Bước đầu nghiên cứu một số thành phần hóa học phân đoạn ethyl acetat từ lá khế (averrhoa carambola l )

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN VIỆT THẮNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT TỪ LÁ CÂY KHẾ (Averrhoa carambola L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2022 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN VIỆT THẮNG Mã sinh viên: 1701505 BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT TỪ LÁ CÂY KHẾ (Averrhoa carambola L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn TS Bùi Thị Thúy Luyện Nơi thực Bộ môn Công nghiệp Dược HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Trong trình thực khóa luận tổ Chiết xuất- Bộ mơn Cơng nghiệp dượctrường Đại học Dược Hà Nội, nhận quan tâm giúp đỡ thầy cô, anh chị bạn bè Trước tiên, xin gửi lời cảm ơn biết ơn sâu sắc đến TS Bùi Thi Thúy Luyện– Giảng viên môn Công Nghiệp Dược– tổ Chiết xuất dược liệu – trường Đại học Dược Hà Nội, người tận tình hướng dẫn, bảo, giúp đỡ suốt thời gian nghiên cứu khóa luận Và người đưa ý tưởng, kiểm tra phù hợp luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn đến toàn thể thầy cô trường Đại học Dược Hà Nội giảng dạy, tạo điều kiện cho tơi q trình học tập nghiên cứu trường Những kiến thức mà nhận hành trang giúp vững bước tương lai Tôi xin gửi lời cảm ơn đến bạn sinh viên K72 thực đề tài Bộ môn Công nghiệp dược bên cạnh giúp đỡ, động viên trình thực đề tài Mặc dù cố gắng hoàn thành luận văn phạm vi khả Tuy nhiên khơng tránh khỏi thiếu sót Tơi mong nhận cảm thơng tận tình bảo q thầy tồn thể bạn Tôi xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày 27 tháng 06 năm 2022 Sinh viên Nguyễn Việt Thắng MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH SÁCH CÁC BẢNG DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Đối tượng nghiên cứu 13 2.2 Nguyên liệu 13 2.2.1 Hóa chất 13 2.2.3 Thiết bị 14 2.3 Nội dung ngiên cứu 14 2.4 Phương pháp nghiên cứu 14 2.4.1 Phương pháp chiết xuất 14 2.4.2 Định tính số thành phần hóa học dịch chiết ethanol 15 2.4.3 Phân lập hợp chất hóa học 17 2.4.4 Xác định cấu trúc phân tử hợp chất phân lập 18 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 19 3.1 3.2 Chiết xuất dịch chiết ethanol toàn phần dịch chiết phân đoạn 19 Kết định tính thành phần hóa học dịch chiết ethanol 21 3.3 Phân lập hợp chất phân đoạn ethyl acetat 23 3.4 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 25 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 35 DANH MỤC VIẾT TẮT STT Kí hiệu Giải nghĩa CH2Cl2 Proton Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13 ) Diclomethane DPPH 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol HDL-C IC50 J Lipoprotein tỉ trọng cao Half – maximal inhibitory concentration (Nồng độ ức chế 50%) Hệ số tương tác (đơn vị Hz) 10 LDL-C Lipoprotein tỉ trọng thấp 11 SKLM Sắc ký lớp mỏng 12 STT Số thứ tự 13 TC Cholesterol toàn phần 14 TG Triglycerid 15 TT Thuốc thử 16 VLDL-C Lipoprotein tỉ trọng cực thấp 17 δ Độ chuyển dịch hóa học (đơn vị ppm) 1 13 H-NMR C-NMR DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Bảng Bảng Bảng Bảng Bảng Bảng Nội dung Một số thành phần hóa học từ khế Các hoạt chất hóa học khế xác định Việt Nam Các hóa chất sử dụng Các hoạt chất hóa học khế định tính Dữ liệu phổ H-NMR, 13C-NMR tương tác HMBC hợp chất AC-T1 Dữ liệu 1H-NMR, 13C-NMR hợp chất AC-T2 Trang 11 13 21 27 32 DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ Hình sơ đồ Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình 10 Hình 11 Hình 12 Hình 13 Sơ đồ Sơ đồ Nội dung Hình ảnh khế Hình ảnh hoa khế Hình ảnh khế Hình ảnh khế Phổ giãn 1H-NMR AC-T1 Phổ 13C-NMR AC-T1 Phổ HMBC hợp chất AC-T1 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC AC-T1 Phổ giãn H-NMR vùng trường thấp hợp Trang 13 25 26 27 chất AC-T2 29 Phổ giãn 1H-NMR vùng trường cao hợp chất AC-T2 29 Phổ giãn 13C-NMR hợp chất AC-T2 Phổ HMBC hợp chất AC-T2 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC AC-T2 Quy trình chiết xuất khế (A.carambola) Quy trình phân lập AC-T1 AC-T2 28 30 31 34 20 24 ĐẶT VẤN ĐỀ Khí hậu Việt Nam khí hậu nhiệt đới gió mùa phù hợp với điều kiện phát triển nhiều loại thực vật Theo phát triển lịch sử, nhân dân ta biết sử dụng nhiều loại dược liệu để phòng chữa bệnh Tuy nhiên, thuốc dân gian đa số dựa vào kinh nghiệm truyền từ đời sang đời khác mà chưa hoàn toàn nghiên cứu rõ ràng nghiên cứu khoa học tác dụng dược lý thành phần hóa học thuốc Khế cịn gọi ngũ liễm tử, tên khoa học Averrhoa carambola thuộc Họ Chua me đất, có nguồn gốc từ Sri Lanka biết đến rộng rãi Đông Nam Á Khế loại dễ dàng phát triển mạnh vùng môi trường nhiệt đới Theo y học cổ truyền, khế sử dụng để trị số bệnh lở sơn, mày đay, sổ mũi đau họng, sưng lách sinh sốt Tại Việt Nam, khế phân bố rộng phổ biến Các nghiên cứu trước cho thấy dịch chiết phận khế có nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn, tác dụng hạ đường huyết, tác dụng hạ huyết áp, tác dụng chống oxy hóa, tác dụng hạ lipid máu, hạ đường huyết, chống viêm, … [5] Tuy nhiên Việt Nam, nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học khế cịn hạn chế Để góp phần làm sáng tỏ tác dụng khế y học cổ truyền, nghiên cứu tìm kiếm lồi dược liệu có hoạt tính sinh học tốt, việc nghiên cứu kỹ thành phần hóa học khế cần thiết Do chúng tơi thực đề tài “Bước đầu nghiên cứu số thành phần hóa học phân đoạn ethyl acetat từ khế (Averrhoa carambola L.) Đề tài thực với mục tiêu: - Phân lập xác định cấu trúc số thành phần từ dịch chiết phân đoạn ethyl acetat khế CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan khế 1.1.1 Vị trí phân loại - Theo khung phân loại vị trí phân loại chi Averrhoa theo hệ thống phân loại Takhtajan Giới thực vật: Plantae Ngành: Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp: Ngọc lan (Magnoliophyta) Phân lớp: Hoa hồng (Rosidae) Bộ: Chua me đất (Oxalidales) Họ: Chua me đất (Oxalidaceae) Chi: Averrhoa Loài: Averrhoa carambola 1.1.2 Đặc điểm thực vật khế (Averrhoa carambola) Thơng thường, có chiều cao từ đến 7m, có nhiều cành nhánh Đường kính thân đạt đến 15cm Phân cành thấp thuộc loại thực vật thân gỗ nhỏ Đối với khế già, vỏ thân thường có màu đỏ với nhiều nốt sần Gỗ khế dễ gãy, giòn rễ cọc mọc sâu cỡ 1,5m [4] Các rễ chùm, rễ lông hút tập trung mặt đất khoảng 0,3 – 0,4m Lá khế có màu xanh tươi, theo dạng hình trái xoan nhọn đầu Ngồi ra, loại kép mọc đối cành Lá khế nhạy cảm với ánh sang có xu hướng gấp lại với ban đêm, đồng thời khê có độ nhạy cảm định nhiệt độ [4] Hình 1: Lá khế Hoa thường có màu tím hồng, ln mọc thành chùm đầu cành, nên sai hoa Cuống hoa có màu đỏ Mỗi cánh hoa thường gồm phần, phần móng ngắn có màu trắng tinh khiết bao phủ phần phiến dạng hình bầu dục, màu hồng tím Cánh hoa 5, đều, rời Mỗi cánh hoa có phần: phần móng ngắn, màu trắng; phần phiến hình bầu dục có màu hồng tím nhạt mặt ngồi, mặt đậm màu có nhiều chấm tím đậm Tiền khai cánh hoa lợp, điểm, vặn hay ngược chiều kim đồng hồ Nhị 10, khơng đều, dính đáy nhị, xếp vòng; nhị lép ngắn hơn, vòng ngồi, khơng có bao phấn, đối diện cánh hoa; nhị thụ vòng xen kẽ cánh hoa, nhị hình sợi phình gốc, màu xanh Bao phấn hình bầu dục, màu trắng, ơ, nứt dọc, hướng trong, đính đáy Hạt phấn rời, hình bầu dục, màu vàng nhạt Lá noãn 5, trước mặt cánh hoa, bầu ơ, nỗn, đính nỗn trung trụ Bầu nỗn có khía dọc, màu xanh có nhiều lơng vịi nhụy rời, hình sợi, màu xanh đầu nhụy dạng điểm Hình 2: Hoa khế Quả khế thuộc loại mọng, tiết diện hình ngơi cánh, dài 8-10 cm đặc biệt dài tới 15 cm, rộng 6-7 cm, non màu xanh lục nhạt, già màu vàng Thịt có vị chua có mùi giống mùi acid oxalic [4] High-Resolution Mass Spectrometry and Evaluation for α-glucosidase, Tyrosinase, Elastase, and Antioxidant Potential Food Chem 332, 127377 doi:10.1016/j.foodchem.2020.127377 27 Chang, J M., Hwang, S J., Kuo, H T., Tsai, J C., Guh, J Y., Chen, H C., et al (2000) Fatal Outcome after Ingestion of Star Fruit (Averrhoa carambola) in Uremic Patients Am J Kidney Dis 35 (2), 189–193 doi:10.1016/s02726386(00)70325-8 28 Ahmed, A A., Ali, A A., & Mabry, T J (1989) Flavonoid aglycones from Jasonia montana Phytochemistry, 28(2), https://doi.org/10.1016/0031-9422(89)80084-6 665-667 Doi: 29 Wu, P., Iwahashi, H., Xie, H H., Wang, Y., Zhou, Y Y., Kiso, A., & Wei, X Y (2022) Star fruit extract and C-glycosylated flavonoid components have potential to prevent air pollutant-induced skin inflammation and premature aging Natural products and bioprospecting, 12(1), 1-10 Doi: 10.1007 / s13659022-00336-1 42 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR AC-T1 Phụ lục 2: Phổ 13C-NMR AC-T1 Phụ lục 3: Phổ 1H-NMR AC-T2 Phụ lục 4: Phổ 13C-NMR AC-T2 Phụ lục 5: Phổ HMBC AC-T1 Phụ lục 6: Phổ HMBC AC-T2 43 Phổ 1H-NMR AC-T1 44 45 Phổ 13C-NMR AC-T1 46 47 Phổ 1H-NMR hợp chất AC-T2 48 Phổ 13C-NMR hợp chất AC-T2 49 Phổ HMBC AC-T1 50 51 52 Phổ HMBC hợp chất AC-T2 53 54 55 56 ... cứu kỹ thành phần hóa học khế cần thiết Do chúng tơi thực đề tài ? ?Bước đầu nghiên cứu số thành phần hóa học phân đoạn ethyl acetat từ khế (Averrhoa carambola L. ) Đề tài thực với mục tiêu: - Phân. .. 1.2 Một số tác dụng sinh học thành phần hóa học từ khế 1.2.1 Một số nghiên cứu giới 1.2.1.1 Nghiên cứu thành phần hóa học Thành phần hóa học A .carambola bao gồm flavonoid, benzoquinone, glycoside... Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN VIỆT THẮNG Mã sinh viên: 1701505 BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT TỪ L? ? CÂY KHẾ (Averrhoa carambola L. ) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP