Khóa luận nghiên cứu thành phần hóa học của cây chua me đất hoa vàng (oxalis corniculata l )

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐẶNG THỊ QUỲNH NGA NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CHUA ME ĐẤT HOA VÀNG (Oxalis corniculata L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐẶNG THỊ QUỲNH NGA NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CHUA ME ĐẤT HOA VÀNG (Oxalis corniculata L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2013.Y Người hướng dẫn: TS Vũ Đức Lợi PGS.TS Nguyễn Quốc Huy Hà Nội – 2018 VN U LỜI CẢM ƠN rm ac y, Em xin chân thành cảm ơn TS Vũ Đức Lợi – Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội PGS.TS Nguyễn Quốc Huy – Cục Khoa học công nghệ Đào tạo, Bộ Y tế trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để em nghiên cứu hồn thành khóa luận Ph a Em xin chân thành cảm ơn giảng viên thuộc Bộ môn Dược liệu Dược học cổ truyền Bộ mơn Hóa dược Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội; cán Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ em nhiều q trình thực khóa luận ea nd Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới tất quý thầy cô Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội dạy dỗ, trang bị kiến thức cho em suốt năm theo học trường ed ici n Em xin trân trọng cảm ơn Ban Chủ nhiệm Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt thời gian học tập nghiên cứu trường lo fM Và cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn đặc biệt tới gia đình, bạn bè theo sát động viên, quan tâm tạo điều kiện giúp em hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 25 tháng năm 2018 Sinh viên Đặng Thị Quỳnh Nga Co py rig ht @ Sc h oo Xin chân thành cảm ơn! PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma STT Ký hiệu, chữ viết tắt CC CH2Cl2 Dichloromethan CHCl3 Chloroform DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer d doublet dt doublet of triplets ESI-MS Electrospray Ionization Mass Spectrometer HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation 10 MeOH Methanol 11 m/z 12 NMR 13 pTLC 14 q 15 oo Tên đầy đủ VN U DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT TLC ac y, rm Ph a ea nd ici n ed mass to charge ratio Nuclear Magnetic Resonance Preparative Thin Layer Chromatography quartet singlet Thin Layer Chromatography t triplet td triplet of doublets v/v volume to volume ratio Co py rig ht 19 @ 17 18 lo fM Sc h s 16 Column Chromatography PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma STT Tên hình VN U DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1: Hình vẽ mô tả Chua me đất hoa vàng Hình 1.2: Cấu trúc hóa học acid oxalic Hình 1.3: Cấu trúc hóa học acid ascorbic Hình 1.4: Một số flavonoid phân lập từ lồi Oxalis corniculata L 10 Hình 1.5: Một số hợp chất khác phân lập từ loài Oxalis corniculata L 12 Hình 2.1: Hình ảnh cụm Chua me đất hoa vàng 16 Hình 2.2: Sơ đồ chiết tách phân đoạn 18 Hình 3.1: Sơ đồ chiết tách phân đoạn lồi Oxalis corniculata L 22 Hình 3.2: Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 24 10 Hình 3.3: Cấu trúc hóa học acid eburicoic 26 11 Hình 3.4: Cấu trúc hóa học 24-methylenecholest4-en-3β,6β-diol 29 12 Hình 3.5: Cấu trúc hóa học 3β-hydroxylanosta8,24-dien-21-oic 31 ac y, oo lo fM ed ici n ea nd Ph a rm Co py rig ht @ Sc h PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U DANH MỤC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 1: Hàm lượng số thành phần loài Oxalis corniculata L Bảng 3.1: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh M 25-26 Bảng 3.2: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh N 27-28 Bảng 3.3: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh P 30-31 Co py rig ht @ Sc h oo lo fM ed ici n ea nd Ph a rm ac y, STT PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ ac y, CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 10 1.1 Tổng quan chi Oxalis 1.1.1 Vị trí phân loại chi Oxalis rm 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Oxalis Ph a 1.1.3 Chi Oxalis Việt Nam 1.1.4 Thành phần hóa học chi Oxalis ea nd 1.2 Tổng quan loài Oxalis corniculata L 1.2.1 Tên gọi 1.2.2 Đặc điểm thực vật ici n 1.2.3 Phân bố ed 1.2.4 Thành phần hóa học 1.2.4.1 Hợp chất acid oxalic lo fM 1.2.4.2 Hợp chất acid ascorbic 1.2.4.3 Nhóm chất flavonoid oo 1.2.4.4 Một số hợp chất khác 11 Sc h 1.2.5 Một số tác dụng dược lý nghiên cứu 12 1.2.5.1 Tác dụng kháng khuẩn 12 1.2.5.2 Tác dụng chống oxy hóa 13 @ 1.2.5.3 Tác dụng chống viêm 13 1.2.5.5 Tác dụng bảo vệ thần kinh 13 1.2.5.6 Một số tác dụng khác 14 1.2.6 Tác dụng công dụng theo Y học cổ truyền 14 Co py rig ht 1.2.5.4 Tác dụng bảo vệ gan 13 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nguyên vật liệu nghiên cứu 16 ac y, 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.2 Nguyên vật liệu nghiên cứu 16 rm 2.1.2.1 Hóa chất dung môi 16 2.1.2.2 Trang thiết bị 17 Ph a 2.2 Phương pháp nghiên cứu 17 2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 17 ea nd 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 19 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất 21 ici n 3.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất 24 ed 3.2.1 Hợp chất 24 3.2.2 Hợp chất 27 lo fM 3.2.3 Hợp chất 30 3.3 Bàn luận 32 oo KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 Sc h TÀI LIỆU THAM KHẢO Co py rig ht @ PHỤ LỤC PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U ĐẶT VẤN ĐỀ rm ac y, Việt Nam quốc gia có khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa, tạo nên hệ thực vật đa dạng phong phú Hệ thực vật cung cấp nguồn lương thực dồi mà đem lại nguồn thuốc chữa bệnh quý giá Tuy nhiên, có nhiều thuốc chưa nghiên cứu nghiên cứu chưa có hệ thống Cùng với phát triển tổng hợp hóa dược, việc nghiên cứu phát triển thuốc có nguồn gốc từ dược liệu góp phần nâng cao tính an toàn hiệu điều trị ea nd Ph a Chi Oxalis chi lớn họ Chua me đất (Oxalidaceae), có khoảng 950 lồi, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, số lồi cịn thấy vùng ơn đới ẩm Chi Oxalis Việt Nam có 04 lồi: Chua me đất (Oxalis acetosella L.), Chua me đất hoa vàng (Oxalis corniculata L.), Chua me đất hoa hồng (Oxalis corymbosa DC.) Chua me đất hoa đỏ (Oxalis deppei Lodd.), có 03 lồi dùng để làm thuốc [1, 11] Sc h oo lo fM ed ici n Cây Chua me đất hoa vàng có tên khoa học Oxalis corniculata L., thuộc chi Oxalis, phổ biến khắp nước ta, thường mọc lẫn loại trồng khác vườn, ngồi đồng ruộng, bãi sơng, đồi nương rẫy Cây ưa sống nơi đất ẩm chịu bóng Cây người dân dùng để giải nhiệt, kháng sinh, tiêu viêm, làm dịu, hạ huyết áp, lợi tiêu hóa, lợi tiểu, giảm ho, tiêu phù thũng, sát trùng [1] Cho đến nay, chưa có nhiều cơng trình nghiên cứu cơng bố thành phần hóa học tác dụng sinh học Chua me đất hoa vàng Việt Nam Để làm sáng tỏ thành phần hóa học lồi này, chúng tơi tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học Chua me đất hoa vàng (Oxalis corniculata L.)” với mục tiêu: @ Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ Chua me đất hoa vàng Co py rig ht Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Oxalis ac y, 1.1.1 Vị trí phân loại chi Oxalis Theo hệ thống phân loại thực vật APG III (2009) [37], vị trí phân loại chi Oxalis là: Ph a Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) rm Giới Thực vật (Plantae) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) ea nd Phân lớp Hoa Hồng (Rosidae) Bộ Chua me đất (Oxalidales) ici n Họ Chua me đất (Oxalidaceae) Chi Oxalis 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Oxalis Sc h oo lo fM ed Chi Oxalis, họ Chua me đất (Oxalidaceae): Phần lớn thân thảo sống hai năm hay nhiều năm gần hóa gỗ Thân có củ, có hành khơng, chứa nhiều acid oxalic Lá mọc so le, gồm 3-4 chét, đến 20, có cử động thức ngủ Hoa nách mọc từ gốc, đài cánh hoa, 10 nhị mà ngắn, bao phấn hướng trong, nhị rời hay hợp Bầu ô, vịi nhụy Quả nang mở mà vỏ ngồi có đỉnh đàn hồi tung hạt hạt chín Hạt có nội nhũ [3] @ Chi Oxalis chi lớn họ Chua me đất, có khoảng 950 loài, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Nam Mỹ, Nam Phi, Madagasca, Châu Á Một số lồi cịn thấy vùng ôn đới ẩm [3, 11] ht 1.1.3 Chi Oxalis Việt Nam Co py rig Chi Oxalis Việt Nam có 04 lồi, có 03 lồi dùng để làm thuốc [3, 4] Oxalis acetosella L – Chua me đất, Me chua đất: Cây cao 5-8 cm, gốc mảnh, thân rễ mọc trườn phủ vẩy nạc lông chim Lá có cuống dài, chét PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ac y, VN U tạo phân mảnh giống Từ khối lượng phân mảnh phân tử, phương pháp phổ khác người ta xác định cấu trúc chất chưa biết So sánh phổ khối chất chưa biết với phổ khối chất biết giúp định danh chất chưa biết dễ dàng xác rm Phổ cộng hưởng từ hạt nhân ea nd Ph a Phổ proton (1H-NMR hay proton NMR) cho biết mơi trường hóa học proton phân tử Các proton có mơi trường hóa học khác dịch chuyển hóa học khác Phổ proton proton hay nhóm proton có mơi trường hóa học thể phổ đỉnh Đỉnh đỉnh đơn, đơi, ba… tới bảy đỉnh thành phần Diện tích đỉnh tỷ lệ với số lượng proton đỉnh Dựa vào diện tích đỉnh biết số proton đỉnh oo lo fM ed ici n Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon-13 (13C-NMR) cung cấp thông tin mơi trường hóa học carbon Carbon lai hóa sp3 không liên kết với dị tố chuyển dịch khoảng 0-60 ppm Carbon liên kết đơn với oxy (alcol, ether) chuyển dịch khoảng 45-85 ppm Carbon lai hóa sp2 chuyển dịch khoảng 100-150 ppm, có liên kết (đơi) với oxy dịch chuyển tới 240 ppm Với kỹ thuật đo phổ tại, phổ NMR carbon vạch đơn, vạch ứng với carbon (hơn carbon có chung mơi trường hóa học) phân tử @ Sc h Các kỹ thuật xác định số lượng proton carbon cho biết số lượng proton liên kết carbon, gián tiếp cho biết số C H phân tử Kỹ thuật thường sử dụng DEPT (Detortionless Enhancement by Polarization Transfer) Co py rig ht Các kỹ thuật phổ hai chiều cho thông tin tương tác C H gắn trực tiếp nó, proton carbon kế cận (phổ COSY) hay phổ tương tác dị nhân (HETCOR) proton carbon kế cận (thuờng sử dụng kỹ thuật HSQC) hay xa (long-range HETCOR, thuờng dùng HMBC) proton gần không gian (NOESY, ROESY) PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất VN U CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Co py rig ht @ Sc h oo lo fM ed ici n ea nd Ph a rm ac y, Phần mặt đất Chua me đất hoa vàng phơi sấy khô, nghiền thành bột (2,4 kg), ngâm chiết với methanol (8,0 lít × lần) Sau đó, dịch chiết methanol quay cất loại dung môi áp suất giảm thu 196 g dịch cô Lấy 176 g dịch cô hồ vào 1,5 lít hỗn hợp MeOH : nước (1:1, v/v) chiết phân bố với dung môi theo thứ tự tăng dần độ phân cực n-hexan, dichloromethan ethyl acetat thu phân đoạn tương ứng Sau đó, phân đoạn cất loại dung môi áp suất giảm thu cắn chiết n-hexan (60 g), dichloromethan (28 g), ethyl acetat (18 g) dịch nước lại PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma Cao methanol lưu (20 g) ac y, Chiết methanol (8,0 lít x lần) Thu hồi dung môi Ph a rm Cao methanol (196 g) Cao methanol (176 g) VN U Dược liệu nghiền thành bột (2,4 kg) ea nd Phân tán MeOH : nước (1:1) Lắc với n-hexan Thu hồi n-hexan Dịch chiết nước lo fM ed ici n Cắn n-hexan (60 g) Dịch chiết nước Lắc với dichloromethan Thu hồi dichloromethan Cắn dichloromethan (28 g) Sc h oo Lắc với ethyl acetat Cắn ethyl acetat (18 g) Hình 3.1: Sơ đồ chiết xuất phân đoạn loài Oxalis corniculata L Co py rig ht @ Dịch chiết nước Thu hồi ethyl acetat PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ac y, VN U Phân đoạn ethyl acetat phần mặt đất Chua me đất hoa vàng phân tách thô sắc ký cột silica gel pha thường Cột sắc ký làm sạch, đáy cột lót lớp bơng mỏng Cột nhồi phương pháp nhồi cột ướt, pha tĩnh sử dụng silica gel Ổn định cột 24 Ph a rm Cắn ethyl acetat (15 g) trộn với lượng silica gel tối thiểu Nạp mẫu lên cột, rửa giải với hệ dung môi aceton : cloroform : methanol theo gradient nồng độ từ tỷ lệ 3:1:0,1 đến methanol 100% Kiểm tra dịch rửa giải sắc ký lớp mỏng dồn ống có tương đồng cao, cất loại dung mơi áp suất giảm thu phân đoạn: A (2,2 g), B (1,6 g), C (800 mg), D (1,4 g), E (1,2 g) F (1,6 g) ea nd Phân đoạn A tiếp tục phân lập sắc ký cột pha thường với hệ dung môi rửa giải CHCl3 : MeOH (20:1, v/v) thu phân đoạn chính: A1, A2 A3 ed ici n Phân đoạn A1 tiếp tục phân lập sắc ký cột pha thường với hệ dung môi rửa giải CHCl3 : MeOH (15:1, v/v) thu phân đoạn nhỏ: A1.1, A1.2, A1.3, A1.4 A1.5 lo fM Phân đoạn A1.1 phân tách sắc ký cột pha đảo với hệ dung môi rửa giải MeOH : H2O (3:2, v/v) thu hợp chất (15 mg) oo Phân đoạn A1.2 phân tách sắc ký cột pha thường với hệ dung môi rửa giải CH2Cl2 : aceton (2:1, v/v) thu hợp chất (20 mg) Co py rig ht @ Sc h Phân đoạn A1.3 phân tách sắc ký cột pha đảo với hệ dung môi rửa giải acetonitril : H2O (90:10, v/v) thu hợp chất (12 mg) PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U Cắn ethyl acetat ac y, Pha thường aceton : chloroform : methanol A B, C, D, E, F A1 Pha đảo MeOH : H2O Pha thường CH2Cl2 : aceton lo fM A1.3 ici n A1.2 ed A1.1 ea nd Pha thường CHCl3 : MeOH Ph a A3 A2 rm Pha thường CHCl3 : MeOH A1.4, A1.5 Pha đảo acetonitril : H2O Hình 3.2: Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat oo 3.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất Sc h 3.2.1 Hợp chất Tính chất: tinh thể màu trắng, nhiệt độ nóng chảy: 280-283oC @ Phổ IR (KBr) max (cm-1): 3332, 1720, 1648, 890 Co py rig ht Phổ ESI-MS (m/z) = 469 [M]+ tương ứng với công thức C31H50O3 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma δH (1) ppm δH (M) ppm δC (1) ppm δC (M) ppm 1,18 (1H, s) 1,20 (1H, s) 36,1 36,1 1,81 (2H, dt, J = 7,5; 1,80 (2H, dt, J 3,5 Hz) = 7,5; 3,5 Hz) 28,7 3,41 (1H, t, J = 10,5 Hz) 3,46 (1H, t, J = 10,5 Hz) 78,0 - - 1,14 (1H, dd, J = 11 Hz) 1,14 (1H, dd, J = 11 Hz) 6a: 1,67 (1H, m) 6b: 1,62-1,44 (1H, m) 1,67 (1H, m) 7a: 1,62-1,44 (1H, m) 7b: 2,09-2,04 (1H, m) Ph a 26,8 78,0 37,4 50,9 50,9 18,7 18,7 1,61 (1H, m) 26,8 27,5 ici n ea nd 39,5 ed lo fM rm ac y, Vị trí C 2,01-1,91 (2H, m) 2,00 (2H, m) 135,4 135,5 - - 134,3 135,3 - - 37,4 39,5 oo 10 2,01-1,91 (2H, m) 2,00 (2H, m) 21,3 21,3 12 2,01-1,91 (2H, m) 2,00 (2H, m) 29,3 30,9 - - 44,9 44,9 - - 49,8 49,9 15a: 1,67 (1H, m) 15b: 1,27 (1H, td, J = 12,5 Hz) 1,67 (1H, m) 30,9 32,8 16 2,09-2,04 (1H, m) 2,04 (1H, m) 27,5 28,7 17 2,49-2,39 (1H, m) 2,44 (1H, m) 47,7 49,3 18 1,06 (3H, s) 1,05 (3H, s) 16,4 16,4 @ 14 Sc h 11 13 rig ht 15 Co py VN U Bảng 3.1: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh M PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 1,00 (3H, s) 1,02 (3H, s) 19,4 20 2,62 (1H, td, J = 10,5; 7,0 Hz) 2,62 (1H, td, J = 10,5; 7,0 Hz) 49,2 21 - - 191,3 22 2,09-2,04 (1H, m) 2,04 (1H, m) 31,8 23 2,33-2,23 (2H, m) 2,27 (2H, m) 31,8 24 - - 155,9 155,9 25 2,33-2,23 (2H, m) 2,27(2H, m) 34,2 26 1,60 (3H, d, J = Hz) 1,60 (3H, d, J = Hz) Ph a 34,2 22,0 21,9 27 1,65 (3H, s) 1,64 (3H, s) 21,9 22,0 28 - - 24,5 24,5 29 - - 28,6 28,6 30 1,23 (3H, s) 1,22 (3H, s) 24,5 21,9 31 4,88 (2H, s) 4,87 (2H, s) 107,0 107,0 ea nd rm ac y, 47,7 178,8 29,4 31,8 ed ici n 19,4 VN U 19 rig ht @ Sc h oo lo fM δH (M), δC (M) acid eburicoic [25] Hình 3.3: Cấu trúc hóa học acid eburicoic Co py Hợp chất thu tinh thể màu trắng, nhiệt độ nóng chảy 280-283oC Phổ khối lượng ESI-MS (m/z) hợp chất 469 [M]+ tương ứng với công thức phân tử C31H50O3 Phổ hồng ngoại hợp chất có dải hấp thụ đặc trưng PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U nhóm exomethylen (=CH2) 890 cm-1; nhóm carbonyl (C=O) 1720 cm-1 nhóm hydroxyl (-OH) 3332 cm-1 lo fM ed ici n ea nd Ph a rm ac y, Phổ 1H-NMR hợp chất cho thấy tín hiệu nhóm metyl độ dịch chuyển δH 1,06 ppm (H-28), 1,00 ppm (H-29), 1,23 ppm (H-30), 1,60 ppm (H-26), 1,65 ppm (H-27) hai proton exomethylen δH 4,88 ppm 4,92 ppm (H-31) Ngồi ra, phổ 1H-NMR cịn xuất tín hiệu proton δH 3,45 ppm (1H, t, H-3) Phổ 13C-NMR, DEPT hợp chất xuất tín hiệu 31 carbon, bao gồm carbon methin, 10 carbon methylen, carbon methyl, carbon olefinic, carbonyl carbon bậc Tín hiệu phổ 13C-NMR hợp chất cho thấy tín hiệu carbon nhóm methyl C-18 (δC 16,4 ppm), C-19 (δC 19,4 ppm), C-28 (δC 28,6 ppm), C-29 (δC 16,4 ppm), C-30 (δC 24,5 ppm), đồng thời tín hiệu carbon cịn lại cho thấy cấu trúc gồm hệ thống bốn vòng có liên kết đơi vị trí C-8 (δC 135,4 ppm) C-9 (δC 134,3 ppm), liên kết đôi C-31 (δC 107,0 ppm) C-24 (δC 155,9 ppm) carbonyl C-21 (δC 191,3 ppm) Phổ 13C-NMR cịn xuất tín hiệu δC 78,0 ppm tín hiệu C-3 có gắn nhóm hydroxyl Ngoài ra, phổ HMBC cho thấy tương tác proton carbon phân tử hợp chất oo Kết hợp phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT, HSQC, HMBC cho thấy hợp chất dẫn xuất lanosterol Từ số liệu phổ so sánh với hợp chất M xác định cấu trúc hợp chất acid eburicoic 3.2.2 Hợp chất Sc h Tính chất: Chất bột vơ định hình, màu trắng [α]25D = -21,0 (c = 0,1, CHCl3) @ Công thức phân tử: C28H46O2 Khối lượng phân tử: 414 ht Bảng 3.2: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh N δH (2) ppm δH (N) ppm δC (2) ppm δC (N) ppm 1,16 (1H, m) 1,16 (1H, m) 40,2 39,7 1,99 (1H, m) 1,97 (1H, m) 30,2 30,1 Co py rig Vị trí C PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma - - 73,7 73,7 5,39 (1H, s) 5,99 (1H, s) 129,9 129,9 - - 147,1 147,1 - - 67,5 67,5 1,33 (1H, m) 1,38 (1H, m) 37,7 1,52 (1H, m) 1,52 (1H, m) 28,4 0,89 (1H, m) 0,87 (1H, m) 55,0 10 - - 37,3 11 1,45 (1H, m) 1,49 (1H, m) 12 1,28 (1H, m) 1,28 (1H, m) 13 - - 14 - 15 37,7 28,4 55,0 21,3 40,7 40,7 42,8 42,8 - 56,4 56,4 1,11 (1H, m) 1,13 (1H, m) 24,5 24,5 16 1,24 (1H, m) 1,23 (1H, m) 28,4 28,5 17 - - 56,5 56,3 18 0,74 (1H, s) 0,72 (1H, s) 12,2 12,2 19 1,54 (1H, s) 1,54 (1H, s) 21,6 21,6 20 1,40 (1H, m) 1,41 (1H, m) 36,0 36,0 21 0.97 (1H, d, J = 6,5 Hz) 0,99 (1H, d, J = 6,5 Hz) 18,9 18,9 22 1,24 (1H, m) 1,22 (1H, m) 35,1 35,0 23 1,97 (1H, m) 1,97 (1H, m) 30,2 30,1 24 - - 156,7 156,7 2,31 (1H, m) 2,28 (1H, m) 34,1 34,0 0,85 (1H, d, J = 6,5 Hz) 0,88 (1H, d, J = 6,5 Hz) 22,6 22,6 0,86 (1H, d, J = 6,5 Hz) 0,89 (1H, d, J = 6,5 Hz) 22,1 22,1 4,69 (1H, d, J = 8,0 Hz) 4,84 (1H, d, J = 8,0 Hz) 106,6 106,6 rig ht 27 py 28 ed lo fM @ 26 Sc h 25 ea nd 21,3 ici n 37,3 oo Ph a rm ac y, VN U Co δH (N), δC (N) 24-methylenecholest-4-ene-3,6-diol [18] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U ac y, rm Ph a ea nd Hình 3.4: Cấu trúc hóa học 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol lo fM ed ici n Hợp chất thu dạng bột màu trắng Phổ 1H-NMR hợp chất cho biết có mặt nhóm methyl δH 0,72 (3H, s, H-18), 1,54 (3H, s, H-19), 0,99 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-21), 0,88 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-26) 0,89 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-27); proton olefin δH 5,99 (1H, s, H-4) proton oxymethin δH 4,55 (2H, m) Phổ 13C-NMR hợp chất cho thấy có mặt 28 carbon bao gồm carbon methyl, 10 methylen, methin carbon bậc @ Sc h oo Tương tác HMBC H-26 (δH 0,88) H-27 (δH 0,89) C-24 (δC 156,72)/C-25 (δC 34,08); H-28 (δH 4,84) C-23 (δC 30,19)/C-24 (δC 156,72)/C-25 (δC 34,08) gợi ý có mặt liên kết đơi C-24/C-28 hai nhóm methyl C-25 Tương tác HMBC H-19 (δH 1,54) với C-1 (δC 39,73)/C-5 (δC 147,15)/C-9 (δC 55,03)/C-10 (δC 37,33); H-3 H-6 (δH 4,55) đến C-4 (δC 129,97)/C-5 (δC 147,15)/C-7 (δC 30,95)/C-10 (δC 37,39) cho phép xác định vị trí nhóm hydroxyl C-3 C-6 Co py rig ht Từ phân tích phổ nêu kết hợp so sánh với hợp chất N cho thấy giống số liệu phổ NMR vị trí tương ứng Vì vậy, cấu trúc hợp chất xác định 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U 3.2.3 Hợp chất Tính chất: tinh thể màu trắng, nhiệt độ nóng chảy: 258-260oC ac y, Phổ IR (KBr) max (cm-1): 3200 (-OH), 1718, 1632 Phổ ESI-MS (m/z) = 455 [M]+ tương ứng với công thức phân tử C30H48O3 δC (3) ppm δC (P) ppm 1,65 (1H, m) 36,1 35,6 1,82 (2H, dt, J = 9,5; 4,0 Hz) 34,6 34,5 216,0 217,7 - 47,3 47,3 1,15 (1H, t) 50,9 51,5 δH (P) ppm 1,81 (2H, dt, J = 9,5; 4,0 Hz) 3,40 (1H, t, J = 9,5 Hz) - 1,15 (1H, t) 1,78-1,68 (1H, m) 1,67 (1H, m) 18,7 20,1 2,06 (2H, t, J = 5,5; 3,5 Hz) 2,06 (2H, t, J = 5,5; 3,6 Hz) 26,8 25,9 - - 134,3 134,4 - - 135,2 132,2 - - 37,4 37,2 1,97-1,92 (2H, m) 1,95 (2H, m) 21,3 21,1 12 1,97-1,92 (2H, m) 1,95 (2H, m) 29,4 29,3 13 - - 44,9 44,0 - - 49,9 49,7 15 1,26 (1H, td) 1,26 (1H, td) 30,9 29,7 16 2,46-2,35 (2H, m) 2,37 (2H, m) 27,5 27,4 17 2,46-2,35 (2H, m) 2,37 (2H, m) 47,8 47,0 10 ici n Co py rig 14 3,43( 1H, d, J = 7,6; 15,8 Hz) ed lo fM oo @ 11 Sc h ea nd 1a: 1,80 (1H, dt, J = 9,5; 4,0 Hz) 1b: 1,85-1,44 (1H, m) ht Ph a δH (3) ppm Vị trí C rm Bảng 3.3: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh P PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 1,03 (3H, s) 16,4 19 1,00 (3H, s) 1,08 (3H, s) 19,4 20 2,61 (1H, td, J = 9,5; 4,0 Hz) 2,60 (1H, td, J = 9,5; 4,0 Hz) 49,1 21 - - 22 22a: 1,97-1,92 (2H, m) 22b: 1,78-1,68 (1H, m) 1,67 (1H, m) 23 23a: 2,46-2,35 (2H, m) 23b: 2,29-2,25 (1H, m) 2,37 (1H, m) 24 5,32 (1H, t) 25 - 26 1,60 (3H, s) 27 1,65 (3H, s) 28 1,06 (3H, s) 29 0,99 (3H, s) 30 1,23 (3H, s) 15,8 VN U 1,06 (3H, s) ac y, 18 19,6 47,4 181,3 33.4 32,4 rm 178,7 26,9 5,34 (1H, t) 124,9 123,5 - 131,7 132,7 1,63 (3H, s) 17,8 17,6 1,67 (3H, s) 25,8 25,7 1,26 (3H, s) 16,4 21,3 1,03 (3H, s) 28,7 26,6 1,08 (3H, s) 24,5 24,5 ed ici n ea nd Ph a 26,8 ht @ Sc h oo lo fM δH (P), δC (P) 3β-hydroxylanosta-8,24-dien-21-oic [8] rig Hình 3.5: Cấu trúc hóa học 3β-hydroxylanosta-8,24-dien-21-oic Co py Hợp chất thu dạng tinh thể màu trắng, điểm nóng chảy 258-260oC Phổ ESI-MS (m/z) = 455 [M]+ cho biết khối lượng phân tử 454, tương ứng với công thức phân tử C30H48O3 Phổ 1H-NMR hợp chất có PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U xuất tín hiệu proton methyl 1,06 (3H, s, H-18), 1,00 (3H, s, H19), 1,60 (H-26), 1,65 (H-27), 1,06 (3H, s, H-28), 0,99 (3H, s, H-29), 1,23 (3H, s, H-30) Ph a rm ac y, Phổ 13C-NMR, DEPT hợp chất cho thấy tín hiệu 30 carbon carbon methin, 10 carbon methylen, carbon methyl, carbon olefinic, carbonyl carbon bậc Các tín hiệu phổ cho thấy cấu trúc hợp chất bao gồm hệ thống bốn vịng, có liên kết đơi vị trí C-8 (δC 135,0 ppm) C-9 (δC 134,3 ppm) Hợp chất có xuất tín hiệu carbon olefinic C-24 (δC 124,9 ppm) C-25 (δC 134,6 ppm) carbonyl C-21 (δC 178,7 ppm) Ngoài phổ HMBC cho thấy ea nd tương tác proton carbon phân tử ici n Kết hợp phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT, HSQC, HMBC cho thấy hợp chất dẫn xuất lanosterol Từ số liệu phổ so sánh với hợp chất P xác định cấu trúc hợp chất phù hợp với cấu trúc acid 3βhydroxylanosta-8,24-dien-21-oic ed 3.3 Bàn luận Sc h oo lo fM Đề tài sử dụng phương pháp ngâm chiết siêu âm với dung mơi MeOH Phương pháp có ưu điểm tiết kiệm thời gian, hiệu suất cao Cắn tồn phần sau chiết phân bố với dung môi theo thứ tự tăng dần độ phân cực n-hexan, dichloromethan ethyl acetat Phương pháp sắc ký cột phân lập ba hợp chất từ phần mặt đất Chua me đất hoa vàng thu hái tỉnh Hà Tĩnh Co py rig ht @ Đề tài xác định cấu trúc hợp chất phân lập thông qua kết đo nhiệt độ nóng chảy, phổ khối, phổ cộng hưởng từ hạt nhân so sánh với liệu công bố hợp chất liên quan Ba hợp chất phân lập xác định cấu trúc là: acid eburicoic (1), 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol (2) acid 3β-hydroxylanosta-8,24-dien-21-oic (3) Các hợp chất 1, 2, lần phân lập từ phần mặt đất Chua me đất hoa vàng Đây đóng góp đề tài, góp phần bổ sung kiến thức thành phần hóa học lồi Oxalis corniculata L PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U Acid eburicoic Ph a rm ac y, Tác dụng giảm đau, chống viêm: mơ hình gây phù chân chuột λ-carrageenan, acid eburicoic phân lập từ lồi Antrodia camphorata có khả làm giảm phù chân sau gây viêm giờ; tăng hoạt tính catalase (CAT), superoxid dismutase (SOD) peroxidase glutathion (GPx) mô; giảm đáng kể malondialdehyd (MDA), oxit nitric (NO), TNF-α, interleukin-1β (IL-1β); ức chế iNOS cyclooxygenase-2 (COX-2); giảm xâm nhập bạch cầu trung tính hai chân sau Cơ chế chống viêm khả giảm cytokin tăng hoạt động enzym chống oxy hóa acid eburicoic [20] ed ici n ea nd Tác dụng bảo vệ gan: acid eburicoic phân lập từ lồi Antrodia camphorata có tác dụng chống lại tổn thương gan carbon tetrachlorid gây Cụ thể, hợp chất hạn chế tăng aspartat aminotransferase (AST), alanin aminotransferase (ALT) peroxid lipid; tăng hoạt tính catalase (CAT), superoxid dismutase (SOD) peroxidase glutathion (GPx); giảm oxit nitric (NO) TNF-α; ức chế iNOS COX-2 Tác dụng bảo vệ gan chế chống oxy hóa chống viêm acid eburicoic [15] lo fM 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol oo Nghiên cứu rằng, 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol phân lập từ lồi san hơ Alcyonium patagonicum polyhydroxysterol có khả gây độc tế bào ung thư bạch cầu chuột với giá trị IC50 mg/ml [21] Sc h 3β-hydroxylanosta-8,24-dien-21-oic ht @ Nghiên cứu rằng, 3β-hydroxylanosta-8,24-dien-21-oic phân lập từ dịch chiết dichloromethan loài nấm Fomitopsis pinicola (Swartz ex Fr.) Karst steroid có tác dụng kháng khuẩn chống lại chủng vi sinh vật Bacillus subtilis thí nghiệm sinh học TLC [8] Co py rig Như vậy, hợp chất phân lập góp phần việc định hướng nghiên cứu thêm thành phần hóa học tác dụng sinh học Chua me đất hoa vàng PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma VN U KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận ac y, Qua trình tiến hành làm thực nghiệm, đề tài đạt mục tiêu đề thu kết sau đây: Ph a rm - Đã chiết xuất phân lập ba hợp chất với phương pháp sắc ký cột từ phân đoạn dịch chiết ethyl acetat phần mặt đất Chua me đất hoa vàng ea nd - Đã xác định cấu trúc hóa học ba hợp chất phân lập trên: acid eburicoic (1), 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol (2) acid 3βhydroxylanosta-8,24-dien-21-oic (3) Các hợp chất lần phân lập từ phần mặt đất Chua me đất hoa vàng ici n Kiến nghị ed - Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học từ phân đoạn dịch chiết ethyl acetat phần mặt đất Chua me đất hoa vàng lo fM - Tiến hành định lượng hợp chất phân lập mẫu nghiên cứu oo - Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu, cao dược liệu dựa thành phần hóa học Co py rig ht @ Sc h - Tiến hành nghiên cứu tác dụng sinh học cắn toàn phần, cắn phân đoạn hợp chất phân lập từ Chua me đất hoa vàng PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ... Oxalis Việt Nam có 04 l? ??i: Chua me đất (Oxalis acetosella L. ), Chua me đất hoa vàng (Oxalis corniculata L. ), Chua me đất hoa hồng (Oxalis corymbosa DC .) Chua me đất hoa đỏ (Oxalis deppei Lodd .), ...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐẶNG THỊ QUỲNH NGA NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CHUA ME ĐẤT HOA VÀNG (Oxalis corniculata L. ) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2013.Y... trình nghiên cứu cơng bố thành phần hóa học tác dụng sinh học Chua me đất hoa vàng Việt Nam Để l? ?m sáng tỏ thành phần hóa học l? ??i này, chúng tơi tiến hành thực đề tài ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học