(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên

(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên(Luận văn thạc sĩ) Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm (Paphiopedilum concolor) ở Thái Nguyên

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TRẦN THỊ THU TRANG NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY LAN HÀI ĐỐM (Paphiopedilum concolor) Ở THÁI NGUYÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Thái Nguyên - 2020 Thái Nguyên, 2020 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN - 2020 HỌC TRƢỜNGThái ĐẠINguyên HỌC KHOA TRẦN THỊ THU TRANG NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY LAN HÀI ĐỐM (Paphiopedilum concolor) Ở THÁI NGUYÊN Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Vũ Thị Lan Trƣờng Đại học Khoa học – ĐH Thái Nguyên Thái Nguyên - 2020 Thái Nguyên - 2020 i LỜI CAM ĐOAN T ƣ x y tr TS Vũ T ị L Mọ trí ố Cá số ệu, kết bố tr ột tr u tr u tr uậ vă t t ệ ƣ uậ vă ều rõ tru v ƣ từ t k Thái Nguyên, ngày tháng 12 năm 2020 Tác giả Trần Thị Thu Trang s uồ ii LỜI CẢM ƠN Lờ ầu t t x ƣợc bày tỏ lòng biết s u sắc t i TS Vũ T ị Lan, Khoa Công nghệ sinh học, Trƣờ hƣ ng d n, bảo v luậ vă Đại học Khoa học Thái Nguyên ã tận tình úp ỡ tơi suốt thời gian th c hồn thành y Tôi xin chân thành B ệu Trƣờ Đại học K học Thái Nguyên, Ban ch nhiệm Khoa Công nghệ sinh học v cán Khoa Công nghệ sinh học, ặc biệt s qu ị k t uật v p t í ệm Khoa ã tạ t ều kiệ ọ - Đại t ầy , úp ỡ c , úp ỡ tơi q trình làm luậ vă t sĩ Tơi xin cảm ộng viên tạ ộng l ình bạn bè ln bên cạnh ng hộ, khuyến khích, ể tơi hồn thành luậ vă Trong q trình làm luậ vă k nhậ ƣợc s ó trá y k ỏi sai sót, tơi mong óp q báu từ phía thầy bạ bè ể tơi hồn thành luậ vă Thái Nguyên, ngày tháng 12 năm 2020 Tác giả Trần Thị Thu Trang iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH .vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấ ề Mục tiêu nghiên c u Nội dung nghiên c u CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Gi i thiệu lan H v H Đốm 1.1.1 Phân loại lan Hài (Paphiopedilum) 1.1.2 N uồ 1.1.3 Đặ ố ể t 1.1.4 Đ ều kiệ s 1.1.5 H ệ trạ t y H V ệt N 1.1.6 Đặ ểm th c vật học c H Đốm 12 1.2 P ƣơ p áp in vitro 14 ố v tí 1.2.1 Quy trình nhân giống in vitro [20] .14 1.2.2 Cá p ƣơ p áp ố v tí 1.3 Tình hình nghiên c u lan Hài gi H Đốm 16 v tr ƣ c 17 1.3.1 Trên gi i .17 1.3.2 Tron ƣ c 22 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đố tƣợng vật liệu nghiên c u 27 2.2 Đị ểm thời gian nghiên c u 28 2.3 Hóa chất thiết bị nghiên c u 28 2.3.1 Hóa chất 28 iv 2.3.2 Thiết bị .28 2.3.3 Dụng cụ 29 2.4 P ƣơ p áp u 29 2.4.1 P ƣơ pháp khử trùng chồi non .29 2.4.2 P ƣơ p áp k trùng 2.4.3 Nghiên c u ảnh ƣởng c Đốm 30 trƣờng t i khả ă ảy mầm c a hạt lan H Đốm .30 2.4.4 P ƣơ p áp chồi in vitro .30 2.4.5 Nghiên c u ả ƣởng c NAA ến khả ă r rễ c H Đốm 31 2.4.6 P ƣơ p áp ƣ t nhiên .31 2.4.7 P ƣơ p áp 2.4.8 P ƣơ p áp p ă sóc tí H Đốm ƣ i .32 v xử lí số liệu 32 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Nghiên c u p ƣơ 3.2 Nghiên c u ả c a hạt l nhân nhanh s s trƣờng t i khả ă ƣởng c a số chất trƣởng c a chồ ƣởng c a BAP kết hợp v trƣởng c a chồ 3.3.2 Ả ƣởng c a tuổi v ảy mầm H Đốm 36 3.3 Nghiên c u ả 3.3.1 Ả p áp k trùng m u 33 3.5 Nghiên c u ƣ s trƣở ến khả ă H Đốm 40 NAA ến khả ă v sinh H Đốm non sau nảy mầm 40 ƣởng c a nồ 3.4 Nghiên c u ả ều ƣởng c y ộ BAP ến khả ă NAA ến khả ă in vitro r ồi 44 r rễ c H Đốm 49 vƣờ ƣơ 52 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 PHỤ LỤC 67 v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT B5: Gamborg , 1976 BA: N6-benzyladenine BAP : - benzyl amino purine CT: Công th c CS: Cộng s DNA: Deoxyribonucleic acid ĐC: Đối ch ng KC: Knudson C MS : Murashighe Skoog, 1962 NAA : Naphthalene acetic acid PCR: Polymerase Chain Reaction RAPD: Random Amplification of Polymorphic DNA THT: Than hoạt tính SH: Schenk and Hildebrandt, 1972 VW: Vacin and Went WPM : Woody Plant Medium – Lioyd vi DANH MỤC BẢNG Bả 1.1: Cá ó Bả tồ T H V ệt N t t bả tồ Tổ Quố tế IUCN 10 Bảng 2.1: Hóa chất nghiên c u 30 Bảng 2.2: Thiết bị nghiên c u 30 Bảng 3.1: Ả chồi ƣởng c a thời gian khử trùng HgCl2 0,1% ối v i H Đốm sau tuần 37 Bảng 3.2: Hiệu c a chế ộ khử trù Bảng 3.3: Ả ối v i lan Hài Đốm 38 ƣởng c a tuổi v trƣờng t i khả ă ảy mầm c a hạt lan Hài Đốm 40 Bảng 3.4: Kết nghiên c u ả khả ă v s ƣởng c a BAP kết hợp v i NAA ến trƣởng c a chồ H Đốm sau 50 ngày 46 Bảng 3.5: Ả ƣởng c a nồ ộ BAP ến khả ă nhân chồi sinh trƣởng c a chồi in vitro 49 Bảng 3.6: Kết nghiên c u ả y ƣởng c NAA ến khả ă r rễ c a H Đốm in vitro 55 vii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Hình thái lan Hài Đốm 13 Hình 2.1: Đố tƣợng vật liệu nghiên c u 29 H 2.2: Sơ thí nghiệm 31 Hình 3.1: Tái sinh l Hình 3.2: Ả H Đốm p ƣơ p áp ƣởng c a BAP kết hợp v ạt 42 NAA ế s trƣởng c a chồi H Đốm non sau 50 ngày 47 Hình 3.3: Chồi lan Hài Đố nồ Hình 3.4: Chồ nồ Hình 3.5: Ả s trƣở tr trƣờng bổ sung BAP ộ từ – 4mg/l sau tuần 50 H Đố s trƣở tr trƣờng bổ sung BAP ộ từ – 4mg/l sau tuần nuôi cấy 51 ƣởng c a NAA t i khả ă Hình 3.6: Cây lan Hài Đố s r rễ c H Đốm 56 trƣởng phát triển nhà ƣ i 57 MỞ ĐẦU Đặt vấn đề H ƣợ ƣời biết ến từ s m khoảng 2.800 ă hoa ƣợc coi nhữ TCN, ỉnh cao tiến hóa c a lồi hoa Hiện nay, gi i có khoảng 800 chi 25.000 - 30.000 loài lan, họ Lan (Orchidaceae) chiếm vị trí th hai sau họ Cúc (Asteraceae) ngành th c vật ũ hạt kín [30] Vì vậy, hình thái, cấu tạ ƣ ệ thống phân loại c a họ ạng ph c tạp ƣợc t Việt Nam quố ƣu ã , ó ộ ạng sinh học cao, phong lan Việt N ạng số loài, màu sắc ch ng loại v i 140 p 1000 r t vù rừ ú ƣ C Kontum, Pleiku, B ố uy t y C ú M T uật, P R , Đ Lạt, D L bố khu v c hẹp biệt lập Tr y quý 66 ọ ế p ĩ tƣơ ể ố ố y ƣ V ệt N G ột tr Ngoài tên l H H V , v ƣơ ƣ v t ƣ ỏ ẹ ƣ uộ , Đồ ởt k ết L H l ùb P ú ,L ất y ƣợ t ọ p Anh l H v ý 22 ỉ xuất H Trắ , H R u,…[1] Gấ ất y Vạ Đ ể ƣ Bắ Cạ , Bắ từ Đố ù t s , … L H ƣờ P áp trị H Tí , ó sƣơ u ỏ, t ƣờ ,t ó t k ả ữu ó H L ƣợ Á, ƣờ A ặ H Đố ọ ãy ú tƣơ ó ố N ãt ều ữ , Sơ L , T N uy , Vĩ uv Đ y, V ệt N ó ó H Đỏ, Đố Hài, chúng t ƣờ V ệt N v vù Hài Vân, lan Hài Vân Duyên, lan Hài Đố , Lan H t ế gi i, loài phân hài Vệ Nữ Sabot de Venus v Paphiopedilum tr ệ tạ V ệt N tr an Hài Lan Hài (Paphiopedilum) t Lady's slippers [1] H ệ t uộ bố , v.v [20] Loài lan số bố từ Ấ Độ, N w G t uộ p Bằ , Sa Pa, Lào Cai, Huế, Hả V , Quy N , ặc hữu c a Việt Nam ều t ƣờ H ù Đố từ ế b ƣợ t ị trƣờ Đố có hoa ƣợ tr ng b ểu .. .Thái Nguyên, 2020 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN - 2020 HỌC TRƢỜNGThái ĐẠINguyên HỌC KHOA TRẦN THỊ THU TRANG NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY LAN HÀI ĐỐM (Paphiopedilum concolor) Ở THÁI NGUYÊN... trình nhân giống lồi này, kết thu b ầu vài giố ƣH Hằng [2], Hài Hồng [3], Hài Bóng [4] Xuất p át từ ữ vấ ề t t ễ tr ú t tế ề t : ? ?Nghiên cứu phƣơng pháp nhân giống in vitro Lan Hài Đốm (Paphiopedilum. .. (Paphiopedilum concolor) Thái Nguyên? ?? Mục tiêu nghiên cứu Nhân giống thành công lan H p ƣơ p áp sả xuất ố Đốm (Paphiopedilum concolor bằ in vitro óp p ầ bả tồ v u ấp y ố 3 Nội dung nghiên cứu 1) Nghiên