1435 nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro cây diệp tài hồng lá đỏ (ludwigia repens rubin) và cây diệp tài hồng lá táo (ludwigia natans)

Nguyễn Thị Điệp tgk TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY DIỆP TÀI HỒNG LÁ ĐỎ (LUDWIGIA REPENS RUBIN) VÀ CÂY DIỆP TÀI HỒNG LÁ TÁO (LUDWIGIA NATANS) NGUYỄN THỊ ĐIỆP*, KHA NỮ TÚ UYÊN**, VƯƠNG THỊ HỒNG LOAN , NGUYỄN THỊ HỒNG TÚ**, PHẠM ĐÌNH DŨNG* * TĨM TẮT Đề tài nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống in vitro Diệp tài hồng đỏ (Ludwigia repens Rubin) Diệp tài hồng táo (Ludwigia natans) từ đốt thân Kết thu được, Diệp tài hồng đỏ, mơi trường thích hợp để tạo chồi từ đốt thân mơi trường MS có bổ sung nồng độ TDZ 0,07 mg/l NAA 0,01 mg/l, rễ cảm ứng mơi trường ½ MS tỉ lệ sống vườn ươm đạt 98% Đối với Diệp tài hồng táo, mơi trường thích hợp để tạo chồi từ đốt thân môi trường MS có bổ sung nồng độ TDZ 0,2 mg/, rễ cảm ứng mơi trường ½ MS tỉ lệ sống ngồi vườn ươm đạt 96% Từ khóa: nhân giống in vitro, Diệp tài hồng đỏ, Diệp tài hồng táo ABSTRACT In vitro micropropagation of Ludwigia repens Rubin and Ludwigia natans This research investigates the protocol for in vitro propagation of Ludwigia repens Rubin and Ludwigia natans from their dormant buds The results showed that, the suitable medium for proliferation of dormant buds of L repens Rubin was MS medium supplemented with TDZ 0.07 mg/l and NAA 0.01 mg/l,roots were induced from buds on ½ MS medium and survival rate of plantlets in nursery garden was 98% For Ludwigia natans,the suitable medium for proliferation of dormant buds was MS medium supplemented with TDZ 0.2 mg/l, roots were induced from buds on ½ MS medium and survival rate of plantlets in nursery garden was 96% Keywords: In vitro propagation, Ludwigia repens Rubin, Ludwigia natans Mở đầu Trong không gian sống chật hẹp, bể kính ni cá cảnh kết hợp với số thủy sinh giúp tăng thêm tươi mát, hấp dẫn màu sắc, dễ chịu cho người Mảng màu xanh tươi mát thủy sinh làm người có cảm giác gần gũi với thiên nhiên đồng thời làm dịu căng thẳng sống đại * ThS, Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao, TPHCM; Cử nhân, Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao, TPHCM; ** Trong ngành nông nghiệp nuôi trồng thủy sản, Diệp tài hồng giống thủy sinh quan trọng, từ lâu người chơi ưa chuộng Cây Diệp tài hồng thuộc họ Onargaceae, thân thảo sống lưỡng cư, tìm thấy chủ yếu phía nam Bắc Mĩ Chi Ludwigia phân bố rộng Mĩ, châu Phi, châu Á Úc sử dụng chủ yếu để lọc làm nước kênh mương hồ Một số loài thuộc chi Ludwigia thường sử dụng làm rau, thủy sinh cảnh, nguồn phấn hoa cho ong mật, thức ăn cho cá dùng làm thuốc (Ozturk cộng sự, 2004) [5] Với lượn sóng hấp dẫn dễ trồng làm cho lồi trở nên phổ biến Cây tạo màu đẹp tương phản với màu xanh bể thủy sinh Nên trồng theo khóm lớn để tăng hiệu ứng trang trí cắt tỉa thường xuyên để khỏe mạnh Tuy nhiên thiếu phương pháp nhân giống hiệu quả, Diệp tài hồng bị thu hái bừa bãi từ tự nhiên để cung cấp cho thị trường thủy sinh Nhưng luật pháp cấm sưu tập thủy sinh từ tự nhiên điều làm giảm nguồn thủy sinh cảnh cung cấp cho thị trường Nhằm đáp ứng nhu cầu cung cấp giống trì nguồn cung cấp bền vững thủy sinh ổn định với số lượng lớn phương pháp ni cấy mơ in vitro xem phương pháp thích hợp Nghiên cứu nhằm xây dựng quy trình nhân giống in vitro Diệp tài hồng đỏ (Ludwigia repens Rubin) Diệp tài hồng táo (Ludwigia natans), nhằm tạo nguồn giống chất lượng cao, đồng với số lượng lớn đáp ứng nhu cầu thị trường Vật liệu, phương pháp 2.1 Vật liệu Đốt thân mang mầm ngủ Diệp tài hồng đỏ (Ludwigia repens Rubin) Diệp tài hồng táo (Ludwigia natans) 2.2 Phương pháp Điều kiện nuôi cấy: Nhiệt độ phòng sáng 26 ± oC, ẩm độ tương đối phòng 60 ± 5%, thời gian chiếu sáng 12 h/ngày, cường độ ánh sáng 2000 lux Tất môi trường nuôi cấy in vitro có pH 5,8 hấp khử trùng 121oC; atm 15 phút Phương pháp khử trùng mẫu đốt thân diệp tài hồng đỏ diệp tài hồng táo: Các mẹ sinh trưởng khỏe mạnh loại bỏ rễ, đốt thân có mang mầm ngủ rửa nước máy Tiếp theo mẫu rửa lắc nước pha xà phòng 30 phút rửa nước cất vô trùng lần Đưa mẫu vào tủ cấy tiến hành khử trùng mẫu cách rửa với nước cất vô trùng lần, lắc cồn 70 độ, lắc mẫu 30 giây, rửa lại lần nước cất vô trùng Khử trùng mẫu theo tỉ lệ javel: nước = 1:3 (javel Mĩ Hảo 5%), bổ sung giọt Tween 20 nhằm nâng cao hiệu khử trùng, lắc mẫu Sau 20 phút rửa mẫu nước cất vô trùng - lần Đốt thân loại bỏ phần bị hoại tử cắt thành đoạn khoảng 0,5cm Cấy mẫu vào mơi trường MS có bổ sung 20g/l sucrose 8g/lagar Mẫu thu sau tuần nuôi cấy sử dụng làm nguồn vật liệu ban đầu cho thí nghiệm Các thí nghiệm bố trí sau: Nghiên cứu ảnh hưởng TDZ kết hợp với NAA lên nhân nhanh chồi Diệp tài hồng đỏ Mơi trường khống MS (Murashige Skoog, 1962) có bổ sung đường saccharose 20g/l, agar 8g/l nồng độ chất điều hòa sinh trưởng TDZ là: 0; 0,01; 0,03; 0,05; 0,07 0,1 mg/l kết hợp với nồng độ NAA là: 0; 0,01 0,05 mg/l Thí nghiệm bố trí theo kiểu hai yếu tố hịan tồn ngẫu nhiên với 18 nghiệm thức, với lần lặp lại, lần lặp gồm bình ni cấy Theo dõi tiêu sau 45 ngày ni cấy: Số chồi (chồi/mẫu), hình thái chồi (đánh giá cảm quan) Nghiên cứu ảnh hưởng TDZ kết hợp với NAA lên nhân nhanh chồi Diệp tài hồng táo Mơi trường khống MS (Murashige Skoog, 1962) có bổ sung đường saccharose 20g/l, agar 8g/l nồng độ chất điều hòa sinh trưởng độ TDZ là: 0; 0,05; 0,1; 0,2 0,3 mg/l kết hợp với nồng độ NAA là: 0; 0,05 0,1 mg/l Thí nghiệm bố trí theo kiểu hai yếu tố hịan tồn ngẫu nhiên với 15 nghiệm thức, với lần lặp lại, lần lặp gồm bình ni cấy Theo dõi tiêu sau 45 ngày ni cấy: Số chồi (chồi/mẫu), hình thái chồi (đánh giá cảm quan) Nghiên cứu ảnh hưởng IBA lên rễ tạo Diệp tài hồng đỏ Diệp tài hồng táo hịan chỉnh Mơi trường khống ½ MS (Murashige Skoog, 1962) có bổ sung đường saccharose 20g/l, agar 8g/l nồng độ chất điều hòa sinh trưởng độ IBA là: 0; 0,3; 0,5; 1,0; 1,5 2,0 mg/l, (mơi trường khống theo Ozturk, 2004) Thí nghiệm bố trí theo kiểu yếu tố hịan tồn ngẫu nhiên với nghiệm thức, với lần lặp lại, lần lặp gồm bình ni cấy Theo dõi tiêu sau 45 ngày ni cấy: Tỉ lệ chồi hình thành rễ (%), số rễ (rễ/chồi), chiều dài rễ (cm), hình thái rễ (đánh giá cảm quan) Chăm sóc Diệp tài hồng đỏ Diệp tài hồng táo giai đoạn hậu nuôi cấy mô Khảo sát khả thích ứng Diệp tài hồng đỏ Diệp tài hồng táo in vitro vườn ươm Chỉ tiêu theo dõi sau tuần là: Tỉ lệ sống (%) hình thái hậu cấy mô Kĩ thuật trồng in vitro vườn ươm: Cây Diệp tài hồng đỏ Diệp tài hồng táo in vitro đồng kích thước có chiều cao trung bình - cm, trồng chất đất thịt: đất sét: phân trùn = 5:1:1, bể kính kích thước 1,2m x 0,6m x 0,6m Tổng số mang trồng 100 Điều kiện trồng chăm sóc: Các trồng chăm sóc đồng yếu tố: ánh sáng (2000 lux), CO 18 mg/l/giờ, thời gian chiếu sáng 10h/ngày, chất lượng nước, chất Quản lí chăm sóc: thay nước ngày/1 lần Xử lí số liệu: Số liệu thu thập xử lí thống kê chương trình Statgraphic 3.0 Đọc kết dựa vào bảng ANOVA, bảng trung bình bảng so sánh khác biệt nghiệm thức (bằng phương pháp Duncan) Kết thảo luận 3.1 Đối với giống Diệp tài hồng đỏ • Giai đoạn nhân nhanh Trên môi trường nhân nhanh chồi với nồng độ TDZ NAA khác nhận thấy thời gian đầu tất mẫu cảm ứng với mơi trường, mơ phồng lên có tái sinh chồi từ đốt thân Nếu mẫu tiếp tục ni mơi trường bổ sung TDZ NAA mẫu không tiếp tục cảm ứng chết Đặc biệt nghiệm thức bổ sung nồng độ TDZ cao 0,1 mg/l, mẫu cảm ứng nhanh sau bị chết nhanh Điều giải thích theo Bùi Trang Việt (2002) [1] cytokinin làm cho mô phồng lên, cảm ứng phát triển chồi nách chồi bất định, điều khiển phân chia tế bào Trong phát triển chồi, cytokinin phối hợp với auxin giúp tăng trưởng chồi non khởi phát tạo mô phân sinh chồi từ nhu mô Tuy nhiên nồng độ cao, auxin cản trở phát triển phát thể chồi chồi nách vừa thành lập Do ni cấy đốt thân Diệp tài hồng đỏ in vitro mơi trường thí nghiệm sau ngày ni cấy mẫu chuyển sang mơi trường ½ MS khơng bổ sung chất điều hịa sinh trưởng nuôi cấy 45 ngày, thu kết tái sinh chồi Bảng 1, Hình Kết thu cho thấy nồng độ TDZ 0,07 mg/l NAA 0,01 mg/l có số chồi tạo thành cao với 8,56 chồi/mẫu, chồi phát triển tốt, màu xanh tím có rễ nhiều Bảng Kết ảnh hưởng nồng độ TDZ NAA lên nhân chồi Diệp tài hồng đỏ Nồng độ NAA (mg/l) (B) Nồng độ TDZ (mg/l) (A) 0,0 0,01 0,03 0,05 0,07 0,1 Trung bình yếu tố B 0,0 2,74 3,56 3,47 3,33 6,22 2,93 3,71b 0,01 0,05 2,42 4,27 4,31 5,16 4,69 4,9a 2,49 2,51 2,82 3,53 8,54 5,96 5,25 3,76b Trung bình yếu tố A 2,55d Ftính A 95,52** B 38,96** Ftính Ftính AB 9,0** CV (%) 11,07 3,44c 3,53c 4,0b 6,91a 4,29b Ghi chú: *: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,05; **: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,01; ns: khơng có khác biệt; a, b, c, d: khác biệt nghiệm thức theo trắc nghiệm phân hạng Duncan a b c d e f Hình Ảnh hưởng nồng độ TDZ NAA lên nhân chồi Diệp tài hồng đỏ, đo 0,5 cm a TDZ mg/l NAA 0,01 mg/l; d TDZ 0,05 mg/l NAA 0,01 mg/l b TDZ 0,01 mg/l NAA 0,01 mg/l; e TDZ 0,07 mg/l NAA 0,01 mg/l c TDZ 0,03 mg/l NAA 0,01 mg/l; f TDZ 0,1 mg/l NAA 0,01 mg/l Theo Ozturk cộng (2004) [5], mơi trường thích hợp để nhân nhanh Diệp tài hồng môi trường MS có bổ sung 0,05 mg/l TDZ 0,1 mg/l NAA, đỉnh sinh trưởng cho tái sinh chồi tốt (số chồi đạt 12,31 chồi/mẫu), sau đến chồi nách thứ thứ hai (số chồi tái sinh tương đương 10 7,56 chồi/mẫu), tái sinh chồi thấp sử dụng chồi nách thứ ba thứ tư để nhân giống (số chồi tái sinh 5,12 chồi/mẫu) • Giai đoạn tạo rễ Diệp tài hồng đỏ Các chồi có chiều cao từ - cm nuôi cấy mơi trường có bổ sung nồng độ IBA khác nhau, sau 45 ngày ni cấy nghiệm thức đối chứng khơng có bổ sung IBA, chồi có số rễ chiều dài rễ cao so với nghiệm thức có bổ sung IBA, tương ứng 13,8 rễ/chồi 2,56 cm (bảng 2) Quan sát thấy rễ tạo thành tuần sau cấy sau phát triển thành rễ chùm, khỏe gốc rễ màu đen Bảng Kết ảnh hưởng nồng độ IBA lên rễ tạo Diệp tài hồng đỏ sau 45 ngày nuôi cấy IBA (mg/l) Tỉ lệ chồi Số rễ tạo rễ (%) (rễ/chồi) dài Chiều rễ Hình thái rễ (cm) 100 13,8a 2,56a Rễ chùm, khỏe gốc rễ khơng có màu đen 0,3 100 8,35b 1,69b Rễ nhỏ, yếu 0,7 100 8,0b 1,26c Rễ nhỏ, yếu 100 c Rễ nhỏ, có nhiều rễ thứ cấp 1,0 1,5 2,0 100 100 1,02 de 5,7 d 1,22 cd Rễ nhỏ, yếu gốc rễ có màu đen 5,4 d e Rễ nhỏ, yếu gốc rễ có màu đen 6,8 0,9 Ftính 157,87** 53,53** CV (%) 6,11 10,1 Ghi chú: *: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,05; **: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,01; ns: khơng có khác biệt; a, b, c: khác biệt nghiệm thức theo trắc nghiệm phân hạng Duncan Kết phù hợp với nghiên cứu Ozturk cộng (2004) [5], báo cáo chồi Diệp tài hồng đỏ mơi trường ½ MS khơng có chất điều hịa sinh trưởng dùng để tạo rễ Những có rễ hồn chỉnh chuyển môi trường nước nuôi thủy sinh với tỉ lệ sống 100% Theo Stanly cộng (2011) [6], nghiên cứu hai loài Cryptocoryne wendtii Cryptocoryne becktti kết hai loài tiêu thảo có khả hình thành rễ mơi trường MS lỏng khơng có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng, in vitro có thịt hệ mạch phát triển bình thường, 95% in vitro sống khơng có xuất hình thái bất thường trồng điều kiện thủy sinh a b c d e f Hình Ảnh hưởng nồng độ IBA lên rễ tạo diệp tài hồng đỏ sau 45 ngày nuôi cấy, đo cm a IBA 0,0 mg/l; b IBA 0,3 mg/l; c IBA 0,5 mg/l; d IBA 1,0 mg/l; e IBA 1,5 mg/l; f IBA 2,0 mg/l • Chăm sóc Diệp tài hồng đỏ giai đoạn hậu nuôi cấy mô Các Diệp tài hồng đỏ in vitro có rễ phát triển, rễ khỏe, cao từ – cm đem trồng ngồi hồ thủy sinh để khảo sát khả thích ứng in vitro với điều kiện môi trường nước Tổng số mang vườn trồng 100 Sau tuần trồng môi trường nước, quan sát có 98% Diệp tài hồng đỏ phát triển bình thường Hình Cây Diệp tài hồng đỏ môi trường nước sau tháng nuôi trồng 3.2 Đối với giống Diệp tài hồng táo  Giai đoạn nhân nhanh chồi Nghiệm thức có bổ sung nồng độ TDZ 0,2 mg/l NAA 0,0 mg/l có số chồi tạo thành cao với 5,89 chồi/mẫu, chồi thu dạng cụm chồi, chồi khỏe chồi có nhiều rễ phát triển (Bảng 3, Hình 4) Trong nghiên cứu Stanly cộng (2011) [6] sử dụng chồi đỉnh để nhân giống hai loài Tiêu thảo Cryptocoryne wendtii Cryptocoryne becktti Kết cho thấy hai loài Tiêu thảo có khả hình thành chồi mơi trường MS có bổ sung 0,5mg/l BA 0,2 mg/l IBA lỏng khơng có bổ sung agar (số chồi Cryptocoryne wendtii đạt 9,4 chồi, số chồi Cryptocoryne becktti đạt 8,8 chồi) Bảng Kết ảnh hưởng nồng độ TDZ NAA lên nhân chồi Diệp tài hồng táo sau 45 ngày nuôi cấy Nồng độ NAA (mg/l) (B) Nồng độ TDZ (mg/l) (A) 0,0 0,05 0,1 0,2 0,3 TB yếu tố B 0,05 1,78 1,11 1,44 1,22 2,11 1,67 5,89 1,11 0,89 1,11 2,42a 1,24b 0,1 1,11 1,78 1,11 1,0 1,0 1,2b TB yếu tố A 1,33c 1,48bc 1,63b 2,67a 1,0d 0,0 Ftính A Ftính B Ftính AB CV (%) 60,81** 123,36** 75,36** 14,85 Ghi chú: **: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,01; ns: khơng có khác biệt; a, b, c, d: khác biệt nghiệm thức theo trắc nghiệm phân hạng Duncan a b d c e Hình Ảnh hưởng nồng độ TDZ NAA lên hình thái chồi Diệp tài hồng táo sau 45 ngày nuôi cấy, đo 0,5 cm a TDZ 0,0 mg/l NAA 0,0 mg/l; d TDZ 0,2 mg/l NAA 0,0 mg/l b TDZ 0,05 mg/l NAA 0,0 mg/l; e TDZ 0,3 mg/l NAA 0,0 mg/l c TDZ 0,1 mg/l NAA 0,0 mg/l;  Sự tạo rễ giống Diệp tài hồng táo Các chồi có chiều cao từ - cm ni cấy mơi trường có bổ sung nồng độ IBA khác nhau, sau 45 ngày nuôi cấy nghiệm thức đối chứng khơng có bổ sung IBA, chồi có số rễ chiều dài rễ cao so với nghiệm thức có bổ sung IBA, tương ứng 6,11 rễ/chồi 9,94 cm Chồi nghiệm thức có rễ dài khỏe Bảng Kết ảnh hưởng nồng độ IBA lên rễ tạo Diệp tài hồng táo sau 45 ngày nuôi cấy IBA (mg/l) Tỉ lệ chồi tạo rễ (%) Số rễ (rễ/mẫu) Chiều dài rễ (cm) Hình thái rễ 100 6,11a 9,94a Rễ dài, khỏe 0,3 100 5,0b 6,93b Rễ nhỏ, dài c b Rễ nhỏ, dài yếu Rễ nhỏ, dài yếu 0,7 100 3,67 5,94 1,0 100 3,44cd 2,36c 100 d 1,5 2,0 100 3,11 e 3,0 c c 2,33 2,32 Ftính 76,99** 81,64** CV (%) 6,86 11,6 Rễ nhỏ, dài yếu Rễ nhỏ, dài yếu Ghi chú: *: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,05; **: khác biệt có ý nghĩa mức p ≤ 0,01; ns: khơng có khác biệt; a, b, c: khác biệt nghiệm thức theo trắc nghiệm phân hạng Duncan Theo Kane cộng (1999) [2] tạo Cryptocoryne wendtii rễ mà khơng bổ sung chất điều hịa sinh truởng Theo Matthew cộng (2000) [4] thu 100% rễ mơi trường khơng có chất điều hịa sinh truởng, bổ sung 0,2 % than hoạt tính cải thiện rễ Tuy nhiên, theo Karatas cộng (2013) [3] nghiên cứu tái sinh chồi thủy sinh Bacopa Monnieri L Pennell đốt thân Các chồi tạo rễ mơi trường MS có bổ sung IBA (0,25 mg/l, 0,5 mg/l 1,0 mg/l IBA) a b d e c f Hình Ảnh hưởng nồng độ IBA lên rễ tạo Diệp tài hồng táo sau 45 ngày nuôi cấy, đo cm a IBA 0,0 mg/l; d IBA 0,1 mg/l; b IBA 0,03 mg/l; e IBA 0,15 mg/l; c IBA 0,05 mg/l; f IBA 0,2 mg/l  Chăm sóc Diệp tài hồng táo giai đoạn hậu nuôi cấy mô Các Diệp tài hồng táo in vitro có rễ dài khỏe, cao từ – cm đem trồng môi trường nước để khảo sát khả thích ứng in vitro Tổng số mang trồng 100 Sau tuần trồng môi trường nước, tỉ lệ sống Diệp tài hồng táo đạt 96 % Cây có hình thái bình thường, hình dạng sinh trưởng bình thường, khơng có biến dị Hình Cây Diệp tài hồng táo môi trường nước sau tháng nuôi trồng Kết luận Đối với Diệp tài hồng đỏ, mơi trường thích hợp để tạo chồi từ đốt thân mơi trường MS có bổ sung nồng độ TDZ 0,07 mg/l NAA 0,01 mg/l Mơi trường ½ MS mơi trường thích hợp để cảm ứng rễ tạo hoàn chỉnh tỉ lệ sống in vitro ngồi mơi trường nước 98% Đối với Diệp tài hồng táo, mơi trường thích hợp để tạo chồi từ đốt thân mơi trường MS có bổ sung nồng độ TDZ 0,2 mg/l Mơi trường ½ MS khơng có bổ sung IBA mơi trường thích hợp để cảm ứng rễ tạo hoàn chỉnh tỉ lệ sống in vitro ngồi mơi trường nước 96% TÀI LIỆU THAM KHẢO Bùi Trang Việt (2002), Sinh lí thực vật đại cương, phần II, Nxb Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Kane, M.E., Davis, G.L., McConnell, D.B Gargiulo, J.A (1999), “In vitro propagation of Cryptocoryne wendtii”, Aquatic Botany, 63: 197 - 202 Karatas, M., Aasim, M., Dogan, M Khawar, M K (2013), “Adventitious shoot regeneration of the medicinal aquatic plant water hyssop (Bacopa monnieri L pennell) using different internodes”, Arch Biol Sci., 65: 297 - 303 Matthew, A J., Michael, E K Dennis, McConnell, B (2000), “Shoot organogenesis from petiole explants in the aquatic plant Nymphoides indica”, Plant cell, Tissue and Organ Culture, 63: - Ozturk, M., Khawar, K M., Atar, H H., Sancak, C Ozcan, S (2004), “In vitro micropropagation of the aquarium plant Ludwigia repens”, Asia Pacific Journal of Molecular Biology and Biotechnology, 12: 21 - 25 Stanly, C., Bhatt, A., Keng, C L (2011), “An efficient in vitro plantlet regeneration of Cryptocoryne wendtii Cryptocoryne becketti through shoot tip culture”, Acta Physiol Plant, 33: 619 - 624 (Ngày Tòa soạn nhận bài: 22-10-2015; ngày phản biện đánh giá: 30-10-2015; ngày chấp nhận đăng: 17-3-2016) ... cấy mô in vitro xem phương pháp thích hợp Nghiên cứu nhằm xây dựng quy trình nhân giống in vitro Diệp tài hồng đỏ (Ludwigia repens Rubin) Diệp tài hồng táo (Ludwigia natans), nhằm tạo nguồn giống. .. thái rễ (đánh giá cảm quan) Chăm sóc Diệp tài hồng đỏ Diệp tài hồng táo giai đoạn hậu nuôi cấy mô Khảo sát khả thích ứng Diệp tài hồng đỏ Diệp tài hồng táo in vitro vườn ươm Chỉ tiêu theo dõi sau... nước, quan sát có 98% Diệp tài hồng đỏ phát triển bình thường Hình Cây Diệp tài hồng đỏ môi trường nước sau tháng nuôi trồng 3.2 Đối với giống Diệp tài hồng táo  Giai đoạn nhân nhanh chồi Nghiệm