Khóa luận nghiên cứu thành phần hóa học của quả ngũ vị tử ( schisandra sphenanthera reht et wills), họ ngũ vị, (schisandracee) thu tại vùng núi ngọc linh, việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN ĐỨC THÀNH 18100212 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA QUẢ NGŨ VỊ TỬ ( SCHISANDRA SPHENANTHERA REHT.ET WILLS), HỌ NGŨ VỊ, (SCHISANDRACEE) THU TẠI VÙNG NÚI NGỌC LINH, VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) HÀ NỘI – 2023 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC Người thực hiện: NGUYỄN ĐỨC THÀNH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA QUẢ NGŨ VỊ TỬ ( SCHISANDRA SPHENANTHERA REHT ET WILLS), HỌ NGŨ VỊ, (SCHISANDRACEE) THU TẠI VÙNG NÚI NGỌC LINH, VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) Khóa : QH2018Y Người hướng dẫn : TS NGUYỄN THỊ HÀ LY TS LÊ NGỌC AN Nơi thực hiện: Viện Dược Liệu HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Trong suốt q trình học tập hồn thiện khóa luận tốt nghiệp khoa khoa Hóa phân tích – Tiêu chuẩn Viện Dược liệu, em nhận giúp đỡ, động viên vô lớn từ thầy cơ, anh chị, bạn bè gia đình Lời em xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng đào tạo trường Đại học Y Dược Hà Nội; khoa Dược liệu dược học cổ truyền, khoa Hóa Phân tích – Tiêu chuẩn Viện Dược liệu tạo điều kiện cho em tham gia học tập hồn thành khóa luận suốt thời gian qua Đặc biệt em xin gửi tới lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới PGS TS Đỗ Thị Hà TS Nguyễn Thị Hà Ly - Khoa Hóa Phân tích – Tiêu chuẩn Viện Dược liệu, người trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ, dìu dắt, thơi thúc em xuyên suốt trình thực đề tài khóa luận tốt nghiệp Tiếp đến em xin cảm ơn TS Lê Ngọc An môn Dược liệu dược học cổ truyền trường Đại học Y Dược Hà Nội Thầy tạo điều kiện cho phép em tiếp cận tham gia nghiên cứu khoa học, cảm ơn động viên quan tâm sát thầy q trình em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Trong suốt thời gian học tập nghiên cứu, em nhận giúp đỡ to lớn từ Cử nhân Phạm Thị Hiền anh chị khoa Hóa Phân tích – Tiêu chuẩn Viện Dược liệu Cuối em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè ln đồng hành suốt q trình học tập cơng tác, chỗ dựa vững vật chất lẫn tinh thần em gặp khó khăn sống Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 27 tháng năm 2022 Sinh viên Nguyễn Đức Thành MỞ ĐẦU Chi Schisandra (Ngũ vị tử) có khoảng 22-25 lồi phân bố giới chủ yếu tìm thấy Trung Quốc[1-3] Trước năm 2000, Việt Nam phát loài Schisandra cocinea Schisandra sinensis với tên gọi chung Ngũ vị tử phân bố chủ yếu tỉnh biên giới giáp với Trung Quốc Lào Cai Lai Châu [4] Năm 2006, Viện Dược liệu cơng bố lồi Ngũ vị tử Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils tìm thấy vùng núi Ngọc Linh thuộc địa phận hai tỉnh Kon Tum Quảng Nam Trong y học cổ truyền Ngũ vị tử vị thuốc bổ giúp phục hồi sức khỏe, trị lỵ, lậu, cảm lạnh, say nóng, viêm phế quản, hen phế quản, chữa ho, liệt dương,…[4, 5] Hiện nghiên cứu xác định thành phần hóa học Schisandra sphenanthera hợp chất lignan, ngồi cịn có chứa thành phần tinh dầu, triterpene, acid hữu cơ,…[4-6] Một số nghiên cứu tác dụng dược lý Schisandra sphenanthera có tác dụng ức chế tế bào ung thư, chống oxy hóa,…[7, 8] Tuy nhiên Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc Linh (Schisandra sphenanthera) loài tương đối Việt Nam nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý cịn tương đối hạn chế Polyphenol nhóm hợp chất lớn, gồm nhiều chất chuyển hóa thứ cấp thực vật [9] Polyphenol nhóm chất có dược liệu Ngũ vị tử Nhóm chất thể số hoạt tính sinh học, điển hình tác dụng chống oxi hóa, chống viêm [10] Có nhiều chứng khoa học nhóm chất đóng vai trò quan trọng việc hỗ trợ điều trị số bệnh tim mạch, thần kinh hỗ trợ điều trị ung thư [10] Tuy nhiên có nghiên cứu nhóm chất polyphenol loài Schisandra sphenanthera phân bố nước ta, Bên cạnh nhóm chất polyphenol, tinh dầu thành phần đặc trưng Ngũ vị tử Tuy nhiên, có nghiên cứu khoa học tinh dầu lồi Schisandra sphenanthera Việc phân tích thành phần hóa học tinh dầu lĩnh vực quan trọng phát triển, thành phần tinh dầu có ngun liệu thực vật ngày cơng nhận có mùi thơm, kháng khuẩn, diệt trùng, đặc tính sinh học [11] Từ thực tiễn trên, Khóa luận tốt nghiệp “Nghiên cứu thành phần hóa học Ngũ vị tử (Schisandra sphenanthera Reht.et Wills), họ ngũ vị, (Schisandraceae) thu vùng núi Ngọc Linh, Việt Nam” thực nhằm xác định thành phần hóa học lồi Schisandra sphenanthera, cung cấp thêm sở khoa học cho nghiên cứu tiêu chuẩn hóa chất lượng phát triển sản phẩm từ dược liệu Khóa luận tốt nghiệp thực với mục tiêu sau: Định tính nhóm chất có Ngũ vị tử phản ứng hóa học Xây dựng phương pháp UV-VIS phân tích định lượng polyphenol ứng dụng phương pháp để đánh giá hàm lượng polyphenol số mẫu Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc linh, Việt Nam Phân tích thành phần tinh dầu dược liệu Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc linh, Việt Nam DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ, kí hiệu viết tắt Ý nghĩa chữ viết đầy đủ AST Alanine aminotransferase ABTS+ Phương pháp bắt gốc tự AOAC Hiệp hội nhà hố học phân tích thống AST Aspartate aminotransferase CCl4 Carbontetraclorid CNVT Cao chiết Ngũ vị tử DAD Máy sắc kí lỏng cao áp DPPH gốc tự diphenyl picryl hydrazinyl EC50 Nồng độ hiệu tối đa nửa EO Tinh dầu FC Thuốc thử Folin- Ciocalteu GC-MS Hệ thống sắc ký khí ghép khối phổ HDL High density lipoprotein cholesterol HIV Virus gây suy giảm miễn dịch người IC50 Nồng độ ức chế tối đa nửa LDL Low density lipoprotein cholesterol NAFLD Viêm gan nhiễm mỡ không rượu NMR Cộng hưởng từ hạt nhân PC3, MCF7 Dòng tế bào ung thư vú người SOD Superoxide dismutase TC Total cholesterol TCM Đông y TG Triglycerid TT Thuốc thử MỤC LỤC CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc Linh 1.1.1 Thực vật học Hình 1.1 Một số hình ảnh Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc Linh CHƯƠNG 20 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất, dung mơi 20 2.1.3 Hóa chất, dung mơi: 21 2.2 Nội dung nghiên cứu 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Phương pháp định tính nhóm chất thường gặp mẫu dược liệu 21 2.3.2 Xác định hàm ẩm mẫu dược liệu 24 2.3.3 Định lượng polyphenol 24 2.3.4 Thẩm định phương pháp phân tích phịng thí nghiệm dùng cho nghiên cứu 26 2.3.5 Định lượng tinh dầu tổng số phương pháp cất kéo nước 28 2.3.6 Phân tích thành phần tinh dầu phương pháp sắc ký khí ghép nối detector khối phổ (GC-MS) 29 CHƯƠNG 30 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 30 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu thường gặp Ngũ vị tử 30 3.2 Phân tích định lượng polyphenol dược liệu Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc linh, Việt Nam 33 3.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng polyphenol Ngũ vị tử phương pháp UV-VIS 33 3.3 Hàm lượng tinh dầu tổng số 40 3.4 Phân tích thành phần tinh dầu GCMS 41 CHƯƠNG 43 BÀN LUẬN 43 4.1 Về kết định tính nhóm chất dược liệu Ngũ vị tử Ngọc Linh 43 4.2 Về kết phân tích định lượng polyphenol dược liệu Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc linh, Việt Nam 43 4.3 Về kết phân tích thành phần tinh dầu hàm lượng tinh dầu tổng số Ngũ vị tử thu núi Ngọc Linh 44 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 46 Kết luận 46 Đề xuất 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Một số hình ảnh Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc Linh………………….7 Hình 1.2 Cấu trúc lignan dibenzocyclooctadien từ Schisandra sphenanthera……………………………………………………………………………… 10 Hình 1.3 Cấu trúc lignan khác từ S.sphenanthera…………………………… 10 Hình 1.4 Cấu trúc triterpene S.sphenanthera………………… 10 Hình 1.5 Cấu trúc hóa học nortriterpenoid lignan phân lập từ S.sphenanthera…………………………………………………………………………… 11 Hình 1.6 Cấu trúc hóa học polyphenol phổ biến Ngũ vị tử………18 Hình 2.1 Hình ảnh mẫu NVT-05………………………………………………… 20 Hình 2.2 Sơ đồ dụng cụ cất tinh dầu………………………………………… 28 Hình 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu phản ứng hóa học Ngũ vị tử Ngọc Linh…………………………………………………………………….31 Hình 3.2 Phổ UV-VIS mẫu blank mẫu trắng………………………………33 Hình 3.3 Phổ UV-VIS mẫu thử mẫu thử thêm chuẩn…………………… 34 Hình 3.4 Đường chuẩn acid gallic……………………………………………… 35 Hình 3.5 Biểu đồ số lượng mẫu tương ứng với khoảng % hàm lượng polyphenol thu được…………………………………………………………………………….40 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các hợp chất phân lập từ Schisandra sphenanthera………………12 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất Ngũ vị tử Ngọc Linh………… 32 Bảng 3.2 Kết xây dựng đường chuẩn acid gallic.…………………………….35 Bảng 3.3 Kết đánh giá giới hạn định lượng………………………………… 36 Bảng 3.4 Kết đánh giá độ lặp lại ngày………………………………….36 Bảng 3.5 Kết đánh giá độ lặp lại khác ngày 12 lần thí nghiệm………… 37 Bảng 3.6 Kết đánh giá hiệu suất thu hồi………………………………………38 Bảng 3.7 Kết định lượng mẫu Ngũ vị tử………………………………….39 Bảng 3.8 Hàm lượng tinh dầu tổng số mẫu Ngũ vị tử………………… 40 Bảng 3.9 Thành phần tinh dầu GC-MS…………………………………… 41 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc Linh 1.1.1 Thực vật học 1.1.1.1 Vị trí phân loại Ngũ vị tử thu hái Ngọc Linh, Việt Nam có tên khoa học Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils., thuộc chi Ngũ vị tử (Schisandra), họ Ngũ vị (Schisandraceae), Hồi (Illiciales), phân lớp Hoàng liên (Rancunulidae), lớp Hai mầm (Dicotyledones), ngành Hạt kín (Angiospermae) Ở Việt Nam, Ngũ vị tử chủ yếu phân bố vùng núi Ngọc Linh, thuộc tỉnh Kon Tum Quảng Nam Ngũ Vị Tử thu núi Ngọc linh, Việt Nam có tên khoa học Schisandra sphenanthera Rehder & E.H.Wilson, phân bố độ cao 1.200-1.600 m, tập trung nhiều vùng có sinh thái rừng bụi, rừng thứ sinh rừng thông Ở Kon Tum, Ngũ vị tử phân bố huyện Ngọc Lây, Đak tô, Tu-mơ-rông, Konplông Ở Quảng nam phân bố chủ yếu nam Trà My.[12, 13] A B C Hình 1.1 Một số hình ảnh Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc Linh (A - Quả chưa chín; B: Hoa; C: Quả chín) 1.1.1.2 Đặc điểm thực vật Ngũ vị tử Ngọc Linh (Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.) loại thân leo gỗ, dài – m rụng vào mùa khô (tháng 10-11) Tồn khơng lơng, gặp gân, mặt non có lơng nhỏ mềm thưa thớt Khi đâm chồi (tháng 2) vẩy chồi có lơng mềm Cành nhỏ có mầu hồng cánh gián Thân cành có nốt sần, cành non có cạnh Lá mọc so le, hình trứng đảo, rộng phía cuối lá, gốc Hàm lượng polyphenol toàn phần 0,96 0,96 0,93 0,95 0,97 0,95 (%) Trung bình (%) 0,95 SD RSD (%) SD = 0,0138 ; %RSD = 1,45 % Bảng 3.5 Kết đánh giá độ lặp lại khác ngày Lần Khối lượng mẫu (g) 2,0145 2,0123 2,0147 2,0185 2,0157 2,0196 Độ hấp thụ quang (Abs) 0,367 0,365 0,382 0,374 0,367 0,380 Hàm lượng polyphenol toàn phần (%) 0,97 0,96 1,01 0,99 0,97 1,00 Trung bình (%) (n=12) 0,98 SD (n=12) RSD (%) (n=12) SD = 0,0179 ; %RSD = 1,82 % Kết bảng 3.4 cho thấy trung bình hàm lượng polyphenol toàn phần 0,95%, độ lệch chuẩn SD = 0,0138 phương pháp có độ lặp lại chấp nhận thông qua %RSD = 1,45 % (< 2,7% - mức qui định %RSD mức hàm lượng 1% theo AOAC) 37 Kết bảng 3.5 cho thấy hàm lượng trung bình polyphenol tồn phần sau 12 thí nghiệm 0,98% ta tính độ lệch chuẩn SD = 0,0179 phương pháp có độ lặp lại chấp nhận thơng qua RSD = 1,82 % (< 2,7% - mức qui định %RSD mức hàm lượng 1% theo AOAC) Kết thu cho thấy phương pháp định lượng polyphenol tồn phần dược liệu Ngũ vị tử (tính theo acid gallic) đạt yêu cầu độ lặp lại 3.2.1.5 Hiệu suất thu hồi phương pháp Kết đánh giá hiệu suất thu hồi phương pháp trình bày Bảng 3.6 Bảng 3.6 Kết đánh giá hiệu suất thu hồi Độ hấp thụ quang (Abs) TT Lượng acid gallic tìm lại Hiệu suất thu hồi (%) (mg) Mẫu không thêm chuẩn acid gallic Mẫu thêm chuẩn acid gallic (3,7 mg) 0,373 0,678 3,524 95,25 Mẫu thêm chuẩn acid gallic (3,7 mg) 0,683 3,552 96,01 Mẫu thêm chuẩn acid gallic (3,7 mg) 0,676 3,514 95,01 0,679 3,530 95,42 Trung bình Từ kết bảng 3.6 cho thấy hiệu suất thu hồi trung bình acid gallic đạt 95,42 % 3.2.1.6 Đánh giá hàm lượng polyphenol mẫu dược liệu Ngũ vị tử Kết định lượng polyphenol tồn phần (tính theo acid gallic) mẫu Ngũ vị tử trình bày Bảng 3.7 Mỗi thí nghiệm phân tích lặp lại lần lấy kết trung bình 38 Bảng 3.7 Kết định lượng polyphenol tồn phần (tính theo acid gallic) mẫu Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc linh, Việt Nam (n=3) Hàm lượng TT Ký hiệu mẫu Khối lượng dược liệu (g) Độ hấp thụ quang (Abs) M3 2,0101 0,314 0,81 M4 2,0234 0,714 1,84 M5 2,0221 0,495 1,28 M7 2,0012 0,368 0,96 M8 2,0421 0,286 0,73 M9 2,0021 0,789 2,07 M12 2,0455 0,638 1,63 M16 2,0312 0,679 1,84 M17 2,0112 0,294 0,76 10 M18 2,0434 0,345 0,88 11 M20 2,0278 0,272 0,70 12 M21 2,0435 0,283 0,72 13 M22 2,0175 0,212 0,55 14 M23 2,0924 0,222 0,55 15 M26 2,0356 0,740 2,00 16 M28 2,0775 0,399 1,05 17 M29 2,1322 0,757 1,93 18 M30 2,0012 0,372 0,97 19 M31 2,0025 0,435 1,14 20 M32 2,0123 0,255 0,66 21 M33 2,0733 0,218 0,57 22 M34 2,0554 0,317 0,83 39 polyphenol tồn phần trung bình (%) 22 mẫu Ngũ vị tử đo hàm lượng polyphenol toàn phần mẫu Dưới 1% 1% đến 2% mẫu 13 mẫu Trên 2% Hình 3.5 Biểu đồ số lượng mẫu tương ứng với khoảng % hàm lượng polyphenol thu Từ Hình 3.5 cho thấy có 13 mẫu/22 mẫu (chiếm 59%) mẫu Ngũ vị tử khảo sát có hàm lượng polyphenol tồn phần 1%; có 7/22 mẫu Ngũ vị tử (chiếm 32%) có hàm lượng polyphenol tồn phần từ 1-2%; có 2/22 mẫu (chiếm 9%) có hàm lượng polyphenol tồn phần 2% 3.3 Hàm lượng tinh dầu tổng số Do khối lượng dược liệu dùng để định lượng tinh dầu khoảng 100 g dược liệu, mẫu Ngũ vị tử thu thập được, số mẫu có đủ khối lượng để xác định hàm lượng tinh dầu tổng số Kết phân tích hàm lượng tinh dầu tổng số mẫu Ngũ vị tử trình bày Bảng 3.8 Bảng 3.8 Hàm lượng tinh dầu tổng số mẫu Ngũ vị tử 100,2 99,8 98,7 100,1 100,1 Thể tích tinh dầu thu (ml) 1,1 0,9 0,9 1,2 1,1 Độ ẩm (%) 13,6 12,5 10,5 13,2 12,6 Mẫu Khối lượng dược liệu (g) 40 Hàm lượng tinh dầu tổng số (%)* 1,27 1,03 1,02 1,38 1,26 *Hàm lượng tinh dầu tổng số tính khối lượng mẫu khô kiệt Từ kết thu cho thấy, hàm lượng tinh dầu mẫu Ngũ vị tử dao động từ 1,02-1,38 %, tính theo khối lượng khơ kiệt 3.4 Phân tích thành phần tinh dầu GCMS Tiến hành phân tích thành phần tinh dầu mẫu Ngũ vị tử phương pháp GC-MS theo điều kiện trình bày Mục 2.3.6 Kết thu trình bày Bảng 3.9 Bảng 3.9 Thành phần tinh dầu Ngũ vị tử GC-MS STT Tên chất Độ tương Phần trăm tính theo diện tích pic (%) thích (%) M1 M2 M3 M4 M5 α - Copaene 94 1,32 0,56 0,97 1,43 Daucene 92 2,96 1,95 2,12 2,61 0,73 α - Santalene 93 13,93 9,73 10,35 12,32 6,25 Cubenene 92 1,21 0,74 0,84 0,51 γ - Cadiene 91 34,17 27,43 28,16 29,76 Cis-muurola-3,5diene 91 2,24 2,59 3,83 2,85 2,18 γ - Amorphene 95 0,8 0,47 0,74 α - Amorphene 93 2,96 2,35 2,27 2,46 1,45 γ - Muurolene 96 8,22 6,09 6,53 6,19 4,56 10 γ - Gurjunene 90 0,89 0,69 0,95 0,4 11 Unknown 88 3,52 3,04 2,76 3,12 4,08 12 γ - Acoradiene 90 1,36 13 β - Copaene 94 1,6 1,17 1,42 14 β - Cadinene 92 1,96 1,31 1,74 2,36 1,59 15 Unknown 81 1,25 1,49 1,54 1,23 0,91 16 Nerolidyl acetate 92 1,03 2,91 2,49 1,46 3,11 17 Caryophyllene 93 0,62 18 Epi-Cubenol 93 0,63 19 α - Cadinol 92 1,08 1,28 1,46 1,16 2,19 41 0,85 22 20 Unknown 86 0,65 0,78 21 α - Santalal 90 1,5 2,37 1,43 1,23 1,81 22 α - Santalol 94 3,75 6,45 6,18 6,46 8,82 23 Unknown 81 3,11 7,44 4,94 5,81 9,58 24 Unknown 82 11,87 19,76 19,61 15,52 29,45 Tổng 100 100 100 100 100 Unknown: tín hiệu pic chưa định danh độ phù hợp nhỏ 90%; -: khơng có Kết thu cho thấy, tinh dầu Ngũ vị tử có chứa nhiều thành phần đa dạng sesquiterpenes cadinenes (Daucene, α – Santalene, Cubenene, γ – Cadiene, β - Cadinene), sesquiterpenes humulene (α – Copaene, β - Copaene), sesquiterpenes muurolenes ( Cis-muurola-3,5-diene, γ - Muurolene), sesquiterpenes amorphanes (γ – Amorphene, α - Amorphene), sesquiterpenes (γ – Gurjunene, γ – Acoradiene, γ – Acoradiene, Caryophyllene, Epi-Cubenol, α – Cadinol, α – Santalal, α - Santalol ) Trong đó, số thành phần có tỷ lệ phần trăm lớn γ – Cadiene (22% 34,7%), α – Santalene (6,25% - 13,93%), α – Santalol (3,75% - 8,82%), γ – Muurolene (4,56% - 8,22%), α – Amorphene (1,45% - 2,96%), Nerolidyl acetate (1,03% - 3,11%) 42 CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Về kết định tính nhóm chất dược liệu Ngũ vị tử Ngọc Linh Kết định tính nhóm chất phương pháp hóa học cho thấy Ngũ vị tử Ngọc Linh chứa thành phần: polyphenol, acid amin, đường khử, polysaccharid, flavonoid, coumarin, acid hữu cơ, chất béo Kết phù hợp với kết nghiên cứu công bố tài liệu [5, 47] Trong polyphenol thể phản ứng dương tính mạnh, chứng tỏ nhóm chất có mặt dược liệu Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc linh, Việt Nam Kết định tính giúp phân tích sơ thành phần hóa học bước sở cho việc định hướng nghiên cứu thành phần hóa học, phân tích định tính, định lượng hợp chất có dược liệu Ngũ vị tử 4.2 Về kết phân tích định lượng polyphenol dược liệu Ngũ vị tử thu vùng núi Ngọc linh, Việt Nam Polyphenol nhóm hợp chất hóa học tự nhiên tìm thấy nhiều loại thực phẩm trái cây, rau quả, cacao, nho, hạt cà phê loại thảo dược Các polyphenol nghiên cứu rộng rãi tác dụng dược lý cho có nhiều lợi ích sức khỏe Dưới số tác dụng dược lý hợp chất polyphenol: Tác dụng chống oxy hóa: Polyphenol có khả chống oxy hóa, giúp bảo vệ tế bào khỏi tổn thương gốc tự Họ có khả tiêu diệt phân tử tự làm giảm thiểu q trình oxy hóa thể Tác dụng chống viêm: Một số polyphenol có tác dụng chống viêm, giúp giảm sưng, đau viêm nhiễm thể Chúng có khả ức chế phản ứng vi khuẩn viêm, làm giảm tổn thương mô Tác dụng bảo vệ tim mạch: Một số polyphenol, flavonoid resveratrol, chứng minh có tác dụng bảo vệ tim mạch Chúng có khả làm giảm cholesterol xấu (LDL), tăng cholesterol tốt (HDL), giảm nguy hình thành cục máu đơng giảm vi khuẩn mạch máu Tác dụng chống ung thư: Các polyphenol có khả ngăn chặn q trình 43 phát triển lan truyền tế bào ung thư Chúng làm giảm vi khuẩn gây ung thư, ngăn chặn phát triển khối u, giúp giảm nguy mắc bệnh ung thư Tác dụng chống lão hóa: Polyphenol có khả làm chậm q trình lão hóa bảo vệ tế bào khỏi tổn thương tuổi tác Chúng có tác dụng chống oxy hóa, giảm vi khuẩn cải thiện chức tế bào Kết định lượng polyphenol tồn phần (tính theo acid gallic) mẫu dược liệu Ngũ vị tử thu núi Ngọc Linh cho thấy, hàm lượng polyphenol toàn phần đạt khoảng từ 0,548 – 2,048 % Kết cho thấy Ngũ vị tử nguồn dược liệu giàu nhóm chất polyphenol gợi ý cho nghiên cứu phát triển sản phẩm từ Ngũ vị tử theo định hướng tác dụng dược lý đặc trưng hợp chất polyphenol [48] 4.3 Về kết phân tích thành phần tinh dầu hàm lượng tinh dầu tổng số Ngũ vị tử thu núi Ngọc Linh Quả Ngũ vị tử có mùi thơm đặc trưng, từ việc nghiên cứu tinh dầu từ Ngũ vị tử cần nghiên cứu Hàm lượng tinh dầu tổng số trung bình thu từ mẫu Ngũ vị tử thu núi Ngọc Linh, Việt Nam 1,02-1,38 %, tính theo khối lượng khơ kiệt Kết phân tích thành phần tinh dầu GC-MS cho thấy chất có hàm lượng cao xuất Ngũ vị tử thu núi Ngọc Linh γ – Cadiene, α – Santalene, α – Santalol, γ – Muurolene, α – Amorphene, Nerolidyl acetate Đây chất nhiều nghiên cứu chứng minh có tinh dầu Ngũ vị tử [11, 36, 37] Các hợp chất có tác dụng dược lý bật như:  γ – Cadiene: γ – Cadiene loại diterpenoid tìm thấy lồi thực vật, có cơng thức phân tử C15H24, thuộc nhóm hydrocarbon sesquiterpene γ -cadinene có hoạt tính chống khuẩn khả chống lại số loại vi khuẩn gây bệnh, Staphylococcus aureus Escherichia coli Hoạt tính chống lại virus ức chế phát triển số loại vi-rút, bao gồm vi-rút gây cảm lạnh vi-rút Herpes γ cadinene có khả kháng nấm sử dụng điều trị nhiễm nấm, Candida albicans Aspergillus niger γ -cadinene có khả chống oxy hóa, giúp bảo vệ tế bào khỏi tác động gây hại gốc tự 44  α – Santalene: α-Santalene hợp chất thuộc nhóm sesquiterpen, có cấu trúc phân tử phức tạp Một số nghiên cứu α-santalene có khả chống lại số loại vi khuẩn gây bệnh, Staphylococcus aureus Escherichia coli Nghiên cứu ghi nhận khả α-santalene việc ức chế số loại vi-rút Một số nghiên cứu tiền lâm sàng cho thấy α-santalene có hoạt tính chống viêm giảm viêm nhiễm thể α-Santalene có khả chống oxy hóa, giúp bảo vệ tế bào khỏi tác động gây hại gốc tự  α – Santalol: α-Santalol hợp chất chiếm phần lớn dầu xạ hương thành phần gây nên mùi thơm đặc trưng Nó thuộc vào nhóm sesquiterpenoid dạng alcohol Nghiên cứu α-santalol có khả chống nấm, chống viêm α-Santalol có khả chống oxy hóa, giúp bảo vệ tế bào khỏi tổn thương stress  γ – Muurolene: γ-Muurolene hợp chất tự nhiên thuộc nhóm sesquiterpen Một số nghiên cứu cho thấy γ-muurolene có khả chống lại số loại vi khuẩn gây bệnh, chống vi-rút, chống viêm Một số nghiên cứu cho thấy γ-muurolene có khả kháng nấm, đặc biệt chống lại số loại nấm gây bệnh  α – Amorphene: α-Amorphene hợp chất tự nhiên thuộc nhóm sesquiterpen, tìm thấy số lồi cây thuốc mỡ Một số nghiên cứu α-amorphene có khả chống lại số loại vi khuẩn gây bệnh Staphylococcus aureus Escherichia coli có tác dụng sinh học giống γ-muurolene  Nerolidyl acetate: Nerolidyl acetate este tự nhiên thuộc nhóm sesquiterpen, tìm thấy số loại dầu thực vật tinh dầu Tác dụng sinh học Nerolidyl acetate giống với chất Ngồi ra, nerolidyl acetate cịn sử dụng ngành công nghiệp mỹ phẩm hương liệu nhờ vào mùi thơm đặc trưng 45 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Từ nghiên cứu thành phần hóa học, phân tích định lượng polyphenol phân tích thành phần tinh dầu Ngũ vị tử thu núi Ngọc Linh, Việt Nam, ta thu kết sau: - Bằng phương pháp định tính hóa học nhóm chất xác định dược liệu Ngũ vị tử Ngọc Linh có chứa nhóm hợp chất: polyphenol, acid amin, đường khử, polysaccharid, flavonoid, coumarin, acid hữu cơ, chất béo - Xây dựng phương pháp định lượng polyphenol tồn phần (tính theo acid gallic) Đường chuẩn acid gallic dùng để định lượng polyphenol Y = 0,9372.X + 0,0251 (trong Y độ hấp thụ quang, đơn vị Abs; x nồng độ acid gallic, đơn vị mg/ml; Giới hạn phát giới hạn định lượng phép đo xác định là: LOD = x 10-3 mg/L, LOQ = 7,8 x 10-3 mg/L; Độ lặp lại phương pháp đạt theo hướng dẫn AOAC (hàm lượng polyphenol toàn phần mẫu Ngũ vị tử đạt 0,98%, %RSD thí nghiệm lặp lại ngày khác ngày 1,45% 1,82%) Hiệu suất thu hồi đạt khoảng 95% chứng tỏ phương pháp phân tích có độ xác cao - Đã xác định hàm lượng polyphenol toàn phần 22 mẫu Ngũ vị tử thu núi Ngọc Linh, Việt Nam Kết cho biết hàm lượng polyphenol tồn phần (tính theo acid gallic) mẫu Ngũ vị tử 0,548 – 2,048 % - Hàm lượng tinh dầu tổng số trung bình thu từ mẫu Ngũ vị tử thu núi Ngọc Linh, Việt Nam 1,02-1,38 %, tính theo khối lượng khơ kiệt - Các chất có tinh dầu dược liệu Ngũ vị tử thu núi Ngọc Linh gồm: γ – Cadiene, α – Santalene, α – Santalol, γ – Muurolene, α – Amorphene, Nerolidyl acetate Đề xuất Từ kết thu được, đề xuất số hướng nghiên cứu sau: - Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học, phân tích định lượng tác dụng sinh học hợp chất polyphenol dược liệu Ngũ vị tử - Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm phát triển sản phẩm từ tinh dầu Ngũ vị tử 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO He X Li Z., et al A review of polysaccharides from Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera: Properties, functions and applications Carbohydrate Polymers 2018; (184): tr 178-190 Richard M.K.Saunders Species plantarum: flora of the world Part schisandraceae Australian biological resources study canberra 2001: tr 1-10 Flora of China, Vol 7, 39-43 Đặng Quang Chung cộng Đỗ Huy Bích, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, 2006; 416-423 Đỗ Tất Lợi , Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, 2004; 872-875 Chen D F Lu Y Analysis of Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera J Chromatogr A 2009; 1216(11): tr 1980-90 Tang R Chen X., et al Physicochemical properties, antioxidant activity and immunological effects in vitro of polysaccharides from Schisandra sphenanthera and Schisandra chinensis Int J Biol Macromol 2019; 131: tr 744751 Doan V V Mai N T., et al Chemical constituents from Schisandra sphenanthera and their cytotoxic activity Nat Prod Res 2021; 35(20): tr 33603369 A Rodriguez-Mateos, Vauzour, D., Krueger, C G., Shanmuganayagam, D., Reed, J., Calani, L., … Crozier, A Bioavailability, bioactivity and impact on health of dietary flavonoids and related compounds: an update Archives of Toxicology 2014; 88(10): tr Archives of Toxicology 10 L Condezo-Hoyos, Gazi, C., & Pérez-Jiménez, J Design of polyphenol-rich diets in clinical trials: A systematic review Food Research International 2021; 149: tr 110655 11 X Wang, Liu, Y., Niu, Y., Wang, N., & Gu, W The Chemical Composition and Functional Properties of Essential Oils from Four Species of Schisandra Growing Wild in the Qinling Mountains, China Molecules 2018; 23(7): tr 1645 12 Nguyễn Thị Lan Anh, Nghiên cứu đặc điểm nông sinh học thuốc Ngũ vị tử Ngọc Linh (Schisandra sphenanthera), Luận án tiến sĩ, Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Hà Nội, 2016 13 Nguyễn Bá Hoạt, Nghiên cứu phát triển Ngũ vị tử Ngọc Linh cà tác dụng bảo vệ tế bào gan, Đề tài khoa học cấp tỉnh Kon Tum, Kon Tum, 2006 14 Hirotoshi Kanatani Ikeya Yukinobu, et al The constituents of Schizandra chinensis Baill XV Isolation and structure determination of two new lignans, gomisin S and gomisin T Chemical & pharmaceutical bulletin 1988; 36(10): tr 3974-3979 15 Ko Sugama Ikeya Yukinobu, et al Two lignans from Schisandra sphenanthera Phytochemistry 1991; 30(3): tr 975-980 16 Heihachiro Taguchi Ikeya Yukinobu, et al The constituents of Schizandra chinensis Baill V The structures of four new lignans, gomisin N, gomisin O, epigomisin O and gomisin E, and transformation of gomisin N to deangeloylgomisin B Chemical & pharmaceutical bulletin 1979; 27(11): tr 2695-2709 17 Eiji Miki Minoru Okada Ikeya Yukinobu, et al Benzoylgomisin Q and benzoylgomisin P, two new lignans from Schisandra sphenanthera Rehd et Wils Chemical & pharmaceutical bulletin 1990; 35(8): tr 1408-1411 18 Heihachiro Taguchi Ikeya Yukinobu, et al The constituents of Schizandra chinensis Baill VIII The structures of two new lignans, tigloylgomisin P and angeloylgomisin P Chemical & pharmaceutical bulletin 1980; 28(11): tr 3357-3361 19 Heihachiro Taguchi Ikeya Yukinobu, et al The constituents of Schizandra chinensis Baill I Isolation and structure determination of five new lignans, gomisin A, B, C, F and G, and the absolute structure of schizandrin Chemical & pharmaceutical bulletin 1979; 27(6): tr 1383-1394 20 Fang S D Liu C S., et al Studies on the active principles of Schisandra sphenanthera Rehd et Wils The structures of schisantherin A, B, C, D, E, and the related compounds Sci Sin 1978; 21(4): tr 483-502 21 Heihachiro Taguchi Ikeyda Yukinobu, et al The constituents of Schizandra chinensis Baill XII Isolation and structure of a new lignan, gomisin R, the absolute structure of wuweizisu C and isolation of schisantherin D Chemical & pharmaceutical bulletin 1982; 30(9): tr 3207-3211 22 Heihachiro Taguchi Ikeya Yukinobu, et al The constituents of Schizandra chinensis Baill VII The structures of three new lignans, (-)- gomisin K1 and (+)-gomisins K2 and K3 Chemical & pharmaceutical bulletin 1980; 28(8): tr 2422-2427 23 Bộ Y tế, Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất Y học, 2015; 1273- 1274 24 Yuan R S Wang C M., et al Schisandra polysaccharide inhibits hepatic lipid accumulation by downregulating expression of SREBPs in NAFLD mice Lipids Health Dis 2016; 15(1): tr 195 25 Mao G Zhao T., et al Isolation, characterization and antioxidant activity of polysaccharide from Schisandra sphenanthera Carbohydr Polym 2014; 105: tr 26-33 26 Chen J Yue C., et al Effects of Selenylation Modification on Antioxidative Activities of Schisandra chinensis Polysaccharide PLoS One 2015; 10(7) 27 Chen J Yue C., et al The antioxidant action and mechanism of selenizing Schisandra chinensis polysaccharide in chicken embryo hepatocyte Int J Biol Macromol 2017; 98: tr 506-514 28 Xu G Niu J., et al In Vitro Antioxidant activities and anti-diabetic effect of a polysaccharide from Schisandra sphenanthera in rats with type diabetes Int J Biol Macromol 2017; 94(Pt A): tr 154-160 29 D.M.; Bernatoniene Kopustinskiene, J Antioxidant Effects of Schisandra chinensis Fruits and Their Active Constituents Antioxidants 2021; 10: tr 620 30 Zhu S Nasser M I., et al A Comprehensive Review on Schisandrin B and Its Biological Properties Oxid Med Cell Longev 2020; 2020: tr 2172740 31 Li H Jiang E P., et al Schisandrin B protects PC12 cells against oxidative stress of neurodegenerative diseases Neuroreport 2015; 26(6): tr 3606 32 Mao G Zhao T., et al Antitumor and immunomodulatory activity of a water-soluble low molecular weight polysaccharide from Schisandra chinensis (Turcz.) Baill Food Chem Toxicol 2013; 55: tr 609-16 33 Qu H M Liu S J., et al SCP, a polysaccharide from Schisandra chinensis, induces apoptosis in human renal cell carcinoma Caki-1 cells through mitochondrial-dependent pathway via inhibition of ERK activation Tumour Biol 2014; 35(6): tr 5369-74 34 Liu S J Qu H M., et al Antitumor and antiangiogenic activity of Schisandra chinensis polysaccharide in a renal cell carcinoma model Int J Biol Macromol 2014; 66: tr 52-6 35 Haixia Chen* Zhaoshuai Wang, Wenjing Zhang, Gaoshuang Lan and Likang Zhang Comparative studies on the chemical composition and antioxidant activities of Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera fruits Journal of Medicinal Plants Research 2011; 5(7): tr 1207-1216 36 X Wang, Liu, Y., Zhou, S., Qin, X., & Gu, W Comparison on the Compositions of Essential Oils from the Seed and Pulp of Schisandra sphenanthera Rehd et Wils Journal of Essential Oil Bearing Plants 2017; 20(4): tr 1066-1073 37 L Song, Ding, J.-Y., Tang, C., & Yin, C.-H Compositions and Biological Activities of Essential Oils of Kadsura longepedunculata and Schisandra sphenanthera The American Journal of Chinese Medicine 2007; 35(02): tr 353– 364 38 A Mocan, Crișan, G., Vlase, L., Crișan, O., Vodnar, D., Raita, O., … Tilea, I Comparative Studies on Polyphenolic Composition, Antioxidant and Antimicrobial Activities of Schisandra chinensis Leaves and Fruits Molecules 2014; 19(9): tr 15162–15179 39 K Starzak, Świergosz, T., Matwijczuk, A., Creaven, B., Podleśny, J., & Karcz, D Anti-Hypochlorite, Antioxidant, and Catalytic Activity of Three Polyphenol-Rich Super-Foods Investigated with the Use of Coumarin-Based Sensors Biomolecules 2020; 10(5): tr 723 40 X Wu, Yu, X., & Jing, H Optimization of Phenolic Antioxidant Extraction from Wuweizi (Schisandra chinensis) Pulp Using Random-Centroid Optimazation Methodology International Journal of Molecular Sciences 2011; 12(9): tr 6255-6266 41 Bộ môn Dược liệu, Thực tập Dược liệu, Nhà xuất Y học, Hà Nội, 2010 42 Bộ môn Dược liệu, Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Trường Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh, 2012 43 ICH Validation of analytical procedures: Text and methodology Q2(R1) ICH Harmonized Tripartite guidelines 2005: tr 1-13 44 DS Trần Cao Sơn, Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia, 2010 45 AOAC International Appendix K: Guidelines for Dietary Supplements and Botanicals PART I: AOAC Guidelines for Single-Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals 2013 46 Nguyễn Quốc Tuấn, Xây dựng phương pháp định tính, định lượng flavonoid nụ vối, Trường Đại học Khoa học tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội, 2012 47 Nguyễn Thượng Dong, Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 2006 48 X Zhang, Li, Z., Yang, P., Duan, G., Liu, X., Gu, Z., & Li, Y Polyphenol scaffolds in tissue engineering Materials Horizons 2020