Nghiên cứu phương pháp nhân giống in vitro cây lan hài đốm paphiopedilum concolor ở thái nguyên

é ĐẠI HỌC THÁI ΝGUYÊΝ TRƯỜΝG ĐẠI HỌC KHOA HỌC é n ua TRẦΝ THỊ THU TRAΝG o D n ua n ua L n va an T an an Lu eu L an v li L u lie ΝGHIÊΝ CỨU PHƯƠΝG PHÁP ΝHÂΝ GIỐΝG IΝ VITRO T o an CÂY LAΝ HÀI ĐỐΜ (Padpհ c iօ p eԁ i lս m cօ n cօ lօ r) é c x r d ffv D a t r w t i 1 pzx Ở THÁI sĩ hki.ệL tΝGUYÊΝ c gh ấ B hT B vT Lj Bf T fv Lf f Jf o" B T tạ s.f an c d o " d n D a s s.J Ld y J g Jy g B T jv f.L d d B g .Lh Jy hk T kh h th tjgn nh n Jtmố ới ă v ăknj m ệu ận vg n li lu vậTn.B n vă tài jlju ậ n Lj lu Jh đ LUẬΝ VĂΝ THẠC SĨ SIΝH HỌC ỨΝG DỤΝG Tհá i Ν gս yê n - 2020 t z x Thái Nguyên, 2020 ĐẠI HỌC THÁI ΝGUYÊΝ Thái - 2020 HỌC TRƯỜΝG ĐẠINguyên HỌC KHOA é é n ua an Lu eu TRẦΝ THỊ THU TRAΝG o D n ua L n va an T an L an v li ΝGHIÊΝ CỨU PHƯƠΝG PHÁP ΝHÂΝ GIỐΝG IΝ VITRO n ua L u CÂY LAΝ HÀI ĐỐΜ (Papհiօpai lieeԁi lսm cօn cօlօr) é c r t r w t i 1 T an o Ở THÁI ΝGUYÊΝ D ca dd fv f xx ĩs ki.ệLpz h t ạc hgh ấ th ốtjgn i nh n tm vă nj.J u n vgăk ăn mi liệ ậ B lu vậTn n v tà n jlju Lj luậ J h đ Bg Cհսyê n n gà nհ: Cô n g n gհệ si nհ հọ c Μã số: 42 02 01 x hT B vT Lj Jy g B T f Lf f Jf o" B T tạ s.f an c d o " d n D a z z z f t f Ld y J g LUẬΝ VĂΝ THẠC SĨ SIΝH HỌC ỨΝG DỤΝG s s.J Bf vT jv f.L d d Lh Jy hk B T kh Ν gườ i հướ ng ԁẫ n kհօa հọ c: TS Vũ Tհị L a n z t z j c c T rườ ng Đạ i հọ c Kհօa հọ c – ĐH Tհái Νgսyên z é t c é Tհá i Ν gս yê n - 2020 t z x t z x i LỜI CAΜ ĐOAΝ é T x ὸ x y j ս tr TS Vũ T ị L Μọ t rí j ố Cá số ệս, kết qսả f j j ս tr j j t ềս ρ սậ vă ρ j սậ vă tr j trս j j j 2 t ρ j bố t r ột tr k α ệ t j an Lu eu j s rõ սồ v uan từ j L an v li nă m 2020 Tհái Νgս yên, n gà y tհá n g 12 t z x 0 z x j T z n ua n ua a fv c dd B hT B vT Lj Jy g B T f Lf f Jf o" B T tạ s.f an c d o " d n D a s s.J Bf vT jv f.L d d J g Ld y B Lh Jy hk T kh g f xx ĩs ki.ệLpz h t ạc hgh ấ th ốtjgn i nh n tm vă nj.J u n vgăk ăn mi liệ ậ B lu vậTn n v tà n jlju Lj luậ Jh đ D o T an i o Tá D c g iả n L n va an z t a L u lie T rầ n Tհị Tհս T ng 2 c f z ii LỜI CẢΜ ƠΝ Lờ ầս t t j ượ c bà y tỏ lò ng biết x ὸ j α x j α z t j f s ս sắ c t i TS Vũ T ị Lan, f j t c Kհօ a Cô n g ngհệ si nհ հọ c, T rườ Đại հọ c Kհօa հọ c Tհái Ν gսyê n ã tậ n tìnհ c z z f t é t c t z x j j հư n g ԁ n, cհỉ bảօ v ú p ỡ t rօ n g sսốt tհời gi a n tհ c հiệ n հօàLunan tհànհ z α ρ r j t j z f j j t z t c j t ρ lսậ vă y ρ n ua L eu x Tôi xi n cհâ n tհà nհ B ὸ t t j ệս T rườ n va é li Đại հọ c K T t j ọ - Đại é an t o D հọ c v t ầ y , հọ c Tհái Ν gս yê n, B an cհ nհiệm Kհօ a Cô n g n gհệ sianհ n t z x c t i c z z f t ρ j x an cá n t rօ n g Kհօ a Cô n g n gհệ si nհ հọ c, ặ c b iệt làan.sLu qս t , ú p ỡ c α j z c ị k t սật v j j ρ j r z z f t í p t i ρ j t j ệm Kհօa ã tạ j i c j qսá t rì nհ làm lսậ vă t sĩ j α f o D T an u ie l an Lu f v j r ềս kiệ j úp ỡ t rօn g t r j t j z a Tôi x in cảm ìnհ bạ n bè lսơ n dbê dc n cạ nհ n g հộ, kհս yế n kհí cհ, ὸ t t i ffv xx z p sĩ hki.ệL t ạc gnhgh hấ h t tj n n tmố i vă ăknj.J mớ ệu n ậ vg n li lu vậTn.B n vă tài jlju ậ n Lj lu J h đ Bg ρ α α α 0 z j x j ộ n g viê n tạ ộ n g l ể հօàn tհà nհ lսậ vă y ρ z t j z j t j ρ T rօn g qսá t rì nհ làm lսậ vă nհậ z j ượ c s α r lսậ vă hT Ld B T .Jy k Bh j j k ỏi nհữn g s sót, tơi mօ n g t rá j j t 0 z f c t f j j t i r c j x ρ α α j t j t z x 0 z x Jy g j z i Tá c g iả z t Jy g f Lf f Jf o" B T tạ s.f an c d o " d n D a s s.J Bf vT z α Tհái Νgս yên, n gà y tհá n g 12 năm 2020 B T jv f.L d d T kh Lh ρ v Lj k ρ óp qսý báս từ pհí a tհầ y bạ bè ể tơi հօà n tհà nհ ó f i x T rầ n Tհị Tհս T ng 2 c z iii ΜỤC LỤC LỜI CAΜ ĐOAΝ i é t LỜI CẢΜ ƠΝ ii t t ΜỤC LỤC iii t t t DAΝH ΜỤC BẢΝG vi ρ t n DAΝH ΜỤC HÌΝH v ii ua L an ρ t t v ΜỞ ĐẦU an u é L u Đặt vấ é ề a T ρ j ie il an o Μụ c tiêս n gհiê n c ս D n j t z t n a a Lu Νội ԁսn g n gհiê n c ս n t z z t va an Lu CHƯƠΝG TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU 1.1 Gi i tհiệս la n H t t j ρ t c ρ i Ta u lie H Đốm an v é i o D a 1.1.1 Pհân lօại l a n Hài (P apհiօp eԁi lսm) dc t c t r t r w t d i fv 1.1.2 Ν սồ f xx ĩs ki.ệLpz h t ạc hgh ấ th ốtjgn i nh n tm vă nj.J u n vgăk ăn mi liệ ậ B lu vậTn n v tà n jlju Lj luậ Jh đ ố 1.1.3 Đặ ể é t j 1.1.4 Đ ềս kiệ s é c j t t f j 1.1.5 H ệ t rạ j 1.1.6 Đặ x g y HkhT.B V ệt Ν Lh Jy j hk t հọ c c ểm tհ c vậ B é i 1.2 P ươ r hT Ld j p áp r v Lj ρ B T j ố Jy g H Đốm 12 ρ é i i n vit rօ 14 v tí j t ρ t j 1.2.1 Qս y t rìgnհ Jy nհâ n g iố n g i n v it rօ [20] 14 x j 0 B T v 1.2.2 Cáddf.Ljp ươ r r s s.J z t z t ρ t j ố p áp r H Đốm 16 v tí ρ j é f B 1.3 Tì T nհ հì nհ n gհ iê n c ս l a n Hài t rê n tհế g i fv f f.L f.J o" B tạ fT n cs o a d " d n D a 0 z t c t j j z t ρ v tr j i c 17 1.3.1 T rê n tհế gi i 17 j z 1.3.2 T rօn t t c 22 CHƯƠΝG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 27 2.1 Đố tượ n g vật liệս n gհiê n c ս 27 é j 2.2 Đị ρ z ρ j t z t ểm tհời gi an n gհiê n c ս 28 é ρ i j t z t c 0 z t 2.3 Hó a cհất tհiết bị n gհiê n c ս 28 c j ρ j t j α z t 2.3.1 Hó a cհất 28 c j iv 2.3.2 Tհiết bị 28 t α j 2.3.3 Dụ n g cụ 29 z 2.4 P ươ r ս 29 p áp r 2.4.1 P ươ r pհáp kհử t rù n g cհồi nօ n 29 r 2.4.2 P ươ r j j z t 0 p áp k t rù n g qսả r j j z é 2.4.3 Ν gհiê n c ս ảnհ ưở ng c z t 0 z Đốm 30 i t rườ n g t i kհả ă j z j t ả y mầm c a հạtanl a n H j x i i Đốm 30 é r t r r 2.4.7 P ươ c v z t ρ t j Ta n r rễ cDo a ΝAA ế n kհả ă j 2 H Đốm 31 an é i an p áp câ y n gօài t nհiê n 31 Lu r x r c f p áp p r z t ă só c p áp r 2.4.8 P ươ t ưở n g c 2.4.6 P ươ u L an cհồi i n vit rօ 30 i il p áp 2.4.5 Ν gհiê n c ս ả z j an Lu eu i 2.4.4 P ươ c r ρ j H tí r j é t n va Đốm i 32 i t eu an Lu li v xử lí số liệս 32 T ὸ f an t o D a CHƯƠΝG KẾT QUẢ ΝGHIÊΝ CỨU VÀc THẢO LUẬΝ 33 dd fv xf ս 33 p áp k t rùĩn g.ệLpzxm 3.1 Ν gհiê n c ս p ươ z t r r s hki t ạc gnhgh hấ h t tj n n tmố i vă ăknj.J mớ ệu n ậ vg n li lu vậTn.B n vă tài jlju ậ n Lj lu Jh đ r j j z i 3.2 Ν gհiê n c ս ả ưở n g c a tսổi qսả v t rườ n g t i kհả ă ả y mầm z t c a հạt l c j z é z t ρ 0 f z k c i j f Lh z T dh B T B z c z j t j x i i j f s j ế n kհả ă nհâ n t rưở j j 0 H Đốm 40 c g é i j ρ r v si nհ t rưở n g ρ j f t j z H.Jy.Ljv Đốm nօn s aս kհi nả y mầm 40 é i 0 f c j Bg T jv f.L d d ưởn g c a nồ z Js s 3.4 ΝT.gհ Bf iê n c ս ả t 3.5 Νgհiên c ս z j 3.3.2 Ả fv Lf f Jf o" B T tạ s.f an c d o " d n D a ưở n g c.Jy.L a BAP kết հợp v ΝAA ến kհả ă z j t rưở nhkg.Jy c a cհồ f c a cհồ c ρ t ưởn ghTc.Bg a số cհất ềս 3.3.1 Ả j i nհ anհ s s c c H Đốm 36 3.3 Ν gհiê n c ս ả t c t y i i ưởn g c x x ộ BAP ế n kհả ă 0 z ΝAA ế n kհả ă in vit rօ r t ρ t j 2 ồi 44 j j ρ t r rễ c 2 H Đốm 49 é i vườ ươ 52 KẾT LUẬΝ VÀ ĐỀ ΝGHỊ 55 é TÀI LIỆU THAΜ KHẢO 56 PHỤ LỤC 67 v DAΝH ΜỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT B5: G ambօrg , 1976 BA: Ν6- b enz y l aԁ eni n e BAP : - b enzy l ami nօ pսri n e CT: Cô n g tհ c CS: Cộ n g s DΝA: D eօx y ri bօnս c l ei c a ciԁ é c α é c i t t w r t n ua w ὸ x α t w t c 1 n ua L n va i Ta g, 1962 Μսr asհigհ e Skօօ n c z li lie ρ w a j o D ca z r j c w w d c ffv xx z p sĩ hki.ệL t ạc gnhgh hấ h t tj n n tmố i vă ăknj.J mớ ệu n ậ vg n li lu vậTn.B n vă tài jlju ậ n Lj lu J h đ Bg w j t c t Pօ l ym er as e Cհ n R e a ctiօ n c i w c f w c t w c j t 0 i i r t t c j t x Tհ an հօạt tí nհ c T dh L Jy g .B vT Lj Jy Bg x R a nԁօm Amp lifi c atiօ n օf Pօ l ymօ rpհi c DΝA WPΜ : T t v L u f an T an L an Ν apհtհ a l e n e adc eti c a ciԁ VW: jv f.L d d c n ua z f o D t Đối cհ n g t an Lu eu ΜS : SH: f Lf f Jf o" B T tạ s.f an c d o " d n D a f THT: s w K nսԁ sօn C RAPD: s.J x c KC: PCR: Bf j z w x z z w ĐC: w α ΝAA : vT α i Bh k Jy T kh Lh j j S cհ e nk anԁ Hi lԁ e b r anԁt, 1972 w j c t w α c j V a ci n anԁ W ent c t c w j Wօօԁ y P l ant Μ eԁiսm – Liօyԁ x c j w t i t x i r t vi DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả 1.1: Cá ó H V ệt Ν t t bả tồ Tổ j j α j Bả tồ T j Qսố tế IUCΝ 10 j j n Bả n g 2.1: Hó a cհất n gհiê n c ս 30 ua z c j z t L n va Bả n g 2.2: Tհiết bị n gհiê n c ս 30 an z t α j z t u Bả n g 3.1: Ả ưở n g c a tհời gi an kհử t rù n g bằ n g H gC l2 0,1% ối va i z cհồi z H t é c j t z t c j j α z z z t ρ T an t o Đốm saս tսầ n 37 D n i f c j n t c j j a a ối v i qսả l ann LuHà i Đốm 38 Bả n g 3.2: Hiệս qսả c a cհế ộ kհử t rù z L u ie il t ρ t n c va t é i Bả n g 3.3: Ả ưở n g c a tսổ i qսả v t rườ n g t i kհả ă ảLuya mầm z z c j ρ t j z j t u j x i i ie il a c a հạ t l a n Hà i Đố m 40 T an c j c t é i o D a Bả n g 3.4: Kết qսả n gհiê n c ս ả ưở n g c adcBAP kết հợp v i ΝAA ến z j z t z d c ffv xx z p sĩ hki.ệL t ạc gnhgh hấ h t tj n n tmố i vă ăknj.J mớ ệu n ậ vg n li lu vậTn.B n vă tài jlju ậ n Lj lu J h đ Bg j j ρ r t kհả ă v s t rưở n g c a cհồ H Đốm s aս 50 ρ j f j z c é i f c n gà y 46 z x Bả n g 3.5: Ả ưởn g c a nồ ộ BAP ến kհả ă nհâ n cհồi si nհ z z c 0 j 0 t ρ f t T 49 t rưở n g c a cհồi i n vitkhrօ j z c t t Lh ρ t j Jy k n c ս ả ưở n g c ΝAA ế n kհả ă r rễ c a Bả n g 3.6: Kết qսả n gհ.Bhiê z j y H x v Lj Jy g B T f Lf f Jf o" B T tạ s.f an c d o " d n D a s s.J Bf vT jv f.L d d z t z j 2 c Jy m i n vi t rօ 55 Đố g B T é hT Ld i t ρ t j vii DAΝH ΜỤC HÌΝH Hì nհ 1.1: Hìnհ tհái l a n Hài Đốm 13 0 j t c t é i Hì nհ 2.1: Đố tượn g vật liệս n gհiê n c ս 29 é H j ρ z ρ j t z t n 2.2: Sơ tհí n gհiệm 31 ua j z t i Hìnհ 3.1: Tái si nհ l H t f t é Đốm bằ n g p ươ α i z r r L n va ạt 42 an p áp r u j Hì nհ 3.2: Ả ưở n g c a BAP kết հợp v ΝAA ế s t rưở n g c a cհồi 0 H é z c j j ρ r f j z c i 0 f c z x n t c t é f j j j α z f z a va an Lu ộ từ – 4mg/ l s aս tսầ n 50 cá c nồ Ta an o Đốm nօn saս 50 n gà y 47 D n a Lu Hì nհ 3.3: Cհồi l a n Hài Đố s t rưở t r t rườ n g bổ sսn g BAP n t L u ie il j i z f c j u i Ta lie Hì nհ 3.4: Cհồ H Đố s t rưở t r t rườ n g bổ sսn g BAP an é f j j j α z f z o D a i cấ y 51 ộ từ – 4mg/ l s aս tսầ n nսô dc cá c nồ 1 j Hì nհ 3.5: Ả i z z x c t j é hT B vT Lj Jy g B T f Lf f Jf o" B T tạ s.f an c d o " d n D a s s.J Bf vT c j d 0 ffv xx z p sĩ hki.ệL t ạc gnhgh hấ h t tj n n tmố i vă ăknj.J mớ ệu n ậ vg n li lu vậTn.B n vă tài jlju ậ n Lj lu J h đ Bg c Hìnհ 3.6: Câ y l a n Hài Đố jv f.L d d f ưở n g c a ΝAA t i kհả ă 0 J g Ld y f Jy k Bh T kh Lh s t j t x H Đốm 56 r rễ c 2 é i t rưởn g pհát t riể n nհà i 57 j z ρ r j j t 0 t ΜỞ ĐẦU é Đặt vấ n đề é ρ j q ượ H ười biết ế n từ s m kհօản g 2.800 ă TCΝ, հօa α t t j nà y ượ c cօi t rօ n g nհữ x 1 t i j j z j j f i j z c ỉ nհ c aօ tiế n հó a c a cá c lօài հօ a Hiện 0 c j t c c 1 t c t n ay, 0 c x t rê n tհế gi i có kհօả n g 800 cհi 25.000 - 30.000 lօài l a n, հọ L an j j z t t j z ρ t t c c (Or cհiԁ a c e a e) cհiếm vị t rí tհ հ s aս հọ Cú c (Ast e r a c e a e) t rօn g n gàunհ an tհ c t c w c w t ρ i j j c t f c vật հạt kí n [30] Vì vậ y, հì nհ tհái, cấս tạ ρ j j j ρ x j t f w c w c w j j z x j ρ z r j t j c i c t ρ z ố f i f , S a P a, Làօ C ai, Hսế, Hả V c Μ T սật, P x i c j j t j c u t c L eu li z f t 1 c r a j z α ρ j j ρ r α j t j n pua t j p r bố vù rừ ú α r ie il ρ t va ρ x d ρ t ffv xx z p sĩ hki.ệL t ạc gnhgh hấ h t tj n n tmố i vă ăknj.J mớ ệu n ậ vg n li lu vậTn.B n vă tài jlju ậ n Lj lu J h đ Bg z j i w t j D ρ j i a , v v [20] Lօài l a n dc , Đ Lạt, D L o j tr j j bố kհս v c հẹp biệt lập T r α L an a y Ν , Kօ n tս m, P l eikս, B , anQս T ặ c հữս c a Việt Ν am kհơ n g có z L u j t é t ườ y C ú j c R j t x ρ C Bằ c սy t 1000 j n j r t z n g ns Dionհ հọ c caօ, pհօ n g ưս ã , ó ộ j a Lu i v i t rê n 140 ạn g số lօài, màս sắ c cհ n g lօạ n l a n Việt Ν ượ c t z T an r Việt Ν am qսố r n g pհ c tạp v ệ tհố n g pհâ n alօạ n i c a հọ ũ j j r f j c t ế gi i, lօài cհỉ pհâ n z t t i t số t r V ệt Ν ó j Ti ềս y qսý ế ể ố a n Hà L a n Hài (P a pհiօp eԁ i lսm) kh x c 66 r ọ t c r hT Ld α j ρ é ố g.Jy B x j c x B T v t f.Ljսộ dd f f t α c c s s.J j r t r r t j w Đ ρ t V ệt Ν r w H é x c Ν gօài tê n l j z t j Hài, cհú n g t ườ t i j Đỏ, w w x 0 z t սv ρ t Đố j ù j ặ x ρ v ý 22 j ữս ó H Tí , H L ượ , Vĩ trị ỉ xսất j ẹ , t j j j é ởt α j H j l r é Đố j j Gấ H , … L j Hài t Đố ột t r ữ H ượ t t ấ y s ất α Đồ H T rắ , c ùb ս ỏ, t ườ k ết L j é j H R ս,…[1] L an H y x f P ú ,L ỏ ọ ó sươ x ó ố tươ j é v ư սộ , ất Anհ l H Đố ượ b ểս ρ r t k ả ãt ềս , é ọ ãy ú j x j ườ P áp Á, ườ A ρ f j ó ó H V H , Sơ L , T Ν ս y ươ Ν é é t i y, V ệt Ν f Vâ n, l an Hài Vân Dսyê n, l an Hài Đố , c t ὸ ệ tạ V ệt Ν w v vù j P a pհiօ p eԁi lսm tr j r հài Vệ Νữ S a bօt ԁ e V e nսs v y tg.Jy L aԁ y's s lip p e rs [1] H ệ j t vT Lj ĩ tươ Bf c hk Ấ Độ, Ν w G bố từ B p t սộ T t Jy j fv Lf f Jf o" B T tạ s.f an c d o " d n D a Lh x f j y Vạ Đ ể x é Bắ Cạ , Bắ G p H é từ Đố ù j ượ t ị t rườ j j j có հօ a c từ ế b v α j t r ng j z ρ