7
Tổng quan về Ngũ vị tử thu tại vùng núi Ngọc Linh
Ngũ vị tử, có tên khoa học là Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils., thuộc chi Ngũ vị tử (Schisandra) và họ Ngũ vị (Schisandraceae), chủ yếu phân bố tại vùng núi Ngọc Linh, tỉnh Kon Tum và Quảng Nam, Việt Nam Loài cây này nằm trong bộ Hồi (Illiciales), phân lớp Hoàng liên (Rancunulidae), lớp Hai lá mầm (Dicotyledones) và ngành Hạt kín (Angiospermae).
Schisandra sphenanthera Rehder & E.H.Wilson là cây phân bố ở độ cao từ 1.200 đến 1.600 m, chủ yếu tập trung tại các khu vực rừng cây bụi, rừng thứ sinh và rừng thông Tại tỉnh Kon Tum, Ngũ vị tử được tìm thấy ở các huyện Ngọc Lây, Đak Tô, Tu-mơ-rông và Konplông, trong khi ở Quảng Nam, cây này chủ yếu phân bố ở khu vực nam Trà My.
Hình 1.1 Một số hình ảnh Ngũ vị tử thu tại vùng núi Ngọc Linh
(A - Quả chưa chín; B: Hoa; C: Quả chín) 1.1.1.2 Đặc điểm thực vật
Ngũ vị tử Ngọc Linh (Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.) là một loại cây thân leo gỗ, có chiều dài từ 3 đến 5 mét và rụng lá vào mùa khô, thường diễn ra trong tháng 10-11 Cây này không có lông, chỉ có một ít lông nhỏ mềm thưa thớt trên mặt dưới của lá non Thời điểm cây bắt đầu đâm chồi là vào tháng 3.
2) vẩy chồi có lông mềm Cành nhỏ có mầu hồng cánh gián Thân cành có nốt sần, cành non hơi có cạnh Lá mọc so le, hình trứng đảo, rộng hơn về phía cuối lá, gốc
Cây có hình nêm với đỉnh nhọn, lá trung bình dài từ 5-11 cm và rộng 3-7 cm Mặt trên lá có màu xanh đậm, trong khi mặt dưới nhạt hơn, với mép lá có răng cưa thô Cuống lá dài 2-3 cm và có màu hồng nhạt, với gân lá hình lông chim, có 4-5 đôi gân lồi ở mặt dưới và hơi lõm ở mặt trên Hoa đơn tính, khác gốc, có tràng với 6-9 cánh màu vàng trắng và mùi thơm, nhị 5 Hoa mọc ở nách lá, cuống dài 2-4 cm, với phiến bao dài 3-4 mm, cánh hoa từ 5-9 màu cam, hình trứng đảo dạng tròn dài, kích thước 6-12 x 5.
Hoa có đường kính 8 mm, với nhiều nhị tạo thành bó hình trứng đảo, đế hoa lồi hình trụ tròn và ô phấn hướng nội Hoa cái có 30-60 tâm bì, tập hợp thành bó hình cầu dạng trứng, đường kính 5 cm Trục đế hoa tạo thành quả dài từ 6-17 cm, đường kính 4 mm, cuống quả dài 5-10 cm Khi chín, quả mọng có màu hồng sau đỏ sẫm, hình cầu dạng trứng, đường kính 5-7 mm Hạt tròn màu vàng, hình thận, dài 4 mm, rộng 3,8 mm, với rốn hạt hình chữ V và vỏ hạt lưng có vân sần sùi.
Cây Schisandra, với 25 loại khác nhau, phân bố rộng rãi trên toàn cầu, nhưng Trung Quốc là nơi phong phú nhất với 19 loại từ đông bắc đến tây nam Ngoài ra, có 6 loại khác ở đông nam Mỹ và các nước châu Á Tại Việt Nam, Schisandra sphenanthera là loài mới được phát hiện, chủ yếu phân bố ở vùng núi Ngọc Linh thuộc hai tỉnh Kon Tum và Quảng Nam.
Schisandra fruit contains essential oils with a lemon scent, comprising 30% sesquiterpenes, 20% aldehydes, and acetone The fruit also contains 11% citric acid, 7% malic acid, 0.8% tartaric acid, vitamin C, and approximately 0.12% schisandrin (C22H32O7) The pulp has 1.5% sugar, tannins, and pigments, while the seeds are about 34% fat The primary components of Schisandra are lignan derivatives, classified into five groups: type A dibenzocyclooctadiene lignans, type B spirobenzofuranoid dibenzocyclooctadiene lignans, type C 4-aryltetralin lignans, type D 2,3-dimethyl-1,4-diarylbutane lignans, and type E 2,5-diaryltetrahydrofuran lignans, with their content in Schisandra fruit ranging from 7.2% to 19.2%.
Có 3 triterpen được phân lập từ quả của S sphenanthera bao gồm acid schizandronic (acid ganwuweizic) (24), acid anwuweizic (25) và schisanol (26) [6] Ngoài ra, vào năm 2019, Nguyen Thi Mai và các cộng sự đã phân lập được 6 hợp chất nortriterpenoid (27-32) và 5 lignan (33-37) [8]
6 CH3 CH3 -CH2- OTig CH3 OH CH3 H
9 CH3 CH3 -CH2- OBen CH3 OH CH3 H
10 CH3 CH3 -CH2- OTig CH3 OH CH3 H
12 -CH2- -CH2- OBen CH3 OH CH3 H
14 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 H
15 CH3 CH3 CH3 H CH3 CH3 H
Hình 1.2 Cấu trúc của lignan dibenzocyclooctadien từ Schisandra sphenanthera
Hình 1.3 Cấu trúc của 5 lignan khác từ S.sphenanthera
Hình 1.4 Cấu trúc của 3 triterpene trong quả của S.sphenanthera.
Hình 1.5 Cấu trúc hóa học của 6 nortriterpenoid và 5 lignan được phân lập từ
Bảng 1.1 Các hợp chất được phân lập từ Schisandra sphenanthera
Thứ tự Hợp chất Nguồn tham khảo Các hợp chất nhóm lignan
Các hợp chất nhóm triterpene
1.1.3 Tác dụng và công dụng trong y học cổ truyền
Ngũ vị tử có vị chua chát và tính ấm, quy vào kinh phế và thận, mang lại nhiều công dụng như liễm phế chỉ ho, sáp tinh, ích thận, thu mồ hôi và sinh tân dịch.
Ngũ vị tử có nhiều công dụng trong việc điều trị các triệu chứng như phế hư, ho, suyễn, miệng khô, khát nước, mỏi mệt, thận hư, liệt dương, di tinh, mồ hôi trộm, tả lỵ lâu ngày và đái dầm Liều dùng khuyến nghị là 2-4g mỗi lần, ngày 3 lần dưới dạng thuốc sắc hoặc thuốc bột, thường được phối hợp với các vị thuốc khác Trong Y học cổ truyền Trung Quốc, Ngũ vị tử cũng được sử dụng để bồi bổ sức khỏe, trị lỵ, lậu, cảm lạnh, say nóng, viêm phế quản, hen phế quản, chữa ho và liệt dương.
Một số bài thuốc có chứa Ngũ vị tử:
Để chữa tỳ thận dương hư di tả, cần sử dụng các thành phần gồm ngũ vị tử 6g, phá cố chỉ 12g, nhục đậu khấu và ngô thù du mỗi loại 4g Các vị thuốc này được tán nhỏ và luyện thành viên hoàn kết hợp với đại táo và sinh khương Liều dùng khuyến nghị là 10g mỗi lần, uống một lần mỗi ngày.
Để chữa suy nhược cơ thể do phế khí hư, bạn có thể sử dụng bài thuốc gồm các thành phần: Ngũ vị tử 10g, thục địa, tử uyển, tang bạch bì mỗi vị 12g, đảng sâm, hoàng kì mỗi vị 10g Hãy sắc uống mỗi ngày một thang để đạt hiệu quả tốt nhất.
+ Chữa hen suyễn ở người già: Ngũ vị tử 10g; mạch môn 16g; sa sâm; ngưu tất mỗi vị 12g Sắc uống ngày 1 thang [4]
+ Hỗ trợ điều trị nhồi máu cơ tim: Ngũ vị tử; nhân sâm; mạch môn mỗi vị 8g; cam thảo 6g Sắc uống [4]
Để chữa thiếu máu, bạn có thể sử dụng các thành phần sau: Ngũ vị tử 10g, đảng sâm 16g, phục linh, hoàng kỳ, thục địa, bạch thược, đại táo mỗi vị 12g, đương quy, viễn chí mỗi vị 10g, bạch truật 8g, quế tâm, cam thảo, trần bì mỗi vị 6g, và gừng 2g Hãy sắc uống một thang mỗi ngày để đạt hiệu quả tốt nhất.
+ Chữa chóng mặt ù tai, hay quên: Ngũ vị tử 8g, toan táo nhân, long nhãn, hoài sơn mỗi vị 12g; đương quy 8g Sắc uống ngày 1 thang [4]
1.1.4 Các nghiên cứu về hoạt tính sinh học
1.1.4.1 Tác dụng bảo vệ gan
Nhiều nghiên cứu đã chứng minh polysaccharid từ các loài thuộc chi
Schisandra trong đó có S sphenanthera có tác dụng bảo vệ gan [1, 24]
Ngũ vị tử đã được chứng minh có khả năng bảo vệ gan trong các thử nghiệm in vitro với độc tố Carbontetraclorid (CCl4) và D-galactosamin Một trong những thành phần quan trọng của nó, gomisin A, là một lignan được phân lập và có tác dụng tích cực trong việc hỗ trợ chức năng gan.
20
Thiết bị, dụng cụ và hóa chất, dung môi
- Cân kỹ thuật Precisa XT 620M:
Khả năng cân: 620 g, khả năng đọc: 1mg, độ lặp lại (load > 5%): 1 mg, khả năng cân tối thiểu (1%, k = 2): 200 mg
- Cõn phõn tớch Precisa XT 220ê:
Khả năng cân: 220 g, khả năng đọc: 0.1 mg, độ lặp (load > 5%): 0.1 mg
- Máy UV-VIS 1800, dải đo 190 nm-900 nm, hãng Shimadzu (Nhật Bản)
Hệ thống quang học: hai chùm tia, Khoảng bước sóng: 0 – 1100.0nm
- Hệ thống sắc ký khí khối phổ (GC-MS) của hãng Shimadzu, Nhật Bản
Sử dụng nguồn ion hóa phun điện tử (EI) với nhiệt độ có thể điều chỉnh lên đến 300 °C, năng lượng ion hóa từ 5 đến 150 eV, và cường độ dòng ion hóa phù hợp.
Tần suất sóng siêu âm: 40Hz, dung tích bể chứa: 3,2L.
Hóa chất, dung môi
Các dung môi, hóa chất dùng cho phân tích phản ứng hóa học và phân tích UV-VIS đều đạt tiêu chuẩn hóa chất tinh khiết phân tích
Các dung môi dùng cho phân tích sắc ký khí khối phổ (GC-MS) của hãng Merck và đạt tiêu chuẩn tinh khiết dùng cho phân tích khối phổ
Chất chuẩn acid gallic của hãng Sigma-Aldrich
Thuốc thử Folin-ciocaltreu của hãng Sigma-Aldrich.
Nội dung nghiên cứu
Nội dung 1: Định tính được các nhóm chất có trong quả Ngũ vị tử bằng phản ứng hóa học
Phương pháp UV-VIS được xây dựng nhằm phân tích định lượng polyphenol và đã được ứng dụng để đánh giá hàm lượng polyphenol trong các mẫu Ngũ vị tử thu hái từ vùng núi Ngọc Linh, Việt Nam Nghiên cứu này không chỉ cung cấp thông tin quan trọng về thành phần hóa học của Ngũ vị tử mà còn góp phần nâng cao hiểu biết về giá trị dinh dưỡng và tiềm năng ứng dụng của loại thảo dược này trong y học và thực phẩm.
Nội dung 3: Phân tích thành phần tinh dầu trong dược liệu Ngũ vị tử thu ở vùng núi Ngọc linh, Việt Nam.
Phương pháp nghiên cứu
2.3.1 Phương pháp định tính các nhóm chất thường gặp trong mẫu dược liệu Định tính sơ bộ một số nhóm hoạt chất bằng phương pháp hóa học theo các tài liệu [41, 42]
Chuẩn bị các dịch chiết:
Dịch chiết n-hexan được thực hiện bằng cách cân 10 g bột dược liệu cho vào bình soxhlet và chiết xuất với n-hexan cho đến khi dung môi trong bình trở nên không màu Sau đó, dịch chiết được cất để thu hồi bớt dung môi, tạo ra dịch chiết đậm đặc, sử dụng để thực hiện phản ứng định tính chất béo.
Dịch chiết ethanol 90 %: Cho 5 g bột dược liệu vào bình nón 250 ml, thêm
100 ml ethanol 90 %, đun cách thủy 10 phút, lọc nóng Dùng dịch lọc để làm các
22 phản ứng định tính flavonoid, coumarin, acid hữu cơ, acid amin
Dịch chiết nước: Cho 10 g bột dược liệu vào bình nón dung tích 50 ml, thêm
30 ml nước cất, đun sôi trực tiếp 5 phút Lọc lấy dịch lọc làm các phản ứng định tính tannin, đường khử và polysaccharid
Nhỏ vài giọt dịch chiết n-hexan trên giấy lọc, sấy nhẹ cho bay hơi hết dung môi Phản ứng dương tính khi xuất hiện vết mờ trên giấy lọc
Phản ứng mở đóng vòng lacton được thực hiện bằng cách cho vào hai ống nghiệm, mỗi ống 1 mL dịch chiết cồn Ống 1 thêm 0,5 mL dung dịch NaOH 10%, trong khi ống 2 để nguyên Sau khi đun sôi và để nguội, nếu ống 1 có tủa vàng hoặc tủa đục màu vàng và ống 2 trong, thì kết quả là dương tính Tiếp theo, thêm vào cả hai ống 2 mL nước cất, lắc đều và quan sát Nếu ống 1 trong suốt và ống 2 có tủa đục, thì kết quả cũng dương tính.
Phản ứng diazo hoá được thực hiện bằng cách cho 1 ml dịch chiết cồn vào ống nghiệm nhỏ, sau đó thêm 2 ml dung dịch NaOH 10% và đun cách thủy trong 5 phút trước khi để nguội Cuối cùng, thêm vài giọt thuốc thử Diazo mới pha; phản ứng dương tính sẽ xuất hiện khi có màu đỏ gạch.
+ Ống 1: lấy 2ml dịch chiết nước, thêm 2 giọt dung dịch FeCl3 5% (TT) sẽ xuất hiện màu hoặc tủa màu xanh đen hoặc xanh nâu nhạt
+ Ống 2: lấy 2ml dịch chiết nước, thêm 2 giọt chì acetat 10% (TT) sẽ xuất hiện tủa bông Phản ứng dương tính
+ Ống 3: lấy 2ml dịch chiết nước, thêm 5 giọt dung dịch gelatin 1% sẽ xuất hiện tủa bông trắng Phản ứng dương tính
Hiện tượng tạo bọt có thể được quan sát bằng cách cho 1 g bột dược liệu vào ống nghiệm lớn, sau đó thêm 10 mL nước và lắc mạnh trong 5 phút Sau khi lắc, để yên và quan sát sự hình thành bọt Nếu bọt vẫn còn bền, điều này cho thấy sự tương tác giữa bột dược liệu và nước.
23 vững sau 15 phút thì phản ứng dương tính
Lấy 2 ml dịch chiết nước cho vào ống nghiệm Thêm vào đó 0,5 ml TT Fehling
A và 0,5 ml TT Fehling B Đun sôi cách thủy vài phút Phản ứng dương tính khi thấy xuất hiện tủa đỏ gạch
Cho vào 2 ống nghiệm: Ống 1: 4 ml nước cất + 5 giọt thuốc thử Lugol, ống 2:
4 ml dịch chiết nước + 5 giọt thuốc thử Lugol Quan sát màu ống 2 đậm hơn ống 1 thì phản ứng dương tính
Lấy 3 ml dịch chiết cồn cho vào ống nghiệm Thêm 1-3 mảnh ninhydrin, đun sôi 2 phút, phản ứng dương tính khi thấy dung dịch chuyển màu tím
Để chiết xuất alkaloid, lấy 10 g bột dược liệu cho vào bình nón 50 ml, thêm 15 ml dung dịch H2SO4 2% và đun sôi trong vài phút Sau khi nguội, lọc dịch chiết vào bình gạn và kiềm hóa dịch lọc bằng dung dịch NH4OH 6N đến pH kiềm Tiến hành chiết alkaloid bằng cloroform (CHCl3) 3 lần, mỗi lần 5 ml Dịch chiết CHCl3 được gộp lại và lắc với H2SO4 2%, sau đó gạn lấy lớp nước acid và cho vào ống nghiệm khoảng 1 ml để thực hiện các phản ứng.
Tiến hành phản ứng: thêm vài giọt thuốc thử Dragendorff, phản ứng dương tính khi có tủa vàng cam hoặc đỏ
Phản ứng cyanidin được thực hiện bằng cách cho 2 ml dịch chiết cồn vào ống nghiệm, thêm một ít bột magie kim loại, và từ từ nhỏ 4-5 giọt acid HCl đậm đặc Sau đó, đun nóng cách thủy trong vài phút Kết quả dương tính sẽ xuất hiện nếu có màu tím đỏ.
- Phản ứng với FeCl 3 5% : Cho 1 ml dịch chiết cồn vào ống nghiệm, thêm 2-
3 giọt dung dịch FeCl3 5%, lắc nhẹ Phản ứng dương tính khi dung dịch chuyển màu xanh lục, xanh hoặc nâu
Khi thực hiện phản ứng với kiềm, cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết cồn và thêm vài giọt dung dịch NaOH 10% Phản ứng dương tính sẽ được xác định khi màu vàng của dung dịch tăng lên.
2.3.1.10 Định tính acid hữu cơ
Cho 1ml dịch chiết cồn vào ống nghiệm và cô đặc lại Hòa tan cắn trong 1ml nước, sau đó thêm vài tinh thể natri carbonat Phản ứng dương tính sẽ được xác nhận khi có bọt khí nổi lên.
Để chiết xuất dược liệu, lấy 10g bột dược liệu cho vào bình nón 250ml, thêm 100ml ethanol 25% và ngâm trong 24 giờ Sau đó, lọc dịch chiết vào cốc có mỏ, thêm 3ml chì acetat 30% và khuấy đều Tiến hành lọc để loại bỏ kết tủa, nếu dịch lọc vẫn còn tủa với chì acetat, thêm 1ml chì acetat vào dịch chiết, khuấy và lọc lại Tiếp tục thử nghiệm cho đến khi dịch chiết không còn tủa với acetat Cuối cùng, cho toàn bộ dịch lọc vào bình gạn và lắc kỹ với chloroform.
Gạn lớp chloroform vào cốc khô sạch sau ba lần chiết xuất 5 ml Chia dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ và bốc hơi dung môi bằng phương pháp nồi cách thủy cho đến khi khô Duy trì phần cặn còn lại để thực hiện các phản ứng định tính sau.
- Phản ứng Liebermann-Burchardt: Hòa tan cắn trong ống nghiệm 1 bằng
Để thực hiện thí nghiệm, cho 1ml anhydride acetic vào ống nghiệm và lắc đều Nghiêng ống nghiệm ở góc 45 độ, từ từ thêm 1ml H2SO4 đặc vào thành ống, tránh làm xáo trộn chất lỏng Quan sát hiện tượng: nếu thấy vòng màu tím đỏ xuất hiện ở mặt tiếp xúc giữa hai lớp chất lỏng, với lớp dưới có màu hồng và lớp trên màu xanh lá, thì phản ứng được coi là dương tính.
Phản ứng Baljet được thực hiện bằng cách hòa tan cắn trong ống nghiệm 2 với khoảng 1ml ethanol 90% và lắc đều Tiếp theo, nhỏ từng giọt thuốc thử Baljet mới pha, bao gồm 1 phần dung dịch acid picric 1% và 9 phần dung dịch NaOH 10% Nếu xuất hiện màu đỏ cam, phản ứng được coi là dương tính.
Phản ứng Legal được thực hiện bằng cách hòa tan cắn trong 0,5ml ethanol 90% và lắc kỹ Tiếp theo, nhỏ 1 giọt thuốc thử Natrinitroprussiat 1% cùng với 2 giọt dung dịch NaOH 10%, sau đó lắc đều Nếu xuất hiện màu đỏ cam, phản ứng được coi là dương tính.
2.3.2 Xác định hàm ẩm trong mẫu dược liệu
Xác định hàm ẩm trong mẫu dược liệu theo phương pháp mất khối lượng do làm khô được trình bày ở phụ lục 9.6 Dược điển Việt Nam V
Tiến hành với 1g mẫu dược liệu đã xay nhỏ thành bột (qua rây 180)
Quy trình định lượng: Hàm lượng polyphenol được xác định bằng phương
* Chuẩn bị dung dịch thử và dung dịch chuẩn acid gallic:
Dung dịch chuẩn gốc acid gallic 1 mg/ml được tạo ra bằng cách cân chính xác 5 mg acid gallic vào bình định mức 5 ml Sau đó, thêm 4 ml methanol và siêu âm cho tan hoàn toàn Cuối cùng, bổ sung thể tích bằng methanol và lắc đều để có được dung dịch chuẩn acid gallic với nồng độ 1 mg/ml.
30
Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ thường gặp trong Ngũ vị tử
Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ bằng phản ứng hóa học của Ngũ vị tử Ngọc Linh được trình bày ở Hình 3.1 và Bảng 3.1
Polyphenol Acid amin Đường khử
Polysaccharid Acid hữu cơ Saponin Alkaloid
Chứng + TT Lugol Chứng +Na2CO3 Tạo bọt + TT
Chứng Liebermann-Burchardt Baljet Legal
Hình 3.1 Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ bằng phản ứng hóa học trong mẫu Ngũ vị tử Ngọc Linh
Bảng 3.1 Kết quả định tính các nhóm chất trong Ngũ vị tử Ngọc Linh
STT Nhóm chất Phản ứng Kết quả Kết luận
2 Saponin Phản ứng tạo bọt - Không có
3 Acid amin TT Ninhydrin ++ Có
4 Đường khử TT Fehling ++ Có
8 Alkaloid TT Dragendroff - Không có
9 Acid hữu cơ + Na2CO3 ++ Có
10 Chất béo Tạo vết mờ trên giấy lọc ++ Có
Ghi chú : +++: dương tính mạnh ++: dương tính trung bình
+: dương tính yếu - : âm tính
Kết quả thu được cho thấy, trong mẫu Ngũ vị tử thu tại vùng núi Ngọc Linh, không thấy xuất hiện nhóm chất alkaloid, saponin
Mẫu Ngũ vị tử thu tại vùng núi Ngọc Linh chứa nhiều nhóm chất quan trọng, bao gồm polyphenol, acid amin, đường khử, polysaccharid, flavonoid, coumarin, acid hữu cơ và chất béo Đặc biệt, polyphenol và polysaccharide là hai nhóm chất có phản ứng đáng chú ý.
33 dương tính mạnh, chứng tỏ đây là những nhóm chất chính có trong mẫu Ngũ vị tử nghiên cứu
Từ kết quả thu được, chúng em tiến hành phân tích polyphenol toàn phần trong mẫu dược liệu Ngũ vị tử thu tại vùng núi Ngọc linh.
Phân tích định lượng polyphenol trong dược liệu Ngũ vị tử thu ở vùng núi Ngọc linh, Việt Nam
3.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng polyphenol trong quả Ngũ vị tử bằng phương pháp UV-VIS
3.2.1.1 Độ đặc hiệu của phương pháp
Tiến hành đo phổ UV-VIS cho các dung dịch mẫu trắng, mẫu chuẩn, mẫu thử và mẫu thử thêm chuẩn Quá trình quét phổ UV-VIS được thực hiện trong khoảng bước sóng từ 600-900nm.
Kết quả thu được trình bày trong Kết quả thu được trình bày trong Hình 3.2 và Hình 3.3
Hình 3.2 Phổ UV-VIS của mẫu blank và mẫu chuẩn
Mẫu thử (mẫu loãng) Mẫu thử thêm chuẩn
Hình 3.3 Phổ UV-VIS của mẫu thử và mẫu thử thêm chuẩn
Kết quả phân tích cho thấy rằng mẫu chuẩn, mẫu thử và mẫu thử thêm chuẩn đều có đỉnh hấp thụ tối đa tại 760 nm, trong khi mẫu blank không xuất hiện tín hiệu này Điều này phù hợp với nghiên cứu trước đó [46], chứng minh rằng phức chất hình thành giữa các hợp chất polyphenol trong mẫu Ngũ vị tử và thuốc thử Folin-ciocaltreu có tính chất quang học tương tự như phức chất giữa acid gallic và thuốc thử Folin-ciocaltreu.
Sau khi thêm chất chuẩn acid gallic vào mẫu thử, phổ UV-VIS không xuất hiện đỉnh hấp thụ mới, và đỉnh hấp thụ tại 760 nm có hình dạng tương đồng với phổ của mẫu thử Điều này chứng tỏ rằng 760 nm là bước sóng thích hợp để định lượng polyphenol toàn phần (tính theo acid gallic) trong mẫu Ngũ vị tử.
Kết quả xây dựng đường chuẩn acid gallic được trình bày ở Bảng 3.2 và Hình
Bảng 3.2 Kết quả xây dựng đường chuẩn acid gallic
TT Nồng độ acid gallic (mg/ml) Độ hấp thụ quang
Hình 3.4 Đường chuẩn acid gallic
Phương trình đường chuẩn cho acid gallic được xác định là y = 0,9372x + 0,0251, trong đó x biểu thị nồng độ acid gallic (mg/ml) và y là độ hấp thụ quang (Abs) Độ tuyến tính của đường chuẩn được đánh giá qua hệ số tương quan R², với kết quả cho thấy R² đạt 0,9996, chứng tỏ đường chuẩn có độ tuyến tính cao, đảm bảo cho việc phân tích định lượng polyphenol toàn phần tính theo acid gallic.
3.2.1.3 Xác định giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng
Kết quả xác định giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng polyphenol được biểu thị ở Bảng 3.3
Bảng 3.3 Kết quả đánh giá giới hạn định lượng
Lần 1 2 3 4 5 6 Độ hấp thụ quang
0,001 0,002 0,002 0,001 0,003 0,001 Độ hấp thụ quang trung bình (Abs)
Kết quả trên ta tính được giá trị trung bình: A O = 0,0016 Abs
Giá trị độ lệch chuẩn: SD = 7,45 x 10 -4
Giới hạn phát hiện LOD và LOQ của phương pháp xác định được như sau:
3.2.1.4 Độ lặp lại trong ngày và khác ngày của phương pháp
Kết quả đánh giá độ lặp lại trong ngày và độ lặp lại khác ngày của phương pháp được trình bày trong Bảng 3.4 và Bảng 3.5
Bảng 3.4 Kết quả đánh giá độ lặp lại trong ngày
Khối lượng mẫu (g) 2,0134 2,0167 2,0178 2,0133 2,0126 2,0122 Độ hấp thụ quang
Hàm lượng polyphenol toàn phần
Bảng 3.5 Kết quả đánh giá độ lặp lại khác ngày
Khối lượng mẫu (g) 2,0145 2,0123 2,0147 2,0185 2,0157 2,0196 Độ hấp thụ quang
Hàm lượng polyphenol toàn phần
Kết quả từ bảng 3.4 cho thấy hàm lượng polyphenol toàn phần trung bình đạt 0,95%, với độ lệch chuẩn SD là 0,0138 Phương pháp phân tích cho thấy độ lặp lại chấp nhận được với %RSD là 1,45%, thấp hơn mức quy định 2,7% theo AOAC cho hàm lượng 1%.
Kết quả ở bảng 3.5 cho thấy hàm lượng trung bình polyphenol toàn phần sau
Trong 12 thí nghiệm, kết quả đạt được là 0,98%, với độ lệch chuẩn (SD) là 0,0179 Phương pháp thử nghiệm cho thấy độ lặp lại có thể chấp nhận được, với giá trị RSD là 1,82%, thấp hơn mức quy định 2,7% theo tiêu chuẩn AOAC đối với hàm lượng 1%.
Kết quả nghiên cứu cho thấy phương pháp định lượng polyphenol toàn phần trong dược liệu Ngũ vị tử, tính theo acid gallic, đạt tiêu chuẩn về độ lặp lại.
3.2.1.5 Hiệu suất thu hồi của phương pháp
Kết quả đánh giá hiệu suất thu hồi của phương pháp được trình bày trong Bảng
Bảng 3.6 Kết quả đánh giá hiệu suất thu hồi
TT Độ hấp thụ quang (Abs)
Lượng acid gallic tìm lại được (mg)
1 Mẫu không thêm chuẩn acid gallic 0,373
2 Mẫu thêm chuẩn acid gallic (3,7 mg) 0,678 3,524 95,25
3 Mẫu thêm chuẩn acid gallic (3,7 mg) 0,683 3,552 96,01
5 Mẫu thêm chuẩn acid gallic (3,7 mg) 0,676 3,514 95,01
Từ kết quả ở bảng 3.6 cho thấy hiệu suất thu hồi trung bình đối với acid gallic đạt được là 95,42 %
3.2.1.6 Đánh giá hàm lượng polyphenol trong các mẫu dược liệu Ngũ vị tử
Kết quả định lượng polyphenol toàn phần, tính theo acid gallic, trong các mẫu Ngũ vị tử được trình bày trong Bảng 3.7 Mỗi thí nghiệm được thực hiện lặp lại 3 lần và kết quả được tính trung bình.
Bảng 3.7 Kết quả định lượng polyphenol toàn phần (tính theo acid gallic) trong các mẫu Ngũ vị tử thu tại vùng núi Ngọc linh, Việt Nam (n=3)
Khối lượng dược liệu (g) Độ hấp thụ quang (Abs)
Hàm lượng polyphenol toàn phần trung bình (%)
Hình 3.5 Biểu đồ số lượng mẫu tương ứng với khoảng % hàm lượng polyphenol thu được
Theo Hình 3.5, trong số 22 mẫu Ngũ vị tử được khảo sát, có 13 mẫu (chiếm 59%) có hàm lượng polyphenol toàn phần dưới 1% Bên cạnh đó, 7 mẫu (chiếm 32%) có hàm lượng polyphenol toàn phần từ 1-2%, và chỉ có 2 mẫu (chiếm 9%) có hàm lượng polyphenol toàn phần trên 2%.
Hàm lượng tinh dầu tổng số
Khối lượng dược liệu cần thiết để định lượng tinh dầu là khoảng 100 g Trong số các mẫu Ngũ vị tử thu thập, một số mẫu đủ khối lượng để xác định hàm lượng tinh dầu tổng số Kết quả phân tích hàm lượng tinh dầu tổng số trong các mẫu Ngũ vị tử được thể hiện trong Bảng 3.8.
Bảng 3.8 Hàm lượng tinh dầu tổng số trong các mẫu Ngũ vị tử
Thể tích tinh dầu thu được
22 mẫu Ngũ vị tử được đo hàm lượng polyphenol toàn phần
Hàm lượng tinh dầu tổng số (%)*
*Hàm lượng tinh dầu tổng số tính trên khối lượng mẫu khô kiệt
Từ kết quả thu được cho thấy, hàm lượng tinh dầu trong các mẫu Ngũ vị tử dao động từ 1,02-1,38 %, tính theo khối lượng khô kiệt.
Phân tích thành phần tinh dầu bằng GCMS
Tiến hành phân tích thành phần tinh dầu của các mẫu Ngũ vị tử bằng phương pháp GC-MS theo các điều kiện đã nêu trong Mục 2.3.6 Kết quả phân tích được trình bày chi tiết trong bài viết.
Bảng 3.9 Thành phần tinh dầu Ngũ vị tử bằng GC-MS
STT Tên chất Độ tương thích (%)
Phần trăm tính theo diện tích pic (%)
Unknown: các tín hiệu pic chưa định danh do độ phù hợp nhỏ hơn 90%;
Kết quả thu được cho thấy, trong tinh dầu Ngũ vị tử có chứa nhiều thành phần đa dạng như sesquiterpenes cadinenes (Daucene, α – Santalene, Cubenene, γ –
Cadiene, β - Cadinene), sesquiterpenes humulene (α – Copaene, β - Copaene), sesquiterpenes muurolenes ( Cis-muurola-3,5-diene, γ - Muurolene), sesquiterpenes amorphanes (γ – Amorphene, α - Amorphene), sesquiterpenes (γ – Gurjunene, γ –
Acoradiene, γ – Acoradiene, Caryophyllene, Epi-Cubenol, α – Cadinol, α – Santalal, α - Santalol )
Trong đó, một số thành phần có tỷ lệ phần trăm lớn như γ – Cadiene (22% - 34,7%), α – Santalene (6,25% - 13,93%), α – Santalol (3,75% - 8,82%), γ –
43
Về kết quả định tính các nhóm chất trong dược liệu Ngũ vị tử Ngọc Linh
Kết quả định tính cho thấy Ngũ vị tử Ngọc Linh chứa các thành phần quan trọng như polyphenol, acid amin, đường khử, polysaccharid, flavonoid, coumarin, acid hữu cơ và chất béo Nghiên cứu này xác nhận các phát hiện trước đó trong tài liệu [5, 47], với polyphenol là nhóm chất chính, thể hiện phản ứng dương tính mạnh, chứng tỏ giá trị dược liệu của Ngũ vị tử từ vùng núi Ngọc Linh, Việt Nam.
Kết quả định tính cung cấp cái nhìn sơ bộ về thành phần hóa học, đóng vai trò quan trọng trong việc định hướng nghiên cứu sâu hơn về các hợp chất trong dược liệu Ngũ vị tử Việc phân tích định tính và định lượng các hợp chất này giúp hiểu rõ hơn về giá trị dược lý của Ngũ vị tử.
Về kết quả phân tích định lượng polyphenol trong dược liệu Ngũ vị tử
ở vùng núi Ngọc linh, Việt Nam
Polyphenol là nhóm hợp chất hóa học tự nhiên có mặt trong nhiều loại thực phẩm như trái cây, rau quả, cacao, nho, hạt cà phê và thảo dược Các polyphenol đã được nghiên cứu kỹ lưỡng về tác dụng dược lý và mang lại nhiều lợi ích sức khỏe Dưới đây là một số tác dụng dược lý nổi bật của polyphenol.
Polyphenol có tác dụng chống oxy hóa mạnh mẽ, bảo vệ tế bào khỏi tổn thương do gốc tự do Chúng có khả năng tiêu diệt các phân tử tự do và làm giảm quá trình oxy hóa trong cơ thể, góp phần duy trì sức khỏe và ngăn ngừa các bệnh liên quan đến tuổi tác.
Polyphenol có tác dụng chống viêm mạnh mẽ, giúp giảm sưng, đau và viêm nhiễm trong cơ thể Chúng có khả năng ức chế các phản ứng vi khuẩn và viêm, từ đó làm giảm tổn thương mô hiệu quả.
Polyphenol, đặc biệt là flavonoid và resveratrol, có tác dụng bảo vệ tim mạch hiệu quả Chúng giúp giảm cholesterol xấu (LDL), tăng cholesterol tốt (HDL), giảm nguy cơ hình thành cục máu đông và hạn chế vi khuẩn trong mạch máu.
Tác dụng chống ung thư: Các polyphenol có khả năng ngăn chặn quá trình
Sự phát triển và lan truyền của tế bào ung thư có thể được kiểm soát thông qua việc giảm thiểu vi khuẩn gây ung thư, ngăn chặn sự phát triển của khối u, và từ đó giúp giảm nguy cơ mắc bệnh ung thư.
Polyphenol có tác dụng chống lão hóa hiệu quả, giúp làm chậm quá trình lão hóa và bảo vệ tế bào khỏi tổn thương do tuổi tác Chúng không chỉ có khả năng chống oxy hóa mà còn giảm vi khuẩn và cải thiện chức năng tế bào.
Kết quả định lượng polyphenol toàn phần trong các mẫu dược liệu Ngũ vị tử thu tại núi Ngọc Linh cho thấy hàm lượng polyphenol đạt từ 0,548 – 2,048 % Điều này chứng tỏ Ngũ vị tử là nguồn dược liệu giàu polyphenol, mở ra hướng nghiên cứu phát triển sản phẩm dựa trên tác dụng dược lý của các hợp chất này.
Về kết quả phân tích thành phần tinh dầu và hàm lượng tinh dầu tổng số
Quả Ngũ vị tử có mùi thơm đặc trưng, điều này làm cho việc nghiên cứu tinh dầu từ Ngũ vị tử trở nên cần thiết Hàm lượng tinh dầu tổng số trung bình thu được từ quả này cũng là một yếu tố quan trọng trong nghiên cứu.
5 mẫu quả Ngũ vị tử thu tại núi Ngọc Linh, Việt Nam là 1,02-1,38 %, tính theo khối lượng khô kiệt
Phân tích thành phần tinh dầu từ quả Ngũ vị tử thu tại núi Ngọc Linh bằng phương pháp GC-MS cho thấy các hợp chất chính với hàm lượng cao bao gồm γ – Cadiene, α – Santalene, α – Santalol, γ – Muurolene, α – Amorphene và Nerolidyl acetate Những chất này đã được nhiều nghiên cứu xác nhận có mặt trong tinh dầu Ngũ vị tử.
37] Các hợp chất này đều có những tác dụng dược lý nổi bật như:
γ-Cadiene là một diterpenoid với công thức phân tử C15H24, thuộc nhóm hydrocarbon sesquiterpene Chất này được tìm thấy trong nhiều loài thực vật và nổi bật với hoạt tính chống khuẩn, có khả năng ức chế một số loại vi khuẩn gây bệnh.
Staphylococcus aureus và Escherichia coli có khả năng chống lại virus, ức chế sự phát triển của nhiều loại vi-rút như vi-rút gây cảm lạnh và vi-rút Herpes γ-cadinene thể hiện khả năng kháng nấm, được sử dụng trong điều trị nhiễm nấm như Candida albicans và Aspergillus niger Ngoài ra, γ-cadinene còn có tính chất chống oxy hóa, giúp bảo vệ tế bào khỏi tổn thương do gốc tự do gây ra.
α-Santalene là một hợp chất sesquiterpen với cấu trúc phân tử phức tạp, nổi bật với khả năng chống lại các vi khuẩn gây bệnh như Staphylococcus aureus và Escherichia coli Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng α-santalene có khả năng ức chế một số loại vi-rút và thể hiện hoạt tính chống viêm, giúp giảm tình trạng viêm nhiễm trong cơ thể Ngoài ra, α-santalene còn có tính chống oxy hóa, bảo vệ tế bào khỏi tác động của các gốc tự do.
α-Santalol là hợp chất chủ yếu trong dầu xạ hương, mang lại mùi thơm đặc trưng của nó Thuộc nhóm sesquiterpenoid và là một dạng alcohol, α-santalol đã được nghiên cứu và chứng minh có khả năng chống nấm và chống viêm Ngoài ra, α-Santalol còn có tính chất chống oxy hóa, giúp bảo vệ tế bào khỏi tổn thương do stress.
γ-Muurolene là một hợp chất tự nhiên thuộc nhóm sesquiterpen, nổi bật với khả năng kháng vi khuẩn, chống vi-rút và chống viêm Nghiên cứu cho thấy γ-muurolene cũng có hiệu quả trong việc kháng nấm, đặc biệt là các loại nấm gây bệnh.
α-Amorphene là một hợp chất tự nhiên thuộc nhóm sesquiterpen, được tìm thấy trong một số loài cây như cây thuốc lá mỡ Nghiên cứu cho thấy α-amorphene có khả năng chống lại vi khuẩn gây bệnh như Staphylococcus aureus và Escherichia coli, đồng thời có các tác dụng sinh học tương tự như γ-muurolene.
Nerolidyl acetate là một este tự nhiên thuộc nhóm sesquiterpen, xuất hiện trong nhiều loại dầu thực vật và tinh dầu Tác dụng sinh học của nó tương tự như các hợp chất khác trong nhóm Bên cạnh đó, nerolidyl acetate được ứng dụng rộng rãi trong ngành công nghiệp mỹ phẩm và hương liệu nhờ vào hương thơm đặc trưng.
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT
Kết luận
Các nghiên cứu về thành phần hóa học, phân tích định lượng polyphenol và phân tích thành phần tinh dầu trong quả Ngũ vị tử thu tại núi Ngọc Linh, Việt Nam đã cho thấy những kết quả đáng chú ý.
Phương pháp định tính hóa học đã xác định rằng dược liệu Ngũ vị tử Ngọc Linh chứa các nhóm hợp chất quan trọng như polyphenol, acid amin, đường khử, polysaccharid, flavonoid, coumarin, acid hữu cơ và chất béo.
Phương pháp định lượng polyphenol toàn phần được xây dựng dựa trên acid gallic với đường chuẩn Y = 0,9372X + 0,0251, trong đó Y là độ hấp thụ quang (Abs) và x là nồng độ acid gallic (mg/ml) Giới hạn phát hiện (LOD) là 2 x 10 -3 mg/L và giới hạn định lượng (LOQ) là 7,8 x 10 -3 mg/L Độ lặp lại của phương pháp đạt tiêu chuẩn AOAC, với hàm lượng polyphenol trong mẫu Ngũ vị tử là 0,98% và %RSD lần lượt là 1,45% và 1,82% cho các thí nghiệm lặp lại trong cùng ngày và khác ngày Hiệu suất thu hồi khoảng 95% cho thấy phương pháp phân tích có độ chính xác cao.
Hàm lượng polyphenol toàn phần trong 22 mẫu quả Ngũ vị tử thu tại núi Ngọc Linh, Việt Nam đã được xác định, với kết quả cho thấy hàm lượng này (tính theo acid gallic) dao động từ 0,548% đến 2,048%.
Hàm lượng tinh dầu tổng số trung bình từ 5 mẫu quả Ngũ vị tử thu tại núi Ngọc Linh, Việt Nam đạt từ 1,02% đến 1,38%, tính theo khối lượng khô kiệt.
- Các chất chính có trong tinh dầu dược liệu Ngũ vị tử thu tại núi Ngọc Linh gồm: γ – Cadiene, α – Santalene, α – Santalol, γ – Muurolene, α – Amorphene, Nerolidyl acetate.
Đề xuất
Từ những kết quả thu được, đề xuất một số hướng nghiên cứu như sau:
- Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học, phân tích định lượng và tác dụng sinh học của các hợp chất polyphenol trong dược liệu Ngũ vị tử
- Nghiên cứu về tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm và phát triển sản phẩm từ tinh dầu Ngũ vị tử.