Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (paphiopedilum concolor) ở thái nguyên

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TRẦN THỊ THU TRANG NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY LAN HÀI ĐỐM (Paphiopedilum concolor) Ở THÁI NGUYÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Thái Nguyên - 2020 Thái Nguyên, 2020 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN - 2020 HỌC TRƢỜNGThái ĐẠINguyên HỌC KHOA TRẦN THỊ THU TRANG NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY LAN HÀI ĐỐM (Paphiopedilum concolor) Ở THÁI NGUYÊN Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Vũ Thị Lan Trƣờng Đại học Khoa học – ĐH Thái Nguyên Thái Nguyên - 2020 Thái Nguyên - 2020 i LỜI CAM ĐOAN T ƣ x y tr TS Vũ T ị L Mọ trí ố Cá số ệu, kết bố tr ột tr u tr u tr uậ vă t t ệ ƣ uậ vă ều rõ tru v ƣ từ t k Thái Nguyên, ngày tháng 12 năm 2020 Tác giả Trần Thị Thu Trang s uồ ii LỜI CẢM ƠN Lờ ầu t t x ƣợc bày tỏ lòng biết s u sắc t i TS Vũ T ị Lan, Khoa Công nghệ sinh học, Trƣờ hƣ ng d n, bảo v luậ vă Đại học Khoa học Thái Nguyên ã tận tình úp ỡ tơi suốt thời gian th c hồn thành y Tôi xin chân thành B ệu Trƣờ Đại học K học Thái Nguyên, Ban ch nhiệm Khoa Công nghệ sinh học v cán Khoa Công nghệ sinh học, ặc biệt s qu ị k t uật v p t í ệm Khoa ã tạ t ều kiệ ọ - Đại t ầy , úp ỡ c , úp ỡ tơi q trình làm luậ vă t sĩ Tơi xin cảm ộng viên tạ ộng l ình bạn bè ln bên cạnh ng hộ, khuyến khích, ể tơi hồn thành luậ vă Trong q trình làm luậ vă k nhậ ƣợc s ó trá y k ỏi sai sót, tơi mong óp q báu từ phía thầy bạ bè ể tơi hồn thành luậ vă Thái Nguyên, ngày tháng 12 năm 2020 Tác giả Trần Thị Thu Trang iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH .vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấ ề Mục tiêu nghiên c u Nội dung nghiên c u CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Gi i thiệu lan H v H Đốm 1.1.1 Phân loại lan Hài (Paphiopedilum) 1.1.2 N uồ 1.1.3 Đặ ố ể t 1.1.4 Đ ều kiệ s 1.1.5 H ệ trạ t y H V ệt N 1.1.6 Đặ ểm th c vật học c H Đốm 12 1.2 P ƣơ p áp in vitro 14 ố v tí 1.2.1 Quy trình nhân giống in vitro [20] .14 1.2.2 Cá p ƣơ p áp ố v tí 1.3 Tình hình nghiên c u lan Hài gi H Đốm 16 v tr ƣ c 17 1.3.1 Trên gi i .17 1.3.2 Tron ƣ c 22 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đố tƣợng vật liệu nghiên c u 27 2.2 Đị ểm thời gian nghiên c u 28 2.3 Hóa chất thiết bị nghiên c u 28 2.3.1 Hóa chất 28 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an iv 2.3.2 Thiết bị .28 2.3.3 Dụng cụ 29 2.4 P ƣơ p áp u 29 2.4.1 P ƣơ pháp khử trùng chồi non .29 2.4.2 P ƣơ p áp k trùng 2.4.3 Nghiên c u ảnh ƣởng c Đốm 30 trƣờng t i khả ă ảy mầm c a hạt lan H Đốm .30 2.4.4 P ƣơ p áp chồi in vitro .30 2.4.5 Nghiên c u ả ƣởng c NAA ến khả ă r rễ c H Đốm 31 2.4.6 P ƣơ p áp ƣ t nhiên .31 2.4.7 P ƣơ p áp 2.4.8 P ƣơ p áp p ă sóc tí H Đốm ƣ i .32 v xử lí số liệu 32 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Nghiên c u p ƣơ 3.2 Nghiên c u ả c a hạt l nhân nhanh s s trƣờng t i khả ă ƣởng c a số chất trƣởng c a chồ ƣởng c a BAP kết hợp v trƣởng c a chồ 3.3.2 Ả ƣởng c a tuổi v ảy mầm H Đốm 36 3.3 Nghiên c u ả 3.3.1 Ả p áp k trùng m u 33 ều s trƣở ến khả ă H Đốm 40 NAA ến khả ă v sinh H Đốm non sau nảy mầm 40 ƣởng c a nồ 3.4 Nghiên c u ả 3.5 Nghiên c u ƣ ƣởng c y ộ BAP ến khả ă NAA ến khả ă in vitro r ồi 44 r rễ c H Đốm 49 vƣờ ƣơ 52 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 PHỤ LỤC 67 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT B5: Gamborg , 1976 BA: N6-benzyladenine BAP : - benzyl amino purine CT: Công th c CS: Cộng s DNA: Deoxyribonucleic acid ĐC: Đối ch ng KC: Knudson C MS : Murashighe Skoog, 1962 NAA : Naphthalene acetic acid PCR: Polymerase Chain Reaction RAPD: Random Amplification of Polymorphic DNA THT: Than hoạt tính SH: Schenk and Hildebrandt, 1972 VW: Vacin and Went WPM : Woody Plant Medium – Lioyd Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an vi DANH MỤC BẢNG Bả 1.1: Cá ó Bả tồ T H V ệt N t t bả tồ Tổ Quố tế IUCN 10 Bảng 2.1: Hóa chất nghiên c u 30 Bảng 2.2: Thiết bị nghiên c u 30 Bảng 3.1: Ả chồi ƣởng c a thời gian khử trùng HgCl2 0,1% ối v i H Đốm sau tuần 37 Bảng 3.2: Hiệu c a chế ộ khử trù Bảng 3.3: Ả ối v i lan Hài Đốm 38 ƣởng c a tuổi v trƣờng t i khả ă ảy mầm c a hạt lan Hài Đốm 40 Bảng 3.4: Kết nghiên c u ả khả ă v s ƣởng c a BAP kết hợp v i NAA ến trƣởng c a chồ H Đốm sau 50 ngày 46 Bảng 3.5: Ả ƣởng c a nồ ộ BAP ến khả ă nhân chồi sinh trƣởng c a chồi in vitro 49 Bảng 3.6: Kết nghiên c u ả y ƣởng c NAA ến khả ă r rễ c a H Đốm in vitro 55 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an vii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Hình thái lan Hài Đốm 13 Hình 2.1: Đố tƣợng vật liệu nghiên c u 29 H 2.2: Sơ thí nghiệm 31 Hình 3.1: Tái sinh l Hình 3.2: Ả H Đốm p ƣơ p áp ƣởng c a BAP kết hợp v ạt 42 NAA ế s trƣởng c a chồi H Đốm non sau 50 ngày 47 Hình 3.3: Chồi lan Hài Đố nồ Hình 3.4: Chồ nồ Hình 3.5: Ả s trƣở tr trƣờng bổ sung BAP ộ từ – 4mg/l sau tuần 50 H Đố s trƣở tr trƣờng bổ sung BAP ộ từ – 4mg/l sau tuần nuôi cấy 51 ƣởng c a NAA t i khả ă Hình 3.6: Cây lan Hài Đố s r rễ c H Đốm 56 trƣởng phát triển nhà ƣ i 57 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an MỞ ĐẦU Đặt vấn đề H ƣợ ƣời biết ến từ s m khoảng 2.800 ă hoa ƣợc coi nhữ TCN, ỉnh cao tiến hóa c a lồi hoa Hiện nay, gi i có khoảng 800 chi 25.000 - 30.000 loài lan, họ Lan (Orchidaceae) chiếm vị trí th hai sau họ Cúc (Asteraceae) ngành th c vật ũ hạt kín [30] Vì vậy, hình thái, cấu tạ ƣ ệ thống phân loại c a họ ạng ph c tạp ƣợc t Việt Nam quố ƣu ã , ó ộ ạng sinh học cao, phong lan Việt N ạng số loài, màu sắc ch ng loại v i 140 p 1000 r t vù rừ ú ƣ C Kontum, Pleiku, B ố uy t y C ú M T uật, P R , Đ Lạt, D L bố khu v c hẹp biệt lập Tr y quý 66 ọ ế p ĩ tƣơ ể ố ố y ƣ V ệt N G ột tr Ngoài tên l H H V , v ƣơ ƣ v t ƣ ỏ ẹ ƣ uộ , Đồ ởt k ết L H l ùb P ú ,L ất y ƣợ t ọ p Anh l H Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn v ý 22 ỉ xuất H Trắ , H R u,…[1] Gấ ất y Vạ Đ ể ƣ Bắ Cạ , Bắ từ Đố ù t s , … L H ƣờ P áp trị H Tí , ó sƣơ u ỏ, t ƣờ ,t ó t k ả ữu ó H L ƣợ Á, ƣờ A ặ H Đố ọ ãy ú tƣơ ó ố N ãt ều ữ , Sơ L , T N uy , Vĩ uv Đ y, V ệt N ó ó H Đỏ, Đố Hài, chúng t ƣờ V ệt N v vù Hài Vân, lan Hài Vân Duyên, lan Hài Đố , Lan H t ế gi i, loài phân hài Vệ Nữ Sabot de Venus v Paphiopedilum tr ệ tạ V ệt N tr an Hài Lan Hài (Paphiopedilum) t Lady's slippers [1] H ệ t uộ bố , v.v [20] Loài lan số bố từ Ấ Độ, N w G t uộ p Bằ , Sa Pa, Lào Cai, Huế, Hả V , Quy N , ặc hữu c a Việt Nam ều t ƣờ H ù Đố từ ế b ƣợ t ị trƣờ Đố có hoa ƣợ tr ng b ểu C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 54 80%, tr ó tỉ lệ sống cao tr trƣờng giá thể hỗn hợp d n vụn vỏ thông 1:1 , ạt 80% Một số chồi bị thối rễ, số lại bị thố á, s u ó Deb CR, Jakha HY (2019) ã ố in vitro lan Hài Paphiopedilum Villosum Var Boxallii R b F Pf tz r từ ạt K ỗ ợp át, ất ữu t ố rữ , 1: 1: 1: 1: t u ƣợ 65% Do số ƣợng ƣ ả y số H Đố y bị chết ,t ƣ y r trồ v p b k tr át ể t tỷ ệ sót ƣ r vƣờ ƣơ cịn thời gian theo dõi dài nên tiếp tục nghiên c u thời gian t i Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 55 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ K t luận H 1) Quả Đố ƣợc khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% 15 p út t u ƣợc hiệu khử trùng cao nhất, tỷ lệ m u sống sau tuần 50%, tỷ lệ m u nhiễm thấp (20%) H 2) Quả ó ộ tuổi 170 DAP phù hợp cho nuôi cấy, tỉ lệ hạt ạt 81,7% tr nảy mầ ngày S u ảy ỉ Đố ầ ƣợ tạ t 3) M trƣờng MS bổ BAP 2mg/l sau khoảng 90 ến 100 k ả 100 v 2-3 x y, ậ y L H v 1-2 rễ Đố ỏv trƣờng phù hợp cho nhân chồi s s in vitro hoàn ắ trƣởng c a chồi lan Hài Đốm là: Đối v i chồi non: Mô trƣờng MS bổ sung kết hợp BAP mg/l v i NAA 0,5 , ƣ c dừa 100 ml/l, THT 0,5g/l, số chồi/m u ạt 2,0 chồi, chất ƣợng chồi tốt Đối v i chồ trƣởng thành: M trƣờng MS bổ sung BAP , ƣ c dừa 100 ml/l, THT 0,5 g/l, số chồi/m u ạt 1,75 chồi, chồi sinh trƣởng phá triển tốt 4) M trƣờng phù hợp cho tạo rễ chồi la H Đố : M trƣờng MS bổ sung ộ NAA 1,0 mg/l cho tỉ lệ chồi rễ ạt 84,38 %, chất ƣợng rễ tốt nồ Đã ƣ số yH Đốm in vitro r vƣờ ƣơ thành công v i tỉ lệ ạt 50% - 80% sau 30 ngày Đề nghị - Tiếp tục nghiên c u ều kiện nuôi cấy ể tă k ả ă ảy mầm c a H Đốm - Nghiên c u ả ƣởng c a số chất kí khả ă - Nghiên c u ảm bảo cho s s H Đốm nhằ tă t í s trƣở k ến bó ể hệ số nhân chồi ều kiện vƣờ ƣơ ƣ trƣởng phát triển in vitro Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn t ể, p C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO Ti ng Việt Averyanov, Phillip Cribb, Phan Kế Lộc, Nguyễn Tiến Hiệp (2004), Lan Hài Vi t Nam, Nxb Giao thơng Vận tải, TP Hồ Chí Minh Nguyễn Tiến Bân nhiều tác giả (2007) S ch Đỏ Vi t Nam, Phần Th c vật, Nxb Khoa học T nhiên Công nghệ, Hà Nội L Trầ B , Hồ Hữu N ị, L T ị Muộ 2002 , C ng ngh sinh h c th c vật c i tiến giống c y trồng, Nxb K Nguyễn Thị Cúc, Nguyễ Vă Kết, Dƣơ (2014), “ N uả ọ v K t uật, Hà Nội Tấn Nh t, Nguyễn Thị Kim Lý ƣởng c a số chất hữu tr s trƣởng phát triển lan Hài Hồng (Paphiopedilum delenatii ) in vitro”, Tạp chí Sinh h c, 36 (1), tr 250 – 256 Hoàng Thị Giang, Nguyễn Quang Thạch, Mạch Hồng Thắ , Đỗ Thị Thu Hà (2010), “ N u nhân giống in vitro nuôi trồng giống lan Hài quý Paphiopedilum hangianum pernergurss (Hài Hằ ”, Tạp chí Khoa h c Phát tri n, 8(2), tr.194 – 201 L Vă H 2008 , Giáo trình ni cấy mô tế bào th c vật, Nxb Đại học Đ N ng Trần Hợp (1990), Phong lan Vi t Nam (tập 1,2), Nxb Khoa học K thuật, Hà Nội Trầ Vă Hu , Vă Tí Lƣợm (2007), Kỹ thuật nuôi trồng lan, Nxb Thành phố Hồ Chí Minh Dƣơ Đ c Huyến (2007), Th c vật chí Vi t Nam, 9-H lan (Orchidceae) Nxb Khoa học k thuật 10 Vũ N ọc Lan, Nguyễn Thị Lý Anh (2013), “Nhân giống in vitro loài lan bả ịa Dendrobium nobile Lindl”, Tạp chí Khoa h c Phát tri n, 11(7), tr 917 - 925 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 57 11 Phan Kế Long, Nguyễ G Sơ , Đặng Tất Thế 2009 , “Mối quan hệ di truyền c a số loài lan Hài thuộc chi Paphiopedilum Việt N ”, Tuyển tập báo cáo Hội nghị sinh thái tài nguyên sinh vật lần th 12 Đỗ Tất Lợi (2001), Những thuốc vị thuốc Vi t Nam, Nxb Y Học, Hà Nội 2007 , “N 13 Lê Quang Lu liệu u nhân giống in vitro tạo nguồn nguyên y ột biến hoa lan quý Việt N ”, Bá tổng kết ề tài cấp Cơ sở TP Hồ Chí Minh 14 Vũ Quốc Luận, Nguyễ P ú Huy, Đỗ Khắc Thị , Dƣơ 2014 , “Sử dụ p ƣơ Tấn Nh t p áp ốt trồng tr c tiếp r vƣờ ƣơ y Hài Hồng ( Paphiopedilum delenatii ”, Tạp chí sinh h c, 36 (1), tr.272 – 276 15 Vũ Quốc Luận, Trịnh Thị Hƣơ , N uyễ P ú Huy, Đỗ Khắc Thịnh, Dƣơ Tấn Nh t 2014 , “ Ả ƣởng c a chất bổ sung hữu trƣởng phát triển c a chồi lan Vân Hài (Paphiopedilum trình s callosum) ni cấy v tr ”, Tạp chí Khoa h c Công ngh , tập 52 (1), tr 49 – 62 16 M Xu Lƣơ 2005 , Công ngh sinh h c th c vật, Nxb Đại họ Đ Lạt 17 Trầ Vă M , N uyễ Vă Uyển (2001), “Vi nhân giống phong lan nhóm Dendrobium quy mơ cơng nghiệp, nhân giống in vitro”, Tạp chí Khoa h c Công ngh , Tập1, tr.1 – 18 Chu Thị Ngọc M , Trịnh Khắc Quang (2010) “ Nghiên cứu nh gi ặc i m nông sinh h c số mẫu giống lan rừng Vi t Nam Gia LâmHà Nội ”, Tạp chí NN&PTNT số 13, tr 13 – 19 19 Hoàng Thị Nga, Nguyễn Quang Thạ , Đỗ Đ c Thịnh, Hoàng Minh Tú 2008 , “X y ng quy trình nhân nhanh giố Địa lan Hồng Hồng (Cymbidium iridioides) k thuật ni cấy mơ tế b ”, Tạp chí Khoa h c Phát tri n, 6(4), tr.387 – 394 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 58 20 Ngô Thị Nguyệt, T P ƣơ T ả , Đặng Thị Chinh, Hoàng Thị Thế (2013), Thu thập, ưu trữ nguồn gen ứng dụng công ngh sinh h c b o tồn phát tri n số loài lan quý Qu ng Ninh, Báo cáo tổng hợp kết khoa học công nghệ ề tài, Trung tâm Khoa học Sản xuất Lâm Nông nghiệp Quảng Ninh 21 Đặng Xuyế N ƣ 2006 , Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống ni trồng giống hai lồi lan Hài Vi t Nam, Báo cáo tổng kết Khoa học K thuật ề tài, Viện Ứng dụng Công nghệ 22 Dƣơ Tấn Nh t (2007), Một số kỹ thuật nhân giống vơ tính Lan Hài (Paphiopedilum delenatii), Báo cáo khoa học Hội thảo ng dụng k thuật m i nhân giống nuôi trồng hoa lan Tp Hồ Chí Minh 23 P ù Vă P , N uyễn Trung Thành, Phạm Thị O c u sơ trạ v 2013 , “N ề xuất giải pháp bảo tồn loài th c vật ó bị tuyệt ch ng khu bảo tồ t H K ,P C ,H B uy ”, Tạp chí Khoa h c Đ QG N, 29(4), tr 36 - 43 24 Nguyễ Vă Song, Trƣơ “Nhân nhanh in vitro rừ ó K uy tuyệt ch T ị Bí P ƣợ , P Hù Vĩ (2011), Đ ệp (Dendrobium chrysotoxum) - lồi lan ”, Tạp chí khoa h c Đ uế, Tập 64, tr.127 – 136 25 Nguyễn Thị Sơ , N uyễn Thị Lý A , Vũ N ọc Lan, Trần Thế Mai (2012), “Nhân giống in vitro loài lan Dendrobium fimbriatum Hook (Hoàng Thảo Long nhãn)”, Tạp chí Khoa h c Phát tri n, 10(2), tr 263 – 271 26 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Lý Anh (2003), Nghiên cứu y ng quy tr nh nh n giống nu i trồng phong lan Phalaenopsis (lan Hồ Đi p), Báo cáo khoa học toàn quốc, Nxb Khoa học K t uật 27 N uyễ Đ T ứng ụng, Nxb N 2000 , Nu i cấy m tế th c vật - Nghiên cứu ệp, Hà Nội Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 59 28 Nguyễn Thị Tình, Nguyễn Tiế Dũ Xuân Bình (2017), “N , P ạm Thị Nam, C u T ú Đạt, Ngô u nhân giống in vitro L H Đố ”, Tạp chí Nơng Nghi p Phát Tri n Nông Thôn, 12 (2), tr 79-83 29 Nguyễn Thiện Tịnh (2001), Lan Vi t Nam, Nxb Nông nghiệp, TP Hồ Chí Minh 30 Khuất Hữu Trung, Kiều Thị Dung, Nguyễ T úy Đ ệp, Bùi Thị t u Hƣơ , Trầ Duy Dƣơ , Đặng Trọ H Lƣơ 2007 , “ N u ốm (Paphiopedilum concloro pfizer) bả ạng di truyền ịa c a Việt N ”, Tạp chí Khoa h c Công ngh , 2(3), tr 70 – 77 31 Đ T ịT V , Đặng Thị Tố Nga (2008) Giáo trình hoa lan, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội 32 Đỗ Đă Vịnh (2002), C ng ngh sinh h c c y trồng, Nxb N ệp, Hà Nội Ti ng Anh 33 Anjum S, Zia M and Chaudhary MF (2006) Investigation of diffirent strategies for high frequency r r t fD r bu s “V t ry” Afican Journal of Biotechnology, 5(19), pp.1738-1743 34 Bubeck SK (1973), A suty of Paphiopedilum meristem culture, Ph.D Thesis, Rutgers University Microfilm International, Ann Arbor, Mivhigan, The USA 35 Chen T Y, Chen J T, Chang W C 2004 , “P t r r t t r u direct shoot bud formation from leaf cultures of Paphiopedilum orchids”, Plant Cell Tiss Organ Cult 76, pp.11–15 36 Chen Z L, Ye X L, Liang C Y, Duan J 2004b ,“S r t v tr of Paphiopedilum armeniacum and P.micranthum”, Acta Hortic Sinica, 31(4), pp.540–542 37 Chen J T, Chang W C ( 2002), Effects of tissue culture conditions and explants characteristics on direct somatic embryogenesis in Oncidium „G w r R s y‟ Plant Cell Tissue and Organ Cult, 69, pp.41–44 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 60 38 Chyuam Y N, Saleh N M 2011 , “I v tr pr p orchid through formation of protocorm- k b t fP p p u s”, Plant Cell Tiss Org Cult 10, pp.193 – 202 39 Deb CR, Jakha HY (2019), In vitro Immature Embryo Culture and Propagation of Paphiopedilum villosum Var Boxallii (Rchb.f) Pfitzer, Biotechnology, 18(2), pp.77 - 88 40 Ding C C, Wu H, Liu F Y 2004 , “F t rs ff t t r t f Paphiopedilum armeniacum”, Acta Bot Yunnanica, 26(6), pp 673–677 41 Edy SWU, Hery P, Thin D 2015 , “Asy b t s r t vitro seedling development of Paphiopedilum liemianum fowlie an r J rr str Or N t r Su tr I s ”, Journal of plant sciences, 10 (1), pp 25 – 34 42 Huang LC, Lin CJ, Kou CI, Huang BL, Mushige (2001), "Paphiopedilum clonning in vitro", Scientia Horticulturae 91, pp 111-121 43 Nguyen Phuc Huy, Do Thi Thuy Tam, Vu Quoc Luan, Hoang Thanh Tung, Vu Thi Hien, Ha Thi My Ngan, Duong Tan Nhut (2019), “In vitro polyploid induction of Paphiopedilum villosum using colchicine” Scientia Horticulturae 252, pp 283-290 44 Kalimuthu K, Senthikumar R and Vijaykumar S (2006), “In vitro micropropagation of orchid, Oncidium sp (Dancing Dolls)”, Afican Journal of Biotechnology, 6(10) , pp 1171-1174 45 Kauth P (2005), In vitro seed germination and seedling development of -Calopogon tuberosus and Sacoila lanceolata var lanceolata: Two Florida native terrestrial orchids, Master thesis, University of Florida 46 Koshiro K (2006), "Clonal propagation of Paphiopedilum by tissue culture in vitroculture of ovaries", Flower Stalks and Undevelop Flower Buds, (2), pp 35 – 46 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 61 47 Kusumoto and Furukawa (1977) Effect of Organic Matter on the Growth of Cymbidium Protocorms Cultured in vitro, Japan Soc Hort Sci 45(4), pp 421-426 48 Lee Y I, (1998), The stzzudy of embryo development and seed germination in vitro in slipper orchids, MSc thesis National Taiwan University, Taiwan 49 Lee Y I, Chen M C, Huang C Y (2010), “Effect of medium composition on a asymbiotic seed germination of five phalaenopsis species”, ISHS Acta Horticulturae 878, International Orchid Symposium November 25th 50 Li HL, Zan YY, Yang B (2012), “Tissue culture of Dendrobium officinale Kimura et Migo.”, Subtrop Plant Sci, 41(3), pp 76 - 77 51 Liao Y J, Tsai Y C, Sun Y W, Lin R S, Wu F S 2011 , “I v tr s t induction and plant regeneration from flower buds in Paphiopedilum r s”, In vitro Cell, Dev Biol plant 47, pp.702 – 709 52 Lin Y H, Chang C, Chang W C 2000 , “P culture of P p p u t r r t fr us ybr ”, Plant Cell Tiss Org Cult 62, pp 21 – 25 53 Liu Z J, Liu K W, Chen L J (2006 , “C s rv t species Paphiopedilum armeniacum Or y f r ”, Acta Ecol Sinica, 26(9) , pp.2791–2800 54 Luan VQ, Thien NQ, Khiem DV and Nhut DT (2006) In vitro germination capacity and pant recover of some native and rare orchids, Processding of Internation Workshop on Biotechnology of Agriculture, pp.175 – 177 55 McCrea, and Timothy C Baldwin (2008), “Axenic seed germination and in vitro seedling development of Restrepia brachypus (Orchidaceae)”, Journal of the Torrey Botanical Society, 135(4), pp 497-505 56 McKendrick (2000), In vitrogermination of orchids: a manual, Ceiba Foundation for Tropica Conservation, pp.1 – 17 57 Ng CY Saleh NM (2011), “I v tr pr p t f Paphiopedilum orchid through formationof protocorm-like bodies”, Plant Cell Tiss Organ Cult 105, pp.193 – 202 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 62 58 Nhut D T, Thuy D T T, Dong N T 2007 , “I v tr st t f Paphiopedilum Delenatii Guillaumin and shoot regeneration via stem node u tur ”, Propagation of Ornamental Plants, 7(1), pp 29 – 36 59 Nhut D T, Thuy D T T, Luan V Q, Dong N T, Khiem D V, Van T T 2005 , “Micropropagation of Paphiopedilumdelenatii v st u tur ”, Vietnam – Korea International Symposium, Bio-Technology & Bio-System Engineering, pp 184 – 190 60 Nhut D T, Trang P T T, Vu N H, Thuy D T T, Khiem D V, Binh N V, Van TT ( 2005 , “A wounding method and liquid culture in Paphiopedilum delenatiii propagation”, ropagation of Ornamental Plants, 5(3), pp 156 – 161 61 Rittirat S, Klaocheed S,Thammasiri K, Prasertsongskun S (2017, “In vitro Propagation and Forest Reestablishment of Cymbidium finlaysonianum Lindl., an Endangered Medicinal Orchid” Walailak Journal of Science and Technology (WJST), 15(10), pp 711 - 724 62 Songjun Z, Wang J, Wu K 2012 , “I v tr pr p hangianum P r r t f Paphiopedilum Gruss”, Scientia Horticulturae 151, pp 147 – 156 63 Stewart J, Button J 1975 , “T ssu u tur stu s P p p u ”, American Orchid Society Bulletin 44, pp 591 – 599 64 Thi Tinh Nguyen, Tien Dung Nguyen, Xuan Thanh Dao, Truc Dat Chu, Xuan Binh Ngo 2018 , “I v tr Pr p t f V t E L y‟s Slipper Orchid (Paphiopedilum vietnamense O.Gruss & P r r ”, Journal of Horticulture and Plant Research 1, pp.1 - 65 Zeng S, Wang j, Wu K, Zang J, Duan J (2013), “In vitro propagation of Paphiopedilum hangianum Perner & Gruss”, Sci hortic 151, pp.147-156 Trang Web 66 www.vuonhoalan.net 67 Phạm Tiến Khoa – caykieng , http://agrimark.org/nhan-dien-cac-giong-lanviet-nam-theo-thong-thuc-vat-hoc Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 63 CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Vũ T ị L , Trầ T ị T u Tr Paphiopedilum concolor từ 2019 Tá v ạt Tạp 207(14): tr 113-119 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn s H Đố í KH&CN, ĐHTN, C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 64 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 65 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 66 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thành phần m i trƣờng MS Dung dịch mẹ MS I MS II MS III MS IV MS V Vitamins Hóa chất Nồng độ hóa Lƣợng lấy Nồng độ hóa chất cho lít mơi chất lít lít dung dịch trƣờng ni m i trƣờng mẹ (g/l) cấy (ml/l) nuôi cấy (mg/l) NH4NO3 82,5 KNO3 95,0 MgSO4 7H2O 37,0 MnSO4 4H2O 2,23 ZnSO4 7H2O 1,058 CuSO4 5H2O 0,0025 0,025 CaCl2 2H2O 44,0 440,0 KI 0,083 CoCl2 6H2O 0,0025 0,025 KH2PO4 17,0 170,0 H3BO3 0,62 Na2MoO4 2H2O 0,025 FeSO4 7H2O 2,784 Na2EDTA 2H2O 3,724 20 1650,0 1900,0 370,0 10 10 10 22,3 10,6 0,83 6,2 0,25 10 27,85 37,25 Nicotinic acid 0,5 0,5 Pyridocine HCl 0,5 0,5 Thiamine HCl 0,1 0,1 Glycine 2,0 2,0 Inositol 100,0 Sucrose 30000 Agar 5400 pH 5,6 - 5,8 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 5,6 - 5,8 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn