Đánh giá tác dụng ức chế vi khuẩn và khảo sát hàm lượng polyphenol, hoạt tính chống oxy hóa các dịch chiết tinh dầu từ dược liệu cúc tần và xuyên tâm liên (khóa luận tốt nghiệp)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG ỨC CHẾ VI KHUẨN VÀ KHẢO SÁT HÀM LƢỢNG POLYPHENOL, HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HĨA CÁC DỊCH CHIẾT TINH DẦU TỪ DƢỢC LIỆU CÚC TẦN VÀ XUYÊN TÂM LIÊN Ngƣời thực Mã sinh viên : Phạm Thị Huế : 637229 Lớp : K63CNSHC Khoa : Công nghệ sinh học Ngƣời hƣớng dẫn : PGS.TS Nguyễn Thanh Hải TS Nguyễn Thị Thanh Hà Bộ môn : Công nghệ sinh học Thực vật HÀ NỘI - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cảm đoan số liệu, hình ảnh kết báo cáo trung thực, khách quan chƣa đƣợc công bố cơng trình khoa học Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực khóa luận tốt nghiệp đƣợc cảm ơn thơng tin trích dẫn, tài liệu tham khảo đƣợc rõ nguồn gốc danh mục tài liệu tham khảo khóa luận Hà Nội, ngày tháng năm 202 Sinh viên Phạm Thị Huế LỜI CẢM ƠN Với tình cảm chân thành lòng biết ơn sâu sắc, cho phép gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban giám đốc, phịng ban Học viện Nơng nghiệp Việt Nam, Khoa Công nghệ sinh học, Bộ môn Thực vật , thầy tận tình giảng dạy tạo điều kiện giúp đỡ q trình học tập, nghiên cứu hồn thành khóa luận Đặc biệt tơi bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến ngƣời hƣớng dẫn tôi: PGS.TS Nguyễn Thanh Hải TS Nguyễn Thị Thanh Hà, ngƣời tận tình hƣớng dẫn, bảo, giúp đỡ quan tâm động viên suốt khoảng thời gian tơi làm hồn thành khóa luận Cẩm ơn hỗ trợ bạn sinh viên dành cho thời gian làm khóa luận Cuối cùng, với tất lịng kính trọng biết ơn vô hạn, muốn gửi lời cảm ơn đến bố mẹ, anh, chị ngƣời thân tơi tồn thể bạn bè giúp đỡ, hỗ trợ đông viên tạo động lực cho suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm Sinh viên Phạm Thị Huế ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii TÓM TẮT KHÓA LUẬN ix Phần I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích – yêu cầu 1.3 Ý nghĩa Phần II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Các dƣợc liệu sử dụng 2.1.1 Cây cúc tần 2.2 Các loại vi khuẩn đƣợc sử dụng 2.3 Tổng quan Polyphenol 2.4 Hoạt tính chống oxy hóa 2.5.Tình hình nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn, hàm lƣợng polyphenol hoạt tính chống oxy hố dƣợc liệu 2.5.1.Nghiên cứu nƣớc 2.5.2.Nghiên cứu nƣớc 11 Phần III VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 3.1 Vật liệu nghiên cứu 12 3.1.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 12 3.1.1 Phƣơng pháp chiết suất tinh dầu 12 3.1.2 Đối tƣợng nghiên cứu 12 3.1.2.1.Vi khuẩn 12 3.1.3 Hóa chất, dụng cụ thiết bị 13 3.2 Nội dung nghiên cứu 14 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 14 iii 3.3.1 Phƣơng pháp chiết xuất dƣợc liệu 14 3.3.2 Phƣơng pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết dƣợc liệu vi khuẩn 16 3.3.3 Phƣơng pháp xác định đƣờng kính vịng vơ khuẩn tinh dầu cúc tần 19 3.3.4 Phƣơng pháp xác định hàm lƣợng polyphenol 20 3.3.5 Phƣơng pháp xác định hoạt tính chống oxy hóa 21 3.3.6 Phƣơng pháp xử lý số liệu 23 Phần IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 4.1 Kết xác định đƣờng kính vịng vơ khuẩn dịch chiết dƣợc liệu theo phƣơng pháp khuếch tán đĩa thạch 24 4.1.1 Kết đƣờng kính đƣờng kính vịng vơ khuẩn cao chiết cúc tần 24 4.1.2 Đƣờng kính vịng vơ khuẩn Xun tâm liên 27 4.2 Kết đƣờng kính vịng vơ khuẩn tinh dầu cúc tần 31 4.3 Hàm lƣợng polyphenol 32 4.3.1 Kết xây dựng đồ thị chuẩn hàm lƣợng acid chlorogenic gia tăng giá trị mật độ quang đo đƣợc phản ứng với thuốc thử Folin Ciocalteu 33 4.3.2 Kết hàm lƣợng polyphenol dịch chiết cúc tần xuyên tâm liên 34 4.4 Hàm lƣợng hoạt tính chống oxy hoá 36 4.4.1 Kết xác định khả chống oxy hóa chất chuẩn VTME (Alpha tocopherol) 36 4.4.2 Kết xác định khả chống oxy hóa dƣợc liệu 38 Phần V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 KẾT LUẬN 43 KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC 48 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Kích thƣớc đƣờng kính vịng vơ khuẩn (mm) dƣợc liệu cúc tần B.subtilis G philus 24 Bảng 4.2 Kích thƣớc đƣờng kính vịng vơ khuẩn (mm) dƣợc liệu cúc tần S aureus 25923; E coli 85922 25 Bảng 4.3 Đƣờng kính vịng vơ khuẩn (mm) dƣợc liệu xuyên tâm liên 27 Bảng 4.4 Đƣờng kính vịng vơ khuẩn (mm) nồng độ khác tinh dầu cúc tần phƣơng pháp khuếch tán 31 Bảng 4.5 Đƣờng kính vịng vơ khuẩn (mm) nồng độ khác tinh dầu cúc tần phƣơng pháp khuếch tán 32 Bảng 4.6 Mức độ gia tăng giá trị mật độ quang (OD values) theo nồng độ chất chuẩn acid chlorogenic (mg/ml) 33 Bảng 4.6 Hàm lƣợng polyphenol dƣợc liệu cúc tần xuyên tâm liên nồng độ 100 (mg/ml) 35 Bảng 4.7 Hoạt tính chống oxy hóa chất chuẩn VTME xác định theo phƣơng pháp sử dụng DPPH nồng độ khác (AA%) 37 Bảng 4.8 Hoạt tính chống oxy hố quy đổi theo mg VTME/ 100mg dƣợc liệu chiết dung môi khác 39 v DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cúc tần Hình 2.2 Xuyên tâm liên Hình 2.3 Phân loại polyphenol Hình 3.1 Dƣợc liệu đƣợc nghiền thành bột 14 Hình 3.2 Dịch chiết tube 15ml 15 Hình 3.3 Máy quay dƣợc liệu (ảnh chụp phịng thí nghiệm) 15 Hình 3.4 Các bƣớc tiến hành 17 Hình 3.5 Ống khâu sử dụng trình đục lỗ thạch 18 Hình 3.6 Ảnh khả ức chế xuyên tâm liên dung môi vi khuẩn S ureus 25023 sau 12 nuôi cấy 18 Hình 3.7 Máy quang phổ so màu 722 (Ultraviolet - Víibiliti Spectrum, Trung Quốc) 21 Hình 3.8 Phản ứng chuyển màu dung môi dƣợc liệu cúc tần nồng độ 20 mg/ml sử dụng thuốc thử Folin- Ciocalteu's phenol reagent 21 Hình 3.9 Cơ chế phản ứng chuyển màu xác định hoạt tính chống oxy hoá sử dụng chất thử nghiệm DPPH 23 Hình 4.1 Biểu đồ đƣờng kính vịng vơ khuẩn (mm) dịch chiết cúc tần nồng độ 2000 mg/ml 26 Hình 4.2 Đƣờng kính vịng vơ khuẩn sau 12 ni cấy dịch chiết cúc tần 26 Hình 4.3 Đƣờng kính vịng vô khuẩn dịch chiết xuyên tâm liên dung môi ethanol khuẩn E.coli 25922 E.coli 85922 29 HÌnh 4.4 Đƣờng kính vịng vơ khuẩn dịch chiết xuyên tâm liên dung môi methanol 30 Hình 4.5 Biểu đồ so sánh kích thƣơc đƣờng kính vịng vơ khuẩn xun tâm liên nồng độ 2000 mg 30 Hình 4.6 Đƣờng kính vịng vơ khuẩn nồng độ 0.1/tinh dầu cúc tần B.subtilis phƣơng pháp khuếch tán 32 vi Hình 4.7 Đồ thị mối tƣơng quan nồng độ acid chlorogenic (mg/ml) với mức độ gia tăng giá trị đo mật độ quang (OD value) 34 Hình 4.8 Sự đổi màu từ vàng sang xanh dung môi dƣợc liệu xuyên tâm liên 35 Hình 4.9 Biểu đồ so sánh hàm lƣợng polyphenol (quy đổi theo mg acid chlorogenic/ 100 mg dƣợc liệu) dịch chiết 36 Hình 4.10 Biểu đồ đƣờngchuẩn biểu đạt mối tƣơng quan nồng độ VTME (chất chuẩn) hoạt tính chống oxy hóa 38 Hình 4.11 Phản ứng đổi màu đổi màu dịch chiết dung môi khác cúc tần nồng độ 20 mg dƣợc liệu 39 Hình 4.12 Sự thay đổi màu dịch chiết methanol nồng độ 10 mg dƣợc liệu 40 Hình 4.13 Sự thay đổi màu dung mơi dƣợc liệu xuyên tâm liên nồng độ 20 mg dƣợc liệu 40 Hình 4.14 Sự thay đổi màu sắc dịch chiết xuyên tâm liên ethyl hexan nồng độ 100 mg 200 mg 41 Hình 4.15 Biểu đồ hoạt tính chống oxy hóa tổng số dịch chiết cúc tần xuyên tâm liên quy đổi theo hàm lƣợng VTME (100 mg dƣợc liệu) 42 vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Viết đầy đủ ATCC American Type Culture Collection DMSO Dimethyl Sulfoxide DPPH 1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl VTME Vitamin E B subtilis Bacillus subtilis E coli Eschrichia Coli G philus Geobacillus stearothermophilus Pseudo Pseudomonas aeruginosa S.aureus Staphylococcus aureus Sal Salmonella viii TÓM TẮT KHÓA LUẬN MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU - Đánh giá khả ức chế vi khuẩn từ tinh dầu cúc tần dịch chiết dƣợc liệu cúc tần xuyên tâm liên vi khuẩn Bacillus subtilis ATCC 6633; Geobacillus stearothermophilus ATCC 7953; Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027; Staphylococcus aureus ATCC 25023; Staphylococcus aureus ATCC 25923; Escherichia coli ATCC 85922; Escherichia coli ATCC 35218; Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella ATCC 13311 Xác định đƣợc dung mơi chiết xuất có khả kháng khuẩn tốt dƣợc liệu Khảo sát đƣợc hàm lƣợng polyphenol hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết cúc tần xuyên tâm liên, xác định dung mơi có khả thu đƣợc hàm lƣợng tốt PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - Phƣơng pháp chiết suất dƣợc liệu - Phƣơng pháp chƣng cất nƣớc tách chiết tinh dầu - Phƣơng pháp tác dụng ức chế dịch chiết đƣợc thực theo nguyên lý khuếch tán thạch Kirby-Bauer chủng vi khuẩn - Phƣơng pháp xông khuếch tán tinh dầu - Sử dụng phƣơng pháp Folin Cio-cautel chất chuẩn acid chlorogenic để xác định hàm lƣợng polyphenol tổng số dịch chiết - Sử dụng phƣơng pháp DPPH scavenging activity với thuốc thử 1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl (DPPH) chất chuẩn vitamin E ( VTME ) để xác định hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết - Xác định hoạt tính oxy hố phân tích sử dụng chất DPPH (1,1-diphenyl2-picrylhydrazyl), theo phƣơng pháp Masuda et al (2002) KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Dƣợc liệu cúc tần dung mơi methanolthích hợp cho kết đƣờng kính vịng vơ khuần lớn ix Hình 4.12 Sự thay đổi màu dịch chiết methanol nồng độ 10 mg dƣợc liệu Ghi chú: Met: Methnol Ở dƣợc liệu Xuyên tâm liên cao methanol 0.691±0.115 (mg) tiếp đến methanol 0.555±0.152 (mg) tiếp đến acetone ethanol Dịch chiết dung môi ethyl hexane không đƣợc xác định đƣợc hàm lƣợng oxy hố Vì chúng tơi tiến hành tăng dần từ nồng độ 20mg lên 100mg 200mg để mức chống oxy hóa DPPH ngƣỡng màu dẫn đến sai kết mức độ đo oxy hóa dƣợc liệu Hình 4.13 Sự thay đổi màu dung môi dƣợc liệu xuyên tâm liên nồng độ 20 mg dƣợc liệu 40 Hình 4.14 Sự thay đổi màu sắc dịch chiết xuyên tâm liên ethyl hexan nồng độ 100 mg 200 mg Ghi chú: đối chứng bên trái tất ống thí nghiệm Hình 4.14 cho chúng thấy có đổi màu dịch chiết hexan Ethyl so với đối chứng tăng đến 200, nồng độ 200 mg có đổi màu ảnh hƣởng màu dƣợc liệu nên chuyển màu thuốc thử khơng cịn tƣơng ứng với hoạt tính chống oxy hóa Do đó, phƣơng pháp DPPH khơng thể xác định đƣợc hoạt tính chống ox 41 hóa dịch chiết này, mà cần sử dụng phƣơng pháp khác sử dụng thuốc thử khơng có q trình chuyển thành màu vàng, ví dụ nhƣ phƣơng pháp ABTS Từ điều trên, chung thấy hàm lƣợng polyphenol cao hoạt tính chống oxy hố cao điển hình nhƣ dịch chiết cúc tần dung mơi nƣớc nóng có polyphenol 0.890±0.019 mg, hoạt tính chống oxy hố 1.036±0.362 mg Cúc tần dung mơi acetone có hàm lƣợng polyphenol 0.033±0.002 mg, hoạt tính chống oxy hố 0.485±0.419 xuyên tâm liên tƣơng tự nhƣ Hoạt tính chống oxy hố quy đổi theo mg VTME 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 -0.2 Nƣớc nóng metanol Ethanol Cúc tần Ethyl Acetone Hexan Xuyên tâm liên Hình 4.15 Biểu đồ hoạt tính chống oxy hóa tổng số dịch chiết cúc tần xuyên tâm liên quy đổi theo hàm lƣợng VTME (100 mg dƣợc liệu) Qua Hình 4.15 chúng tơi thấy, sử dụng dung mơi hexan cho hàm lƣợng hoạt tính chống oxy hố thấp Dung mơi methanol nƣớc nóng cho kết cao Vì thế, bên cạnh tiềm điều trị nhiễm khuẩn, dƣợc liệu hứa hẹn khả dùng cho mục đích khác nhƣ nâng cao hiệu phịng trị bệnh Các dung mơi dƣợc liệu cho vịng vơ khuẩn có hoạt tính polyphenol hàm lƣợng oxy hố( trừ nƣớc nóng) 42 Phần V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Qua kết nghiên cứu sơ chứng minh đƣợc tác dụng kháng khuẩn cúc tần xuyên tâm liên vi khuẩn E coli 25922; E coli 35218; Escheria coli 85922; S aureus 25923; S aureus 25023; Pseudo 9027; B subtilis 7953; G phillus 7953; Sal 11311 Dung mơi ethanol có khả kháng khuẩn tốt dƣợc liệu cúc tần Dung môi ethanol có khả kháng khuẩn tốt dƣợc liệu xuyên tâm liên Tinh dầu cúc tần có khả kháng khuẩn B subtilis 7953 Cúc tần xuyên tâm liên có hàm lƣợng polyphenol hoạt tính chống oxy hóa Dung mơi nƣớc nóng hai dƣợc liệu có hàm lƣợng polyphenol hoạt tính chống oxy hố cao nhât KIẾN NGHỊ Tuy nhiên, chúng tơi cho cịn cần thêm nhiều cơng tác nghiên cứu để xác định hoạt chất dƣợc liệu, nhƣ khảo sát thêm việc chiết xuất với với dung môi khác (VD: chloroform,, ) để tìm đƣợc dung mơi phù hợp cho loại dƣợc liệu 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nƣớc (1) Bùi Thị Tho & Nguyễn Thi Thanh Hà (2009) Giáo trình Dƣợc liệu Thú y Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội (2) Đỗ Tất Lợi (2014), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Hồng Đức, Hà Nội (3) Linh T M, Giang V H, Liên L Q, Vân N T, Bản N K.,& Minh C V (2013) Đánh giá hoạt tính ức chế vi khuẩn kiểm định số loài thực vật ngập mặn vƣờn quốc gia Xuân Thủy, Nam Định Tạp chí Sinh học, 35(3), 342-347 13/5/2022 (4) Nghiêm Văn Hùng (2020) Đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng tính kháng kháng sinh bệnh nhân nhiễm khuẩn huyết E Coli bệnh viện bệnh nhiệt đới trung ƣơng từ 7/2015 đến 6/2020 Luận văn thạc sĩ, trƣờng Đại học Y Hà Nội (5) Nguyễn Thị Thanh Hà ((2009) Phƣơng pháp kỹ thuật khoanh giấy kháng sinh khuếch tán Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh vật Y học Nhà xuất Y học, Hà nội, 1991:329-338 (6) Phùng Thị Thu Hằng, Nguyễn Ngọc Phƣơng Thảo, NguyễnNguyền Trân, Phan Thành Đạt, Nguyễn Phúc Đảm, ĐỗTấn Khang, Nguyễn Đức Độ & Nguyễn Trọng Hồng Phúc (2021) Khảo sát đặc điểm hình thái, giải phẫu hoạt tính kháng khuẩn cúc tần (Pluchea indica(l.) Less.)Và nam sài hồ(Pluchea pteropoda helms.) Tạp chí khoa học trƣờng Đại học Cần Thơ, phần A: khoa học tự nhiên, công nghệ môi trƣờng Tài liệu nƣớc (7) Ahmed Q.U.; Samah O.A & Sule A.(2012) Andrographis paniculata (Burm.f) Wall ex Ness: A Potent Antibacterial Plant In Antimicrobial Agents; Bobbarala, V., Ed.; IntechOpen: London, UK; pp 345–360 (8) Akhtar M.T.; Bin Mohd Sarib M.S.; Ismail I.S.; Abas F.; Ismail A.; Lajis N.H.& Shaari K.(2016) Anti-Diabetic Activity and Metabolic Changes Induced by Andrographis paniculata Plant Extract in Obese Diabetic Rats Molecules 1026 (9) Andrographis paniculata Nees J Pharm Sci Innov.(2012)1–4 (10) Buapool D., Mongkol N., Chantimal J., Roytrakul S., Srisook E., & Srisook, K (2013) Molecular mechanism of anti-inflammatory activity of Pluchea indicaleaves in macrophages RAW 264.7 and its action in animal models ofinflammation Journal of Ethnopharmacology, 146(2), 495–504 (11) Doran, A L., Morden, W E., Dunn, K., & Edwards‐Jones, V (2009) Vapour– phase activities of essential oils against antibiotic sensitive and resistant bacteria including MRSA Letters in applied microbiology, 48(4), 387-392 (12) Figueroa IOM, Verdugo RA (2005) Cơ chế phân tử gây bệnh Salmonella sp Vi trùng học 47 (1-2): 25-42 (13) Foster, T J (2002) Staphylococcus aureus Molecular Medical Microbiology, 839-888 (14) Gomes T A., Elia W P., Scaletsky, I C., Gut B E., Rodrigues J F., Piazza R M., & Martinez M B (2016) Diarrheagenic escherichia coli brazilian journal of microbiology, 47, 3-30 (15) Gu L.; Yu Q.; Li Q.; Zhang L.; Lu H.& Zhang X (2018) Andrographolide Protects PC12 Cells against β-Amyloid-Induced Autophagy-Associated Cell Death Through Activation of the Nrf2-Mediated p62 Signaling Pathway 44 (16) Gupta S.; Yadava J.N.S & Tandon J.S (2008) Antisecretory (Antidiarrhoeal) Activity of Indian Medicinal Plants Against Escherichia Coli Enterotoxin-Induced Secretion in Rabbit and Guinea Pig Ileal Loop Models Int J Pharmacogn 198–204 (17) Hossain S; Urbi Z.; Karuniawati H Mohiuddin RB; Moh Qrimida A.; Allzrag AMM.; Ming L C Pagano E & Capasso R (2021) Andrographis paniculata (Burm f.) Wall ex Nees: An Updated Review of Phytochemistry, Antimicrobial Pharmacology, and Clinical Safety and Efficacy Life 11(4):348 (18) Inrat s “phytochemical screening, antioxidant and antimicrobial assessment of Pluchea indica (l.) Less extract as an active ingredient in natural lotion bar” International Journal of Current Pharmaceutical Research, vol 13, no 2, Mar 2021, pp 51-57 (19) Ismail S.; Hanapi N.A.; Ab Halim M.R.; Uchaipichat V (2010) Mackenzie, P.I Effects of Andrographis paniculata and Orthosiphon stamineus extracts on the glucuronidation of 4-methylumbelliferone in human UGT isoforms Molecules 3578–3592 (20) Kataky A & Handique P.J (2008) Antimicrobial activity and phytochemical estimation of micropropagated Andrographis paniculata (Burm.f) Nees Asian J Sci Technol 091– 094 (21) Kaur R.; Sharma P.; Gupta G.K.; Ntie-Kang F.; Kumar D (2020) Structure-ActivityRelationship and Mechanistic Insights for Anti-HIV Natural Products Molecules 2070 (22) Kovács, Á T (2019) Bacillus subtilis Trends in Microbiology, 27(8), 724-725 (23) Lee D.; Baek C.Y.; Hwang J.H & Kim M.Y.(2020) Andrographis paniculata Extract Relieves Pain and Inflammation in Monosodium Iodoacetate-Induced Osteoarthritis and Acetic Acid-Induced Writhing in Animal Models Processes 873 (24) Li X.; Yuan K.; Zhu Q.; Lu Q.; Jiang,H.; Zhu M.& Huang, G.; Xu A (2019) Andrographolide Ameliorates Rheumatoid Arthritis by Regulating the Apoptosis-NETosis Balance of Neutrophils Int J Mol Sci 5035 (25) Liu Y.T.; Chen H.W.; Lii C.K.; Jhuang J.H.; Huang C.S.; Li M.L.& Yao H.T (2020) A Diterpenoid, 14-Deoxy-11, 12-Didehydroandrographolide, in Andrographis paniculata Reduces Steatohepatitis and Liver Injury in Mice Fed a High-Fat and High-Cholesterol Diet Nutrients 523 (26) Masuda, T., Oyama, Y., Inaba, Y., Toi, Y., Arata, T., Takeda, Y., Nakamoto, K., Kuninaga, H., Nishizato, S., and Nonaka, A (2002) Antioxidant related activities of ethanol extracts from edible and medicinal plants cultivated in Okinawa, Japan Nippon Shokuhin Kagaku Kogaku Kaishi 49(10), pp: 652-661 (27) Michael, E O.,& Samuel, I Miller (2001) SALMONELLA: A Model for Bacterial Pathogenesis Annu Rev Med, 52, 259–74 (28) Mishra U.S.; Mishra A.; Kumari R.; Murthy P.N & Naik B.S (2009) Antibacterial Activity of Ethanol Extract of Andrographis paniculata Indian J Pharm Sci 71, 436–438 (29) Mishra U.S.; Mishra A.; Kumari R.; Murthy P.N & Naik B.S.(2009) Antibacterial Activity of Ethanol Extract of Andrographis paniculata Indian J Pharm Sci 71, 436–438 (30) Mussard E.; Cesaro A.; Lespessailles E.; Legrain B.; Berteina-Raboin, S.; Toumi H (2017) Andrographolide, a Natural Antioxidant: An Update Antioxidants 571 (31) Mussard E.; Jousselin S.; Cesaro A.; Legrain B.; Lespessailles E.; Esteve, E.; BerteinaRaboin, S & Toumi, H.(2020) Andrographis paniculata and Its Bioactive Diterpenoids Against Inflammation and Oxidative Stress in Keratinocytes Antioxidants 530 45 (32) P Kotzekidou (2014) BACILLUS|Geobacillus stearothermophilus (Formerly Bacillus stearothermophilus), Encyclopedia of Food Microbiology (Second Edition), 2014, pp:129-134 (33) Panossian A & Brendler T (2020) The Role of Adaptogens in Prophylaxis and Treatment of Viral Respiratory Infections Pharmaceuticals 236 (34) Qader S.W.; Abdulla M.A.; Chua L.S.; Najim N.; Zain M.M & Hamdan S (2011) Antioxidant, total phenolic content and cytotoxicity evaluation of selected Malaysian plants Molecules 3433–3443 (35) Qiu Y Q., Qi S H., Zhang S., Tian X P., Xiao Z H., Li M Y.,& Li Q X (2008) Thiophene derivatives from the aerial part of Pluchea indica Heterocycles, 75, 1757-1764 (36) Radhika P.; Sastry B.S & Madhu H.B (2008) Antimicrobial screening of Andrographis paniculata (Acanthaceae) root extracts Res J Biotechnol 62–63 (37) Roy S.; Rao K.; Bhuvaneswari C.; Giri A & Mangamoori L.N (2010) Phytochemical analysis of Andrographis paniculata extract and its antimicrobial activity World J Microbiol Biotechnol (38) Sahalan A.Z.; Sulaiman N.; Mohammed N.; Ambia K.M & Lian H.H (2007) Antibacterial activity of Andrographis paniculata and Euphorbia hirta methanol extracts J Sains Kesihat Malays 1–8 (39) Sahalan A.Z.; Sulaiman N.; Mohammed N.; Ambia K.M.& Lian H.H (2007) Antibacterial activity of Andrographis paniculata and Euphorbia hirta methanol extracts J Sains Kesihat Malays 1–8 (40) Sahalan A.Z.; Sulaiman N.; Mohammed N.; Ambia K.M.; Lian, H.H (2007) Antibacterial activity of Andrographis paniculata and Euphorbia hirta methanol extracts J Sains Kesihat Malays.5, 1–8 (41) Singha PK; Roy S.& Dey S (2003)Hoạt động kháng khuẩn Andrographis paniculata Fitoterapia Sci 74, 692–694 (42) Sirikhwan Tinrat (2021) Phytochemical screening, antioxidant and antimicrobial assessment of Pluchea indica (L.) Less extract as an active ingredient in natural lotion bar Int J Curr Pharm Res,13(2), 51-57 (43) Suda, I., Oki, T., Nishiba, Y., Masuda, M., Kobayashi, M., Nagai, S., Hiyane, R., and Miyashige, T 2005 Polyphenol contents and radical scavenging activity of extracts from fruits and vegetables cultivated in Okinawa, Japan Nippon Shokuhin Kagaku Kogaku Kaishi 52 (10), pp: 462-471 (44) Sule A.; Ahmed Q.U.; Samah O.A & Omar M.N.(2010) Screening for Antibacterial Activity of Andrographis paniculata Used in Malaysian Folkloric Medicine: A Possible Alternative for the Treatment of Skin Infections Ethnobot Leafl 445–456 (45) Sule A.; Ahmed Q.U.; Samah O.A.; Omar M.N.; Hassan N.M.; Kamal, L.Z.M & Yarmo M.A.(2011) Bioassay guided isolation of antibacterial compounds from Andrographis paniculata (Burm.f.) Wall ex Nees (Hempedeu bumi) Am J Appl Sci 525–534 (46) Sule A.; Ahmed Q.U.; Samah, O.A.; Omar, M.N (2011) Bacteriostatic and bactericidal activities of Andrographis paniculata extracts on skin disease causing pathogenic bacteria J Med Plants Res 7–14 (47) Wang Y.; Jiao J.; Yang Y.; Yang M & Zheng Q (2018) Screening and Identification for Immunological Active Components from Andrographis Herba Using Macrophage Biospecific Extraction Coupled with UPLC/Q-TOF-MS Molecules 1047 46 (48) Wei L.S.; Wee W.; Siong J.Y.F & Syamsumir D.F (2011) Characterizaion of antimicrobial, antioxidant, anticancer properties and chemical composition of Malaysian Andrographis paniculata leaf extract 996–1002 (49) Yvon Michel-Briand & Christine Baysse (2002) The pyocins of Pseudomonas aeruginosa Volume 84, Issues 5–6, Pages 499-510,ISSN 0300-9084 (50) Zaidan M.R.;Noor Rain A.; Badrul A.R.; Adlin A.; Norazah A & Zakiah I (2005) In vitro screening of five local medicinal plants for antibacterial activity using disc diffusion method Trop Biomed (51) Zeynep A.; Murat K & Hacer D (2017) A new colorimetric DPPH• scavenging activity method with no need for a spectrophotometer applied on synthetic and natural antioxidants and medicinal herbs Journal of enzyme inhibition and medicinal chemistry Vol 32, NO 1, 640–647 47 PHỤ LỤC Phụ lục Dung dịch chuẩn McFarland mức độ khác để so sánh độ đục nồng độ vi khuẩn tƣơng ứng Phụ lục Đƣờng kính vịng vơ khuẩn đĩa thạch Tinh dầu cúc tần nồng độ 1/10 phƣơng pháp khuếch tán B.subtilis Tinh dầu cúc tần nồng độ 0.1 phƣơng pháp xông B.subtilis 48 Xuyên tâm liên dung môi Ethnol E.coli 85922 49 Xuyên tâm liên dung môi ethanol E.coli 25922 50 51 52 phụ lục Các nghiên cứu trƣớc phƣơng sử dụng DPPH không hiệu với số dƣợc liu cú mu (Zeynep Akar, Murat Kỹỗỹk & Hacer Doan 2017) 53 ( Fany Nelt, 2019) 54