Đánh giá tác dụng và sơ bộ cơ chế tác dụng của một số phân đoạn từ cao chiết n butannol từ lá chè đắng (ilex kudingcha c j tseng) trên mô hình ruồi giấm đột biết gen mang bệnh tự kỷ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐINH THỊ MINH “ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG VÀ SƠ BỘ CƠ CHẾ TÁC DỤNG CỦA MỘT SỐ PHÂN ĐOẠN TỪ CAO CHIẾT N- BUTANOL TỪ LÁ CHÈ ĐẮNG (ILEX KUDINGCHA C.J.TSENG) TRÊN MƠ HÌNH RUỒI GIẤM ĐỘT BIẾN GEN MANG BỆNH TỰ KỶ’’ LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐINH THỊ MINH “ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG VÀ SƠ BỘ CƠ CHẾ TÁC DỤNG CỦA MỘT SỐ PHÂN ĐOẠN TỪ CAO CHIẾT N- BUTANOL TỪ LÁ CHÈ ĐẮNG (ILEX KUDINGCHA C.J.TSENG) TRÊN MƠ HÌNH RUỒI GIẤM ĐỘT BIẾN GEN MANG BỆNH TỰ KỶ’’ LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH HOÁ SINH DƯỢC MÃ SỐ: 8720208 Người hướng dẫn khoa học : PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng PGS.TS Nguyễn Thị Lập HÀ NỘI 2022 LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng, PGS.TS Nguyễn Thị Lập giáo viên hướng dẫn ln nhiệt tình giúp đỡ, hết lịng bảo trực tiếp hướng dẫn tơi suốt thời gian thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn anh chị nghiên cứu viên Khoa Dược lý Sinh hoá - Viện Dược liệu, thầy giáo mơn Hóa sinh Dược - trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện để tơi hồn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến tồn thể thầy giáo cán trường Đại học Dược Hà Nội nhiệt tình giảng dạy, giúp đỡ mang lại cho tơi kiến thức kinh nghiệm quý báu suốt thời gian học tập trường Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu, phòng Sau đại học phòng ban khác trường Đại học Dược Hà Nội, đặc biệt ThS Chu Lê Mai tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành chương trình đào tạo thạc sĩ thời hạn Cuối cùng, xin bày tỏ yêu thương biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè ln bên tôi, ủng hộ chỗ dựa tinh thần tơi gặp khó khăn học tập sống Hà Nội, ngày 20 tháng 04 năm 2022 Học viên cao học Đinh Thị Minh i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC BẢNG .vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 BỆNH TỰ KỶ .3 1.1.1 Sơ lược bệnh tự kỷ 1.1.2 Nguyên nhân gây bệnh yếu tố di truyền học .3 1.1.3 Tác động stress oxy hoá đến ASD 1.1.4 Thuốc điều trị tự kỷ 1.1.5 Một số mơ hình nghiên cứu rối loạn tự kỷ .8 1.2 CHÈ ĐẮNG 10 1.2.1 Tên gọi – vị trí phân loại .10 1.2.2 Đặc điểm thực vật, phân bố 10 1.2.3 Thành phần hóa học 11 1.2.4 Một số nghiên cứu thực Chè đắng 11 1.3 RUỒI GIẤM .14 1.3.1 Đặc điểm .14 1.3.2 Hệ gen ruồi giấm 14 1.3.3 Chu kỳ vòng đời 15 1.3.4 Cấu trúc thần kinh ruồi giấm 15 1.3.5 Mơ hình ruồi giấm đột biến gen rugose mang bệnh tự kỷ 17 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu (hoặc nguyên vật liệu) .18 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.1.2 Chủng ruồi giấm phục vụ nghiên cứu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu .20 2.2.1 Nhân dòng ruồi giấm tự kỷ hoang dại phục vụ nghiên cứu .21 2.2.2 Đánh giá ảnh hưởng mẫu nghiên cứu hành vi tương tác xã hội thử nghiệm tương tác cộng đồng (Social space assay): 23 2.3.3 Đánh giá ảnh hưởng mẫu nghiên cứu trí nhớ ngắn hạn mơ hình ruồi giấm tự kỷ 24 2.3.4 Đánh giá ảnh hưởng mẫu nghiên cứu khả vận động ấu trùng ruồi giấm 25 ii 2.3.5 Phương pháp đánh giá tác dụng chống oxy hóa in vitro số cao chiết phân đoạn n- butanol từ chè đắng 27 2.3.6 Phương pháp đánh giá tác dụng chống oxy hóa số cao chiết phân đoạn n- butanol từ chè đắng thử nghiệm ex vivo dịch đồng thể đầu ruồi giấm 28 2.3.7 Đánh giá thay đổi cấu trúc thần kinh (Neuromuscular junction NMJ) phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang .31 2.3.8 Phân tích kết 33 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 34 3.1 Nội dung 1: Đánh giá tác dụng cải thiện bệnh tự kỷ cao chiết phân đoạn n- butanol chè đắng mô hình ruồi giấm đột biến gen rugose .34 3.1.1 Kết thử nghiệm hành vi tương tác cộng đồng ( Social Interaction)34 3.1.2 Kết đánh giá khả nhớ mùi ấu trùng ruồi giấm ( Odor- taste learning) 37 3.1.3 Kết thử nghiệm hành vi bò ấu trùng ( Crawling assay) 38 3.2.1 Hoạt tính khử gốc DPPH in vitro cao chiết phân đoạn nbutanol chè đắng 40 3.2.2 Hoạt tính khử gốc DPPH thử nghiệm ex vivo dịch đồng thể đầu ruồi giấm 41 3.2.3 Kết định lượng MDA (Malondialdehyd) dịch đồng thể đầu ruồi điều trị cao chiết phân đoạn n- butanol từ chè đắng .42 3.2.4 Kết đánh giá thay đổi cấu trúc thần kinh (Neuromuscular junction - NMJ) phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang .43 Chương 4: BÀN LUẬN 47 4.1 Về mơ hình nghiên cứu .47 4.1.1.Về việc lựa chọn mơ hình ruồi giấm mang bệnh tự kỷ 47 4.1.2 Về việc lựa chọn cao chiết dược liệu nghiên cứu 48 4.1.3 Về lựa chọn mức liều nghiên cứu .49 4.1.4 Về không lựa chọn chứng dương nghiên cứu .49 4.2 Về kết nghiên cứu .49 4.2.1 Đánh giá tác dụng cải thiện thiếu hụt hành vi tương tác cộng đồng ruồi giấm đột biến gen rugose mang bệnh tự kỷ 49 4.2.2 Đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ ngắn hạn ấu trùng ruồi giấm đột biến gen rugose mang bệnh tự kỷ 50 4.2.3 Đánh giá tác dụng cải thiện hành vi vận động ấu trùng ruồi giấm bậc ba ruồi giấm tự kỷ trưởng thành mang gen đột biến rugose 51 4.2.4 Đánh giá tác dụng chống oxy hóa invitro cao chiết phân đoạn IB2 IB5 từ chè đắng 52 iii 4.2.5 Đánh giá tác dụng chống oxy hóa ex vivo dịch đồng thể đầu ruồi 53 4.2.6 Đánh giá thay đổi cấu trúc thần kinh (Neuromuscular junction NMJ) phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang .54 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 55 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu ASD ADN AM ARN BuOH CantonS CĐ DCM DLG DPPH Viết đầy đủ theo tiếng Anh Viết đầy đủ theo tiếng Việt Autism spectrum disorders Rối loạn phổ tự kỷ Deoxyribonucleic acid n- amyl acetate Ribonucleic acid n- butanol Acid deoxyribonucleic n- amyl acetat Acid ribonucleic n- butanol Ruồi giấm chủng hoang dại Chè đắng Dichloromethan Kháng thể Discs-Large Ilex kudingcha C.J.Tseng Dichloromethane Discs-Large 1,1-Diphenyl-2picrylhydrazyl 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl DPPH 1,1-Diphenyl-2 picrylhydrazyl 1,1-Diphenyl-2 picrylhydrazyl FDA Food and Drug Administration Cơ quan quản lý thực phẩm thuốc Hoa Kỳ FICT Fluorescein isothiocyanate Fluorescein isothiocyanat HL3 Hemolymph-like saline Dung dịch muối HL3 Learning Index Malondialdehyd Methanol Neurobeachin Neuromuscular junction 1-Octanol Optical density Phosphat buffer saline Preference Reactive oxygen species Cao chiết phân đoạn n-butanol từ chè đắng Chỉ số học tập Malondialdehyd Methanol Gen Neurobeachin ( Rugose) Cấu trúc thần kinh 1-Octanol Mật độ quang Đệm phosphat Chỉ số ưu tiên Các gốc phản ứng oxy hoá Social Interaction Tương tác cộng đồng Thiobarbituric acid Acid thiobarbituric IB LI MDA MeOH NBEA NMJ OCT OD PBS PREF ROS Social Interaction TBA v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Hóa chất sử dụng nghiên cứu .19 Bảng 2 Dụng cụ thiết bị nghiên cứu 19 Bảng Thành phần cho 500ml thức ăn ruồi giấm 21 Bảng Kết phân tích khoảng cách tương tác khơng gian ruồi giấm lô ruồi giấm sử dụng cao chiết phân đoạn n- butanol từ chè đắng IB1 IB11 hai nồng độ 0,8 mg/ml mg/ml 34 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1 Hình ảnh Chè đắng Chè đắng khơ (Ilex kudingcha C.J Tseng) 10 Hình Chu kỳ vòng đời ruồi giấm 15 Hình Cấu trúc thần kinh ấu trùng ruồi giấm 16 Hình Sơ đồ thiết kế nghiên cứu .20 Hình 2 Hình ảnh mô thử nghiệm đánh giá khả tương tác xã hội ruồi giấm .23 Hình Thiết kế thí nghiệm đánh giá khả nhớ mùi ấu trùng ruồi giấm .25 Hình Hình ảnh mơ thử nghiệm kết xử lý phần mềm Image- J để đánh giá khả vận động hành vi bò ấu trùng ruồi giấm bậc 26 Hình Phản ứng DPPH chất chống oxy hóa 27 Hình Phản ứng MDA TBA .30 Hình Giải phẫu ấu trùng ruồi giấm bậc 32 Hình Tác dụng cải thiện hành vi giao tiếp xã hội đánh giá thử nghiệm hành vi tương tác cộng đồng ruồi giấm rugose trưởng thành cao chiết IB2 IB5 36 Hình Tác dụng cải thiện trí nhớ ngắn hạn cao chiết phân đoạn IB2, IB5 ấu trùng bậc ruồi giấm rugose .37 Hình 3 Hình ảnh đường ấu trùng ruồi giấm bậc ba sau phân tích qua phần mềm Image-J 38 Hình Tác dụng cải thiện khả vận động cao chiết phân đoạn IB2, IB5 ấu trùng bậc ruồi giấm rugose 39 Hình Hoạt tính dọn gốc DPPH cao chiết 40 Hình Khả ức chế gốc tự DPPH đầu ruồi giấm lơ khác 41 Hình 7.Nồng độ MDA dịch đồng thể đầu ruồi lơ nghiên cứu 43 Hình Kết phân tích cấu trúc thần kinh (Neuromuscular junction-NMJ) nhóm số ấu trùng ruồi giấm bậc phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang 45 vii ĐẶT VẤN ĐỀ Rối loạn phổ tự kỷ (Autism spectrum disorders, ASD) tình trạng rối loạn hành vi nhóm rối loạn phát triển lan tỏa, đặc trưng suy giảm khả hòa nhập xã hội, suy giảm khả giao tiếp, có hành vi rập khn, lặp lại quan tâm mang tính hạn hẹp Bệnh xuất liên quan đến yếu tố di truyền, sinh học, môi trường tương tác gen môi trường Hiện ASD coi bệnh xã hội đại với tỷ lệ mắc tăng lên nhanh chóng tất quốc gia Số lượng trẻ em mắc chứng tự kỷ cộng đồng mức báo động với tỷ lệ ước tính 160 trẻ có trẻ mắc tự kỷ, đặc biệt trẻ nhỏ, gây ảnh hưởng nhiều đến sống trẻ Hiện chưa có phương pháp điều trị khỏi, biện pháp giúp cải thiện triệu chứng bệnh Vì vậy, bệnh trở thành gánh nặng trẻ tự kỷ gia đình trẻ, mối quan tâm tồn xã hội Chè đắng có tên khoa học Ilex kudingcha C.J.Tseng, loài thân gỗ sống lâu năm mọc vùng núi đá vôi Việt Nam, phân bố chủ yếu số tỉnh Lào Cai, Lạng Sơn, Cao Bằng, Hịa Bình Ninh Bình Trong y học cổ truyền Việt Nam, Chè đắng sử dụng làm vị thuốc để loại bỏ độc tố, kháng khuẩn, giảm khát ho, ngứa mắt, mắt đỏ, đặc biệt để tăng cường tập trung cải thiện trí nhớ Triterpenoid, acid phenolic, flavonoid tinh dầu chất Chè đắng thành phần có tác dụng bảo vệ hệ thống mạch máu, điều hòa trình chuyển hóa lipid, có tác dụng chống oxy hoá, hạ đường huyết ức chế khối u [45] Trong khn khổ đề tài sở nhóm nghiên cứu năm 2019: “Nghiên cứu sàng lọc tác dụng số cao chiết dược liệu mơ hình ruồi giấm tự kỷ thực nghiệm” cho thấy cao chiết dược liệu: Rau đắng biển (nồng độ mg/ml); Chè đắng (2 mg/ml) Ngũ gia bì hương (2 mg/ml) thể tác dụng điều trị tự kỷ mơ hình ruồi giấm thơng qua tiêu chí làm giảm khoảng cách tương tác cá thể ruồi giấm; thử nghiệm đánh giá hành vi thức/ngủ, kết nghiên cứu bước đầu mẫu cao chiết chè đắng (2 mg/ml) cho thấy có tác dụng kéo dài thời gian ngủ vào ban đêm buổi trưa; đồng thời đỉnh hoạt động mạnh xác định vào buổi sáng (10 h) buổi tối (20 h) [7] Đến năm 2020, nhóm nghiên cứu tiếp tục đánh giá tác dụng cải thiện hội chứng tự kỷ chè đắng mơ hình chuột nhắt tự kỷ gây natri valproat, kết luận cao chiết chè đắng có khả cải thiện hội chứng tự kỷ chống lo âu, tăng tương tác xã hội cải thiện suy giảm trí nhớ/ nhận thức mô Nghiên cứu Simon cộng [47] cho thấy khác biệt giới tính không ảnh hưởng đến hành vi tương tác cộng đồng ruồi Vì vậy, chúng tơi thống kê liệu quần thể bao gồm ruồi đực ruồi Tuy nhiên, để giảm ảnh hưởng tương tác giới tính, ví dụ giao phối, đến mơ hình hành vi, chúng tơi thực thí nghiệm nhóm ruồi đực ruồi riêng rẽ Hình ảnh phân bố quần thể ruồi không gian số khoảng cách đến ruồi gần Hình 3.1 cho thấy ruồi giấm mang gen đột biến bị giảm khả tương tác cộng đồng Các cá thể nhóm bệnh chứng đứng riêng lẻ rải rác khơng gian, di chuyển thành đám giống nhóm ruồi giấm chủng hoang dại Minh chứng cho điều khoảng cách gần hai cá thể nhóm ruồi đột biến gen rugose tăng lên rõ rệt so với nhóm ruồi giấm chủng hoang dại Kết phù hợp với kết công bố giới [47], [57] khác biệt khoảng cách cá thể tương tác xã hội phân bố ngẫu nhiên [47] Kết sàng lọc phân đoạn từ cao chiết n- butanol chè đắng từ IB1IB11 nồng độ 0.8 mg/ml cho thấy cao chiết phân đoạn IB2 IB5 nồng độ mg/ml làm giảm khoảng cách ngắn hai cá thể ruồi giấm đột biến gen rugose với khác biệt đạt ý nghĩa thống kê p < 0,05 Như vậy, việc sử dụng cao chiết phân đoạn IB2-2 IB5-2 có tác dụng cải thiện thiếu hụt hành vi tương tác cộng đồng ruồi giấm đột biến gen rugose bệnh tự kỷ Chính thế, chúng tơi tiếp tục đánh giá mơ hình cao chiết 4.2.2 Đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ ngắn hạn ấu trùng ruồi giấm đột biến gen rugose mang bệnh tự kỷ Sự thiếu hụt khả học tập ghi nhớ ghi nhận số nhóm trẻ em mắc ASD Chúng tơi sử dụng mơ hình đánh giá khả học tập ghi nhớ mùi ấu trùng ruồi giấm (Odor – taste learning) nhằm đánh giá hiệu tác dụng cao chiết phân đoạn IB2-2 IB5-2 lên khả ghi nhớ ngắn hạn ấu trùng ruồi giấm tự kỷ Kết thực nghiệm khả ghi nhớ mùi lô bệnh lý Rugose hẳn so với lô chứng sinh lý CantonS có ý nghĩa thống kê, cho thấy mơ hình hồn tồn phù hợp để đánh giá tác dụng mẫu cải thiện hành vi học tập - ghi nhớ Ruồi giấm đột biến gen rugose thể chức tương đồng với gen neurobeachin 50 người liên quan tới học tập, ghi nhớ Kết hoàn toàn tương đồng với nghiên cứu trước tác giả Volders cộng [55] Kết cao chiết phân đoạn IB2-2 IB5-2 cho thấy tác dụng cải thiện khả ghi nhớ Chỉ số học tập hai nhóm ruồi tăng lên so với ruồi tự kỷ, khác biệt đạt ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Trong nghiên cứu tác giả Volder học tập ghi nhớ mùi ruồi giấm liên quan trực tiếp tới tế bào Kenyo, hình thành cấu trúc hình thái vùng MB (Mushroom body) thuộc thần kinh trung ương (CNS) ruồi giấm [55] Điều gợi ý cho đích tác dụng cao chiết phân đoạn IB2 IB5 cấu trúc MB thuộc hệ thần kinh trung ương, nhiên cần nghiên cứu sâu để khẳng định xác 4.2.3 Đánh giá tác dụng cải thiện hành vi vận động ấu trùng ruồi giấm bậc ba ruồi giấm tự kỷ trưởng thành mang gen đột biến rugose Cải thiện tốc độ di chuyển tiêu chí nhằm đánh giá hiệu tác dụng dược liệu lên chức vận động ruồi giấm Kết Hình 3.3 Hình 3.4 ruồi giấm đột biến gen rugose bệnh tự kỷ có tốc độ bị chậm so với ruồi giấm chủng hoang dại Ngoài ra, quan sát trình thực nghiệm cho thấy ruồi giấm mang gen đột biến có xu hướng di chuyển cuộn trịn, tuyến tính so với đường nhóm ruồi sinh lý Điều phù hợp với kết nghiên cứu trước Wise cộng [57] Sự khác biệt lô chứng sinh lý lô chứng bệnh lý cho thấy mơ hình phù hợp để đánh giá tác dụng cao chiết IB2 IB5 IB2 IB5 nồng độ mg/ml cho thấy tác dụng cải thiện chức vận động ruồi giấm, làm tăng 14 % tốc độ di chuyển trung bình ấu trùng ruồi giấm đột biến gen, khác biệt đạt ý nghĩa với p < 0,01 Trong trình phát triển, hệ thống NMJ phát triển theo tăng cường kích thước sợi để đảm bảo trì xác synap điều khiển Từ lúc nở tới giai đoạn phát triển thứ ấu trùng diện tích bề mặt sợi tăng tới 100 lần [27] Trong giai đoạn phát triển, số lượng nút thần kinh tiếp tục tăng (một số bị loại bớt), kết trình tăng số lượng nút số vùng hoạt động nút lên 10 lần [15] Các tượng tối ưu cân nội, thay đổi điện sinh lý làm thay đổi giải phóng chất dẫn truyền trung gian thần kinh và/hoặc đáp ứng hậu synap 51 [37] Liên hệ với số nghiên cứu trước dựa phân tích cấu trúc thần kinh NMJ nhóm số ấu trùng ruồi giấm bậc phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang, chúng tơi nhận thấy có mối liên quan [11], [44] Vì thế, đề tài làm rõ thay đổi cấu trúc thần kinh cơ, cụ thể số lượng, diện tích nút thần kinh, số lượng nhánh Nhờ đó, có thay đổi khả vận động Do đó, đích tác dụng cao chiết IB2 IB5 ấu trùng ruồi giấm bậc ba 4.2.4 Đánh giá tác dụng chống oxy hóa invitro cao chiết phân đoạn IB2 IB5 từ chè đắng Stress oxy hoá sản sinh gốc tự ROS, NOS, gốc tích tụ vượt q khả trung hồ tế bào gây rối loạn chức ty thể, đột biến gen Việc sản xuất ROS đặc điểm rối loạn thần kinh Các gốc oxy hoá chứng minh đóng vai trị quan trọng sinh lý bệnh, tiến triển mức độ nghiêm trọng bệnh Tự kỷ, Alzheimer, Parkinson Huntington chứng xơ cứng teo Ngoài ra, bệnh nhân Tự kỷ dễ bị stress oxy hoá dễ bị tổn thương qua trung gian ROS nhiễm độc tế bào thần kinh Tự kỷ kết tương tác yếu tố di truyền, môi trường miễn dịch với stress oxy hoá Các phương pháp đánh giá khả dọn gốc tự in vitro bước để nghiên cứu chế phân tử Trong đó, DPPH phương pháp cổ điển thường quy để đánh giá hoạt tính chống oxy hóa chất có tiềm Kết thu Hình 3.5 cho thấy giá trị IC50 mẫu cao chiết cao chiết phân đoạn chè đắng IB2 544,3 μg/ml (440,1 ÷ 693,1 μg/ml) Với nồng độ cao 1000 µg/ml, tỉ lệ % khả dọn gốc tự DPPH cao chiết IB2 đạt 70,85% Giá trị IC50 tính cao chiết IB5 249.3 μg/ml (200,6 ÷ 304,9 μg/ml) Với nồng độ cao 750 μg/ml, tỉ lệ % khả dọn gốc tự DPPH cao chiết IB5 86,19 % Hoạt tính dọn gốc DPPH chè đắng chứng minh nghiên cứu giới Trong nghiên cứu khả chống oxy hoá chè đắng Liu cộng sự, giá trị IC50 mẫu cao chiết chè đắng phân đoạn chiết với ethyl acetat, butanol, nước 265 µg/ml; 315 µg/ml; 892 µg/ml [36] So sánh với giá trị IC50 này, đặc biệt IC50 cao chiết chè đắng phân đoạn n-butanol 315 µg/ml thấy khả dọn gốc tự DPPH IB5 tốt so với IB2 52 4.2.5 Đánh giá tác dụng chống oxy hóa ex vivo dịch đồng thể đầu ruồi Não dễ bị tổn thương stress oxy hoá khả chống oxy hoá hạn chế, yêu cầu lượng, lượng lipid sắt não cao Não có khối lượng khoảng 2% thể tiêu thụ khoảng 20% lượng trao đổi chất Phần lớn lượng sử dụng cho tế bào thần kinh Các chất chống oxy hố vơ cần thiết cho tồn tế bào thần kinh giai đoạn phát triển ban đầu +) Hoạt tính khử gốc DPPH Khả dọn gốc tự DPPH lô sử dụng cao chiết mạnh chứng tỏ có nồng độ chất chống oxy hóa dịch đồng thể đầu ruồi cao Kết hình 3.6 cho thấy khả thu dọn gốc tự lô sinh lý (CantonS) cao so với lơ bệnh lý ( Rugose), khác biệt có ý nghĩa thống kê p