Khóa luận đánh giá tác dụng chống xơ gan của viên nang ngũ vị tử (schisandra sphenanthera rehder et wills)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC BÙI THANH HÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG XƠ GAN CỦA VIÊN NANG NGŨ VỊ TỬ (SCHISANDRA SPHENANTHERA REHDER ET WILL) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) Hà Nội – 2023 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC Người thực hiện: BÙI THANH HÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG XƠ GAN CỦA VIÊN NANG NGŨ VỊ TỬ (SCHISANDRA SPHENANTHERA REHDER ET WILL) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) KHÓA: QH.2018.Y Người hướng dẫn 1: PGS.TS PHẠM THỊ NGUYỆT HẰNG Người hướng dẫn 2: ThS NGUYỄN THÚC THU HƯƠNG Hà Nội – 2023 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập hồn thiện khóa luận tốt nghiệp khoa Dược lý - Hóa sinh Viện Dược liệu, em nhận giúp đỡ, động viên vô lớn từ thầy cô, anh chị bạn bè Lời em xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng đào tạo trường Đại học Y Dược, Đại học quốc gia Hà Nội; khoa Dược lý - Hóa sinh Viện Dược liệu tạo điều kiện cho em tham gia học tập hoàn thành khóa luận suốt thời gian qua Đặc biệt em xin gửi tới lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng khoa Dược lý – Hóa sinh Viện Dược liệu, người trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ em xuyên suốt q trình thực đề tài khóa luận tốt nghiệp Tiếp đến em xin cảm ơn ThS Nguyễn Thúc Thu Hương môn Dược liệu – Dược học cổ truyền trường Đại học Y Dược, Đại học quốc gia Hà Nội Cảm ơn động viên quan tâm sát q trình em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Trong suốt thời gian học tập nghiên cứu, em nhận giúp đỡ to lớn từ ThS Nguyễn Thị Phượng, anh Nguyễn Văn Hiệp, chị Nguyễn Thị Như Thơ, chị Nguyễn Thị Lý anh chị khoa Dược lý – Hóa Sinh khoa Hóa Phân tích – Tiêu chuẩn Viện Dược liệu Cuối em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè ln đồng hành suốt q trình học tập cơng tác, chỗ dựa vững vật chất lẫn tinh thần em gặp khó khăn sống Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 25 tháng năm 2023 Sinh viên MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan ngũ vị tử Ngọc Linh 1.1.1 Phân loại thực vật 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố 10 1.1.4 Thành phần hóa học 10 1.1.5 Tác dụng Ngũ vị tử 15 1.2 Tổng quan xơ gan 18 1.2.1 Định nghĩa 18 1.2.2 Nguyên nhân 18 1.2.3 Cơ chế bệnh sinh 18 1.2.4 Chẩn đoán xơ gan 20 1.2.5 Điều trị xơ gan 22 1.3 Mơ hình gây xơ gan đánh giá tác dụng bảo vệ gan thực nghiệm 24 1.3.1 Gây xơ gan tác nhân hóa học 24 1.3.2 Gây xơ gan phương pháp thắt ống dẫn 26 1.3.3 Gây xơ gan phương pháp miễn dịch 27 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Đối tượng nghiên cứu 28 2.2 Phương tiện nghiên cứu 28 2.2.1 Động vật nghiên cứu 28 2.2.2 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất nghiên cứu 28 2.3 Phương pháp nghiên cứu 29 2.3.1 Đánh giá tác dụng chống xơ gan viên nang Ngũ vị tử thực nghiệm 29 2.3.2 Phương pháp xử lý số liệu 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 32 3.1 Kết đánh giá tác dụng điều trị xơ viên nang Ngũ vị tử thực nghiệm 32 3.1.1 Ảnh hưởng viên nang Ngũ vị tử đến số trọng lượng chuột trọng lượng gan 32 3.1.2 Ảnh hưởng viên nang Ngũ vị tử đến số sinh hóa máu 35 CHƯƠNG BÀN LUẬN 40 4.1 Tác dụng điều trị bệnh xơ gan viên nang Ngũ vị tử thực nghiệm 40 4.1.1 Bàn luận mơ hình nghiên cứu 40 4.1.2 Tác dụng điều trị xơ gan viên nang Ngũ vị tử 41 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 45 5.1 Kết luận 45 5.2 Đề xuất 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ, kí hiệu viết tắt Ý nghĩa chữ viết đầy đủ ALT Alanine aminotransferase AST Aspartate aminotransferase CC14 Carbontetraclorid CMC Carboxymethyl cellulose NVT Ngũ vị tử DPHH Gốc tự diphenyl picryl hydrazinyl DTNB 5,5-dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid) GSH Glutathion HDL High density lipoprotein cholesterol HepG2 Dòng tế bảo ung thư gan người IC50 Nổng độ ức chế tối đa nửa LDL Low density lipoprotein cholesterol MDA Malondialdehyde NAFLD Viêm gan nhiễm mỡ không rượu NAPQ N-acetyl-p-benzoquinoneimine PC3, MCF Dòng tế bào ung thư vú người SCP-0-1, SCPP11 Polysaccharide từ Ngũ vị tử SGPT Glutamate-pyruvate transaminase (ALT) SOD Superoxide dismutase TBA Acid thiobarbituric TBARS Các chất phản ứng với acid thiobarturic TC Total cholesterol TG Triglycerid DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các hợp chất phân lập từ Ngũ vị tử Ngọc Linh 11 Bảng 3.1 Ảnh hưởng Viên nang Ngũ vị tử trọng lượng thể chuột 32 Bảng 3.2 Ảnh hưởng NVT đến trọng lượng tương đối gan chuột mơ hình gây xơ gan thực nghiệm CCl4 33 Bảng 3.3 Ảnh hưởng NVT lên hoạt độ AST huyết chuột 35 Bảng 3.4 Ảnh hưởng NVT lên hoạt độ ALT huyết chuột 36 Bảng 3.5 Ảnh hưởng NVT lên số albumin huyết protein toàn phần gan 37 Bảng 3.6 Ảnh hưởng NVT lên cholesterol, bilirubin triglyceride 38 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc lignan dibenzocyclooctadien 11 Hình 1.2 Cấu trúc lignan khác 12 Hình 1.3 Cấu trúc triterpene Ngũ vị tử 12 Hình 1.4 Cấu trúc hóa học notriterpenoid lignan phân lập từ Ngũ vị tử 13 Hình 3.1 Cấu trúc đại thể gan thuộc nhóm 34 ĐẶT VẤN ĐỀ Gan quan quan trọng thể, đảm nhiệm nhiều vai trò quan trọng phức tạp Nhiệm vụ gan chuyển hóa chất dinh dưỡng, khử độc tố tổng hợp chất mật, tạo enzym cần thiết Các nguyên nhân gây bệnh lý gan vi khuẩn, virus, kí sinh trùng, rượu, thuốc hóa chất độc hại xâm nhập vào ga gây viêm gan cấp, viêm gan mạn, tiến triển tới xơ gan ung thư gan [1] Xơ hóa gan kết trình chữa lành vết thương bị rối loạn phản ứng với nhiều loại kích thích bệnh lý, đặc điểm bị tê liệt tích tụ chất ngoại bào (ECM) [2] Nếu không điều trị, xơ hóa gan dẫn đến xơ gan chí bệnh gan ác tính, nguyên nhân đáng kể gây bệnh tật tỷ lệ tử vong toàn giới Hiện nay, chưa có phương pháp điều trị hiệu xơ hóa gan Điều trị xơ gan, đặc biệt xơ gan giai đoạn cuối chủ yếu điều trị triệu chứng ghép gan phương án cuối Ngũ vị tử Ngọc Linh (Schisandra sphenanthera Rehder et Wills.) loại dược liệu thuộc chi Ngũ vị tử (Schisandra), họ Ngũ vị (Schisandraceae), Hồi (Illiciales) [3], [4] Từ xa xưa y học cổ truyền sử dụng vị thuốc giúp hồi phục sức khỏe, chữa cảm lạnh, cảm nóng, viêm phế quản, chữa ho, [5] Trong nghiên cứu tác dụng dược lý giới, nhà nghiên cứu xác định thành phần hóa học Schisandra sphenanthera hợp chất lignan, ngồi cịn có chứa thành phần tinh dầu, tritepene,acid hữu cơ,… có nhiều tác dụng bảo vệ gan, thiện trí nhớ, chống viêm [11] Ở Việt Nam có nghiên cứu chuyên sâu tác dụng bảo vệ gan từ Ngũ vị tử Do đó, đề tài: “Đánh giá tác dụng chống xơ gan viên nang Ngũ vị tử (Schisandra sphenanthera Rehder et Wills.)” thực với Ngũ vị tử Ngọc Linh (Schisandra sphenanthera Rehder et Wills.) CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan ngũ vị tử Ngọc Linh 1.1.1 Phân loại thực vật Theo kết nghiên cứu thực vật học, Ngũ vị tử nam cịn có tên gọi khác Ngũ vị tử Ngọc Linh Tên khoa học: Schisandra sphenanthera Rehder et Wills Vị trí phân loại Ngũ vị tử Ngọc Linh thể sau: [3], [4] Ngành: Hạt kín (Angiopermae) Lớp Hai mầm (Dicotyledones) Phân lớp Hoàng liên (Rancunulidae) Bộ Hồi (Illiciales) Họ Ngũ vị (Schisandraceae) Chi Ngũ vị tử (Schisandra) 1.1.2 Đặc điểm thực vật Ngũ vị tử Ngọc Linh (Schisandra sphenanthera Rehder et Wills.) dạng leo thân gỗ, dài – 5m Cây có hệ rễ chùm, ăn nơng lan rộng Tồn khơng lơng, mặt non có lơng nhỏ mềm thưa thớt Thân cành có nốt sần, cành non có cạnh Lá mọc so le, hình trứng đảo, rộng phía cuối lá, gốc hình ném, đỉnh nhọn, kích thước trung bình dài 5-11 cm, rộng 3-7 cm Mép có cưa thơ phía cuối Lá có gân hình lơng chim Hoa đơn tính, khác gốc, tràng có 69 cành, màu vàng trắng, có mùi thơm, nhị Hoa mọc nách lá, cuống dài 2-4 cm, gốc có phiến bao (vây) dài 3-4 mm Cánh hoa 5-9, màu cam, hình trứng đảo dạng trịn dài, kích thước 6-12 x 5-8 mm Hoa đực nhị nhiều, thành bó hình trứng, đường kính 4-5 mm Đế hoa lồi hình trụ trịn, nhị nhiều, ô phấn hướng nội Trục đế hoa tập hợp đài 6-17 cm, đường kính mm, cuống dài 5-10 cm Quả mọng chín có màu hồng sau đỏ sẫm, hình cầu dạng trứng, đường kính 5-7 mm Hạt trịn màu vàng, hình thận dài mm, rộng 3,8 mm, rốn hạt hình chữ V, vỏ hạt lưng có vân sần sùi [4], [6] 1.1.3 Phân bố Ngũ vị tử Ngọc Linh tìm thấy chủ yếu hai tỉnh Kon Tum Quảng Nam, tập trung nhiều vùng có sinh thái rừng bụi, rừng thứ sinh rừng thông qua khai thác chọn Ở Kon Tum, Ngũ vị tử phân bố huyện Ngọc Lây, Đak tô, Tu-mơ-rông, Konplông Ở Quảng Nam phân bố chủ yếu nam Trà My [4] 1.1.4 Thành phần hóa học Ngũ vị tử Ngọc Linh có chứa tinh dầu mùi chanh, thành phần tinh dầu gồm 30% secquiterpen, 20% aldehyd aceton Quả chứa 11% acid citric, 7% acid malic 0,8% acid tartric, vitamin C Hạt chưa khoảng 34% chất béo [7], [8] Các dẫn chất Lignan thành phần Ngũ vị tử, phân thành năm loại bao gồm: Dibenzocyclooctadiene lignan (loại A)(1-16); Spirobenzofuranoid dibenzocyclooctadiene lignan (loại B); 4-aryltetralin lignan (loại C)(17); 2,3-dimethyl-1,4-diarylbutane lignan (loại D)(18-20); 2,5-diaryltetrahydrofuran lignan (loại E)(21-23) [9] Hàm lượng nhóm lignan Ngũ vị tử giao động tử 7,2- 19,2 % [8], [9] Ba triterpen phân lập từ Ngũ vị tử schizandronic acid (ganwuweizic acid) (24), anwuweizic acid (25) schisanol (26) [9] Năm 2019, Nguyen Thi Mai cộng phân lập hợp chất nortriterpenoid (27-32) lignan (33-37) [10] 10 - Sau 12 tuần điều trị, trọng lượng chuột lô điều trị (bằng NVT silymarin) lô chứng bệnh lý tăng so với trước điều trị (p < 0,05) đạt ý nghĩa thống kê - Khơng có khác biệt trọng lượng chuột lô điều trị NVT lô điều trị silymarin so với lô chứng bệnh lý (p > 0,05) Bảng 3.2 Ảnh hưởng NVT đến trọng lượng tương đối gan chuột mơ hình gây xơ gan thực nghiệm CCl4 Lơ Tên lô n Trọng lượng tương đối gan chuột (g/100 gram thể trọng) Lô chứng sinh lý 3,1 ± 0,2 Lô chứng bệnh lý 4,3 ± 0,3# Lô điều trị NVT (121 mg/kg) 3,8 ± 0,2# Lô điều trị NVT (242 mg/kg) 4,3 ± 0,2# Lô điều trị NVT (liều 363 mg/kg) 4,3 ± 0,1# Lô điều trị Silymarin (110 mg/kg) 3,6 ± 0,1*# Ghi chú: *p < 0,05 so với lô chứng bệnh lý; #p < 0,05 so với lô chứng sinh lý Nhận xét: Kết bảng 3.2 cho thấy - Trọng lượng tương đối gan chuột lô chứng bệnh lý tất lô điều trị NVT sau gây độc CCL4 tăng so với lô chứng sinh lý (p < 0,05) đạt ý nghĩa thống kê - Trọng lượng tương đối gan chuột lô điều trị silymarin sau gây độc CCL4 tăng so với lô chứng sinh lý (p > 0,05) kết không đạt ý nghĩa thống kê 33 - Trọng lượng tương đối gan chuột lô điều trị silymarin 110 mg/kg giảm có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý (p < 0,05), khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô điều trị NVT (p > 0,05) - Lơ điều trị NVT liều 121 mg/kg có trọng lượng tương đối gan chuột nhỏ so với lơ chứng bệnh lý, khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê Hình ảnh đại thể gan Hình 3.1 Cấu trúc đại thể gan thuộc nhóm A Nhóm sinh lý D Nhóm điều trị NVT 121 mg/kg B Nhóm chứng bệnh lý E Nhóm điều trị NVT 242 mg/kg C Nhóm điều trị silymarin F Nhóm điều trị NVT 363 mg/kg Cấu trúc đại thể gan thuộc nhóm chứng bệnh lý nhẵn bóng, có nốt nhỏ li ti, sần sùi, gan nhạt màu Các nhóm điều trị có gan màu bóng hơn, nhận thấy nốt 34 3.1.2 Ảnh hưởng viên nang Ngũ vị tử đến số sinh hóa máu 3.1.1.1 Kết đo hoạt độ AST Bảng 3.3 Ảnh hưởng NVT lên hoạt độ AST huyết chuột L ô Tên lô n (U/L) % ức chế so với lô chứng bệnh lý AST Lô chứng sinh lý 129,1 ± 9,0* - Lô chứng bệnh lý 366,7 ± 73,2 - Lô điều trị NVT (121 mg/kg) 211,4 ± 23,4 42,3 Lô điều trị NVT (242 mg/kg) 191,9 ± 14,9* 47,7 Lô điều trị NVT (liều 363 mg/kg) 151,4 ± 27,7* 58,7 Lô điều trị Silymarin (110 mg/kg) 165,0 ± 12,4* 55,0 Ghi chú: *p < 0,05 so với lô chứng bệnh lý Nhận xét: Kết bảng 3.3 cho thấy - Hoạt độ AST lô chứng bệnh lý xơ gan gây CCl4 tăng cao rõ rệt so với lô chứng sinh lý (xấp xỉ lần) (p < 0,05) - Chuột điều trị viên nang Ngũ vị tử liều 121 mg/kg làm giảm hoạt độ AST (giảm 42,3%) so với lô chứng bệnh lý khác biệt ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - Chuột điều trị viên nang Ngũ vị tử liều 242 mg/kg có tác dụng làm giảm hoạt độ AST (giảm 47,7%), đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý (p < 0,05) 35 - Chuột điều trị viên nang Ngũ vị tử liều 363 mg/kg có tác dụng làm giảm hoạt độ AST (giảm 58,7%, đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý (p < 0,05) - Chuột điều trị silymarin liều 110 mg/kg có tác dụng làm đáng kể giảm hoạt độ AST (giảm 50,0%) đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý (p < 0,05) 3.1.1.2 Kết đo hoạt độ ALT Bảng 3.4 Ảnh hưởng NVT lên hoạt độ ALT huyết chuột L ô Tên lô n (U/L) % ức chế so với lô chứng bệnh lý ALT Lô chứng sinh lý 49,1 ± 2,9* - Lô chứng bệnh lý 297,7 ± 75,5 - Lô điều trị NVT (121 mg/kg) 152,3 ± 29,8 48,8 Lô điều trị NVT (242 mg/kg) 90,9 ± 7,1* 69,3 Lô điều trị NVT (liều 363 mg/kg) 92,3 ± 31,2* 68,9 Lô điều trị Silymarin (110 mg/kg) 97,7 ± 17,4* 67,2 Ghi chú: *p < 0,05 so với lô chứng bệnh lý Nhận xét: Kết bảng 3.4 cho thấy - Hoạt độ ALT lô chứng bệnh lý (gây độc CCl4) tăng cao rõ rệt so với lô chứng sinh lý (xấp xỉ lần) (p < 0,05) 36 - Chuột điều trị viên nang Ngũ vị tử liều 121 mg/kg làm giảm hoạt độ ALT (giảm 48,8%) so với lô chứng bệnh lý khác biệt ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - Chuột điều trị viên nang Ngũ vị tử liều 242 mg/kg làm giảm rõ rệt hoạt độ ALT (giảm 69,3%) đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý (p < 0,05) - Chuột điều trị viên nang Ngũ vị tử liều 363 mg/kg làm giảm rõ rệt hoạt độ ALT (giảm 68,9%) đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý (p < 0,05) - Chuột điều trị silymarin làm giảm rõ rệt hoạt độ ALT (giảm 67,2%) đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý (p < 0,05) 3.1.1.3 Các số sinh hóa máu khác Bảng 3.5 Ảnh hưởng NVT lên số albumin huyết protein tồn phần gan Lơ Tên lơ n Albumin huyết (g/L) Protein toàn phần gan (g/L) Lô chứng sinh lý 34,7 ± 0,8 67,2 ± 1,7# Lô chứng bệnh lý 28,7 ±1,1* 49,8 ± 2,5 Lô điều trị NVT (121 mg/kg) 27,6 ± 1,2* 55,5 ± 3,9 Lô điều trị NVT (242 mg/kg) 30,1 ± 0,5* 55,8 ± 1,8 Lô điều trị NVT (liều 363 mg/kg) 28,0 ± 0,4* 65,6 ± 3,0# Lô điều trị Silymarin (110 mg/kg) 27,4 ± 0,5* 58,6 ± 3,1# (Chú thích: #p < 0,05 so với lơ chứng bệnh lý; *p < 0,05 so với lô chứng sinh lý) 37 Nhận xét: Từ bảng 3.5 ta thấy - Nồng độ albumin huyết chuột lô chứng bệnh lý lô điều trị giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh lý (p < 0,05) Tuy nhiên khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê về, nồng độ albumin huyết lô điều trị NVT (ở mức liều) silymarin (liều 110 mg/kg) so với lô chứng bệnh lý - Nồng độ albumin gan chuột lô chứng bệnh lý giảm đạt ý nghĩa thống kê (p < 0,05) so với lô chứng sinh lý Điều trị cao NVT silymarin có tác dụng phục hồi mức độ giảm albumin gan chuột xơ gan, đạt ý nghĩa thống kê liều 363 mg/kg NVT 110 mg/kg silymarin (p < 0,05) Bảng 3.6 Ảnh hưởng NVT lên cholesterol, bilirubin triglyceride L ô Tên lô n Cholesterol Bilirubin Triglyceride (mg/dL) (µmol/L ) (mg/dL) Lơ chứng sinh lý 37,5 ± 2,3 5,4 ± 0,5 59,4 ± 8,1 Lô chứng bệnh lý 46,0 ± 3,2# 8,7 ± 0,9# 95,4 ± 10,3# Lô điều trị NVT (121 mg/kg) 39,9 ± 2,6 8,9 ± 0,2# 106,8 ± 13,6 Lô điều trị NVT (242 mg/kg) 48,7 ± 3,7 8,7 ± 0,5# 100,1 ± 13,5 Lô điều trị NVT (liều 363 mg/kg) 34,0 ± 2,0* 8,7 ± 0,4# 91,8 ± 15,0 Lô điều trị Silymarin (110 mg/kg) 40,3 ± 3,0 8,7 ± 0,5# 89,8 ± 6,5 (Chú thích: #p < 0,05 so với lơ chứng sinh lý; *p < 0,05 so với lô chứng bệnh lý) Nhận xét: Từ bảng 3.6 ta thấy 38 - Nồng độ cholesterol, triglycerid, bilirubin huyết chuột lô chứng bệnh lý tăng rõ rệt so với lô chứng sinh lý, đạt ý nghĩa thống kê (p < 0,05) - Tuy nhiên, có liều 363 mg/kg NVT có tác dụng làm giảm rõ rệt nồng độ cholesterol huyết so với lô chứng bệnh lý (p < 0,05) 39 CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Tác dụng điều trị bệnh xơ gan viên nang Ngũ vị tử thực nghiệm 4.1.1 Bàn luận mô hình nghiên cứu Mơ hình gây xơ gan thực nghiệm thực qua nhiều nghiên cứu tác giả nước giới Các mơ hình gây xơ hóa gan áp dụng là: Mơ hình gây độc ethanol, carbon tetrachlorid, thiocetamid, dimethylnitrosamin, chế độ ăn thiếu methionin cholin, chế độ ăn giàu chất béo, thắt ống dẫn mật, gây mơ hình xơ hóa gan virus viêm gan [24], [25]… Trong nghiên cứu này, chúng tơi chọn lựa mơ hình gây xơ gan carbon tetrachlorid (CCl4) chuột để đánh giá tác dụng chống xơ gan Ngũ vị tử Ngọc Linh, CCl4 chất gây độc áp dụng nhiều nghiên cứu xơ hóa gan bệnh xơ gan tính tương đồng xơ hóa gan so với nhiễm độc gan mạn tính gây xơ gan người [24] Trong thể, CCl4 chuyển hóa phần lớn qua CYP2E1 thành gốc tự tricloromethyl (CCl3*), gốc tự thông qua hai đường haloalkyl hóa peroxy hóa lipid gây hoại tử tế bào gan, kích hoạt tế bào Kupffer sản sinh nhiều chất gây viêm leukotriene, interleukin, TNF-α, TGF-β… Chính TGF-β q trình hoại tử tế bào gan liên tục gốc tự CCl3* gây kích thích hoạt hóa tế bào hình gan (hepatic stellate cells: HSCs) sản sinh mơ sợi dẫn đến xơ hóa gan [2], [18] Mơ hình gây xơ gan CCl4 thực chuột cống trắng chuột nhắt trắng Có thể dùng CCl4 đường tiêm da, đường uống, đường tiêm phúc mạc màng bụng Đường tiêm phúc mạc màng bụng đường dùng lựa chọn nhiều lợi điểm như: tỷ lệ chuột chết thấp, khả gây xơ gan rõ, lựa chọn đường tiêm phúc mạc màng bụng CCl4 nghiên cứu 40 Liều CCl4 thường sử dụng gây độc gan khoảng 0,5 – 0,7 ml/kg trọng lượng thể Ở mơ hình cấp tính, CCl4 thường sử dụng với liều cao 0,8 – ml/kg Các tác giả thường sử dụng CCl4 với liều ml/ 1kg thể trọng pha dầu olive với tỷ lệ CCl4 / dầu olive tiêm màng bụng lần/ tuần đến 12 tuần để gây xơ gan chuột nhắt trắng thực nghiệm [3] Dựa vào sở trên, xây dựng mơ hình xơ gan chuột cống hình thức tiêm da CCl4 liều ml/kg, lần/tuần, thời gian 12 tuần, kèm theo số thay đổi để phù hợp với mục tiêu nghiên cứu điều kiện sở nghiên cứu Chúng sử dụng silymarin làm thuốc chứng dương nghiên cứu silymarin chứng minh có tác dụng tốt giảm xơ hóa gan chuột mơ hình gây xơ gan CCl4 [26] 4.1.2 Tác dụng điều trị xơ gan viên nang Ngũ vị tử 4.1.2.1 Ảnh hướng viên nang Ngũ vị tử tới giải phẫu bệnh gan chuột Trong bệnh lý xơ gan, gan xơ thường thay đổi kích thước, mật độ màu sắc: Gan to, nặng bình thường xâm nhập nhiều mỡ thành phần khác Về hình ảnh đại thể, gan chuột lơ điều trị Ngũ vị tử có khác biệt rõ ràng màu sắc hình thái gan so với lơ chứng bệnh lý (hình 3.1): Gan có màu tươi, hạt bề mặt so với việc nhẵn bóng, có nốt nhỏ li ti sần sùi, màu sắc nhạt gan chuột nhóm chứng bệnh lý Kết bảng 3.24 cho thấy sau gây mơ hình xơ gan tiêm phúc mạc màng bụng CCl4 18 tuần, trọng lượng tương đối gan chuột tất lô gây độc CCl4, có điều trị khơng điều trị thuốc tăng cao so với lô chứng sinh học ( p < 0,05) Trọng lượng tương đối gan chuột cao lô chứng bệnh lý (4,3 ± 0,3 g/100 g thể trọng), thấp lô điều trị silymarin liều 110 mg/kg (3,6 ± 0,1 g/100 g thể trọng) Lô điều trị NVT liều 121 mg/kg làm giảm trọng lượng tương đối gan chuột so với lơ chứng bệnh lý khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê 41 Kết nghiên cứu hình ảnh đại thể cho thấy viên nang Ngũ vị tử có tác dụng hạn chế xơ hóa gan gây độc gan dài ngày CCl4 4.1.2.2 Ảnh hướng viên nang Ngũ vị tử tới mức độ tổn thương gan chức gan chuột mơ hình thực nghiệm Gan quan thực nhiều chức quan trọng cho thể chuyển hóa chất, khử độc tạo mật Vì phá hủy tế bào giải phóng enzym từ tế bào vào tuần hồn, nên enzym gan đóng vai trò quan trọng việc đánh giá hủy hoại tổn thương tế bào gan[16] Hai aminotransferase sử dụng rộng rãi việc đánh giá tổn thương tế bào gan ALT AST Trong viêm gan cấp AST ALT thường tăng cao (>10 - 100 lần), viêm gan mạn tính xơ gan hai số xét nghiệm bình thường tăng vừa phải Nếu viên nang Ngũ vị tử có tác dụng bảo vệ gan tốt mơ hình gây xơ gan thực nghiệm CCl4 ức chế tổn thương tế bào gan đánh giá thông qua việc làm giảm hoạt độ ALT AST so với lô chứng bệnh lý Kết bảng 3.1 cho thấy, hoạt độ AST ALT lô chứng bệnh lý tăng cao so với lô chứng sinh lý (lần lượt lần) (p < 0,05), Điều chứng tỏ CCl4 gây tổn thương tế bào gan cấp làm giải phóng enzym vào máu Mức độ tăng ALT AST mô hình khơng cao mơ hình gây viêm gan cấp, đặc điểm phù hợp với đặc điểm viêm gan mạn tính xơ gan tổn thương gan không mạnh, ạt viêm cấp Chuột lô điều trị Ngũ vị tử (liều NVT 242 mg/kg , NVT liều 363 mg/kg) lô điều trị silymarin có hoạt độ ALT AST giảm so với lơ bệnh lý có ý nghĩa thống kê (p < 0,05), cho thấy Ngũ vị tử có tác dụng cải thiện làm chậm diễn tiến trình hủy hoại tế bào gan CCl4 Khi so sánh mức độ giảm hoạt độ ALT AST lô dùng Ngũ vị tử với so sánh với nhóm dùng silymarin, việc sử dụng NVT liều 121 mg/kg có làm giảm hoạt độ AST (42,3%) ALT (48,8%) so với lô bệnh lý khác biệt khơng có ý nghĩa với p > 0,05 Sự khác biệt thấy rõ có ý nghĩa lô chuột uống NVT liều 242 mg/kg NVT liều 363 mg/kg làm giảm hoạt độ AST (58,7%) ALT (68,9%) so 42 với lô bệnh lý (p < 0,05) Do sử dụng mức liều cao NVT liều 363 mg/kg cho thấy khả ức chế tăng hoạt độ enzym AST ALT phù hợp với nghiên cứu công bố Lô chứng silymarin (silymarin hoạt chất sử dụng rộng rãi việc điều trị bệnh gan) chứng minh tác dụng thông qua việc làm giảm hoạt độ AST (giảm 55%) ALT (67,2%) so với lô bệnh lý với p < 0,05 Như sử dụng liều cao Ngũ vị tử lô điều trị NVT liều 242 mg/kg NVT liều 363 mg/kg có chứng tác dụng làm chậm q trình hủy hoại tế bào gan vượt trội so với lô điều trị NVT liều 121 mg/kg Trong nghiên cứu này, chúng tơi tiến hành gây mơ hình xơ gan CCl4 đánh giá chức tổng hợp chuyển hóa gan thơng qua nồng độ albumin, cholesterol bilirubin tồn phần máu chuột, qua đánh giá tác dụng viên nang Ngũ vị tử mơ hình gây xơ gan thực nghiệm Một chức quan trọng gan tạo mật tiết mật Thông qua định lượng nồng độ bilirubin huyết ta đánh giá chức gan, đồng thời bước đầu đánh giá, nhận xét tình trạng viêm, tắc gây ứ mật Trong viêm gan mạn tính, bilirubin thường tăng [16] Kết nghiên cứu bảng 3.3 cho thấy nồng độ bilirubin máu chuột lơ gây mơ hình xơ gan CCl4 tăng Tuy nhiên thay đổi nồng độ bilirubin máu chuột lơ khơng có ý nghĩa thống kê ( p > 0,05) Khi gan bị suy giảm chức năng, nồng độ albumin huyết giảm tượng không xảy thời gian bán hủy albumin xấp xỉ 12 ngày Chính định lượng albumin huyết có ý nghĩa đánh giá bệnh gan mạn tính so với bệnh gan cấp tính [20] Kết nghiên cứu bảng 3.3 cho thấy nồng độ albumin máu chuột lô gây mô hình xơ gan CCl4 giảm Sau điều trị viên nang Ngũ vị tử, thay đổi nồng độ albumin máu chuột lô khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Mặc dù nồng độ Albumin máu chuột lô NVT 242 cao so với lô bệnh lý khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê với p > 0,05 43 Gan tổng hợp phần lớn cholesterol huyết thông qua hấp thu acid béo tự từ thức ăn thối hóa thành acetyl-CoA, acetyl-CoA chuyển hóa tạo thành cholesterol Vì vậy, bệnh lý gan mạn tính tế bào gan bị tổn thương kéo dài, nồng độ cholesterol máu giảm [20] Kết nghiên cứu bảng 3.3 cho thấy nồng độ cholesterol máu chuột chuột lô NVT liều 242 mg/kg có nồng độ cholesterol tăng khác biệt so với lơ bệnh lý khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 44 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận Từ kết đạt nghiên cứu đánh giá tác dụng chống xơ gan viên nang Ngũ vị tử Ngọc Linh giàu lignan, kết luận sau: - Viên nang chứa cao chiết giàu lignan Ngũ Vị tử Ngọc Linh (liều 242 363 mg/kg) có tác dụng hỗ trợ/ bảo vệ tổn thương gan chuột xơ gan gây CCl4 sau tuần điều trị, đánh giá thông qua số: giảm tăng hoạt độ enzym ALT AST; tăng nồng độ protein toàn phần gan; giảm cholesterol huyết 5.2 Đề xuất Do khn khổ thời gian có hạn để thực khóa luận, em chưa thể hồn thiện tồn nội dung đề tài Hiện nhóm nghiên cứu trình đánh giá tác dụng điều trị xơ gan viên nang chứa cao chiết giàu lignan Ngũ vị tử Ngọc Linh Do vậy, em xin phép đưa đề xuất tiếp tục nghiên cứu sau: - Tiếp tục đánh giá thông số liên quan chuột xơ gan gây CCl điều trị cao chiết giàu lignan Ngũ vị tử Ngọc Linh, bao gồm: thông số huyết học, giải phẫu mô bệnh học gan phương pháp nhuộm H&E Masson, định lượng collagen gan - Đánh giá độc tính cấp, độc tính bán trường diễn viên nang chứa cao chiết giàu lignan Ngũ vị tử Ngọc Linh - Nghiên cứu thành phần có tác dụng hỗ trợ/ bảo vệ tổn thương gan từ Ngũ vị tử Ngọc Linh 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Văn Hưng (2018), "Giải phẫu bệnh học", Nhà xuất Y học, Hà Nội, pp 345 - 363 Crespo Yanguas S, Cogliati B., et al (2016), "Experimental models of liver fibrosis, Arch Toxicol", pp 1025-1048 Bộ Y tế (2015), "Dược điển Việt Nam V", Chuyên luận Ngũ vị tử, pp 1273- 1274 Nguyễn Lan Anh (2016), "Nghiên cứu đặc điểm nông sinh học thuốc Ngũ vị tử Ngọc Linh (Schisandra sphenathera) Hà Nội", Luận văn Thạc sỹ, pp - Tất Lợi Đỗ (2004), "Những thuốc vị thuốc Việt Nam", Nhà xuất Y học, Hà Nội, pp 872- 875 Nguyễn Xuân Trường (2016), "Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu thực vật thuốc Ngũ vị tử Ngọc Linh (Schisandra sphenanthera Rehder & E.H.Wilson)", Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam pp 97- 100 Trần Quang Hưng (2010), "Các hợp chất lignan nortriterpen từ Ngũ vị tử", Hội nghị Khoa học kỉ niệm 35 năm Viện khoa học Công nghệ Việt Nam, pp 99- 103 Đỗ Tiến Lâm (2012), "Nghiên cứu thành phần hóa học Ngũ vị tử nam (Schisandra sphenathera Rehd et Wils.) họ Schisandraceae Dak GleiKontum", Luận văn Thạc sỹ, pp 86 Ke Yang, Jing Qiu, et al (2022), "A comprehensive review of ethnopharmacology, phytochemistry, pharmacology, and pharmacokinetics of Schisandra chinensis (Turcz.) Baill and Schisandra sphenanthera Rehd et Wils.", Journal of Ethnopharmacology, 284, pp 10 Nguyen Thi Mai (2020), "A New Sesquiterpene from Schisandra sphenanthera Record Natural Product", Record Natural Product, pp 11 Peili Zhu, Junkui Li, et al (2019), "Schisandra fruits for the management of drug-induced liver injury in China: A review", Phytomedicine, 59, pp 152760 12 Ziqi Chen, Fang Liu, et al (2019), "Wuzhi capsule (Schisandra Sphenanthera extract) attenuates liver steatosis and inflammation during nonalcoholic fatty liver disease development", Biomedicine & Pharmacotherapy, 110, pp 285-293 13 Choi Young-Whan, Takamatsu Satoshi, et al (2006), "Schisandrene, a Dibenzocyclooctadiene Lignan from Schisandra chinensis: Structure - 46 Antioxidant Activity Relationships of Dibenzocyclooctadiene Lignans", Journal of natural products, 63, pp 356-359 14 Alexander Panossian, Wikman Georg (2008), "Pharmacology of Schisandra chinensis Bail.: an overview of Russian research and uses in medicine", J Ethnopharmacol, pp 183-212 15 Kopustinskiene DM, Bernatoniene J, et al (2021), "Antioxidant Effects of Schisandra chinensis Fruits and Their Active Constituents" 16 Thành Văn Tạ (2018), "Hóa sinh", Nhà xuất Y học, Hà Nội, pp 353– 365 17 Starr S.P, D Raines (2011), "Cirrhosis: diagnosis, management and prevention", Am Fam Physician, pp 1353-1359 18 Ramón B, AB David (2005), "Liver fibrosis", J Clin Invest, 115, pp 209-218 19 G D'Amico (2006), "Natural history and prognostic indicators of survival in cirrhosis: A systematic review of 118 studies", Journal of Hepatology, pp 217-231 20 Nguyễn Khánh Trạch (2015), "Chẩn đoán điều trị xơ gan", Bài giảng bệnh học nội khoa, 2, pp 193-202 21 Nguyễn Việt Lân (2018), "Bệnh học nội khoa", nhà xuất Y học, Hà Nội, pp 9-17 22 Bộ Y tế (2019 ), "Hướng dẫn chẩn đoán, điều trị bệnh viêm gan vi rút B", Quyết định số 3310/QĐ-BYT ngày 29/7/2019 Bộ Y tế, pp 23 Zhang F, J Ma, et al (2012), "Inhibitory effect of acupuncture on hepatic extracellular matrix production in carbon tetrachloride-induced liver fibrosis rats", pp 8-11 24 Tsukamoto H, Matsuoka M, et al (1990), "Experimental models of hepatic fibrosis: a review", pp 56-65 25 Starkel P, I.A Leclercq (2011), "Animal models for the study of hepatic fibrosis", Best Pract Res Clin Gastroenterol, 25, pp 319-333 26 Wen C.L, L.L Wei (2006), "Ameliorative effect of Ganoderma lucidum on carbon tetrachloride-induced liver fbrosis in rats", World J Gastroenterol, pp 265-270 47