KHẢO SÁT ẢNH HƯỚNG CỦA CHÁT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỚNG VÀ NƯỚC DỪA ĐÉN QUÁ TRÌNH NHÂN GIÓNG JN VITRO CÂY LAN NHẮT ĐIỂM HỎNG (Dendrobiunn draconis)

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG VÀ NƯỚC DỪA ĐẾN QUÁ TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY LAN NHẤT ĐIỂM HỒNG (Dendrobium draconis) Giảng viên hướng dẫn Sinh viên thực TS TRẦN THỊ DUNG TRẦN HỒNG NAM Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 12/2009 LỜI CẢM ƠN Lời xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô Trần Thị Dung, bảo giúp đỡ tận tình thời gian làm luận văn Đồng thời xin gửi lời cảm ơn chân thành đến ban lãnh đạo Trung tâm Nghiên Cứu Phát Triển Nông Nghiệp công Nghệ Cao tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành luận văn Cám ơn anh chị phịng ni cấy mơ - Trung tâm Nghiên Cứu Phát Triển Nông Nghiệp công Nghệ Cao tận tình giúp đỡ, bảo kiến thức chuyên ngành quý báu giúp em hoàn thành tốt luận văn Cám ơn bạn bên cạnh để động viên em lúc khó khăn Xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo Khoa Khoa học ứng dụng trường Đại học Tôn Đức Thắng gửi em đến môi trường làm việc chuyên nghiệp, giúp em trao dồi thêm kinh nghiệm làm việc hữu ích cho công việc sau em Lời cuối xin cảm ơn ba mẹ kính yêu người sinh nuôi dạy thành người, bên động viên lúc gặp khó khăn nhất, ơn nghĩa sinh thành ni dạy ba mẹ khắc ghi lòng Xin cảm ơn tất Trần Hồng Nam i TĨM TẮT Đề Tài : Khảo sát ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng nước dừa đến q trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng Giáo viên hướng dẫn : TS.Trần Thị Dung Đề tài tiến hành Phịng ni cấy mơ – Trung tâm nghiên cứu phát triển nông nghiệp công nghệ cao Thành phố Hồ Chí Minh Thời gian thực : tháng 9/09 đến tháng 12/09 Nội dung đề tài thực gồm thí nghiệm:  Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng mơi trường ni cấy có bổ sung nước dừa đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Thí nghiệm tiến hành nhằm xác định nồng độ nước dừa thích hợp cho trình nhân chồi lan Nhất Điểm Hồng Kết thu được: Nồng độ nước dừa = 200 ml/l bổ sung vào mơi trường MS cho kết hình thành chồi nhiều (2,65 chồi) thời gian nảy chồi nhanh (14,78 NSC)  Thí nghiệm : Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Thí nghiệm tiến hành nhằm xác định nồng độ BA tốt cho trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng Kết thu được: Nồng độ BA = 1,5 mg/l bổ sung vào môi trường MS thích hợp cho hình thành chồi với số chồi hình thành cao ( 3,17 chồi), thời gian hình thành ngắn (15,89 NSC)  Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Thí nghiệm tiến hành nhằm xác định nồng độ BA kết hợp NAA tốt cho trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng ii Kết thu được: Sự kết hợp nồng độ BA = mg/l NAA = 0,5 mg/l mơi trường cho kết hình thành chồi tối ưu nhất, với thời gian hình thành chồi ngắn ( 13,22 NSC), số chồi đạt cao ( 3,28 chồi)  Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Thí nghiệm tiến hành nhằm xác định nồng độ NAA tốt cho trình hình thành rễ in vitro lan Nhất Điểm Hồng Kết thu được: Nồng độ NAA = mg/l bổ sung vào mơi trường MS thích hợp cho hình thành rễ lan Nhất Điểm Hồng với số rễ nhiều (3 rễ), thời gian rễ nhanh (17,22 NSC) iii MỤC LỤC Trang tựa Lời cảm ơn i Tóm tắt ii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt vi Danh sách hình vii Danh sách bảng viii MỞ ĐẦU TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung giống lan Dendrobium 2.1.1 Đặc điểm hình thái 2.1.2 Điều kiện sinh thái 2.1.3 Tình hình sản xuất lan giới nước 2.1.4 Đặc điểm lan Nhất Điểm Hồng 10 2.2 Lịch sử phát triển nuôi cấy mô tế bào thực vật 11 2.3 Các phương pháp nhân giống in vitro 12 2.3.1 Nhân giống chồi nách 12 2.3.2 Nhân giống chồi đỉnh 12 2.3.3 Nhân giống chồi bất định 13 2.3.4 Nhân giống qua nuôi cấy callus 13 2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình nhân giống in vitro 14 2.4.1 Mẫu nuôi cấy 14 2.4.2 Môi trường nuôi cấy 15 2.4.2.1 Các nguyên tố đa lượng 17 2.4.2.2 Các nguyên tố vi lượng 19 2.4.2.3 Vitamin 19 2.4.2.4 Than hoạt tính 20 2.4.2.5 Nước dừa 20 iv 2.4.2.6 Agar 20 2.4.2.7 Các chất điều hoà sinh trưởng 21 2.5 Các cơng trình nghiên cứu Dendrobium 22 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 3.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 24 3.2 Đối tượng nghiên cứu 24 3.3 Vật liệu nghiên cứu 24 3.3.1 Trang thiết bị dụng cụ phòng nghiên cứu 24 3.3.2 Điều kiện nuôi cấy 24 3.3.3 Môi trường nuôi cấy 25 3.4 Phương pháp bố trí thí nghiệm 26 3.4.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng mơi trường ni cấy có bổ sung nước dừa đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 27 3.4.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng 28 3.4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng 29 3.4.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng 30 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 PHỤ LỤC v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT BA : Benzyl – – aminopurin NAA : α – napthlen acetic acid MS : Murashige Skoog (1962) NT : Nghiệm thức MT : Môi trường NSC : Ngày sau cấy ĐC Đối chứng : vi DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 2.1 Sự đa dạng hình dạng màu sắc Dendrobium Hình 2.2 Hoa lan Nhất Điểm Hồng (Dendrobium draconis) Hình 3.1 Cách bố trí chai nước biển 26 Hình 4.1 : Ảnh hưởng mơi trường ni cấy có bổ sung nước dừa đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 33 Hình 4.2 : Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 36 Hình 4.3a : Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 39 Hình 4.3b : Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 40 Hình 4.4 : Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro vii 43 DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 3.1: Các nồng độ nước dừa sử dụng thí nghiệm 27 Bảng 3.2: Các nồng độ BA sử dụng thí nghiệm 28 Bảng 3.3: Các nồng độ BA NAA sử dụng thí nghiệm 29 Bảng 3.4: Các nồng độ NAA sử dụng thí nghiệm 30 Bảng 4.1: Ảnh hưởng mơi trường ni cấy có bổ sung nước dừa đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 31 Bảng 4.2: Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 34 Bảng 4.3: Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 37 Bảng 4.4: Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro viii 41 Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Hoa lan người tiêu dùng ưa chuộng vẻ đẹp đặc sắc hình thức đa dạng chúng Hoa lan q tạo hóa Đây khơng lồi hoa đẹp có giá trị mặt tinh thần mà cịn có giá trị kinh tế cao có thị trường tiêu thụ mạnh nước xuất Ngày nay, thấy hoa lan khắp nơi dễ bị chống ngợp trước vẻ đẹp quyến rũ, biến hóa mn màu, mn vẽ lồi hoa như: Cattleya, Phalaenopsis, Dendrobium, Vanda, Cymbidium Thành phố Hồ Chí Minh nằm vùng khí hậu nhiệt đới nóng, phù hợp với số loài lan, nhiên việc sản xuất hoa lan cịn quy mơ nhỏ chủ yếu sản xuất giống ngoại nhập lan Mokara, Phalaenopsis, Dendrobium Với mức sống ngày cao người, bên cạnh việc thỏa mãn nhu cầu ăn, mặc việc thõa mãn nhu cầu tinh thần thiếu Trong nơng nghiệp, lồi có giá trị kinh tế như: lương thực, công nghiệp, ăn có vai trị ni sống người hoa kiểng đóng vai trị quan trọng đời sống tinh thần người Nó biểu tượng cho vẻ đẹp, cho hạnh phúc sức sống người Hiện hoa sử dụng rộng rãi khắp nơi vào nhiều dịp như: lễ, tết, hội họp, … Do vậy, việc phát triển hoa xây dựng hồn thiện quy trình nhân nhanh giống hoa việc làm cần thiết Được cho phép Khoa Khoa Hoc Ứng Dụng – Bộ môn Công Nghệ Sinh Học – Trường Đại Học Tôn Đức Thắng Chúng tiến hành thực đề tài : “Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng nước dừa đến trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng ”  Nhận xét: Qua bảng kết 4.1, sau 45 ngày nuôi cấy cho thấy :  Về số chồi Nghiệm thức (200 ml/ nước dừa) có số chồi hình thành nhiều (2,65 chồi), khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức lại Khi sử dụng nước dừa bổ sung vào mơi trường ni cấy có tác động tốt đến khả hình thành chồi nước dừa có nhiều hàm lượng chất hữu cơ, chất khống chất tương tự cytokinin Nghiệm thức nghiệm thức có lượng nước dừa lớn nghiệm thức số chồi hình thành dùng nước dừa với nồng độ cao làm giảm hình thành chồi, xuất hóa nâu gốc chồi gây độc cho  Về chiều cao chồi Nghiệm thức có kích thước chồi cao (1,32cm), khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức nghiệm thức 5, khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức (ĐC) nghiệm thức  Về thời gian nảy chồi Các nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa Nghiệm thức có thời gian hình thành chồi nhanh (14,78 NSC)  Về trọng lượng cụm chồi Nghiệm thức có trọng lượng cao (0,16g) khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức khác biệt khơng có ý nghĩa với nghiệm thức Nước dừa thêm vào với lượng thích hợp kích thích hình thành phát triển chồi hình thành Vậy mơi trường MS có bổ sung 200 ml nước dừa kết hợp với mg/l BA 0,5 mg/l NAA cho kết hình thành chồi cao, thích hợp cho hình thành chồi lan Nhất Điểm Hồng in vitro 32 NT1 (ĐC) NT2 NT3 NT4 NT5 NT 1: 1mg/l BA + 0,5 mg/l NAA + ml nước dừa NT 2: 1mg/l BA + 0,5 mg/l NAA + 100 ml nước dừa NT 3: 1mg/l BA + 0,5 mg/l NAA + 200 ml nước dừa NT 4: 1mg/l BA + 0,5 mg/l NAA + 300 ml nước dừa NT 5: 1mg/l BA + 0,5 mg/l NAA + 400 ml nước dừa Hình 4.1 : Ảnh hưởng mơi trường ni cấy có bổ sung nước dừa đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy 33 4.2 Thí nghiệm : Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Trong môi trường MS bổ sung nồng độ BA khác kích thích hình thành chồi tăng số lượng chồi khác Bảng 4.2 : Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy BA NT Thời gian hình thành Số chồi Chiều cao chồi (cm) Trọng lượng cụm Đặc điểm (mg/l) chồi (NSC) (ĐC) 18,78ab 0,98c 1,06a 0,08ab Chồi xanh non, nhỏ 17,22 c 1,88 b 0,66b 0,10ab Chồi xanh, có 1,5 15,89 d 3,17 a 0,62 bc 0,12 a Chồi xanh, to, khỏe 18,33 b 1,22bc 0,39d 0,12 a Chồi xanh, nhỏ, có 2,5 19,11 a 0,87c 0,46cd 0,06 b Chồi xanh, nhỏ CV (%) 2,10 12,32 13,88 15,44 LSD 0,6831 0,7479 0,1627 0,05753 chồi (g)  Ghi chú: Các giá trị theo sau không mẫu tự cột có khác biệt có ý nghĩa mức ý nghĩa 0,05 dựa theo trắc nghiệm LSD 34  Nhận xét: Trong thí nghiệm nồng độ BA bố trí tăng dần qua nghiệm thức Qua bảng 4.2 ta thấy số chồi hình thành có khác biệt có ý nghĩa NT  Về số chồi Nghiệm thức (BA= 1,5 mg/l) có số chồi hình thành cao (3,17 chồi) khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức lại Sự khác biệt BA kích thích tạo chồi sử dụng nồng độ thích hợp Ở nghiệm thức nghiệm thức sử dụng nồng độ BA cao gây ức chế hình thành chồi nên số chồi giảm dần  Về chiều cao chồi Nghiệm thức (ĐC) có chiều cao chồi cao (1,06 cm) khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức lại Nguyên nhân nghiệm thức có chiều cao chồi cao nghiệm thức không bổ sung BA, nên vươn dài thân không bị ức chế Ngược lại nghiệm thức khác có bổ sung BA kích thích hình thành chồi, ức chế vươn dài in vitro  Thời gian nảy chồi Các nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa Nghiệm thức có thời gian hình thành chồi ngắn (15,89 NSC)  Trọng lượng cụm chồi Theo bảng kết cho thấy có khác biệt có ý nghĩa, nghiệm thức (0,12g) có khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức (0,06g) khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức cịn lại Vậy nghiệm thức có nồng độ BA=1,5 mg/l mơi trường MS thích hợp cho hình thành chồi lan Nhất Điểm Hồng in vitro 35 NT1(ĐC) NT2 NT3 NT4 NT5 NT 1: mg/l BA NT 4: mg/l BA NT 2: mg/l BA NT 5: 2,5 mg/l BA NT 3: 1,5 mg/l BA Hình 4.2 : Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy 36 4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Sau 45 ngày nuôi cấy môi trường MS, nồng độ BA NAA có ảnh hưởng lên thời gian khả hình thành chồi Nhất Điểm Hồng in vitro Bảng 4.3 : Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy Thời gian Chiều Trọng cao chồi lượng cụm (cm) chồi (g) 1,14e 1,06bc 0,06g Chồi xanh non 17,89a 1,17 de 0,87bcd 0,11cd Chồi xanh, có 0,1 17,33a 1,83bcd 0,54efg 0,12c Chồi xanh, có 1,5 0,1 14,67b 2,16b 0,81cde 0,10de Chồi xanh, to 0,1 14,56b 1,71 bcde 0,53fg 0,14 b Chồi xanh, to 2,5 0,1 15,22b 1,42cde 0,52fg 0,08f Chồi xanh, có 0,5 0,5 13,67c 1,88 bc 1,14ab 0,09ef Chồi xanh, có rễ 0,5 13,22c 3,28a 1,27a 0,17 a Chồi xanh, có rễ 1,5 0,5 15,22b 1,6 bcde 0,71 def 0,15 b Chồi xanh, có 10 0,5 17,89a 1,31cde 0,58efg 0,09ef Chồi xanh, có 11 2,5 0,5 17,67a 1,43cde 0,33g 0,11cd Chồi xanh CV (%) 2,98 10,82 12,87 14,04 LSD 0,8050 0,6815 0,2730 0,01693 BA NAA (mg/l) (mg/l) chồi (NSC) (ĐC) 0 17,78a 0,5 0,1 NT hình thành Số chồi Đặc điểm  Ghi chú: Các giá trị theo sau khơng mẫu tự cột có khác biệt có ý nghĩa mức ý nghĩa 0,05 dựa theo trắc nghiệm LSD 37  Nhận xét: Sau 45 ngày nuôi cấy môi trường MS, nồng độ BA NAA có ảnh hưởng đến q trình hình thành chồi Dựa vào bảng 4.3 ta thấy: Sự tạo chồi nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa  Về thời gian hình thành chồi Nghiệm thức có ngày hình thành chồi ngắn (13,2 NSC), khác biệt khơng có ý nghĩa so với nghiệm thức (13,67 NSC) khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức lại  Về số chồi Số chồi hình thành chiều cao chồi nghiệm thức (3.28 chồi) lớn nhất, khác biệt có ý nghĩa với tất nghiệm thức khác  Về trọng lượng cụm chồi Trọng lượng cụm chồi nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa, nghiệm thức (0.17 g) có trọng lượng lớn Khi bổ sung NAA vào môi trường có BA NAA kích thích q trình hình thành chồi diễn nhanh chồi hình thành nhiều Sử dụng NAA nồng độ 0,5 mg/l kết hợp với nồng độ BA ngồi việc hình thành chồi cịn thấy có hình thành rễ chồi Vậy nghiệm thức có bổ sung nồng độ BA= mg/l NAA= 0,5 mg/l mơi trường MS thích hợp cho hình thành chồi lan Nhất Điểm Hồng in vitro 38 NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 NT6 NT 1: mg/l BA + mg/l NAA NT 4: 1,5 mg/l BA + 0,1 mg/l NAA NT 2: 0,5 mg/l BA + 0,1 mg/l NAA NT 5: mg/l BA + 0,1 mg/l NAA NT 3: mg/l BA + 0,1 mg/l NAA NT6: 2,5 mg/l BA + 0,1 mg/l NAA Hình 4.3a : Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy 39 NT7 NT8 NT9 NT10 NT 7: 0,5 mg/l BA + 0,5 mg/l NAA NT 8: mg/l BA + 0,5 mg/l NAA NT9: 1,5 mg/l BA + 0,5 mg/l NAA NT10: mg/l BA + 0,5 mg/l NAA NT11 NT11: 2,5 mg/l BA + 0,5 mg/l NAA Hình 4.3b : Ảnh hưởng nồng độ BA NAA đến khả hình thành chồi từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy 40 4.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro Việc tạo rễ, thân, hồn chỉnh giai đoạn cuối q trình nhân giống in vitro Sử dụng NAA để tạo rễ với nồng độ khác ta kết theo bảng 4.4 Bảng 4.4 : Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy NT NAA Thời gian Số rễ Chiều Chiều rễ hình dài rễ cao (NSC) thành (cm) (cm) Trọng Số lượng (g) (ĐC) 19,56 a 1,30c 0,66a 2,45c 4,97 0,13c 17,22 c 3,00a 0,44 ab 2,95 a 5,10 0,20a 1,5 18,56 b 2,43b 0,57 ab 2,87ab 4,77 0,17b 19,44 a 1,57c 0,41b 2,53bc 4,23 0,14c CV(%) 1,03 13,77 13,46 7,57 10,22 11,70 LSD 0,3622 0,5392 0,2306 0,3859 0,01883  Ghi chú: Các giá trị theo sau không mẫu tự cột có khác biệt có ý nghĩa mức ý nghĩa 0,05 dựa theo trắc nghiệm LSD 41  Nhận xét:  Về thời gian rễ Thời gian rễ nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa Nghiệm thức 1(ĐC) có thời gian rễ lâu (19,56 NSC), khác biệt khơng có ý nghĩa với nghiệm thức (19,44 NSC) khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức (17,22 NSC) nghiệm thức (18,56 NSC)  Về số Số nghiệm thức khơng có khác biệt mặt thống kê  Về chiều dài rễ Chiều dài rễ nghiệm thức (0,66cm) dài khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức (0,41cm), khơng có khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức (0,44 cm) nghiệm thức (0,57 cm)  Về số rễ Nghiệm thức (3,00 rễ) cho số rễ nhiều có khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức khác Trên mơi trường có nồng độ NAA cao (nghiệm thức 5) ảnh hưởng không tốt đến tạo rễ phát triển  Về chiều cao Chiều cao nghiệm thức cao (2,95 cm) khác biệt khơng có ý nghĩa với nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa với nghiệm thức cịn lại Vậy nghiệm thức có bổ sung NAA= 1mg/l mơi trường MS thích hợp cho hình thành rễ lan Nhất Điểm Hồng in vitro 42 NT1 NT2 NT3 NT4 NT 1: mg/l NAA NT 3: 1,5 mg/l NAA NT2: mg/l NAA NT4: mg/l NAA Hình 4.4 : Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả hình thành rễ từ lan Nhất Điểm Hồng in vitro sau 45 ngày nuôi cấy 43 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Qua thời gian nghiên cứu đề tài “Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng nước dừa đến trình nhân giống in vitro lan Nhất Điểm Hồng ” rút kết luận sau:  Môi trường MS bổ sung 200ml/l nước dừa có số chồi hình thành nhiều (2,65 chồi) thời gian nảy chồi nhanh (14,78 NSC)  Môi trường MS bổ sung 1,5 mg/l BA thích hợp cho hình thành chồi với số chồi hình thành cao ( 3,17 chồi), thời gian hình thành ngắn (15,89 NSC)  Sự kết hợp nồng độ BA = mg/l NAA = 0,5 mg/l môi trường MS cho kết hình thành chồi tối ưu nhất, với thời gian hình thành chồi ngắn ( 13,22 NSC), số chồi đạt cao ( 3,28 chồi)  Môi trường MS có bổ sung mg/l NAA thích hợp cho hình thành rễ lan Nhất Điểm Hồng in vitro với số rễ nhiều (3 rễ), thời gian rễ nhanh (17,22 NSC) 44 5.2 Đề nghị  Nghiên cứu thêm nhiều loại môi trường nuôi cấy khác để nhân nhanh số lượng lớn phục vụ cho nhu cầu thị trường  Tiếp tục nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân giống, khảo sát thêm sinh trưởng lan tự nhiên  Nghiên cứu điều kiện sinh trưởng lan Nhất Điểm Hồng vườn ươm  Nghiên cứu tạo hạt nhân tạo để bảo quản giống lan quý dần biến tự nhiên  Nghiên cứu thêm hoa lan Nhất Điểm Hồng điều kiện in vitro 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Thị Như Bích, 2005 Khảo sát yếu tố môi trường nuôi cấy ảnh hưởng đến nhân giống in vitro lan Hồ Điệp (Phalaenopsis sp.) Luận văn tốt nghiệp kỹ sư nông nghiệp Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Minh Chơn, 2004 Giáo trình chất điều hịa sinh trưởng thực vật Đại học Cần Thơ 94 trang Trần Hợp, 1988 Phong lan Việt Nam Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Dương Công Kiên, 2003 Nuôi cấy mô thực vật II Nhà xuất Đại học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh 183 trang Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên, 2002 Công nghệ tế bào Nhà xuất Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh 376 trang Nguyễn Đình Minh, 2004 Nhân giống in vitro lan Dendrobium phương pháp nuôi cấy mô tế bào lớp mỏng Luận văn tốt nghiệp kỹ sư nơng nghiệp Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh Bùi Trang Việt, 2002 Sinh lí thực vật đại cương Nhà xuất Đại học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh 360 trang http://www.hoalanvietnam.org/Article.asp?ID=469 http://agriviet.com/nd/1167-hoa-lan-viet-nam/ 10 http://www.phonglanviet.com.vn/vn/product_cat.aspx?cat=5&page=2 46 ... đa dạng gồm số thành phần sau: - Các muối khoáng đa lượng vi lượng - Các vitamin - Các amino acid - Nguồn carbon: số loại đường - Các chất điều hoà sinh trưởng - Các chất hữu bổ sung: nước dừa,... phần thuốc tẩy (với 10% hoạt chất) phần nước - Ca-hypochlorite hay Ca(ClO)2: có dạng bột hoà lẫn với nước, lọc lại dùng khử trùng 5-3 0phút (3 5-1 00g/l) - Mercuric chloride (HgCl2): chất độc trồng,... Pirydocine(B6) Biotin (H) 0,01 Myo-Inositol 100 Nicotinic acid (PP) Thiamine – HCl - Chất điều hoà sinh trưởng : BA (Benzyl Adenin) , NAA(Indol-3-Acetic acid) - Các chất khác: Đường 30 g/l Agar