Nghiên cứu nhân giống in vitro loài lan hài có nguy cơ tuyệt chủng paphiopedilum dianthum

BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - NGUYỄN THỊ MINH TRÂM NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO LOÀI LAN HÀI CÓ NGUY CƠ TUYỆT CHỦNG PAPHIOPEDILUM DIANTHUM LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI - 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - - NGUYỄN THỊ MINH TRÂM NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO LOÀI LAN HÀI CÓ NGUY CƠ TUYỆT CHỦNG PAPHIOPEDILUM DIANTHUM CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ : 60.42.02.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS HOÀNG THỊ NGA GS.TS NGUYỄN QUANG THẠCH HÀ NỘI - 2014 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu Các số liệu kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình nghiên cứu khác Tôi xin cam đoan thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2014 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Minh Trâm Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu để hoàn thành luận văn mình, nhận bảo tận tình, giúp đỡ quý báu thầy giáo, cô giáo, nhà khoa học, nhà quản lý, cán công nhân viên Viện sinh học nông nghiệp- Học viện Nông nghiệp Việt Nam Nhân dịp này, cho phép bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: TS Hoàng Thị Nga- Trưởng phòng Công nghệ sinh học Thực vật, Viện Sinh học nông nghiệp; GS TS Nguyễn Quang Thạch – Chủ tịch Hội đồng Khoa học Viện sinh học nông nghiệp– Học viện Nông nghiệp Việt Nam hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho suốt trình thực đề tài, đánh giá kết hoàn thành luận văn đồng thời bồi dưỡng cho kiến thức chuyên môn kinh nghiệm quý báu Với tình cảm sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn tới Ban lãnh đạo, cán công nhân viên Viện Sinh học nông nghiệp- Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ để hoàn thành luận văn Để hoàn thành luận văn này, xin bày tỏ lòng biết ơn tới Thầy giáo, Cô giáo, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Công nghệ sinh học Thực vật, Khoa Công nghệ sinh học –Học viện Nông nghiệp Việt Nam, ủng hộ, tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành thủ tục cần thiết để bảo vệ thành công luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn toàn thể gia đình, bạn bè, anh em, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích hoàn thành luận văn này! Hà Nội, ngày tháng năm 2014 Nguyễn Thị Minh Trâm Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục viết tắt vii Danh mục bảng vi Danh mục hình vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề: Mục đích yêu cầu Ý nghĩa đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Lan Hài: 1.1.1 Một số đặc điểm họ Lan (Orchidaceae) 1.1.2 Nguồn gốc quan hệ họ hàng lan Hài 1.2 Phân loại lan Hài 1.2.1 Phân loại học 1.2.2 Những nét chi Paphiopedilum 1.3 Thực trạng lan Hài giới Việt Nam 11 1.3.1 Sự phân bố Lan Hài giới 11 1.3.2 Sự phân bố lan Hài Việt Nam 13 1.3.3 Thực trạng Lan Hài Việt Nam 13 1.3.3 Một số nét lan Hài P.dianthum 19 1.4 Những nghiên cứu nhân giống lan Hài 22 1.4.1 Những nghiên cứu nhân giống lan Hài giới 22 1.4.2 Những nghiên cứu nhân giống Lan Hài Việt Nam 25 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii Chương VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Thời gian, địa điểm vật liệu nghiên cứu: 26 2.1.1 Thời gian tiến hành 26 2.1.2 Địa điểm: 26 2.1.3 Vật liệu nghiên cứu 26 2.1.4 Phạm vi nghiên cứu 26 2.2 Nội dung nghiên cứu: 26 2.2.1 Nội dung 26 3.2.2 Các tiêu theo dõi 32 2.3 Các phương pháp nghiên cứu: 27 2.3.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 27 2.3.2 Các bước tiến hành thí nghiệm 32 2.3 Phương pháp xử lý số liệu 32 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Nhóm thí nghiệm tạo vật liệu khởi đầu: 3.1.1 Xác định tuổi đến khả nảy mầm hạt loài Lan 33 HàiPaphiopedilum dianthum 3.1.2 33 Xác định môi trường thích hợp cho khả nảy mầm Paphiopedilum dianthum 3.1.3 34 Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng tới phát sinh hình thái hạt lan Hài Paphiopedilum dianthum sau nảy mầm 3.1.4 37 Nghiên cứu ảnh hưởng chất ĐTST đến phát sinh hình thái callus 40 3.2 Nhóm thí nghiệm nhân nhanh: 44 3.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng số chất ĐTST đến khả nhân nhanh Lan Hài P.dianthum 3.2.2 44 Nghiên cứu ảnh hưởng số dịch chiết dinh dưỡng bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả nhân nhanh Lan Hài 3.3 P.dianthum 49 Nhóm thí nghiệm tạo hoàn chỉnh 52 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv 3.3.1 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến khả sinh trưởng chồi 52 Nghiên cứu ảnh hưởng α-NAA đến rễ chồi 54 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 57 Kết luận: 57 Kiến nghị: 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC 62 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 3.1 Tỷ lệ nảy mầm hạt loài Lan HàiP dianthum 33 3.2 Tỷ lệ nảy mầm hạt lan Hài P.dianthum môi trường nuôi cấy 3.3 35 Ảnh hưởng 2,4-D tới phát sinh hình thái hạt lan Hài P.dianthum sau nảy mầm 3.4 37 Ảnh hưởng 2,4-D kết hợp với BA tới phát sinh hình thái hạt lan HàiP.diathum sau nảy mầm 38 3.5 Ảnh hưởng BA đến phát sinh hình thái callus 40 3.6 Ảnh hưởng TDZ đến phát sinh hình thái callus 41 3.7 Ảnh hưởng TDZ kết hợp với K tới phát sinh hình thái callus loài lan HàiP.diathum 3.8 42 Ảnh hưởng BA đến trình nhân nhanh PLBs chồi lan Hài P.dianthum 3.9 45 Ảnh hưởng TDZ đến trình nhân nhanh PLBs chồi lan Hài P.dianthum 3.10 46 Ảnh hưởng BA kết hợp với NAA đến trình nhân nhanh PLBs chồi lan HàiP.dianthum 3.11 47 Ảnh hưởng TDZ kết hợp với NAA đến trình nhân nhanh PLBs chồi lan Hài P.dianthum 3.12 48 Ảnh hưởng dịch chuối bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến trình nhân nhanh loài lan Hài P.dianthum 3.13 50 Ảnh hưởng dịch chuối kết hợp với khoai tây bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến trình nhân nhanh lan Hài loài lan Hài 51 P.dianthum 3.14 3.15 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến khả sinh trưởng chồi 53 Ảnh hưởng αNAA đến sinh trưởng rễ chồi 55 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1 Một số loài lan Hài Việt nam 18 1.2 Một số hình ảnh lan Hài P.dianthum 22 3.1 Hạt lan Hài P.dianthum sau 12 tuần theo dõi 34 3.2 Hạt lan Hài P.dianthum môi trường (sau 12 tuần ) 36 3.3 Sự phát sinh hình thái hạt lan HàiP.diathum sau nảy mầm (sau 12 tuần) 3.4 39 Một số hình ảnh phát sinh hình thái callus loài lan HàiP.diathum (sau 12 tuần nuôi cấy) 3.5 43 Ảnh hưởng chất ĐTST đến trình nhân nhanh PLBs chồi lan Hài P.dianthum (sau 12 tuần nuôi cấy) 3.6 49 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến khả sinh trưởng chồi loài lan Hài P.dianthum (sau 10 tuần nuôi cấy) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 54 Page vii DANH MỤC VIẾT TẮT Viết tắt Tên thông thường VW Vacin Went, 1949 MS Murashige Skoog, 1962 RE Robert Ernst, 1979 2,4-D acid 2,4 Dichlorophenoxy acetic TDZ thidiaruzone BA 6-Benzylaminopurine K α-NAA Kinetin α Naphtalenacetic acid ĐC Đối chứng CT Công thức CTTD Chỉ tiêu theo dõi TGTD Thời gian theo dõi CTTN Công thức thí nghiệm PLB Protocorm like body: Thể sinh chồi Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii ANH HUONG CUA TDZ DEN SU PHAT SINH HINH THAI CALLUS VARIATE V004 PLB LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 5411.36 1803.79 ****** 0.000 * RESIDUAL 5.45474 681843 -* TOTAL (CORRECTED) 11 5416.82 492.438 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLC FILE 15 20/ 9/14 20:29 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ DEN SU PHAT SINH HINH THAI CALLUS VARIATE V005 TLC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 11431.8 3810.61 ****** 0.000 * RESIDUAL 7.45015 931268 -* TOTAL (CORRECTED) 11 11439.3 1039.93 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 15 20/ 9/14 20:29 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ DEN SU PHAT SINH HINH THAI CALLUS MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 CALLUS 3.00000 17.9500 25.9833 26.8967 PLB 5.99667 43.8767 56.9700 58.7733 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp TLC 90.9700 37.8933 16.9900 13.9467 Page 70 SE(N= 3) 0.214313 0.476740 0.557156 5%LSD 8DF 0.538854 1.67460 1.81683 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 15 20/ 9/14 20:29 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ DEN SU PHAT SINH HINH THAI CALLUS F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CALLUS PLB TLC GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 18.458 12 41.404 12 39.950 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 10.010 0.37120 1.5 0.0000 22.191 0.82574 2.1 0.0000 32.248 0.96502 2.4 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CALLUS FILE 15 20/ 9/14 20:33 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ VA KINETIN DEN SU PHAT SINH HINH THAI CALLUS VARIATE V003 CALLUS LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 3133.43 1044.48 ****** 0.000 * RESIDUAL 2.91844 364805 -* TOTAL (CORRECTED) 11 3136.35 285.123 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE PLB FILE 15 20/ 9/14 20:33 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ VA KINETIN DEN SU PHAT SINH HINH THAI CALLUS VARIATE V004 PLB LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 71 ========================================================================= ==== CT$ 5338.63 1779.54 ****** 0.000 * RESIDUAL 5.23735 654668 -* TOTAL (CORRECTED) 11 5343.87 485.806 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLC FILE 15 20/ 9/14 20:33 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ VA KINETIN DEN SU PHAT SINH HINH THAI CALLUS VARIATE V005 TLC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 14677.3 4892.44 ****** 0.000 * RESIDUAL 6.57611 822014 -* TOTAL (CORRECTED) 11 14683.9 1334.90 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 15 20/ 9/14 20:33 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ VA KINETIN DEN SU PHAT SINH HINH THAI CALLUS MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 CALLUS 3.00000 31.9100 40.9767 43.8333 PLB 5.99667 59.8367 48.9733 52.7967 TLC 90.9700 7.97667 9.99333 12.9500 SE(N= 3) 0.348714 0.467143 0.523455 5%LSD 8DF 0.84712 1.10331 1.70693 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 15 20/ 9/14 20:33 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ VA KINETIN DEN SU PHAT SINH HINH THAI CALLUS Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 72 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CALLUS PLB TLC GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 29.930 12 41.901 12 30.472 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 16.886 0.60399 1.5 0.0000 22.041 0.80912 1.4 0.0000 36.536 0.90665 3.0 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNP FILE 18 20/ 9/14 20:48 :PAGE ANH HUONG CUA BA DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI VARIATE V003 HSNP LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 4.96772 993543 616.69 0.000 * RESIDUAL 12 193329E-01 161108E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 17 4.98705 293356 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 18 20/ 9/14 20:48 :PAGE ANH HUONG CUA BA DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI VARIATE V004 HSNC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 3.92589 785179 512.07 0.000 * RESIDUAL 12 184003E-01 153335E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 17 3.94429 232017 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 73 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 18 20/ 9/14 20:48 :PAGE ANH HUONG CUA BA DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 3 HSNP 1.32000 1.63667 2.04000 2.53333 2.86000 2.36000 HSNC 1.24000 1.81333 2.16667 2.40000 2.73000 2.07333 SE(N= 3) 0.231738E-01 0.226079E-01 5%LSD 12DF 0.174064E-01 0.146627E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 18 20/ 9/14 20:48 :PAGE ANH HUONG CUA BA DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNP HSNC GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 2.1250 18 2.0706 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.54162 0.40138E-01 4.7 0.0000 0.48168 0.39158E-01 3.7 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNP FILE 18 20/ 9/14 20:53 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI VARIATE V003 HSNP LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 4.94832 989663 662.22 0.000 * RESIDUAL 12 179335E-01 149445E-02 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 74 -* TOTAL (CORRECTED) 17 4.96625 292132 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 18 20/ 9/14 20:53 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI VARIATE V004 HSNC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 6.23716 1.24743 710.57 0.000 * RESIDUAL 12 210666E-01 175555E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 17 6.25823 368131 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 18 20/ 9/14 20:53 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 3 HSNP 1.32000 1.66667 2.07000 2.47000 2.94000 2.20333 HSNC 1.24000 1.55667 2.38000 2.64000 2.91000 2.33000 SE(N= 3) 0.223193E-01 0.241906E-01 5%LSD 12DF 0.167734E-01 0.165393E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 18 20/ 9/14 20:53 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 75 VARIATE HSNP HSNC GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 2.1117 18 2.1761 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.54049 0.38658E-01 3.8 0.0000 0.60674 0.41899E-01 3.6 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNP FILE 20 20/ 9/14 21: :PAGE ANH HUONG CUA BA VÀ NAA DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI VARIATE V003 HSNP LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 8.23764 2.05941 764.64 0.000 * RESIDUAL 10 269331E-01 269331E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 14 8.26457 590327 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 20 20/ 9/14 21: :PAGE ANH HUONG CUA BA VÀ NAA DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI VARIATE V004 HSNC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 5.44044 1.36011 635.58 0.000 * RESIDUAL 10 213996E-01 213996E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 14 5.46184 390131 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 20 20/ 9/14 21: :PAGE ANH HUONG CUA BA VÀ NAA DEN NHAN NHANH Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 76 PROTOCORM VA CHOI MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 3 HSNP 1.32000 2.90000 3.11667 3.43667 3.02000 HSNC 1.24000 2.79000 2.93000 2.58000 2.32000 SE(N= 3) 0.299628E-01 0.267080E-01 5%LSD 10DF 0.944138E-01 0.231580E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 20 20/ 9/14 21: :PAGE ANH HUONG CUA BA VÀ NAA DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNP HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.7587 15 2.3720 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.76833 0.51897E-01 1.9 0.0000 0.62461 0.46260E-01 3.9 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNP FILE 20 20/ 9/14 21: :PAGE ANH HUONG CUA TDZ VÀ NAA DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI VARIATE V003 HSNP LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 6.50760 1.62690 661.34 0.000 * RESIDUAL 10 246001E-01 246001E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 14 6.53220 466586 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 20 20/ 9/14 21: Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 77 :PAGE ANH HUONG CUA TDZ VÀ NAA DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI VARIATE V004 HSNC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 8.66883 2.16721 772.15 0.000 * RESIDUAL 10 280672E-01 280672E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 14 8.69689 621207 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 20 20/ 9/14 21: :PAGE ANH HUONG CUA TDZ VÀ NAA DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 3 HSNP 1.32000 2.92000 3.08000 2.96000 2.87000 HSNC 1.24000 2.99333 3.22667 3.16667 3.13667 SE(N= 3) 0.286357E-01 0.305872E-01 5%LSD 10DF 0.230922E-01 0.193812E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 20 20/ 9/14 21: :PAGE ANH HUONG CUA TDZ VÀ NAA DEN NHAN NHANH PROTOCORM VA CHOI F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNP HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.6300 15 2.7527 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.68307 0.49599E-01 3.6 0.0000 0.78817 0.52979E-01 3.6 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 78 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNP FILE 20 20/ 9/14 21:10 :PAGE ANH HUONG CUA DICH CHIET CHUOI DEN NHAN NHANH VARIATE V003 HSNP LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 181733E-01 454333E-02 7.33 0.005 * RESIDUAL 10 620001E-02 620001E-03 -* TOTAL (CORRECTED) 14 243733E-01 174095E-02 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 20 20/ 9/14 21:10 :PAGE ANH HUONG CUA DICH CHIET CHUOI DEN NHAN NHANH VARIATE V004 HSNC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 337067E-01 842667E-02 11.19 0.001 * RESIDUAL 10 753332E-02 753332E-03 -* TOTAL (CORRECTED) 14 412400E-01 294571E-02 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 20 20/ 9/14 21:10 :PAGE ANH HUONG CUA DICH CHIET CHUOI DEN NHAN NHANH MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 HSNP 1.26667 1.22667 1.31000 HSNC 1.38000 1.42667 1.52000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 79 3 1.32333 1.30000 1.45333 1.48000 SE(N= 3) 0.143759E-01 0.158465E-01 5%LSD 10DF 0.212990E-01 0.109328E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 20 20/ 9/14 21:10 :PAGE ANH HUONG CUA DICH CHIET CHUOI DEN NHAN NHANH F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNP HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.2853 15 1.4520 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.41725E-010.24900E-01 3.6 0.0053 0.54274E-010.27447E-01 3.9 0.0012 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNP FILE 20 20/ 9/14 21:14 :PAGE ANH HUONG CUA DICH CHIET CHUOI VA KHOAI TAY DEN NHAN NHANH VARIATE V003 HSNP LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 170693 426733E-01 60.96 0.000 * RESIDUAL 10 700000E-02 700000E-03 -* TOTAL (CORRECTED) 14 177693 126924E-01 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 20 20/ 9/14 21:14 :PAGE ANH HUONG CUA DICH CHIET CHUOI VA KHOAI TAY DEN NHAN NHANH VARIATE V004 HSNC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 80 ========================================================================= ==== CT$ 143507 358767E-01 47.62 0.000 * RESIDUAL 10 753333E-02 753333E-03 -* TOTAL (CORRECTED) 14 151040 107886E-01 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 20 20/ 9/14 21:14 :PAGE ANH HUONG CUA DICH CHIET CHUOI VA KHOAI TAY DEN NHAN NHANH MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 3 HSNP 1.26667 1.38667 1.46000 1.50333 1.58000 HSNC 1.38000 1.67667 1.53000 1.49333 1.46000 SE(N= 3) 0.152753E-01 0.158465E-01 5%LSD 10DF 0.231329E-01 0.429328E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 20 20/ 9/14 21:14 :PAGE ANH HUONG CUA DICH CHIET CHUOI VA KHOAI TAY DEN NHAN NHANH F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNP HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.4393 15 1.5080 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.11266 0.26458E-01 2.3 0.0000 0.10387 0.27447E-01 1.6 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CC FILE 11 3/ 9/14 20:59 :PAGE ANH HUONG CUA NEN MOI TRUONG DEN SINH TRUONG VARIATE V003 CC Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 81 LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 3.00472 600943 244.18 0.000 * RESIDUAL 12 295334E-01 246111E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 17 3.03425 178485 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE SL FILE 11 3/ 9/14 20:59 :PAGE ANH HUONG CUA NEN MOI TRUONG DEN SINH TRUONG VARIATE V004 SL LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 112400 224800E-01 7.03 0.003 * RESIDUAL 12 384000E-01 320000E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 17 150800 887059E-02 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 11 3/ 9/14 20:59 :PAGE ANH HUONG CUA NEN MOI TRUONG DEN SINH TRUONG MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 3 CC 3.66000 3.73000 4.71333 4.33667 4.25000 3.62000 SL 4.51000 4.49667 4.68000 4.53667 4.46667 4.43000 SE(N= 3) 0.286421E-01 0.326599E-01 5%LSD 12DF 0.232561E-01 0.100636 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 11 3/ 9/14 20:59 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 82 :PAGE ANH HUONG CUA NEN MOI TRUONG DEN SINH TRUONG F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CC SL GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 4.0517 18 4.5200 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.42248 0.49610E-01 3.2 0.0000 0.94184E-010.56569E-01 3.2 0.0029 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE C.CAO FILE 24/ 8/14 9:49 :PAGE ANH HUONG CUA NAA DEN KHA NANG RA RE VARIATE V003 C.CAO LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 1.63900 409750 202.85 0.000 * RESIDUAL 10 201999E-01 201999E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 14 1.65920 118514 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLA FILE 24/ 8/14 9:49 :PAGE ANH HUONG CUA NAA DEN KHA NANG RA RE VARIATE V004 SLA LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 995867 248967 229.11 0.000 * RESIDUAL 10 108667E-01 108667E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 14 1.00673 719095E-01 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 83 BALANCED ANOVA FOR VARIATE S.RE FILE 24/ 8/14 9:49 :PAGE ANH HUONG CUA NAA DEN KHA NANG RA RE VARIATE V005 S.RE LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN ========================================================================= ==== CT$ 3.40567 851417 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 813312E-02 813312E-03 -* TOTAL (CORRECTED) 14 3.41380 243843 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 24/ 8/14 9:49 :PAGE ANH HUONG CUA NAA DEN KHA NANG RA RE MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS C.CAO SLA S.RE 4.03333 4.10333 2.56000 4.61333 4.57333 2.79667 3 4.86000 4.75333 3.52333 4.90333 4.78000 3.67000 4.89000 4.75667 3.71000 SE(N= 3) 0.259486E-01 0.190322E-01 0.164652E-01 5%LSD 10DF 0.227650E-01 0.599710E-01 0.218826E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 24/ 8/14 9:49 :PAGE ANH HUONG CUA NAA DEN KHA NANG RA RE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE C.CAO SLA S.RE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | 15 4.6600 0.34426 0.44944E-01 3.2 0.0000 15 4.5933 0.26816 0.32965E-01 2.9 0.0000 15 3.2500 0.49380 0.28519E-01 3.6 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 84 [...]... Trên cơ sở đó, tôi tiến hành đề tài: Nghiên cứu nhân giống in vitroloài lan Hài có nguy cơ tuyệt chủng Paphiopedilum dianthum 2 Mục đích và yêu cầu * Mục đích - Nhân giống in vitrothành cây loài lan Hài Paphiopedilum dianthum - Xác định ảnh hưởng của một số chất điều tiết sinh trưởng, chất hữu cơ bổ sung vào môi trường nuôi cấy làm cơ sở cho việc xây dựng qui trình nhân giống in vitroloài lan Hài Paphiopedilum. .. của cây in vitroloài lan Hài P .dianthum 3 Ý nghĩa của đề tài * Ý nghĩa khoa học: - Kết quả nghiên cứu sẽ đưa ra được một qui trình nhân giống loài lan Hài P .dianthum bằng phương pháp nhân giống in vitro - Đánh giá được tác động của một chất điều tiết sinh trưởng trong nhân giống hoa lan P .dianthum - Bổ sung nguồn tài liệu tham khảo cho công tác nghiên cứu, giảng dạy và sản xuất cây hoa lan P .dianthum. .. nghiệp Page 24 1.4.2 Những nghiên cứu về nhân giống cây Lan Hài ở Việt Nam Về nhân giống lan Hài ở Việt Nam còn rất hạn chế, chỉ có một vài tác giả thành công trên đối tượng lan Hài Chẳng hạn như: Tại Phân Viện Sinh Học Đà Lạt, lan Hài Đỏ (Hồng Hài) – Một giống lan quý hiếm được nhân giống thành công bằng phương pháp ứng dụng công nghệ tế bào thực vật Sau nhiều lần thử nghiệm nhân giống, từ hai năm qua,... Paphiopedilum dianthum * Yêu cầu - Xác định được tuổi quả thích hợp để đưa vào nhân giống loài lan Hài P .dianthum - Xác định được môi trường nền thích hợp cho việc vào mẫu và nhân nhanh loài lan Hài Paphiopedilum dianthum - Xác định được chất điều tiết sinh trưởng và nồng độ tối ưu bổ sung vào môi trường nhân nhanh giống loài lan Hài P .dianthum - Xác định được môi trường tối ưu nhất cho sinh trưởng,... xay nhuyễn bằng máy xay sinh tố - Các chất điều tiết sinh trưởng 2.1.4 Phạm vi nghiên cứu Đề tài chỉ tập trung vào loài Lan Hài Paphiopedilum dianthum 2.2 Nội dung nghiên cứu: 2.2.1 Nội dung - Nghiên cứu tạo vật liệu khởi đầu: + Xác định tuổi quả thích hợp để làm vật liệu khởi đầu cho quá trình nhân giống in vitro + Xác định nền môi trường thích hợp cho quá trình nhân giống in vitro Học viện Nông nghiệp... các nhà nghiên cứu nhờ một loạt phát hiện mới và lạ về lan Hài được công bố Đầu tiên là Hài hê len (P.helenae), loài lan Hài nhỏ hoa vàng có ở Cao Bằng Tiếp đến là một loạt những loài lan Hài khác cũng từ khu vực núi đá vôi Đông Bắc như Hài hằng (P.hangianum) cho hoa trắng, Hài hương lan (P.emersonii) hoa trắng vàng, Hài trần liên (P.tranlienianum) hoa nâu Trong cuốn sách tổng quan về lan Hài Việt... (P.hangianum) và Hài Tam Đảo (P.gratrixianum) bằng cách gieo hạt của các loài lan này trong nuôi cấy in vitro Hoàng Thị Giang và cộng sự (2010) đã nghiên cứu nhân giống in vitrogiống lan Hài Hằng (Paphiopedilum hangganumperner gurss) từ nguồn nguy n liệu ban đầu là hạt lấy từ quả 6 – 10 tháng tuổi Môi trường nuôi cấy là RE cho tỷ lệ hạt nảy mầm cao nhất (58 – 67%) Môi trường nhân nhanh là môi trường RE có bổ... thiệu 18 loài lan Hài và 4 loài lai tự nhiên có ở Việt Nam Đến năm 2007, Sách Đỏ Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 14 Việt Nam với phiên bản mới cũng đã đưa vào 12 loài lan Hài bản địa có giá trị khoa học cao cần được bảo vệ Trong một nghiên cứu của mình năm 2003, Averyanov L., đã cảnh báo tiếp theo sự tuyệt chủng của lan HàiViệt sẽ là một loạt các loài lan Hài khác... 1.4 Những nghiên cứu về nhân giống cây lan Hài 1.4.1 Những nghiên cứu về nhân giống cây lan Hài trên thế giới Vì hạt lan Hài quá nhỏ, không chứa dữ liệu và chỉ có một phôi chưa phân hóa, nên không thể phát triển theo một phương cách bình thường được Tỷ lệnảy mầm trong tự nhiên lại rất thấp do đó các loài lan Hài rất hiếm dạng dại (Arditti and Enst, 1993) Sự cộng sinh của hạt lan chín trong tự nhiên thường... liệu P affine, P datalanse, P villosum var boxalli (nguồn: www.thiennhien.net) Lan Hài vàng P villosum Lan Hài đài cuộn P appletonianum Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 16 Lan Hài kim P.armeniacum Lan Hài vân P.callosum Lan Hài mã lị P malipoense Lan Hài đốm P gratrixianum Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 17 Lan Hài helen