliaceae)
1.2.2 Đặc điểm thực vật, phân bố
Hình 1.1: Hình ảnh cây Chè đắng và búp Chè đắng khô
Cây chè đắng, theo tài liệu của Sở Khoa học công nghệ và môi trường tỉnh Cao Bằng (2002), không chỉ có giá trị kinh tế cao mà còn đòi hỏi kỹ thuật trồng trọt chuyên biệt Việc phát triển cây chè đắng có thể mang lại lợi ích kinh tế đáng kể cho nông dân, đồng thời góp phần vào việc bảo vệ môi trường Kỹ thuật trồng chè đắng cần được nghiên cứu và áp dụng đúng cách để tối ưu hóa năng suất và chất lượng sản phẩm.
Cây gỗ có chiều cao trung bình từ 6-20m, có thể đạt tới 35m, với đường kính thân từ 20-60cm, những cây lớn có thể lên tới 120cm Cành cây thô, màu nâu xám, không có lông, trong khi cành non hình trụ tròn có nhiều gờ nhỏ Lá đơn mọc cách, kích thước thay đổi; ở cây trưởng thành, lá dài từ 11-17cm và rộng từ 4-6cm Phiến lá có hình bầu dục, thuôn hoặc hình mác ngược với chóp nhọn hoặc tù, gốc hẹp dần Mép lá có răng cưa nhỏ, răng tù với đầu màu đen, cứng như sừng Mặt trên lá màu lục sẫm và bóng, trong khi mặt dưới màu lục nhạt, cả hai mặt đều không có lông.
Cây thường ra hoa từ tháng 2 đến tháng 4, với quả chín vào tháng 6 đến tháng 8 Hoa có màu trắng ngà, với cụm hoa đực ở nách lá, thường gồm 20-30 hoa có cuống dài 4-5mm Đài hoa có đường kính khoảng 3mm, cánh hoa dài 3,5-4mm và nhị ngắn hơn hoặc bằng cánh hoa Cụm hoa cái dạng chùm giả, gồm 3-9 hoa với cuống thô dài 4-6mm Quả hạch gần hình cầu, đường kính khoảng 1cm, khi chín có màu đỏ và chứa 3-4 hạt hình thuôn, dài 7mm, rộng 4mm, với bề mặt có vân và rãnh dạng mắt lưới.
Cây Chè đắng thường mọc rải rác trong rừng thường xanh cây lá rộng vùng núi đá vôi, ở ven suối hoặc trong rừng thưa bên sườn núi, ở độ cao 600- 900m [6]
Chè đắng phân bố rộng rãi ở nhiều khu vực trên thế giới, đặc biệt là tại Trung Quốc với các tỉnh như Hồ Bắc, Hồ Nam, Vân Nam, Quảng Tây và Quảng Đông Tại Việt Nam, chè đắng chủ yếu xuất hiện ở các vùng như Lào Cai (Sa Pa), Cao Bằng (Hạ Lang, Quảng Hòa, Thạch An), Hòa Bình (Lạc Thủy, Phố Sấu) và Ninh Bình (Cúc Phương) Đặc biệt, ở Cao Bằng, cây chè đắng mọc tự nhiên ở 6/12 huyện, chiếm 32,6% diện tích toàn tỉnh.
Triterpenoids, axit phenolic, flavonoid và tinh dầu đã được phân lập và xác định từ cây Chè đắng Trong số các thành phần đã được phát hiện,
15 triterpenoid và polyphenol được coi là những chất chuyển hóa quan trọng nhất, với nhiều hoạt tính sinh học khác nhau [8,38,40]
Các ursane triterpenoid với vòng lactone tại vị trí C20 và C28, bao gồm α-kudinlactone, β-kudinlactone và γ-kudinlactone, được xem là thành phần đặc trưng nhất trong Chè đắng Phân tích hóa học 45 loài thuộc chi này cho thấy sự phong phú và đa dạng của các hợp chất này.
Chè đắng, theo Ilex, chứa hàm lượng saponin cao nhất, với 52 loại saponin được phát hiện trong dịch chiết của nó, bao gồm ba saponin chính: kudinoside A, D và F Ngoài ra, cây Chè đắng còn chứa các triterpenes loại oleanane, lupane và glycoside của chúng.
Acid phenolic, đặc biệt là các hợp chất polyphenol, đã được phát hiện trong cây Chè đắng trong những năm gần đây Qua phân tích bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) và sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS), các acid như acid chlorogenic, acid cryptochlorogenic và acid isochlorogenic A, B, C đã được xác định Trong số đó, acid isochlorogenic A, B và C là ba hợp chất polyphenolic chiếm ưu thế nhất trong Chè đắng.
1.2.4 Một số nghiên cứu tác dụng của cây Chè đắng trong và ngoài nước
1.2.4.1 Sơ lược cây Chè đắng sử dụng làm thuốc Ở Trung Quốc, Chè đắng đã được sử dụng trong gần 2.000 năm như một loại trà để giải khát, tiêu đờm, phân tán nhiệt gió, loại bỏ độc tố khỏi máu giúp tinh thần sảng khoái và cải thiện thị lực Nó cũng đã được sử dụng để chữa cảm lạnh thông thường, viêm mũi, ngứa mắt, sung huyết kết mạc, đau đầu và rất hữu ích cho hệ tiêu hóa và giảm bớt tác dụng có hại của rượu [8]
Chè đắng, theo ghi chép trong “Ben Cao Shi Yi” của triều đại nhà Đường, có nhiều tác dụng chữa bệnh như giải khát, tiêu đờm, giảm phù nề, giúp sảng khoái tinh thần và cải thiện thị lực.
Chè đắng, theo Dược điển Việt Nam V, có vị đắng, ngọt và tính mát, quy vào kinh tâm, tỳ, thận Nó có công năng thanh nhiệt, giải thử, tiêu viêm, bình can hạ áp, chủ trị các triệu chứng như cảm nắng sốt cao, viêm họng, lỵ, viêm dạ dày cấp tính và đau đầu hoa mắt Ngoài ra, chè đắng còn được sử dụng để điều trị tăng huyết áp, cholesterol máu cao và trừ lỵ do thấp nhiệt.
1.2.4.2 Một số nghiên cứu tác dụng của cây Chè đắng trong nước
Nghiên cứu của tác giả Nguyễn Thị Lý đã chỉ ra rằng cao chiết lá Chè đắng (Ilex kudingcha C.J Tseng) có tác dụng cải thiện hội chứng tự kỷ ở chuột nhắt với liều 270 mg/kg và 540 mg/kg, giúp tăng cường tương tác cộng đồng, kéo dài thời gian khám phá cánh mở và cải thiện nhận thức Cao chiết này cũng cho thấy khả năng ức chế quá trình stress oxy hóa bằng cách loại bỏ các gốc tự do như DPPH và superoxide, ngăn chặn sự giảm GSH và bảo vệ tế bào thần kinh, từ đó góp phần cải thiện triệu chứng của hội chứng tự kỷ.
- Tác dụng điều trị đái tháo đường type 2
Nghiên cứu của tác giả Nguyễn Thị Nhung cho thấy cao chiết lá Chè đắng có IC50 là 147,25 µg/mL, cho thấy khả năng ức chế enzyme α-glucosidase Trên chuột nhắt trắng mắc bệnh tiểu đường type 2, sau 28 ngày điều trị với chiết xuất lá Chè đắng ở liều 100 mg/kg và 200 mg/kg, mức đường huyết giảm tương ứng 30,19% và 39,35% so với mức ban đầu Đặc biệt, ở liều 200 mg/kg, nồng độ glucose trong máu giảm nhiều hơn Ngoài ra, chiết xuất này cũng được chứng minh là hiệu quả trong việc giảm triglycerid, cholesterol toàn phần, LDL-cholesterol và tăng HDL-cholesterol.
- Tác dụng chống viêm gan và ức chế xơ gan
Nghiên cứu của Bùi Thị Bằng và các nhà nghiên cứu tại Viện Dược liệu chỉ ra rằng saponin toàn phần chiết xuất từ lá Chè đắng ở Cao Bằng có tác dụng bảo vệ gan, giảm hoạt tính men gan GPT (28,03%), bilirubin (11,96%) và hàm lượng collagen (30,6%) ở chuột bị xơ gan do CCl4 Ngoài ra, nó còn có khả năng chống oxy hóa (giảm 24,34% hàm lượng MDA), tăng tiết mật (25,41% khối lượng mật), chống viêm mạn tính (giảm 30,62% trọng lượng khối u) và chống viêm cấp tính (giảm 32,49% độ phù bàn chân của chuột).
- Tác dụng chống oxy hoá, bảo vệ tế bào gan, não
Nghiên cứu của Đặng Thị Mai Huy (2003) cho thấy flavonoid toàn phần có khả năng ức chế POL rõ rệt, với mức độ ức chế tỷ lệ thuận với nồng độ flavonoid Hoạt chất này trong Chè đắng cũng giúp thu gọn gốc tự do anion superoxide trong hệ Xanthine/Xanthine oxidase, và khả năng ức chế gốc tự do cũng tỷ lệ thuận với nồng độ flavonoid toàn phần.
1.2.4.3 Một số nghiên cứu tác dụng của cây Chè đắng trên thế giới
- Tác dụng chuyển hoá lipid
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng và nguyên liệu nghiên cứu
Cao chuẩn hoá lá Chè đắng (Ilex kudingcha C.J Tseng)
Chè đắng (ký hiệu mẫu IK) được thu hái tại Cao Bằng vào tháng 6/2018 và đã được PGS.TS Phạm Thị Thanh Huyền, Trưởng khoa Tài Nguyên Dược liệu tại Viện Dược liệu, giám định và lưu mẫu Sau khi thu hái, dược liệu được sấy khô ở nhiệt độ 50 độ C và đóng gói bảo quản ở nơi khô ráo nhằm phục vụ cho nghiên cứu.
2.1.1.2 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu
Mẫu cao chiết sử dụng trong nghiên cứu là sản phẩm của tiểu dự án First:
Hợp tác nghiên cứu về việc sàng lọc dược liệu có khả năng ngăn ngừa và hỗ trợ điều trị bệnh suy giảm trí nhớ đang được thực hiện dưới sự tài trợ của Ngân hàng Thế giới Nhóm nghiên cứu thuộc Khoa Hoá Thực vật – Viện Dược liệu đang tiến hành điều chế các dược liệu này nhằm tìm hiểu cơ chế tác dụng của chúng.
Quy trình chiết xuất lá Chè đắng được mô tả tóm tắt như sơ đồ dưới đây:
Hình 2.1: Quy trình chiết xuất Cao chuẩn hoá lá Chè đắng
Cao chuẩn hóa lá Chè đắng thu được có hàm lượng kudinosid E và kudinosid D lần lượt là khoảng 4,3% và 3,0%
2.1.2 Động vật thí nghiệm Động vật được sử dụng trong nghiên cứu là chuột nhắt trắng chủng Swiss albino, giống đực, trọng lượng trung bình 18-20 g (khoảng 4-5 tuần tuổi), được cung cấp bởi Viện vệ sinh dịch tễ Trung ương Chuột được chăm sóc và nuôi
2 Ngâm với cồn 80% theo tỷ lệ 1/10 trong 48h
Dịch chiết lần 1 Ngâm với cồn trong 24h
Thêm nước tỷ lệ 4:1 Để qua đêm Lọc
Cao chuẩn hoá lá Chè đắng
Sấy chân không (nhiệt độ 60˚C, hàm ẩm < 5%)
Trong nghiên cứu này, chuột được nuôi trong phòng thí nghiệm với nhiệt độ ổn định 22 ± 1°C và được cung cấp chế độ ăn uống đầy đủ Chu kỳ sáng tối được duy trì là 12 giờ ánh sáng và 12 giờ tối, với ánh sáng bắt đầu từ 7:00 đến 19:00 Trước khi tiến hành thí nghiệm, chuột được ổn định ít nhất trong 1 tuần.
2.1.3 Hoá chất, thiết bị và dụng cụ
Một số hoá chất, thuốc thử:
Một số hoá chất dùng trong nghiên cứu được liệt kê ở bảng 2.1
Bảng 2.1: Hoá chất được sử dụng trong nghiên cứu
STT Hoá chất Nguồn gốc
2 Peanut butter (Bơ lạc) Việt Nam
3 Hematoxylin và Eosin B Sigma-Aldrich, Hoa Kỳ
4 Ethanol dược dụng Việt Nam
6 Natri chloride (NaCl) 0,9% Việt Nam
8 Nước cất Khoa Dược lý – Sinh hoá
Hệ thống phân tích hành vi Any-maze (Stoeling, Hoa Kỳ)
Kính hiển vi soi ngược IX73 (Olympus, Đức)
Mô hình treo đuôi chuột
Mô hình tìm kiếm mùi
Cân kỹ thuật, cân phân tích (Hoa Kỳ)
Một số thiết bị cơ bản khác
Chuồng nuôi chuột và chai nước có đầu uống
Đầu kim cho uống, kim tiêm và xylanh 1 mL
Micropipet các loại và đầu típ tương ứng
Ngoài ra, còn có các dụng cụ cơ bản khác trong phòng thí nghiệm.
Phương pháp nghiên cứu
Thiết kế nghiên cứu được mô tả như hình 2.2:
Hình 2.2: Sơ đồ thiết kế nghiên cứu
2.2.1 Triển khai mô hình đánh giá tác dụng của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương cấp tính biểu mô khứu giác bằng ZnSO 4
Thiết kế thí nghiệm được mô tả như sau: Chuột nhắt giống đực 6 tuần tuổi được chia thành 4 lô, mỗi lô có từ 10 đến 11 con chuột:
Lô 1: lô chứng sinh lý, chuột được nhỏ mũi liều duy nhất bằng nước muối sinh lý 0,9% (20 μl/ lỗ mũi x 2 lỗ mũi) và uống nước trong suốt quá trình thí nghiệm
Lô 2: lô chứng bệnh lý, chuột được nhỏ mũi liều duy nhất bằng dung dịch ZnSO4 170 mM (20 μl/ lỗ mũi x 2 lỗ mũi) và uống nước trong suốt quá trình thí nghiệm Đánh giá tác dụng cải thiện tổn thương khứu giác của lá Chè đắng trên mô hình động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng cải thiện tổn thương khứu giác Đánh giá tác dụng cải thiện chức năng khứu giác
Thử nghiệm tìm kiếm mùi bơ lạc đã được thực hiện để đánh giá tác dụng cải thiện tổn thương biểu mô khứu giác Nghiên cứu này cũng đo độ dày lớp biểu mô khứu giác (OE) nhằm đánh giá hiệu quả chống trầm cảm của mùi hương này.
Thử nghiệm treo đuôi chuột
Lô 3: lô điều trị cao chiết lá Chè đắng liều 270 mg/kg, chuột được nhỏ mũi liều duy nhất bằng dung dịch ZnSO4 170 mM (20 μl / lỗ mũi x 2 lỗ mũi)
1 giờ sau khi nhỏ mũi bằng ZnSO4, chuột được uống cao lá Chè đắng với mức liều 270 mg/kg liên tục trong 2 tuần
Lô 4: lô điều trị cao chiết lá Chè đắng liều 540 mg/kg, chuột được nhỏ mũi liều duy nhất bằng dung dịch ZnSO4 170 mM (20 μl/ lỗ mũi x 2 lỗ mũi) 1 giờ sau khi nhỏ mũi bằng ZnSO4, chuột được uống cao lá Chè đắng với mức liều 540 mg/kg liên tục trong 2 tuần
Liều điều trị của lá Chè đắng được xác định dựa trên các nghiên cứu trước đây của nhóm tác giả tại Khoa Dược lý-Sinh hoá, Viện Dược liệu, với các liều lượng cụ thể là 270 mg/kg và 540 mg/kg thể trọng.
Sau khi áp dụng mô hình đánh giá tác dụng của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương biểu mô khứu giác cấp tính do ZnSO4, các thử nghiệm đánh giá hành vi và phương pháp nhuộm H&E đã được thực hiện theo quy trình đã được mô tả.
Hình 2.3: Sơ đồ quy trình nghiên cứu
2.2.2 Đánh giá tác dụng cải thiện tổn thương khứu giác và tác dụng chống trầm cảm của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương khứu giác gây bởi ZnSO 4
2.2.2.1 Đánh giá tác dụng cải thiện tổn thương khứu giác
Thử nghiệm tìm kiếm mùi bơ lạc
Nguyên tắc thử nghiệm hành vi tìm kiếm mùi được giới thiệu lần đầu vào năm 1971, cho phép đánh giá chức năng khứu giác của chuột một cách dễ dàng Thử nghiệm này dựa trên tập tính tự nhiên của chuột trong việc sử dụng khứu giác để tìm kiếm thức ăn Kết quả cho thấy, những con chuột có chức năng khứu giác suy giảm mất nhiều thời gian hơn để tìm thấy tấm giấy tẩm mùi bơ lạc so với những con chuột bình thường.
Chuột sẽ được nhịn đói qua đêm và có nước uống tự do trước khi tiến hành thử nghiệm hành vi tìm kiếm mùi Thử nghiệm diễn ra trong hộp nhựa kích thước 20 x 40 x 15 cm, với chất độn sâu 5 cm Một tấm giấy lọc 4 x 4 cm được tẩm bơ lạc (nồng độ 1,2 g/mL) được đặt ở dưới chất độn, cách 1 cm, tại vị trí trung tâm của mỗi phần tư trong hộp để hạn chế các yếu tố ngẫu nhiên Thời gian tiềm ẩn để chuột xác định vị trí tấm giấy sẽ được tính trung bình từ 3 lần thử nghiệm, mỗi thử nghiệm kéo dài 180 giây Thí nghiệm này dự kiến thực hiện vào ngày thứ 7 sau khi chuột được uống mẫu nghiên cứu.
Thông số đánh giá: Thời gian chuột tìm thấy vị trí tấm giấy tẩm mùi bơ lạc (giây)
Đánh giá tác dụng cải thiện tổn thương biểu mô khứu giác chuột bằng phương pháp nhuộm hóa mô Hemaotoxylin&Eosin (H&E)
Phương pháp nhuộm Hematoxylin – Eosin (H&E) sử dụng hai màu nhuộm liên tiếp, trong đó hematoxylin nhuộm các thành phần của nhân tế bào và eosin nhuộm các thành phần của bào tương Đặc điểm bắt màu tương phản của H&E giúp xác định chi tiết cấu trúc tế bào và mô, từ đó cung cấp thông tin quan trọng về đặc điểm của tế bào và cấu trúc mô học.
Chất tạo mùi được phát hiện ở vùng trên của mũi nhờ vào biểu mô khứu giác (OE), nơi chứa hàng triệu tế bào thần kinh cảm giác khứu giác (OSN) Những tế bào này tương tác với các phân tử mùi thông qua các thụ thể, giúp động vật nhận thức mùi và kích thích các phản ứng cảm xúc cũng như hành vi.
Khi khứu giác bị tổn thương do ZnSO4, lớp biểu mô khứu giác (OE) bị phá hủy Việc nhuộm H&E giúp phát hiện tình trạng tổn thương khứu giác và theo dõi khả năng cải thiện tổn thương trong mô hình nghiên cứu.
Quá trình tiến hành thí nghiệm được thực hiện như sau: sau khi kết thúc các thử nghiệm, chuột được gây mê bằng chloral hydrate với liều lượng 50 mg/kg Khi chuột đã gây mê hoàn toàn, các nhà nghiên cứu tiến hành rửa giải não chuột và tách đầu chuột, bao gồm cả não và mũi, để thu thập dữ liệu cần thiết.
Hình 2.5: A) Sơ đồ mô tả quá trình tách mũi chuột; B) Hình ảnh mũi chuột sau khi bị tách
Mẫu sau khi tách sẽ được hủy xương bằng dung dịch EDTA trong 1 tuần ở nhiệt độ 4°C Sau quá trình hủy xương, mẫu sẽ được cố định trong paraformaldehyde 4% ít nhất 2 giờ Mẫu sau đó sẽ được gửi tới Viện 108 để tiếp tục các bước xử lý, bao gồm đúc parafin và cắt tiêu bản Cuối cùng, tiêu bản mũi chuột sẽ được nhuộm H&E, với quy trình nhuộm được mô tả tóm tắt trong sơ đồ dưới đây.
Hình 2.6: Quy trình nhuộm hóa mô H&E
Nhân tế bào: xanh đến xanh đen
Bao tương tế bào: hồng đến đỏ
Những sai sót và hướng xử lý khi nhuộm H&E:
Bào tương và nhân đều bắt màu nhạt: thay thuốc nhuộm mới
Nhân nhạt màu: tăng thời gian nhuộm nhân
Nhân đậm màu quá mức: tẩy nhẹ bằng cồn-acid
Bước 1: Tẩy parafin trong 3 bể xylen, mỗi bể 5 phút
Bước 2: Nhúng qua 4 bể cồn: 100% - 95% - 80% - 70%, mỗi bể
15 lần Bước 3: Rửa bằng nước cất: nhúng 15 lần
Bước 4: Nhuộm nhân bằng Hematoxylin Harris 6 phút sau đó rửa dưới vòi nước chảy 10 phút
Bước 5: Nhuộm Eosin 1% (Eosin B) trực tiếp 1 -2 phút, sau đó rửa dưới vòi nước chảy 1 phút
Bước 6: Loại bỏ phẩm nhuộm thừa bằng cồn 95% - 100% 3 chặng, mỗi chặng 5-10 giây
Bước 7: Tẩy cồn bằng xylen: 3 chặng, mỗi chặng 5-10 giây Sau đó gắn lamen
Sau khi nhuộm H&E, các tiêu bản sẽ được quan sát dưới kính hiển vi soi ngược IX73 (Olympus, Đức) và chụp ảnh tại vật kính x4 và x10 để phân tích kết quả Độ dày lớp biểu mô khứu giác (OE) sẽ được đo bằng phần mềm đi kèm của kính hiển vi Để đảm bảo độ tin cậy của kết quả, thí nghiệm sẽ được lặp lại với 3 tiêu bản mũi/chuột, đo trung bình 5 vị trí/1 tiêu bản mũi.
Thụng số đỏnh giỏ: Độ dày lớp biểu mụ khứu giỏc (OE) (àm)
2.2.2.2 Đánh giá tác dụng chống trầm cảm bằng thử nghiệm treo đuôi chuột
Thử nghiệm treo đuôi chuột
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
Tác dụng cải thiện tổn thương khứu giác của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính gây bởi ZnSO 4 170mM
bị tổn thương khứu giác cấp tính gây bởi ZnSO 4 170mM
3.1.1 Tác dụng cải thiện chức năng khứu giác của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương khứu giác gây bởi ZnSO 4 bằng thử nghiệm tìm kiếm mùi Để đánh giá tác dụng cải thiện chức năng khứu giác của lá Chè đắng trên mô hình chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính gây bởi ZnSO4, chúng tôi tiến hành thử nghiệm hành vi tìm kiếm mùi Kết quả được thể hiện ở hình 3.1
Hình 3.1 trình bày biểu đồ đo thời gian tìm kiếm tấm giấy tẩm mùi bơ lạc của chuột trong các lô chuột thực nghiệm, với kết quả có ý nghĩa thống kê (p < 0,01; #p < 0,05 so với lô bệnh lý) Quan sát từ biểu đồ cho thấy sự khác biệt rõ rệt trong thời gian tìm kiếm giữa các nhóm chuột.
Nhóm chuột trong lô bệnh lý, bị tổn thương khứu giác cấp tính do ZnSO4 170 mM, đã tìm thấy vị trí tấm giấy tẩm mùi bơ lạc nhiều hơn đáng kể so với nhóm chuột ở lô sinh lý, với giá trị p đạt ý nghĩa thống kê.
Lô chuột được điều trị bằng cao chiết lá Chè đắng với liều lượng 270 và 540 mg/kg đã cho thấy thời gian tìm thấy vị trí tấm giấy tẩm mùi bơ lạc ngắn hơn đáng kể so với nhóm chuột bệnh lý, với p < 0,05.
3.1.2 Tác dụng cải thiện tổn thương biểu mô khứu giác của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương khứu giác gây bởi ZnSO 4 170 mM bằng phương pháp nhuộm hóa mô Hemaotoxylin&Eosin
Khi khứu giác bị tổn thương do ZnSO4, lớp OE sẽ bị ảnh hưởng, và việc nhuộm H&E giúp phát hiện tình trạng tổn thương khứu giác cũng như theo dõi khả năng cải thiện Chúng tôi đã thực hiện nhuộm H&E và đo lớp OE để đánh giá tác dụng cải thiện tổn thương biểu mô khứu giác.
Sau khi nhuộm H&E, tiêu bản sẽ được soi dưới kính hiển vi và chụp ảnh với vật kính x4 và x10 Dưới đây là một số hình ảnh minh họa biểu mô khứu giác điển hình của các lô chuột thực nghiệm.
Hình 3.2: Hình ảnh mô học biểu mô khứu giác của chuột lô ở sinh lý:
A) Ảnh chụp ở vật kính x4; B) Ảnh chụp ở vật kính x10
Lớp OE của lô chuột sinh lý trong hình ảnh 3.2 cho thấy sự dày dạn, săn chắc và liên kết chặt chẽ, không có dấu hiệu bị phá huỷ.
Hình 3.3: Hình ảnh mô học biểu mô khứu giác chuột ở lô bệnh lý:
A) Ảnh chụp ở vật kính x4; B) Ảnh chụp ở vật kính x10
Hình ảnh mô học của biểu mô khứu giác trong lô bệnh lý cho thấy lớp biểu mô khứu giác (OE) mỏng và có sự liên kết lỏng lẻo Trong một số trường hợp, lớp biểu mô này còn bị phá vỡ và rách.
Hình 3.4: Hình ảnh mô học biểu mô khứu giác chuột ở lô IK270: A) Ảnh chụp ở vật kính x4; B) Ảnh chụp ở vật kính x10
Hình 3.5: Hình ảnh mô học biểu mô khứu giác chuột ở lô IK540: A) Ảnh chụp ở vật kính x4; B) Ảnh chụp ở vật kính x10
Hình 3.4 và 3.5 minh họa mô học khứu giác của chuột, trong đó có sự khác biệt rõ rệt giữa các mẫu chuột được sử dụng cao chiết lá chè đắng Những hình ảnh này cho thấy tác động của chiết xuất lá chè đắng đến cấu trúc và chức năng của khứu giác ở chuột.
Lớp OE của hai lô chuột được thử nghiệm với liều 270 mg/kg và 540 mg/kg mỏng hơn so với lô chuột sinh lý, nhưng lại dày hơn và có sự liên kết chặt chẽ hơn so với lớp OE của nhóm chuột ở lô bệnh lý.
Sau khi chụp ảnh với vật kính x4 và x10, chúng tôi đã sử dụng phần mềm đi kèm của kính hiển vi soi ngược IX73 (Olympus, Đức) để đo độ dày của lớp biểu mô khứu giác (OE) Kết quả được trình bày trong bảng và hình ảnh dưới đây.
Bảng 3.1: Độ dày lớp biểu mô khứu giác của chuột giữa các lô thực nghiệm
Lô chuột Độ dày lớp biểu mô khứu giác
Giá trị p (so với lô bệnh lý)
Từ bảng trên, ta có thể lập thành biểu đồ dưới đây để có thể quan sát được khái quát kết quả hơn:
Hình 3.6: Biểu đồ đo độ dày lớp biểu mô khứu giác ở các lô chuột thực nghiệm; với ***p < 0,001; #p < 0,05; ##p < 0,01 so với lô bệnh lý
Dựa vào kết quả ở bảng 3.1 và hình 3.6, có thể thấy:
Lớp OE của chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính có kích thước trung bình là 20,54 ± 1,65 µm, nhỏ hơn đáng kể so với lớp OE của những con chuột ở trạng thái sinh lý với kích thước 48,01 ± 1,54 µm Sự khác biệt này đạt ý nghĩa thống kê với giá trị p < 0,001.
Nghiên cứu cho thấy lô chuột được điều trị bằng cao chiết lá Chè đắng với liều 270 mg/kg và 540 mg/kg đều cải thiện đáng kể độ dày lớp OE so với lô bệnh lý, với mức ý nghĩa thống kê p < 0,01 cho liều 270 mg/kg.
< 0,05 (đối với liều 540 mg/kg) Cụ thể, độ dày lớp OE ở liều 270 mg/kg là 26,19 ± 1,09 àm và ở liều 540 mg/kg là 25,19 ± 0,83 àm
Qua kết quả trên, có thể thấy cao chiết là Chè đắng ở cả 2 mức liều
Cả 270 mg/kg và 540 mg/kg đều cho thấy khả năng cải thiện tổn thương lớp biểu mô khứu giác, đặc biệt thông qua việc tăng cường độ dày của lớp OE khi được đánh giá bằng phương pháp nhuộm H&E.
Tác dụng chống trầm cảm của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính gây bởi ZnSO 4 bằng thử nghiệm treo đuôi chuột
Thử nghiệm treo đuôi chuột là phương pháp phổ biến để đánh giá hành vi trầm cảm ở loài gặm nhấm Chúng tôi đã áp dụng thử nghiệm này nhằm khảo sát tác dụng chống trầm cảm của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính do ZnSO4 gây ra Kết quả của nghiên cứu này được trình bày trong hình 3.7.
Hình 3.7: Biểu đồ đo thời gian bất động của chuột trong các lô chuột thực nghiệm; *p < 0,05; #p < 0,05 và ##p < 0,01 so với lô bệnh lý
Dựa vào kết quả của hình 3.7, có thể thấy:
Thời gian bất động của chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính do ZnSO4 170 mM gây ra cao hơn đáng kể so với chuột ở lô sinh lý, với ý nghĩa thống kê đạt p < 0,01.
Nhóm chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính sau khi điều trị bằng cao chiết lá Chè đắng với liều 270 mg/kg và 540 mg/kg cho thấy thời gian bất động giảm đáng kể so với nhóm chuột bệnh lý, với p < 0,01 cho liều 270 mg/kg và p < 0,05 cho liều 540 mg/kg.
BÀN LUẬN
Bàn luận về mô hình nghiên cứu
4.1.1 Về đối tượng nghiên cứu
Chè đắng (Ilex kudingcha C.J Tseng) mọc ở vùng núi đá vôi thuộc tỉnh Cao Bằng và một số địa phương khác ở Việt Nam
Nhiều nghiên cứu trong và ngoài nước đã chỉ ra rằng lá Chè đắng có nhiều tác dụng tích cực, bao gồm bảo vệ thần kinh, hỗ trợ chuyển hoá lipid, bảo vệ thành mạch, điều trị đái tháo đường, chống khối u và chống oxy hoá.
Lá Chè đắng đã được nghiên cứu rộng rãi về tác dụng của nó đối với hệ thần kinh Một nghiên cứu cho thấy lá Chè đắng có khả năng bảo vệ tế bào thần kinh khỏi tổn thương do thiếu máu cục bộ, nhờ vào tác dụng chống oxy hóa và chống viêm Nghiên cứu năm 2020 của PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng cho thấy cao chiết từ lá Chè đắng có khả năng phục hồi hành vi trên chuột tự kỷ, cải thiện lo âu, tăng cường tương tác xã hội và nâng cao nhận thức Ngoài ra, nghiên cứu gần đây tại Khoa Dược lý – Sinh hoá đã chỉ ra rằng chiết xuất lá Chè đắng giúp cải thiện trí nhớ ngắn hạn và dài hạn ở chuột bị tổn thương khứu giác Do đó, nhóm nghiên cứu sẽ tiếp tục điều tra tác dụng của cao chiết lá Chè đắng trong việc cải thiện chức năng khứu giác, chống trầm cảm và phục hồi lớp biểu mô khứu giác.
4.1.2 Về lựa chọn mô hình gây tổn thương khứu giác bằng dung dịch ZnSO 4
Trên toàn cầu, nhiều mô hình gây tổn thương khứu giác đã được áp dụng Trong số đó, mô hình gây tổn thương khứu giác cấp tính do ZnSO4 liều duy nhất là một trong những phương pháp phổ biến và hiệu quả nhất.
Nghiên cứu về tổn thương khứu giác mạn tính do ZnSO4 kéo dài, cùng với các mô hình gây tổn thương khứu giác từ Methimazole và mô hình cắt bỏ thuỳ khứu giác (OBX), đã chỉ ra nhiều phương pháp khác nhau trong việc khảo sát sự ảnh hưởng đến khứu giác.
Kẽm sulfate (ZnSO4) là một hợp chất vô cơ và là thuốc không kê đơn phổ biến để điều trị tình trạng thiếu kẽm ZnSO4 được ứng dụng để phá hủy biểu mô khứu giác ở nhiều loài khác nhau, và việc sử dụng nó như một mô hình gây tổn thương khứu giác cấp tính đã được chấp nhận rộng rãi Nghiên cứu của Ahn và cộng sự (2018) cho thấy liều duy nhất 170 mM ZnSO4 gây ra sự phá hủy biểu mô khứu giác và suy giảm chức năng khứu giác.
Mô hình cắt bỏ thuỳ khứu giác (OBX) là một phương pháp phổ biến để nghiên cứu tổn thương khứu giác Trong mô hình này, chuột được gây mê và thuỳ khứu giác sẽ bị phá hủy bằng dụng cụ chuyên dụng, dẫn đến việc chuột mất khứu giác vĩnh viễn.
Mô hình mất khứu giác do ZnSO4 liều duy nhất và phẫu thuật cắt bỏ thuỳ khứu giác (OBX) có một số khác biệt quan trọng Đầu tiên, ZnSO4 gây tổn thương tạm thời cho biểu mô khứu giác, trong khi OBX dẫn đến mất khứu giác vĩnh viễn Thứ hai, OBX làm giảm khả năng phát hiện pheromone ở chuột, một yếu tố quan trọng trong hành vi của chúng Thêm vào đó, OBX gây ra tình trạng phù nề, tổn thương tuần hoàn máu não và thoái hóa tế bào thần kinh ở các vùng liên quan đến khứu giác Cuối cùng, chuột OBX thể hiện mức độ trầm cảm cao hơn mà không có sự thay đổi về hành vi lo âu, trong khi ZnSO4 gây ra cả hai loại hành vi này Vì những lý do này, OBX thường được sử dụng để đánh giá mô hình trầm cảm ở chuột.
Vì những lý do ở trên, để đánh giá tác dụng cải thiện tổn thương khứu giác của lá Chè đắng (Ilex kudingcha C.J Tseng) trên mô hình động vật thực
38 nghiệm, chúng tôi quyết định sử dụng mô hình chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính gây bởi ZnSO4 170 mM liều duy nhất
4.1.3 Về căn cứ lựa chọn mức liều nghiên cứu
Nghiên cứu của Khoa Dược lý-Sinh hoá, Viện Dược liệu đã chỉ ra tác dụng của cao chiết lá Chè đắng trên mô hình chuột nhắt tự kỷ do muối natri valproat và mô hình suy giảm trí nhớ ở chuột bị cắt bỏ thuỳ khứu giác hai bên Chúng tôi đã chọn hai mức liều điều trị là 270 mg/kg và 540 mg/kg thể trọng để thực hiện nghiên cứu này.
4.1.4 Về việc không lựa chọn chứng dương trong nghiên cứu
Hiện tại, chưa có thuốc đặc hiệu điều trị tổn thương khứu giác, chỉ có thuốc hỗ trợ Trong nghiên cứu này, chúng tôi không sử dụng chứng dương mà đánh giá hiệu quả của các mô hình thử nghiệm qua việc so sánh kết quả giữa lô sinh lý và lô bệnh lý (chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính do ZnSO4 170 mM) Để đánh giá tác dụng của cao chiết lá Chè đắng đối với tổn thương khứu giác, chúng tôi so sánh kết quả của lô chuột được điều trị bằng cao chiết lá Chè đắng với lô chuột bệnh lý.
Bàn luận về kết quả nghiên cứu
4.2.1 Tác dụng cải thiện tổn thương khứu giác của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính gây bởi ZnSO 4 170 mM
4.2.1.1 Tác dụng cải thiện chức năng khứu giác của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính gây bởi ZnSO 4 170 mM bằng thử nghiệm tìm kiếm mùi
Khứu giác đóng vai trò quan trọng trong hành vi của động vật, ảnh hưởng đến việc tìm kiếm thức ăn, hành vi tình dục và xã hội Khi chuột bị tổn thương khứu giác do ZnSO4, chức năng khứu giác suy giảm, dẫn đến sự thay đổi trong hành vi, đặc biệt là trong việc tìm kiếm thức ăn Do đó, việc đánh giá tác dụng cải thiện khứu giác là cần thiết.
39 năng khứu giác của lá Chè đắng, chúng tôi sử dụng thử nghiệm tìm kiếm mùi, cụ thể là tìm kiếm tầm giấy tẩm mùi bơ lạc
Kết quả thử nghiệm hành vi tìm kiếm mùi cho thấy thời gian tìm thấy vị trí tấm giấy tẩm mùi bơ lạc ở lô bệnh lý cao hơn đáng kể so với lô sinh lý, chứng tỏ chức năng khứu giác của chuột bị suy giảm sau khi nhỏ dung dịch ZnSO4 170 mM liều duy nhất Phát hiện này phù hợp với nghiên cứu của Ahn và cộng sự, cho thấy chuột cũng gặp suy giảm chức năng khứu giác khi bị nhỏ mũi bằng ZnSO4 Điều này cho thấy đề tài đã thành công trong việc gây tổn thương khứu giác bằng ZnSO4, mở ra khả năng đánh giá tác dụng của lá Chè đắng trên mô hình này.
Nghiên cứu cho thấy, nhóm chuột được điều trị bằng cao chiết lá Chè đắng ở liều 270 mg/kg và 540 mg/kg có thời gian tìm kiếm tấm giấy tẩm mùi bơ lạc giảm đáng kể so với nhóm chuột bị tổn thương khứu giác Điều này cho thấy cao chiết lá Chè đắng có tác dụng cải thiện chức năng khứu giác trên mô hình chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính do ZnSO4 170 mM, được đánh giá qua thử nghiệm hành vi tìm kiếm mùi.
4.2.1.2 Tác dụng cải thiện tổn thương lớp biểu mô khứu giác của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính gây bởi ZnSO 4 170 mM bằng phương pháp nhuộm hóa mô Hemaotoxylin&Eosin
Chất tạo mùi được phát hiện ở vùng trên của mũi, nơi có biểu mô khứu giác chính (OE) chứa hàng triệu tế bào thần kinh cảm giác khứu giác (OSN) Các tế bào này tương tác với phân tử mùi qua các thụ thể chất tạo mùi, kích hoạt tín hiệu truyền qua sợi trục đến hành khứu giác chính của não Thông tin mùi sau đó được gửi đến các vùng khác trong não, dẫn đến nhận thức về mùi, phản ứng cảm xúc và hành vi.
Nhuộm Hematoxylin&Eosin (H&E) là một kỹ thuật nhuộm quan trọng trong chẩn đoán giải phẫu bệnh, giúp đánh giá mối quan hệ giữa các tế bào và các thành phần cấu trúc cơ bản của biểu mô, mô liên kết, thần kinh và mô cơ Phương pháp này đóng vai trò then chốt trong việc cung cấp thông tin cần thiết cho việc phân tích và chẩn đoán bệnh lý.
Phương pháp nhuộm H&E được áp dụng để nhuộm biểu mô khứu giác, cho phép đánh giá mức độ tổn thương của lớp biểu mô khứu giác (OE) thông qua việc đo độ dày của nó.
Kết quả thực nghiệm cho thấy nhóm chuột bị tổn thương khứu giác có lớp OE mỏng, liên kết lỏng lẻo và đôi khi bị rách, trong khi nhóm chuột sinh lý có lớp OE dày, săn chắc và liên kết chặt chẽ Các lô chuột được điều trị bằng cao chiết lá Chè đắng cho thấy tác dụng cải thiện rõ rệt tổn thương biểu mô khứu giác, nhờ khả năng tăng cường độ dày của lớp OE.
Nghiên cứu của Noda và cộng sự cho thấy Tokishakuyakusan có tác dụng tích cực trong việc tái tạo tế bào thần kinh khứu giác ở chuột Họ đã sử dụng Methimazole để tạo mô hình tổn thương khứu giác, tương tự như mô hình gây tổn thương bằng ZnSO4 Kết quả cho thấy sau 14 và 28 ngày tiêm Methimazole, lớp biểu mô khứu giác (OE) ở chuột được điều trị bằng Tokishakuyakusan dày hơn đáng kể so với nhóm không được điều trị.
Cao chiết lá Chè đắng có khả năng cải thiện tổn thương lớp biểu mô khứu giác, đặc biệt trong mô hình chuột bị tổn thương khứu giác do ZnSO4.
4.2.2 Tác dụng chống trầm cảm của lá Chè đắng trên chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính gây bởi ZnSO 4 170 mM thông qua thử nghiệm treo đuôi chuột Để khảo sát tác dụng chống trầm cảm của cao chiết lá chè đắng ở 2 mức liều 270 mg/kg và 540 mg/kg, chúng tôi đã sử dụng thử nghiệm treo đuôi chuột Thử nghiệm treo đuôi chuột là một trong những thử nghiệm rộng rãi nhất để đánh giá tác dụng giống thuốc chống trầm cảm ở chuột nhắt Thử nghiệm này dựa trên thực tế rằng khi chuột phải chịu stress cấp tính và không thể trốn thoát khi bị treo lơ lửng thì sẽ hình thành một tư thế bất động Các loại thuốc chống trầm cảm có khả năng đảo ngược hành vi bất động và thúc đẩy xuất hiện các hành vi liên quan đến trốn thoát ở chuột, do đó làm giảm thời gian bất động của chuột
Trong nghiên cứu này, thử nghiệm treo đuôi chuột được thực hiện vào ngày thứ 7 và thứ 14 sau khi chuột uống mẫu nghiên cứu Kết quả cho thấy thời gian bất động của chuột sinh lý thấp hơn so với lô chuột bị tổn thương khứu giác cấp tính, cho thấy chuột có xu hướng bị trầm cảm sau khi bị tổn thương bởi ZnSO4 Kết quả này tương đồng với nghiên cứu của Ahn và cộng sự, cho thấy chuột bệnh lý có thời gian bất động tăng so với nhóm chuột bình thường.
Nghiên cứu về tác dụng của cao chiết lá Chè đắng cho thấy cả hai liều lượng 270 mg/kg và 540 mg/kg đều có hiệu quả chống trầm cảm, được thể hiện qua việc cải thiện thời gian bất động của chuột trong thử nghiệm hành vi treo đuôi.
Nhiều nghiên cứu trong nước và quốc tế đã khẳng định tác dụng của lá Chè đắng đối với hệ thần kinh Viện Dược liệu đã chỉ ra rằng lá chè đắng có khả năng cải thiện các triệu chứng tự kỷ, bao gồm giảm lo âu, tăng cường tương tác xã hội và cải thiện trí nhớ trên mô hình chuột tự kỷ Ngoài ra, nghiên cứu của Kim và cộng sự cho thấy Chè đắng có khả năng bảo vệ tế bào thần kinh khỏi tổn thương do thiếu máu cục bộ thoáng qua, giảm thiểu đáng kể tình trạng phù nề, thiếu máu thần kinh và chết tế bào não do MCAO/tái tưới máu.