Xây dựng quy trình nhân giống in vitro cây chuối sáp nghệ (musa balbisiana)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM VÕ THANH TRUYỀN XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN – VITRO CÂY CHUỐI SÁP NGHỆ (Musa balbisiana) LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành Công Nghệ Sinh Học Mã số ngành 60420201 TP HỒ CHÍ MINH, tháng 9 năm 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM VÕ THANH TRUYỀN XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN – VITRO CÂY CHUỐI SÁP NGHỆ (Musa balbisiana) LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành Công Nghệ Sinh Học Mã số ngành 60420201 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM - VÕ THANH TRUYỀN XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN – VITRO CÂY CHUỐI SÁP NGHỆ (Musa balbisiana) LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành : Công Nghệ Sinh Học Mã số ngành: 60420201 TP HỒ CHÍ MINH, tháng năm 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM - VÕ THANH TRUYỀN XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN – VITRO CÂY CHUỐI SÁP NGHỆ (Musa balbisiana) LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành : Công Nghệ Sinh Học Mã số ngành: 60420201 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS BÙI VĂN THẾ VINH TP HỒ CHÍ MINH, tháng năm 2021 TRƯỜNG ĐH CƠNG NGHỆ TP HCM VIỆN ĐÀO TẠO SAU ĐẠI HỌC CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc TP HCM, ngày 22 tháng 10 năm 2021 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM Cán hướng dẫn khoa học : TS Bùi Văn Thế Vinh Luận văn Thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Công nghệ TP HCM ngày 22 tháng 10 năm 2021 Thành phần Hội đồng đánh giá Luận văn Thạc sĩ gồm: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ Luận văn Thạc sĩ) TT Họ tên PGS.TS Nguyễn Tiến Thắng TS Hoàng Anh Tuấn TS Trịnh Thị Lan Anh TS Nguyễn Hoài Hương TS San Trâm Anh Chức danh Hội đồng Chủ tịch Phản biện Phản biện Ủy viên Ủy viên, Thư ký Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá Luận sau Luận văn sửa chữa (nếu có) Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: VÕ THANH TRUYỀN Giới tính: Nam Ngày, tháng, năm sinh: 28 – 04 – 1989 Nơi sinh: Tỉnh Bến Tre Chuyên ngành: Công nghệ sinh học MSHV: 1841880007 I- Tên đề tài: Xây dựng quy trình nhân giống In – Vitro chuối Sáp Nghệ (Musa balbisiana) II- Nhiệm vụ nội dung: - Khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất khử trùng thời gian ngâm mẫu lên khả sống vô trùng mẫu cấy - Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA, IAA (mg/L) lên khả tái sinh chồi chuối sáp - Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA, IAA (mg/L) lên khả nhân nhanh chồi chuối sáp - Khảo sát ảnh hưởng nồng độ IAA (mg/L) lên hình thành rễ chuối sáp - Khảo sát ảnh hưởng giá thể lên hình thành số rễ chiều cao chuối sáp vườn ươm III- Ngày giao nhiệm vụ: 10 – 08 – 2020 IV- Ngày hoàn thành nhiệm vụ: 16 – 02– 2021 V- Cán hướng dẫn: TS BÙI VĂN THẾ VINH CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Họ tên chữ ký) KHOA QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu Luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực Luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn Luận văn rõ nguồn gốc Học viên thực Luận văn (Ký ghi rõ họ tên) LỜI CÁM ƠN Luận văn hồn thành Phịng thí nghiệm ni cấy mơ tế bào thực vật thuộc Trung tâm Khoa học Công nghệ tỉnh Bến Tre Để có luận văn tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc đến thầy Ts Bùi Văn Thế Vinh hướng dẫn, giúp đỡ em với dẫn khoa học hữu ích suốt q trình triển khai nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô trường Đại học Công nghệ Tp.HCM nói chung thầy Viện Khoa Học Ứng Dụng nói riêng truyền đạt cho em kiến thức, kỹ chuyên môn để tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt thời gian qua Đồng thời, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến ban lãnh Trung tâm Khoa học Công nghệ tỉnh Bến Tre tạo điều kiện để em hoàn thành tốt luận văn Xin chân thành cảm ơn Võ Thanh Truyền TÓM TẮT Vi nhân giống chuối Sáp Nghệ (Musa balbisiana) tiến hành nhằm mục đích xác định qui trình vi nhân giống Các thí nghiệm bao gồm vơ trùng bề mặt mẫu vật, nhân mẫu cấy từ chồi đỉnh, nhân nhanh chồi, tái sinh hồn chỉnh tìm giá thể thích hợp chuối Sáp Kết đạt thí nghiệm vơ trùng mẫu cấy là: mẫu cấy sau rửa nưới máy sau khử trùng bề mặt Sodium Hypochioride có nồng độ 10% 25 phút Phương pháp đạt tỷ lệ mẫu 56,5% Đối với thí nghiệm tái sinh chồi, kết thí nghiệm cho thấy mơi trường thích hợp tái sinh chồi: MS + mg/L BA + 0,1 mg/L IAA Mơi trường thích hợp nhân nhanh chồi: MS + mg/L BA + 0,1 mg/L NAA Mơi trường thích hợp tái sinh hồn chỉnh: MS + 1,5mg/L IAA (bổ sung g/L than hoạt tính) Giá thể thích hợp đói với chuối Sáp Mụn dừa Trên sở đề tài tìm xây dựng thành cơng quy trình nhân giống chuối Sáp phương pháp vi nhân giống Kết đề tài áp dụng vào thực tiễn sản xuất tạo số lượng lớn giống chuối sáp Bến Tre ABSTRACT Plant micropropagation Sap banana (Musa balbisiana) was carried out for the purpose of determining the micropropagation process of this plant Experiments included sterility of the specimen surface, propagation of explants from apical shoots, rapid multiplication of shoots, regeneration of complete plants, and finding suitable substrates for Sap banana plants The results obtained in the aseptic test of the explants are: after being washed under running water, the culture surface will be disinfected with 10% Sodium Hypochioride for 25 minutes This method achieves a clean sample rate of 56.5% For the shoot regeneration experiment, the experimental results showed that the suitable medium for shoot regeneration: MS + mg/L BA + 0,1 mg/L IAA Suitable medium for rapid shoot multiplication: MS + mg/L BA + 0,1 mg/L NAA Suitable medium for complete plant regeneration: MS +1.5 mg/L IAA (addition of g/L activated charcoal) The most suitable growing medium for the Sap banana tree is coco coir substrate On that basis, the topic has found and successfully built the process of propagation of Sap banana tree by micropropagation method The results of the project can be applied to produce a large number of Sap banana seedlings in Ben Tre MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược nhóm thực vật 1.1.1 Cây chuối Sáp 1.1.2 Gía trị dinh dưỡng chuối Sáp 1.1.3 Tình hình trồng chuối Sáp 10 1.2 Vi nhân giống qua nuôi cấy đỉnh sinh trưởng 11 1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy mơ tế bào 13 1.4 Một số nghiên cứu nước 23 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Nội dung nghiên cứu 28 2.2 Vật liệu nghiên cứu 28 2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 29 2.4 Nguyên vật liệu 29 2.4.1 Trang thiết bị dụng cụ 29 2.4.2 Hóa chất 30 2.5 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát: 32 2.6 Phương pháp bố trí thí nghiệm 32 2.6.1 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất khử trùng thời gian ngâm mẫu lên khả sống vô trùng mẫu cấy 32 2.6.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA, IAA (mg/L) lên khả tái sinh chồi chuối Sáp 35 2.6.3 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA, IAA (mg/L) lên khả nhân nhanh chồi chuối Sáp 37 2.6.4 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ IAA lên hình thành rễ chuối Sáp 39 2.6.5 Khảo sát ảnh hưởng giá thể lên tạo rễ chiều cao chuối Sáp vườn ươm 40 2.7 Xây dựng quy trình nhân giống 42 2.8 Phương pháp phân tích số liệu thí nghiệm 42 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43 3.1 Kết ảnh hưởng nồng độ chất khử trùng thời gian ngâm mẫu lên khả sống vô trùng mẫu cấy 43 3.2 Kết ảnh hưởng nồng độ BA, IAA (mg/L) lên khả tái sinh chồi chuối Sáp 47 3.3 Kết ảnh hưởng nồng độ BA, IAA (mg/L) lên khả nhân nhanh chồi chuối Sáp 51 3.4 Kết ảnh hưởng nồng độ IAA lên hình thành rễ chuối Sáp 55 3.5 Kết ảnh hưởng giá thể lên tạo rễ chiều cao chuối Sáp vườn ươm 59 3.6 Xây dựng quy trình nhân giống 63 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 PHỤ LỤC 74 PHỤ LỤC : SỐ LIỆU Thí nghiệm Bảng phân tích phương sai ảnh hưởng thời gian nồng độ lên tỷ lệ mẫu sống vô trùng Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 12330,6 Within groups 3600,0 11 24 1120.96 7,47 0,0 150,0 Total (Corr.) 15930,6 35 75 Bảng kiểm định ảnh hưởng thời gian nồng độ lên tỷ lệ mẫu sống vô trùng -Method: 95,0 percent LSD Nghiem Thuc Count Mean Homogeneous Groups -1 X X X 3 8,33333 X 8,33333 X 8,33333 X 33,3333 X 12 33,3333 X 10 33,3333 X 33,3333 X 11 41,6667 XX 56,6667 X 76 Thí nghiệm Bảng phân tích ảnh hưởng nồng độ BA (mg/L), IAA (mg/L) lên khả tái sinh chồi chuối sáp Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 237,778 13 18,2906 Within groups 23,7867 28 0,849524 21,53 0,0000 Total (Corr.) 261,565 41 Bảng kiểm định ảnh hưởng nồng độ BA (mg/L), IAA (mg/L) lên khả tái sinh chồi chuối sap -Method: 95.0 percent LSD Nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -8 1,0 X 1,0 X 2,53333 XX 2,96667 X 14 3,4 X 3 3,73333 XX 4,06667 XX 4,96667 XX 13 5,2 6,43333 XX 6,86667 X 11 7,53333 XX 10 7,53333 XX XX 77 12 8,83333 X 78 Thí nghiệm Bảng phân tích ảnh hưởng nồng độ BA (mg/L), IAA (mg/L) lên khả nhân chồi Chuối sáp Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1030,04 13 79.2336 Within groups 22,2533 28 0,794762 99,69 0,0000 Total (Corr.) 1052,29 41 79 Bảng kiểm định ảnh hưởng nồng độ BA (mg/L), IAA (mg/L) lên khả nhân nhanh chồi chuối sáp -Method: 95,0 percent LSD Nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -8 1,0 X 1,0 X 1,76 X 4,53 X 3 4,86 X 6,5 9,5 10,3 14 11,4 11,8 XX 10 12,3 XX 13 13,2 XX 12 13,9 X 11 16,4 X X XX XX X 80 Thí nghiệm 04 Bảng phân tích phương sai ảnh hưởng độ IAA (mg/L) môi trường Ms lên khả tạo rễ chuối sáp Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups Within groups 28.4323 9.47743 0.25 0.03125 303.28 0.00 - 81 Bảng kiểm định ảnh hưởng độ IAA (mg/l) môi trường Ms lên khả tạo rễ chuối sáp -Method: 95,0 percent LSD Nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -1 3.0 X 4.33333 3 5.58333 7.16667 X X X Standard Parameter Estimate T Error Statistic P-Value CONSTANT 2.95 0868028 34.0811 0.0 Nong IAA 2.75 0.0927961 29.6349 0.0 82 Bảng phân tích ảnh hưởng nồng độ BA (mg/l), IAA (mg/l) lên chiều cao chồi Chuối sáp ANOVA Table for trung binh chieu cao cay by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups Within groups 106.076 12.3333 32 35.3588 91.74 000 0.385417 Total (Corr.) 118.41 35 83 Bảng kiểm định ảnh hưởng độ IAA (mg/l) môi trường Ms lên chiều cao chồi Chuối sáp -Method: 95.0 percent LSD nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -1 7.61111 X 9.27778 X 10.3889 X 12.3333 X 84 Thí nghiệm 5: Bảng phân tích ảnh hưởng giá thể lên số rễ Chuối sáp hình thành Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups Within groups 57.9306 28.9653 0.958333 0.159722 181.35 0.0000 Total (Corr.) 58.8889 Bảng kiểm định ảnh hưởng giá thể lên số rễ Chuối sáp hình thành -Method: 95.0 percent LSD Nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -1 3.41667 4.25 3 9.16667 X X X - 85 Bảng phân tích ảnh hưởng giá thể lên lên chiều cao chuối Sáp Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups Within groups 14,1806 2,41667 7.09028 17,60 031 0,402778 Total (Corr.) 16,5972 86 Bảng kiểm định ảnh hưởng giá thể lên lên chiều cao chuối Sáp -Method: 95,0 percent LSD Nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -1 12,75 13,6667 3 15,75 X X X 87 PHỤ LỤC 2: Môi trường MS Môi trường MS (Murashighe-Skoog, 1962)  Khoáng đa lượng (macro) NH4NO3 1650 mg/L KNO3 1900 mg/L MgSO4.7H2O 370 mg/L KH2PO4 170 mg/L CaCl2.2H2O 440 mg/L  Khoáng vi luợng (micro) KI 0,82 mg/L H3BO4 6,2 mg/L MnSO4.4H2O 22,5 mg/L ZnSO4.7H2O 8,6 mg/L Na2MoO4.2H2O 0,25 mg/L CuSO4.5H2O 0,025 mg/L CoCl2 0,025 mg/L  Vitamin Inositol 100 g/5L Acid Nicotinic g/5L Pyridoxin HCl g/5L Thiamin HCl g/5L 88 Biotin 0,01 g/5L Calcium pantothenate g/5L  Fe_EDTA Fe2SO4.7H2O 27, g/5L Na2EDTA.2H2O 37, g/5L Các chất điều hòa sinh trưởng: BA, IBA, Ki Các chất khác Đường saccharose Thạch (agar) : : 20 g/L 7,5 g/L ... ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM - VÕ THANH TRUYỀN XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN – VITRO CÂY CHUỐI SÁP NGHỆ (Musa balbisiana) LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành : Công Nghệ Sinh Học Mã số... tháng, năm sinh: 28 – 04 – 1989 Nơi sinh: Tỉnh Bến Tre Chuyên ngành: Công nghệ sinh học MSHV: 1841880007 I- Tên đề tài: Xây dựng quy trình nhân giống In – Vitro chuối Sáp Nghệ (Musa balbisiana). .. hai loại chuối sáp trắng chuối sáp nghệ Chuối sáp trắng chuối Sáp có ruột màu trắng, cịn chuối sáp nghệ có ruột màu vàng Chuối sáp nghệ dẻo ngọt, ngon ăn, lại có màu sắc bắt mắt chuối sáp trắng