XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIÓNG JN VITRO CÂY BẠCH HOA XÀ (Pluumbago zeylanica L)

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY BẠCH HOA XÀ (Plumbago zeylanica L.) Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực hiện: NGUYỄN MINH HIẾU Niên khóa: 2006 – 2011 Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 01/2011 TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY BẠCH HOA XÀ (Plumbago zeylanica L.) Giảng viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: ThS BÙI ĐÌNH THẠCH NGUYỄN MINH HIẾU Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 01/2011 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình nghiên cứu, thực đề tài "Xây dựng quy trình nhân giống in vitro Bạch hoa xà (Plumbago zeylanica L.)", bên cạnh mặt thuận lợi có mặt khó khăn, em ln nhận dẫn, giúp đỡ động viên từ nhiều phía Do đó, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: Các chú, anh chị phịng, ban Viện Sinh học Nhiệt đới tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài nghiên cứu "Xây dựng quy trình nhân giống in vitro Bạch hoa xà (Plumbago zeylanica L.)" Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy Bùi Đình Thạch Thầy người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài Đồng thời, em xin gửi lời cảm ơn đến Quý thầy cô trường Đại học Tôn Đức Thắng, người truyền đạt kiến thức quý báu suốt q trình em học tập trường Đó sở, tảng giúp em thực đề tài nghiên cứu Bên cạnh đó, em nhận giúp đỡ, động viên chân thành, nhiệt tình bạn bè thân u ngồi lớp 06SH Xin cảm ơn bạn em đồng hành q trình học tập, hết lịng hỗ trợ, giúp đỡ suốt trình học tập nghiên cứu vừa qua Và nguồn động lực vơ quan trọng khác, gia đình Gia đình ln điểm tựa tinh thần vững giúp em hoàn thành đề tài Một lần nữa, em xin chân thành cảm ơn! Sinh viên thực Nguyễn Minh Hiếu MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn Mục lục i Danh sách chữ viết tắt iv Danh sách hình v Danh sách bảng .vi CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1.2 MỤC ĐÍCH – YÊU CẦU 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY BẠCH HOA XÀ (Plumbago zeylanica L.) 2.1.1 Vị trí phân loại 2.1.2 Nguồn gốc – Phân bố 2.1.3 Đặc điểm hình thái 2.1.4 Thành phần hóa học 2.1.5 Công dụng 2.1.6 Những nghiên cứu Bạch hoa xà 2.1.6.1 Trong nước 2.1.6.2 Thế giới 10 -i- 2.2 GIỚI THIỆU VỀ NHÂN GIỐNG IN VITRO 10 2.2.1 Sơ lược lịch sử phát triển 10 2.2.2 Kỹ thuật nhân giống in vitro 12 2.2.2.1 Giới thiệu 12 2.2.2.2 Các phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 12 2.2.2.3 Quy trình nhân giống in vitro 13 2.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến nhân giống in vitro 14 2.2.3.1 Mẫu cấy 14 2.2.3.2 Môi trường nuôi cấy 15 2.2.3.3 Điều kiện nuôi cấy 16 2.2.3.4 Sự tạp nhiễm 17 2.2.4 Ứng dụng 17 2.3 CÁC CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG THỰC VẬT 18 2.3.1 Auxin 18 2.3.2 Cytokinin 19 2.3.3 Gibberellin 20 2.3.4 Abscisic acid 20 2.3.5 Ethylen 20 CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 22 3.2 VẬT LIỆU 22 3.2.1 Thiết bị dụng cụ 22 3.2.1.1 Thiết bị 22 3.2.1.2 Dụng cụ 22 3.2.2 Hóa chất mơi trường thí nghiệm 23 -ii- 3.2.3 Đối tượng nghiên cứu 23 3.2.4 Điều kiện nghiên cứu 24 3.3 PHƯƠNG PHÁP 24 3.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát nồng độ Javel thời gian khử trùng tạo mẫu in vitro từ đoạn thân Bạch hoa xà 24 3.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến khả tạo chồi từ chồi bên in vitro Bạch hoa xà 26 3.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên phát triển Bạch hoa xà từ chồi in vitro 28 3.3.4 Xử lý số liệu 29 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 THÍ NGHIỆM 1: KHẢO SÁT NỒNG ĐỘ JAVEL VÀ THỜI GIAN KHỬ TRÙNG TẠO MẪU IN VITRO TỪ ĐOẠN THÂN CÂY BẠCH HOA XÀ 30 4.2 THÍ NGHIỆM 2: KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG NỔNG ĐỘ CÁC CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG THỰC VẬT ĐẾN KHẢ NĂNG TẠO CHỒI TỪ CHỒI BÊN IN VITRO CỦA CÂY BẠCH HOA XÀ 32 4.3 THÍ NGHIỆM 3: KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG THỰC VẬT LÊN SỰ PHÁT TRIỂN CÂY BẠCH HOA XÀ TỪ CHỒI IN VITRO 40 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN 44 5.2 ĐỀ NGHỊ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC -iii- DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chất điều hòa sinh trưởng thực vật BA 6-Benzyl adenin GA3 Giberelic acid IBA Indole-3-butyric acid Môi trường MS môi trường Murashige – Skoog, 1962 -iv- DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1: Hình vẽ Bạch hoa xà Hình 2.2: Cụm Bạch hoa xà Hình 2.3: Cành Bạch hoa xà Hình 2.4: Hoa Bạch hoa xà Hình 2.5: Rễ Bạch hoa xà Hình 2.6: Cơng thức cấu tạo plumbagin Hình 4.1: Biểu đồ thể kết thí nghiệm 32 Hình 4.2: Nghiệm thức J14 nảy chồi sau tuần nuôi cấy in vitro 32 Hình 4.3: Biểu đồ thể kết thí nghiệm 35 Hình 4.4: Nghiệm thức DC sau tuần nuôi cấy 36 Hình 4.5: Nghiệm thức A1 sau tuần nuôi cấy 36 Hình 4.6: Nghiệm thức B1 sau tuần nuôi cấy 36 Hình 4.7: Các nghiệm thức A1, A2, A3, A4, A5 37 Hình 4.8: Các nghiệm thức B1, B2, B3, B4, B5 37 Hình 4.9: Các nghiệm thức C1, C2, C3, C4, C5 37 Hình 4.10: Các nghiệm thức D1, D2, D3, D4, D5 38 Hình 4.11: Các nghiệm thức A1, B1, C1, D1 38 Hình 4.12: Các nghiệm thức A2, B2, C2, D2 38 Hình 4.13: Các nghiệm thức A3, B3, C3, D3 39 Hình 4.14: Các nghiệm thức A4, B4, C4, D4 39 Hình 4.15: Các nghiệm thức A5, B5, C5, D5 39 Hình 4.16: Biểu đồ thể kết thí nghiệm 42 Hình 4.17: Mẫu cấy ban đầu cho thí nghiệm 42 Hình 4.18: Các nghiệm thức E0, E1, E2, E3, E4, E5, E6 sau tuần nuôi cấy 43 Hình 4.19: Các nghiệm thức E0, E1, E2, E3, E4, E5, E6 sau tuần nuôi cấy 43 -v- DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Bảng phân loại khoa học Bạch hoa xà Bảng 3.1: Các nghiệm thức khảo sát nồng độ Javel thời gian khử trùng tạo mẫu in vitro từ đoạn thân Bạch hoa xà 25 Bảng 3.2: Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến khả tạo chồi từ chồi bên in vitro Bạch hoa xà 27 Bảng 3.3: Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên phát triển Bạch hoa xà từ chồi in vitro 29 Bảng 4.1: Kết khảo sát nồng độ Javel thời gian khử trùng tạo mẫu in vitro từ đoạn thân Bạch hoa xà 31 Bảng 4.2: Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến khả tạo chồi từ chồi bên in vitro Bạch hoa xà 34 Bảng 4.3: Kết khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên phát triển Bạch hoa xà từ chồi in vitro 41 -vi- Mở đầu CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Bạch hoa xà, có tên khoa học: Plumbago zeylanica L., thuộc họ Plumbaginaceae, dược liệu có nguồn gốc từ vùng Tây bắc Châu Á [15] , phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới: Australia, châu Á châu Phi [30] Theo y học cổ truyền, Bạch hoa xà sử dụng cho số bệnh da bị vết thương, chàm, bệnh ghẻ, bệnh phong [14] Nhiều nghiên cứu ghi nhận: rễ, cành sử dụng dược liệu Rễ chứa acrid crystalline gọi plumbagin, naphtoquinone màu vàng, sử dụng dược liệu Ấn Độ từ khoảng 750 năm trước Công nguyên nguồn dược liệu kháng ký sinh, bổ tim, bảo vệ gan bảo vệ thần kinh Ngoài ra, nhiều hoạt chất khác ghi nhận rễ này, bao gồm phenolic acids, tannins, anthocyanin,… có hoạt tính kháng khuẩn [28] Nghiên cứu cho thấy, plumbagin phân lập từ Cây có khả kháng ung thư[24], kháng khuẩn [17],[18], kháng sốt rét [25], ức chế hoạt động phân chia tế bào [16], kháng đột biến, kháng côn trùng [23], làm giảm cholesterol tổng số [27] Với đặc tính Bạch hoa xà sinh trưởng chậm, rễ Cây dùng để khai thác plumbagin cần nhiều năm cho hàm lượng hoạt chất cao [21] Vì thế, việc thu nhận plumbagin từ rễ phải nhiều thời gian làm giảm số lượng phân bố tự nhiên Ngày nay, việc nhân giống in vitro khơng cịn xa lạ lĩnh vực nhân giống trồng, nói phương pháp tốt hiệu để nhân giống thực vật Bằng phương pháp này, tạo nhiều giống có đặc tính tốt gốc ban đầu tạo điều kiện thuận lợi cho việc nghiên cứu thành phần dược tính lồi thực vật thời gian ngắn Tuy nhiên, nước ta việc nhân giống in vitro Bạch hoa xà chưa nghiên cứu Vì vậy, nhằm đảm bảo số lượng chất lượng nguồn nguyên liệu cho nghiên cứu ứng dụng hoạt chất tương lai, đề tài “Xây dựng quy -1- Kết thảo luận 13 12.67 11.33 10.33 6.67 6.33 5.33 4.33 2.93 Nghiệm thức E0 5.67 5.67 4.67 2.27 E1 Số rễ trung bình/mẫu 1.3 1.13 1.07 0.97 0.67 E2 E3 E4 E5 E6 Chiều dài rễ (cm) Số trung bình/mẫu Hình 4.16: Biểu đồ thể kết thí nghiệm Hình 4.17: Mẫu cấy ban đầu cho thí nghiệm - 42 - Kết thảo luận E1 E2 E3 E4 E5 E0 E6 Hình 4.18: Các nghiệm thức E0, E1, E2, E3, E4, E5, E6 sau tuần nuôi cấy E0 E1 E2 E3 E4 E5 E6 Hình 4.19: Các nghiệm thức E0, E1, E2, E3, E4, E5, E6 sau tuần nuôi cấy - 43 - Kết luận đề nghị CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN - Javel có nồng độ 100 % thời gian 20 phút thích hợp cho việc khử trùng tạo mẫu in vitro từ đoạn thân Bạch hoa xà - Môi trường MS có bổ sung BA (1.0, 1.5 mg/L) IBA 0.1 mg/L thích hợp để tạo chồi từ chồi bên in vitro Bạch hoa xà - Môi trường MS có bổ sung BA 0.1 mg/L thích hợp cho phát triển Bạch hoa xà từ chồi in vitro 5.2 ĐỀ NGHỊ - Đối với việc tạo mẫu in vitro, kết đạt chưa khả quan tỷ lệ mẫu cấy có khả phát triển cịn thấp (41.29%), cần nghiên cứu thêm biện pháp khắc phục - Tiếp tục hồn thiện quy trình để áp dụng vào sản xuất thực nghiệm - Nghiên cứu ảnh hưởng trình nhân giống đến ổn định di truyền hàm lượng hoạt chất từ nuôi cấy in vitro - 44 - Tài liệu tham khảo TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT: [1] Đỗ Huy Bích – Đặng Quang Chung – Bùi Xuân Chương – Nguyễn Thượng Dong – Đỗ Trung Đàm – Phạm Văn Hiển – Vũ Ngọc Lộ – Phạm Duy Mai – Phạm Kim Mãn – Đoàn Thị Nhu – Nguyễn Tập – Trần Toàn Viện Dược liệu, 2006 Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam – tập I: tr 88 Nhà xuất Khoa học kỹ thuật [2] Trịnh Đình Đạt, 2008 Cơng nghệ sinh học tập bốn: Công nghệ di truyền: tr 96 – 104 Nhà xuất Giáo dục [3] Nguyễn Như Khanh, 2009 Sinh học phát triển thực vật: tr 29 – 56 Nhà xuất Giáo dục [4] Dương Công Kiên, 2002 Nuôi cấy mô thực vật Nhà xuất Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh 199 trang [5] Dương Công Kiên, 2003 Nuôi cấy mô thực vật (II) Nhà xuất Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh 183 trang [6] Lê Quang Long (chủ biên) – Nguyễn Thanh Huyền – Hà Thị Lệ Ánh Nguyễn Thanh Tùng, 2009 Từ điển tranh loài cây: tr 25 Nhà xuất Giáo dục Việt Nam [7] Đỗ Tất Lợi, 2003 Những thuốc vị thuốc Việt Nam: tr 89 – 90 Nhà xuất Y học [8] Võ Thị Bạch Mai, 2004 Sự phát triển chồi rễ Nhà xuất Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh 125 trang [9] Lê Quý Ngưu Trần Như Đức, 2009 Cây thuốc quanh ta: tr 170 Nhà xuất Thuận Hóa [10] W D Phillips and T J Chilton, 2006 Sinh học tập hai: tr 58 – 63 Nhà xuất Giáo dục - 45 - Tài liệu tham khảo [11] Hồng Thư, 2009 Cây thuốc, vị thuốc có tác dụng an thai: tr.139 Nhà xuất Tổng hợp Đồng Nai [12] Vũ Văn Vụ – Nguyễn Mộng Hùng Lê Hồng Điệp, 2007 Công nghệ sinh học tập hai: Công nghệ sinh học tế bào: tr 22 – 27 Nhà xuất Giáo dục [13] Võ Quang Yến, 2008 Cây nhà vườn – Cây thuốc vị thuốc Việt Nam: tr 260 – 268 Nhà xuất Đà Nẵng TÀI LIỆU TIẾNG NƯỚC NGOÀI: [14] Abebe D Ayehu A, 1993 Medicinal plants and enigmatic health practices of northern Ethiopia BSPE, Addis Ababa [15] Aditi G, Anjali G, Singh J, 1999 New naphtoquinones from Plumbago zeylanica Pharm Biol 37: 321-323 [16] Bhargava SK, 1994 Effects of plumbagin on reproductive function of male dog Indian J Exp Biol 22: 153-156 [17] Didery N, Dubrevil L, Pinkas M, 1994 Activity of anthraquinonic and naphtoquinonic compounds on oral bacteria Die Pharm 49:681-683 [18] Duraga R, Sridhar P, Polasa H, 1990 Effect of plumbagin on antibiotic resistance in bacteria Indian J Med Res 91: 18-20 [19] Idayat T Gbadamosi and A Egunyomi, 2010 Micropropagation of Plumbago zeylanica L (Plumbaginaceae) in Ibadan, Southwestern, Nigeria Journal of Medicinal Plants Research, Vol 4(4), pp 293 – 297 [20] Iyyakkannu Sivanesan and Byoung Ryong Jeong, 2009 Micropropagation of Plumbago zeylanica L African Journal of Biotechnology, Vol (16), pp 3761 – 3768 [21] Kitanow, G.M and Pashankov, P.P 1994 Quantitative investigation on the dynamics of plumbagin in Plumbago europea L roots and herb by HPLC Pharmazie 49: 462 - 46 - Tài liệu tham khảo [22] K Satheeshkumar – Binoy Jose – E V Soniya and S Seeni, 2009 Isolation of morphovariants through plant regeneration in Agrobacterium rhizogenes induced hairy root cultures of Plumbago rosea L Indian Journal of Biotechnology, Vol 8, pp 435 – 441 [23] Kubo I, Uchida M, Klocke JK, 1983 An insect ecolysis inhibitor from the African medicinal plant, Plumbago capsensis ( Plumbaginaceae) Agric Biol Chem 47: 911-913 [24] Mohana K, Purushothoman KK, 1980 Plumbagin: a study of its anticancer, antimicrobial and antifungal properties Indian J Exp.Biol 18: 8768880 [25] Parimala R, Sachdanandam P, 1983 Effect of plumbagin on some glucose Metabolizing J Ethnopharmacol 37: 85-91 [26] Praveen C Verma – Digvijay Singh – Laiq ur Rahman – Madan Mohan Gupta and Suchitra Banerjee, 2002 In vitro-studies in Plumbago zeylanica: rapid micropropagation and establishment of higher plumbagin yielding hairy root cultures J Plant Physiol 159: 547–552 [27] Ram A, 1996 Effect of Plumbago Zeylanica in hyperlipidaemic rabbits and its modification by vitamin E Indian J Pharmacol 28:161-166 [28] Rang DD, Dung NX, 1996 Chemical constituents of Plumbago zeylanica Tap Chin Hoc 34: 67-70 [29] Sivanesan, 2007 Shoot Regeneration and Somaclonal Variation from Leaf Callus Cultures of Plumbago zeylanica Linn Asian Journal of Plant Sciences 6(1), pp 83 – 86 [30] Vijver LM, Looter AP, 1971 The constituents of the roots of Plumbago auriculata and P zeylanica responsible for antimicrobial activity.Plant Med 20: 813 [31] Xiaoping Wei – Xiaoping Gou – Tong Yuan and Scott D Russell, 2006 A highly efficient in vitro plant regeneration system and Agrobacterium-mediated transformation in Plumbago zeylanica Plant Cell Rep 25: 513 – 521 - 47 - Tài liệu tham khảo TÀI LIỆU INTERNET: [32] http://botanyvn.com/ [33] http://plants.usda.gov [34] http://thuocdongduoc.vn/ [35] http://vietroselle.com/ [36] http://www.herbs.pukkaherbs.com/?29 [37] http://www.mdpi.org/molbank/m0093.htm [38].http://www.meemelink.com/prints%20pages/18411.Plumbaginaceae%20%20Plumbago%20zeylanica.htm [39] http://www.vienduoclieu.org.vn/ [40] http://vi.wikipedia.org/ - 48 - Phụ lục PHỤ LỤC Thành phần mơi trường Murashige – Skoog (MS): Khống đa lượng Khoáng vi lượng Sắt EDTA Vitamin mg/L mol NH4NO3 1650 20.6 KNO3 1900 18.8 CaCl2.2H2O 440 2.99 MgSO4.7H2O 370 1.5 KH2PO4 170 1.25 H3BO3 6.2 100 MnSO4.4H2O 22.3 100 ZnSO4.7H2O 8.6 28.9 KI 0.83 5.00 Na2MoO4.2H2O 0.25 1.03 CuSO4.5H2O 0.025 0.100 CoCl2.6H2O 0.025 0.105 FeSO4.7H2O 27.8 100 Na2.EDTA.2H2O 37.3 100 Inositol 100 555 Nicotinic acid 0.5 4.06 Pyridoxine HCl 0.5 2.34 Thyamine HCl 0.1 0.296 PL Phụ lục Title: THÍ NGHIỆM 1: TỶ LỆ MẪU VƠ TRÙNG Function: ANOVA-1 Data case no to 45 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to 15 Variable (TY LE VO TRUNG) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 14 35213.365 2515.240 94.206 0.0000 Within 30 800.980 26.699 Total 44 36014.344 Coefficient of Variation = 23.68% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 2.98 3.00 0.000 0.000 0.00 2.98 3.00 0.000 0.000 0.00 2.98 3.00 47.880 15.960 3.78 2.98 3.00 0.000 0.000 0.00 2.98 3.00 0.000 0.000 0.00 2.98 3.00 37.500 12.500 12.50 2.98 3.00 73.570 24.523 4.30 2.98 3.00 0.000 0.000 0.00 2.98 10 3.00 0.000 0.000 0.00 2.98 11 3.00 93.330 31.110 10.18 2.98 12 3.00 249.990 83.330 0.00 2.98 13 3.00 78.330 26.110 6.73 2.98 14 3.00 238.890 79.630 3.20 2.98 15 3.00 162.500 54.167 7.22 2.98 -Total 45.00 981.990 21.822 28.61 4.26 Within 5.17 Bartlett's test Chi-square = 228.267 Number of Degrees of Freedom = 14 Approximate significance = 0.000 -Data File : KẾT QUẢ TRẮC NGHIỆM PHÂN HẠNG Function : RANGE Error Mean Square = 26.70 Error Degrees of Freedom = 30 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 11.60 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = 0.0000 F = 0.0000 F = 0.0000 F = 15.96 DE = 0.0000 F = 0.0000 F = 12.50 E = 24.52 CD = 0.0000 F 10 = 0.0000 F 11 = 31.11 C 12 = 83.33 A 13 = 26.11 CD 14 = 79.63 A 15 = 54.17 B Mean 12 = 83.33 A Mean 14 = 79.63 A Mean 15 = 54.17 B Mean 11 = 31.11 C Mean 13 = 26.11 CD Mean = 24.52 CD Mean = 15.96 DE Mean = 12.50 E Mean = 0.0000 F Mean = 0.0000 F Mean 10 = 0.0000 F Mean = 0.0000 F Mean = 0.0000 F Mean = 0.0000 F Mean = 0.0000 F PL Phụ lục Title: THÍ NGHIỆM 1: TỶ LỆ MẪU CĨ KHẢ NĂNG PHÁT TRIỂN Function: ANOVA-1 Data case no to 45 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to 15 Variable (KHA NANG PHAT TRIEN) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 14 25540.113 1824.294 7.263 0.0000 Within 30 7535.316 251.177 Total 44 33075.429 Coefficient of Variation = 69.67% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 9.15 3.00 0.000 0.000 0.00 9.15 3.00 0.000 0.000 0.00 9.15 3.00 219.450 73.150 5.78 9.15 3.00 0.000 0.000 0.00 9.15 3.00 0.000 0.000 0.00 9.15 3.00 133.740 44.580 40.34 9.15 3.00 147.030 49.010 15.53 9.15 3.00 0.000 0.000 0.00 9.15 10 3.00 0.000 0.000 0.00 9.15 11 3.00 88.690 29.563 25.65 9.15 12 3.00 91.910 30.637 7.44 9.15 13 3.00 149.400 49.800 32.74 9.15 14 3.00 123.860 41.287 7.57 9.15 15 3.00 69.610 23.203 4.87 9.15 -Total 45.00 1023.690 22.749 27.42 4.09 Within 15.85 Bartlett's test Chi-square = 235.219 Number of Degrees of Freedom = 14 Approximate significance = 0.000 -Data File : KẾT QUẢ TRẮC NGHIỆM PHÂN HẠNG Function : RANGE Error Mean Square = 251.2 Error Degrees of Freedom = 30 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 35.59 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = 0.0000 C = 0.0000 C = 0.0000 C = 73.15 A = 0.0000 C = 0.0000 C = 44.58 AB = 49.01 AB = 0.0000 C 10 = 0.0000 C 11 = 29.56 BC 12 = 30.64 BC 13 = 49.80 AB 14 = 41.29 AB 15 = 23.20 BC Mean = 73.15 A Mean 13 = 49.80 AB Mean = 49.01 AB Mean = 44.58 AB Mean 14 = 41.29 AB Mean 12 = 30.64 BC Mean 11 = 29.56 BC Mean 15 = 23.20 BC Mean = 0.0000 C Mean = 0.0000 C Mean 10 = 0.0000 C Mean = 0.0000 C Mean = 0.0000 C Mean = 0.0000 C Mean = 0.0000 C PL Phụ lục Title: THÍ NGHIỆM 2: TỶ LỆ TẠO CHỒI Function: ANOVA-1 Data case no to 63 One way ANOVA grouped over variable (NT) Variable (TY LE TAO CHOI) with values from to 21 ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 20 9100.185 455.009 0.853 Within 42 22406.593 533.490 Total 62 31506.779 Coefficient of Variation = 27.20% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 266.670 88.890 19.24 13.34 3.00 233.340 77.780 19.24 13.34 3.00 250.000 83.333 28.87 13.34 3.00 233.330 77.777 38.49 13.34 3.00 166.670 55.557 50.92 13.34 3.00 300.000 100.000 0.00 13.34 3.00 266.670 88.890 19.24 13.34 3.00 266.670 88.890 19.24 13.34 3.00 300.000 100.000 0.00 13.34 10 3.00 233.340 77.780 19.24 13.34 11 3.00 300.000 100.000 0.00 13.34 12 3.00 266.670 88.890 19.24 13.34 13 3.00 233.340 77.780 19.24 13.34 14 3.00 300.000 100.000 0.00 13.34 15 3.00 233.340 77.780 19.24 13.34 16 3.00 266.670 88.890 19.24 13.34 17 3.00 266.670 88.890 19.24 13.34 18 3.00 266.670 88.890 19.24 13.34 19 3.00 200.000 66.667 33.33 13.34 20 3.00 200.000 66.667 33.33 13.34 21 3.00 300.000 100.000 0.00 13.34 -Total 63.00 5350.050 84.921 22.54 2.84 Within 23.10 Bartlett's test Chi-square = 170.228 Number of Degrees of Freedom = 20 Approximate significance = 0.000 Data File : KẾT QUẢ TRẮC NGHIỆM PHÂN HẠNG Function : RANGE Error Mean Square = 533.5 Error Degrees of Freedom = 42 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 38.06 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 1= 2= 3= 4= 5= 6= 7= 8= 9= 10 = 11 = 88.89 AB Mean 11 = 100.0 A 77.78 AB Mean 14 = 100.0 A 83.33 AB Mean = 100.0 A 77.78 AB Mean = 100.0 A 55.56 B Mean 21 = 100.0 A 100.0 A Mean 12 = 88.89 AB 88.89 AB Mean = 88.89 AB 88.89 AB Mean 18 = 88.89 AB 100.0 A Mean = 88.89 AB 77.78 AB Mean 17 = 88.89 AB 100.0 A Mean = 88.89 AB Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean PL 12 = 13 = 14 = 15 = 16 = 17 = 18 = 19 = 20 = 21 = 88.89 77.78 100.0 77.78 88.89 88.89 88.89 66.67 66.67 100.0 AB AB A AB AB AB AB AB AB A Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 16 = 3= 10 = 15 = 4= 2= 13 = 20 = 19 = 5= 88.89 AB 83.33 AB 77.78 AB 77.78 AB 77.78 AB 77.78 AB 77.78 AB 66.67 AB 66.67 AB 55.56 B Phụ lục Title: THÍ NGHIỆM 2: SỐ CHỒI TRUNG BÌNH / MẪU Function: ANOVA-1 Data case no to 63 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to 21 Variable (SO CHOI) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 20 78.797 3.940 1.001 0.4804 Within 42 165.251 3.935 Total 62 244.048 Coefficient of Variation = 72.37% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 13.340 4.447 3.08 1.15 3.00 12.000 4.000 3.61 1.15 3.00 8.000 2.667 2.33 1.15 3.00 10.670 3.557 3.17 1.15 3.00 11.340 3.780 3.27 1.15 3.00 14.000 4.667 2.03 1.15 3.00 13.000 4.333 2.73 1.15 3.00 5.670 1.890 1.68 1.15 3.00 7.330 2.443 1.64 1.15 10 3.00 11.330 3.777 1.95 1.15 11 3.00 7.330 2.443 0.51 1.15 12 3.00 5.670 1.890 1.68 1.15 13 3.00 4.000 1.333 0.34 1.15 14 3.00 8.330 2.777 1.07 1.15 15 3.00 10.670 3.557 0.96 1.15 16 3.00 4.330 1.443 0.20 1.15 17 3.00 3.670 1.223 0.69 1.15 18 3.00 7.330 2.443 1.64 1.15 19 3.00 5.330 1.777 1.26 1.15 20 3.00 6.340 2.113 1.71 1.15 21 3.00 3.000 1.000 0.00 1.15 -Total 63.00 172.680 2.741 1.98 0.25 Within 1.98 Bartlett's test Chi-square = 48.501 Number of Degrees of Freedom = 20 Approximate significance = 0.000 Data File : KẾT QUẢ TRẮC NGHIỆM PHÂN HẠNG Function : RANGE Error Mean Square = 3.935 Error Degrees of Freedom = 42 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 3.269 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 1= 2= 3= 4= 5= 6= 7= 8= 9= 10 = 11 = 4.450 AB Mean = 4.670 A 4.000 ABC Mean = 4.450 AB 2.670 ABC Mean = 4.330 AB 3.560 ABC Mean = 4.000 ABC 3.780 ABC Mean = 3.780 ABC 4.670 A Mean 10 = 3.780 ABC 4.330 AB Mean 15 = 3.560 ABC 1.890 ABC Mean = 3.560 ABC 2.440 ABC Mean 14 = 2.780 ABC 3.780 ABC Mean = 2.670 ABC 2.440 ABC Mean 18 = 2.440 ABC PL Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 12 = 13 = 14 = 15 = 16 = 17 = 18 = 19 = 20 = 21 = 1.890 1.330 2.780 3.560 1.440 1.220 2.440 1.780 2.110 1.000 ABC Mean = 2.440 ABC BC Mean 11 = 2.440 ABC ABC Mean 20 = 2.110 ABC ABC Mean = 1.890 ABC ABC Mean 12 = 1.890 ABC BC Mean 19 = 1.780 ABC ABC Mean 16 = 1.440 ABC ABC Mean 13 = 1.330 BC ABC Mean 17 = 1.220 BC C Mean 21 = 1.000 C Phụ lục Title: THÍ NGHIỆM 2: CHIỀU CAO TRUNG BÌNH CỦA CHỒI Function: ANOVA-1 Data case no to 63 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to 21 Title:2 THÍ NGHIỆM 3: SỐ RỄ TRUNG BÌNH / MẪU Variable (CHIEU CAO CHOI) Function: ANOVA-1 A N Acase L Y no S I S1 to O F21V A R I A N C E T A B L E Data Degrees of Sum of Mean One way ANOVA grouped over variable (NT) Freedom Squares Square F-value Prob with values from to Variable202 (SO57.161 RE) Between 2.858 22.838 0.0000 Within 42 5.256 0.125 ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Total Degrees 62 of62.417 Sum of Mean Coefficient of Variation = 27.10% Freedom Squares Square F-value Prob Var V A R I A B L E No Between 203.905 15.184 0.0000 Number Sum Average33.984 SD SE -Within 14 31.333 2.238 3.00 4.690 1.563 0.53 0.20 3.00 4.400 1.467 0.12 0.20 Total 20 235.238 3.00 4.770 1.590 0.80 0.20 3.00 3.930 1.310 0.30 0.20 of Variation Coefficient 3.00 3.350 1.117 = 15.79% 0.39 0.20 3.00 4.200 1.400 0.27 0.20 3.00 0.20 Var V A R I4.360 A B L 1.453 E No 0.23 3.00 2.070 0.62 0.20 Number Sum0.690Average SD SE 3.00 2.200 0.733 0.24 0.20 -10 3.00 2.650 0.883 0.28 0.20 3.00 4.000 34.0001.33311.3330.17 2.08 0.86 111 3.00 0.20 3.00 3.200 39.0001.06713.0000.18 1.73 0.86 122 3.00 0.20 3.00 2.520 27.0000.8409.0000.44 1.00 0.86 133 3.00 0.20 144 3.00 0.20 3.00 3.330 31.0001.11010.3330.19 0.58 0.86 155 3.00 0.20 3.00 3.820 38.0001.27312.6670.26 2.08 0.86 16 3.00 3.140 1.047 0.16 0.20 3.00 17.000 5.667 1.53 0.86 17 3.00 2.080 0.693 0.28 0.20 3.00 3.850 13.0001.2834.3330.45 0.58 0.86 187 3.00 0.20 -19 3.00 1.550 0.517 0.33 0.20 20 3.00 0.710 9.476 0.18 0.20 Total 21.00 2.130 199.000 3.43 0.75 21 3.00 15.990 5.330 0.00 Within 1.50 0.20 -Bartlett's test Total 63.00 82.230 1.305 1.00 0.13 Within 0.35 Chi-square Bartlett's test = 4.969 Number of Degrees of Freedom = Chi-square = 34.986 Approximate significance = 0.548 Number of Degrees of Freedom = 20 ────────────────────────────────────────────────── Approximate significance = 0.020 -Data File: KẾT : KẾT QUẢ TRẮC NGHIỆM Data File QUẢ TRẮC NGHIỆM PHÂNPHÂN HẠNG HẠNG Function: RANGE Function RANGE Error Mean: Square = 0.1250 Error Degrees of Freedom = 42 Error Mean Square = 2.238 No of Degrees observations to calculate=a 14 mean = Error of Freedom Least Significant Difference Test No of observations to calculate a mean = LSD value = 0.7789 at alpha = 0.010 Least Significant TestOrder Original Order Difference Ranked LSD value = 3.636 at alpha = 0.010 Mean = 1.560 21 = 5.330 Original Order B MeanRanked OrderA Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = 1.470 BC Mean = 1.590 B 31= = 1.590 = 1.560 11.33B ABMeanMean = B13.00 A = 1.310 BCD Mean = 1.470 BC = 13.00 A Mean = 12.67 A = 1.120 BCDE Mean = 1.450 BCD = 9.000 BC Mean6 = 11.400 = 11.33 = 1.400 BCD Mean BCD AB 10.33BCD AB Mean Mean = 10.33 74= = 1.450 11 = 1.330 BCD AB 85= = 0.6900 BCD BC 12.67 DE A Mean Mean4 = 1.310 = 9.000 96= = 0.7300 18 =6 = 1.2805.670 BCDECD 5.670CDE CD Mean Mean 10 = 0.8800 BCDE Mean 15 = 1.270 BCDE = 4.330 D Mean = 4.330 D 11 = 1.330 BCD Mean = 1.120 BCDE PL Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 12 = 13 = 14 = 15 = 16 = 17 = 18 = 19 = 20 = 21 = 1.070 BCDE Mean 14 = 1.110 BCDE 0.8400 BCDE Mean 12 = 1.070 BCDE 1.110 BCDE Mean 16 = 1.050 BCDE 1.270 BCDE Mean 10 = 0.8800 BCDE 1.050 BCDE Mean 13 = 0.8400 BCDE 0.6900 DE Mean = 0.7300 CDE 1.280 BCDE Mean 20 = 0.7100 CDE 0.5200 E Mean 17 = 0.6900 DE 0.7100 CDE Mean = 0.6900 DE 5.330 A Mean 19 = 0.5200 E Phụ lục Title: THÍ NGHIỆM 3: CHIỀU DÀI RỄ Function: ANOVA-1 Data case no to 21 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to Variable (CHIEU DAI RE) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 11.938 1.990 23.213 0.0000 Within 14 1.200 0.086 Total 20 13.138 Coefficient of Variation = 19.83% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 6.800 2.267 0.68 0.17 3.00 3.900 1.300 0.26 0.17 3.00 3.400 1.133 0.12 0.17 3.00 3.200 1.067 0.12 0.17 3.00 2.900 0.967 0.06 0.17 3.00 2.000 0.667 0.15 0.17 3.00 8.800 2.933 0.12 0.17 -Total 21.00 31.000 1.476 0.81 0.18 Within 0.29 Bartlett's test Chi-square = 14.524 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.024 ─────────────────────────────────────────────────────── Data File : KẾT QUẢ TRẮC NGHIỆM PHÂN HẠNG Function : RANGE Error Mean Square = 0.08600 Error Degrees of Freedom = 14 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.7128 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 1= 2= 3= 4= 5= 6= 7= 2.270 A 1.300 B 1.130 B 1.070 B 0.9700 B 0.6700 B 2.930 A Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 7= 1= 2= 3= 4= 5= 6= 2.930 A 2.270 A 1.300 B 1.130 B 1.070 B 0.9700 B 0.6700 B PL Phụ lục Title: THÍ NGHIỆM 3: SỐ LÁ TRUNG BÌNH / MẪU Function: ANOVA-1 Data case no to 21 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to Variable (SO LA TRUNG BINH) ANALYSIS OF VARIANCE TABLE Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 15.619 2.603 1.708 0.1915 Within 14 21.333 1.524 Total 20 36.952 Coefficient of Variation = 22.94% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 20.000 6.667 2.08 0.71 3.00 19.000 6.333 1.15 0.71 3.00 16.000 5.333 1.53 0.71 3.00 15.000 5.000 0.00 0.71 3.00 17.000 5.667 0.58 0.71 3.00 14.000 4.667 1.15 0.71 3.00 12.000 4.000 1.00 0.71 -Total 21.00 113.000 5.381 1.36 0.30 Within 1.23 Bartlett's test Chi-square = 25.156 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 PL ... + Zeatin ( 6-[ 4-hydroxy-3-metyl-but-2-enylamino]purine ) + Kinetin ( 6-furfurylamino purine ) + BAP (6-Bezyl amino purine ) hay gọi BA (6-Benzyl adenin) + TDZ ( Thidiazuron ) + 2-ip ( Isopentenyl... trường: - Bình tam giác 250mL - Cốc thủy tinh 100mL - Pipet 5mL, 10mL - Micropipet - Ống đong 50mL, 100mL, 1000mL - Phễu - Đũa khuấy thủy tinh - Muỗng để cân hóa chất - 22 - Vật liệu phương pháp -. .. Plumbagin có cơng thức mytyl-2-juglon hay metyl-2-hyddroxy-5-naphtoquinon 1-4 [7] Hình 2.6: Cơng thức cấu tạo plumbagin (Nguồn: http://www.mdpi.org/molbank/m0093.htm) -6 - Tổng quan tài liệu Plumbagin