ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC ====== ====== KHÚC THỊ THÚY HẠNH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT TỪ CÂY TRAI LÁ HOA (Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2023 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC ====== ====== KHÚC THỊ THÚY HẠNH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT TỪ CÂY TRAI LÁ HOA (Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC KHÓA: QH.2018.Y NGƯỜI HƯỚNG DẪN 1: PGS TS VŨ ĐỨC LỢI NGƯỜI HƯỚNG DẪN 2: ThS LÊ HỒNG DƯƠNG Hà Nội – 2023 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Vũ Đức Lợi – Phó trưởng Khoa Dược kiêm Trưởng Bộ môn Dược cổ truyền, Học viện Y Dược học cổ truyền Việt Nam ThS Lê Hồng Dương – Giảng viên Bộ môn Dược liệu – Dược học cổ truyền Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội – người thầy tận tâm hướng dẫn, hết lòng bảo tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành khố luận Em xin chân thành cảm ơn Thầy cô Bộ môn Dược liệu – Dược cổ truyền Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện, giúp đỡ em trình học tập, nghiên cứu để hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đến tất quý Thầy cô, ban Lãnh đạo Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội dạy dỗ, trang bị kiến thức, tạo điều kiện cho em suốt năm theo học trường Con xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè người theo sát động viên, quan tâm tạo điều kiện để hồn thành khóa luận Do kiến thức cịn hạn hẹp, thời gian nghiên cứu thực khóa luận khơng dài nên Khố luận em khơng tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận lời nhận xét, góp ý Q thầy để Khố luận tốt nghiệp Dược sĩ em hoàn thiện Cuối cùng, em xin kính chúc Thầy sức khỏe, hạnh phúc, thành công sống, vững bước đường trồng người Hà Nội, ngày tháng Sinh viên năm 2023 Khúc Thị Thúy Hạnh DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, VIẾT TẮT STT Ký hiệu Tên tiếng anh Tên tiếng việt H Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ Resonance Spectroscopy hạt nhân proton 1 13 H-NMR 13 C-NMR C Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ Resonance Spectroscopy hạt nhân cacbon-13 Độ dịch chuyển hóa học (ppm) (ppm = part per million) ALT Alanin transaminase AST Aspartat transaminase DEPT D-GalN DPPH EC50 10 ESI-MS 11 FTIR 12 GC-MS 13 IC50 Distortionless Enhancement by Polarization Transfer Phổ DEPT D-galactosamin N 2,2′-diphenyl-1picrylhydrazyl Half Maximal Effective Nồng độ cho 50% tác Concentration dụng tối đa Electrospray Ionization- Khối phổ đo phương Mass Spectrometry pháp ion hóa phun điện tử Fourier transfer infrared Gas chromatography–mass spectrometry Phổ hồng ngoại biến đổi Fourier Sắc ký khí- Khối phổ Half Maximal Inhibitory Nồng độ ức chế tối đa Concentration nửa 14 IR Infrared Tia hồng ngoại 15 TNFα Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tử u Ultra Performance Liquid Sắc ký lỏng siêu hiệu 16 UPLC Chromatography DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng Bảng 1.1 Bảng 3.1 Bảng 3.2 Tên bảng Trang Phân bố loài thuộc chi Murdannia Việt Nam Dữ liệu phổ 1H-NMR MB01 22 Dữ liệu phổ 1H-NMR MB03 chất tham khảo 23 Bảng Dữ liệu phổ 1H- 13C-NMR MB10 3.3 chất tham khảo 24 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Hình 1.1 Tên hình Đặc điểm thực vật số lồi thuộc chi Murdannia Việt Nam Trang Hình 1.2 Hoa số lồi thuộc chi Murdannia Hình 1.3 Đặc điểm quan sinh dưỡng M bracteata Hình 1.4 Đặc điểm quan sinh sản M bacteata Hình 1.5 Trà Rumput Beijing Tea – Thành phần chính: M bracteata 15 Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn từ M bracteata 20 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập chất từ phân đoạn ethyl acetat 21 Hình 3.3 Cấu trúc hóa học hợp chất MB01 22 Hình 3.4 Cấu trúc hóa học hợp chất MB03 23 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học hợp chất MB10 26 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Murdannia 1.1.1 Vị trí phân loại chi Murdannia 1.1.2 Số lượng loài phân bố loài thuộc chi Murdannia 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Murdannia 1.2 Tổng quan loài Murdannia bracteata 1.2.1 Đặc điểm hình thái loài Murdannia bracteata 1.2.2 Đặc điểm phân bố loài Murdannia bracteata 1.2.3 Thành phần hóa học lồi Murdannia bracteata 1.2.4 Tác dụng sinh học Murdannia bracteata 12 1.2.5 Công dụng Murdannia bracteata theo y học cổ truyền 14 1.2.6 Sản phẩm có thành phần Murdannia bracteata thị trường 15 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.1 Nguyên liệu 16 2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị 16 2.2 Phương pháp nghiên cứu 17 2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 17 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 18 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 19 3.1 Kết chiết xuất, phân lập số hợp chất 19 3.1.1 Chiết xuất phân đoạn 19 3.1.2 Phân lập hợp chất 21 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 22 3.2.1 Hợp chất MB01: Nonadecan-1-ol 22 3.2.2 Hợp chất MB03: β-sitosterol 22 3.3.3 Hợp chất MB10: Acid betulinic 24 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 27 4.1 Hợp chất MB01: Nonadecan-1-ol 27 4.2 Hợp chất MB03: β-sitosterol 27 4.3 Hợp chất MB10: Acid betulinic 28 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Từ xa xưa, ông cha ta biết sử dụng cỏ để phòng điều trị bệnh theo kinh nghiệm cổ truyền Nhờ điều kiện tự nhiên khí hậu nhiệt đới gió mùa với đa dạng địa hình, Việt Nam sở hữu nguồn tài nguyên thực vật vô phong phú đa dạng Theo ước tính, nước ta có 12.000 loài thực vật bậc cao, chiếm khoảng - 5% tổng số loài thực vật bậc cao biết giới Trong số đó, khoảng 3.850 lồi thuộc 309 họ sử dụng làm thuốc Nhiều loài sử dụng làm thuốc có tác dụng rõ rệt chưa giải thích chứng minh, tiềm to lớn cho nghiên cứu phát triển thuốc Ngày nay, trước xuất bệnh truyền nhiễm xu hướng trẻ hóa bệnh rối loạn chuyển hóa, người quan tâm đến việc chăm sóc bảo vệ sức khỏe Các loại thuốc điều trị sẵn có phần lớn đắt tiền hay kèm theo tác dụng không mong muốn Điều thúc đẩy nhà khoa học nghiên cứu phát hợp chất tiềm từ thảo dược để tìm phương pháp thay mới, ứng dụng phòng điều trị bệnh theo hướng tiếp cận dễ dàng với chi phí rẻ hơn, độc Cây Trai hoa có tên khoa học Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong, thuộc chi Murdannia, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới ơn đới ấm [1] Thành phần hóa học chi Murdannia gồm nhiều nhóm chất khác nhau, lồi khác lại có chất giống Trong loài nước, vùng khác lại phát có hợp chất khác Trai hoa tìm thấy Trung Quốc, Lào, Thái Lan, Malaysia, Việt Nam [2] Ở Trung Quốc Malaysia, Trai hoa dùng để chữa bệnh tiêu hóa, cảm lạnh, tiểu đường, ung thư,… Ở Việt Nam, theo kinh nghiệm dân gian dùng để chữa bệnh đau dày, nhiên, nghiên cứu cụ stimuli Biochemical and biophysical research communications 2005; 334(2):466-473 22.Khan TH, Sultana S Apigenin induces apoptosis in Hep G2 cells: possible role of TNF-α and IFN-γ Toxicology 2006; 217(2-3):206-212 23.Kwon YI, Apostolidis E, Shetty K Inhibitory potential of wine and tea against α‐Amylase and α‐Glucosidase for management of hyperglycemia linked to type diabetes Journal of Food Biochemistry 2008; 32(1):1531 24.Li DL, Zheng XL, Duan L cộng Ethnobotanical survey of herbal tea plants from the traditional markets in Chaoshan, China Journal of Ethnopharmacology 2017; 205:195-206 25.Đặng Thị Tuyết Anh cộng Nghiên cứu thành phần phân lập Lá gan Pellionia latifolia (Blume) Boerl (Urticaceae) thu hái Yên Bái Tạp chí Khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội: Khoa học Tự nhiên Công nghệ 2018; 4:85 26.A Yili, Mutalipu, H A Asia & M I Isaev Bentulinic acid and sterols from Astragaalus altaicus Chemistry of Natural Compounds 2009; 45:529 27.Alessandro Massolo Sexual and individual cues in the perianal gland secretum of crested porcupines (Hystrix cristata) Mammalian Biology 2009; 74(6):488-496 28.Soumendranath Chatterjee Antibacterial activity of long-chain primary alcohols from Solena amplexicaulis Leaves Proceedings of the Zoological Society 2018; 71:313-319 29.Shyamaladevi Babu An update on β-sitosterol: A potential herbal nutraceutical for diabetic management Biomedicine and Pharmacotherapy 2020; 131:110702 30.T J Wilt 1, R MacDonald, A Ishani Beta-sitosterol for the treatment of benign prostatic hyperplasia: a systematic review BJU International 1999; 83(9):976-83 31.Mechanism Qian Yang, Delin Yu, Yi Zhang β-Sitosterol attenuates the intracranial aneurysm growth by suppressing TNF-α-mediated Pharmacology 2019; 104(5-6):303-311 32.Nicolas Panayotis, Philip A Freund, Letizia Marvaldi, Tali Shalit, Alexander Brandis, Tevie Mehlman, Michael M Tsoory, Mike Fainzilber β-sitosterol reduces anxiety and synergizes with established anxiolytic drugs in mice Cell Reports Medicine 2021; 2(5):100281 33.Nguyễn Thị Thanh Huyền cộng β-sitosterol from Clinacanthus nutans Lindau enhances osteoclastogenic activity via upregulation of differentiation related genes and proteins Bioscience, Biotechnology and Biochemistry 2022; 86(12):1615-1622 34.Ru Wang, Mengnan Zeng, Beibei Zhang, Qinqin Zhang, Jufang Jia, Bing Cao, Meng Liu, Pengli Guo, Yuhan Zhang, Xiaoke Zheng, Weisheng Feng β-Sitosterol inhibits ovalbumin-induced asthma-related inflammation by regulating dendritic cells Immunopharmacology and Immunotoxicology 2022; 44(6):1013-1021 35.Anqi Zeng, Hua Hua, Li Liu, Junning Zhao Betulinic acid induces apoptosis and inhibits metastasis of human colorectal cancer cells in vitro and in vivo Bioorganic and Medical Chemistry 2019; 27(12):25462552 36.Rassameepen Phonarknguen, Saksit Nobsathian, Kanjana Assawasuparer Effect of betulinic acid extraction from Guava (Psidium guajava Linn.) leaves against human cholangiocarcinoma cells Asian Pacific Journal of Cancer Prevention 2022; 23(2):583-590 37.Simone Fulda Betulinic acid: a natural product with anticancer activity Molecular Nutrition and Food Research 2009; 53(1):140-6 38.So Young Kim, Hyun Hwangbo, Min Yeong Kim cộng Betulinic acid restricts human bladder cancer cell proliferation in vitro by inducing caspase-dependent cell death and cell cycle arrest, and decreasing metastatic potential Molecules 2021; 26(5):1381 39.Franziska B Mullauer, Jan H Kessler, Jan Paul Medema Betulinic acid, a natural compound with potent anticancer effects Anticancer Drugs 2010; 21(3):215-27 40.Dahae Lee, Seoung Rak Lee, Ki Sung Kang, Yuri Ko, Changhyun Pang, Noriko Yamabe, Ki Hyun Kim Betulinic acid suppresses ovarian cancer cell proliferation through induction of apoptosis Biomolecules 2019; 9(7):257 41.S Fulda, K M Debatin Betulinic acid induces apoptosis through a direct effect on mitochondria in neuroectodermal tumors Medical and Pediatric Oncology 2000; 35(6):616-8 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: PHIẾU GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC PHỤ LỤC 2: DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT MB01 Cấu trúc hóa học hợp chất MB01 Phụ lục 2.1 Phổ 1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) hợp chất MB01 Phụ lục 2.2 Phổ ESI-MS hợp chất MB01 PHỤ LỤC 3: DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT MB03 Cấu trúc hóa học hợp chất MB03 Phụ lục 3.1 Phổ 1H-NMR (600 MHz, CDCl3) hợp chất MB03 PHỤ LỤC 4: DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT MB10 Cấu trúc hóa học hợp chất MB10 Phụ lục 4.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) hợp chất MB10 Phụ lục 4.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) hợp chất MB10 Phụ lục 4.3 Phổ DEPT hợp chất MB10 ©