Một số đặc điểm đột biến gen slc25a13 trên người bệnh bị thiếu hụt citrin tại bệnh viện nhi trung ương giai đoạn 2018 – 2022

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO, BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG NGUYỄN THỊ MAI HƯƠNG MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM ĐỘT BIẾN GEN SLC25A13 TRÊN NGƯỜI BỆNH BỊ H P THIẾU HỤT CITRIN TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG GIAI ĐOẠN 2018-2022 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC U MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720601 H HÀ NỘI, 2022 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO, BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG NGUYỄN THỊ MAI HƯƠNG H P MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM ĐỘT BIẾN GEN SLC25A13 TRÊN NGƯỜI BỆNH BỊ THIẾU HỤT CITRIN TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG GIAI ĐOẠN 2018-2022 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC U MÃ SỐ CHUYÊN NGÀNH: 8720601 H NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS BS NGÔ DIỄM NGỌC HÀ NỘI, 2022 ii LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu thực hỗ trợ, giúp đỡ nhiều người Tôi xin trân trọng cảm ơn luôn ghi nhớ! Lời cảm ơn sâu sắc tơi xin gửi đến tồn người bệnh bị bệnh thiếu hụt Citrin gia đình họ Nếu khơng có hợp tác nhiệt tình họ, tơi khơng thể hồn thành nghiên cứu Tơi xin trân trọng cảm ơn TS BS Ngô Diễm Ngọc, khoa Di truyền sinh học phân tử, Bệnh viện Nhi trung ương hướng dẫn tơi q trình nghiên cứu Tôi gửi lời cảm ơn chân thành đến Ths Nguyễn Thị Anh Vân, trường Đại học Y tế công H P cộng hỗ trợ suốt trình hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến vị lãnh đạo Bệnh viện Nhi Trung Ương anh, chị đồng nghiệp, đặc biệt TS.BS Nguyễn Phạm Anh Hoa, Trưởng Khoa Gan-Mật tạo điều kiện, giúp đỡ trình nghiên cứu Tơi thực xúc động tự hào hỗ trợ nhiệt tình, động viên, chia sẻ U đồng nghiệp Khoa Di truyền Sinh học phân tử, nơi công tác, để tơi hồn thành nhiệm vụ nghiên cứu tôi! H Tôi vô cảm ơn chia sẻ, giúp đỡ động viên bố mẹ gia đình tơi Chồng tơi người thân yêu bên cạnh tôi, động viên yêu thương vô bờ bến! Họ động lực để luôn cố gắng không ngừng Tôi nguyện cố gắng để làm điều có ý nghĩa với gia đình, với sống với bệnh nhân Nguyễn Thị Mai Hương iii MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chương 1: Tổng quan tài liệu 1.1 Bệnh thiếu hụt Citrin 1.2 Đặc điểm di truyền bệnh thiếu hụt Citrin 1.3 Tình hình nghiên cứu đột biến gen SLC25A13 bệnh thiếu hụt Citrin giới Việt Nam 14 1.4 Giới thiệu địa điểm nghiên cứu 21 Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu 23 H P 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.2 Thời gian thu thập số liệu địa điểm nghiên cứu 23 2.3 Thiết kế nghiên cứu 23 2.4 Cỡ mẫu 24 2.5 Phương pháp chọn mẫu 25 2.6 Phương pháp thu thập số liệu 25 2.7 Biến số nghiên cứu 25 2.8 Các khái niệm, quy trình kỹ thuật sử dụng 26 2.9 Phương pháp phân tích số liệu 30 U H 2.10 Đạo đức nghiên cứu 31 2.11 Hạn chế nghiên cứu, sai số biện pháp khắc phục sai số 31 Chương 3: Kết nghiên cứu 32 3.1 Xác định đột biến gen SLC25A13 32 3.2 Tỷ lệ kiểu gen đột biến gen SLC25A13 41 Chương 4: Bàn luận 50 4.1 Đột biến gen SLC25A13 người bệnh thiếu hụt citrin 50 4.2 Tỷ lệ kiểu gen đột biến gen SLC25A13 55 iv KẾT LUẬN 62 KHUYẾN NGHỊ 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 PHỤ LỤC 74 8.1 Phụ lục 1: Kết xét nghiệm di truyền người bệnh nghiên cứu 74 8.2 Phụ lục 2: Phiếu thông tin người bệnh 83 8.3 Phụ lục 3: Kết tách DNA tổng số người bệnh bị thiếu hụt Citrin 85 8.4 Phụ lục 4: Sản phẩm PCR 18 exon gen SLC25A13 90 8.5 Phụ lục 5: Bảng mã hóa viết tắt axit amin 91 8.6 Phụ lục 6: Hóa chất thiết bị sử dụng nghiên cứu 92 8.7 Phụ lục 7: Kỹ thuật sinh học phân tử sử dụng nghiên cứu 94 H P H U v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AGC (Aspartate/Glutamate carrier): Chất vận chuyển Aspartat Glutamat Bp (Base pair): Cặp bazơ c.DNA (Complementary DNA): DNA bổ sung CTLN2 (Adult-onset type II citrullinemia): Vàng da ứ mật khởi phát người trưởng thành ddNTP (Dideoxynucleotide triphosphate): nucleotide tự đánh dấu huỳnh quang DNA (Desoxyribonucleic acid): phân tử mang thông tin di truyền dNTP (Deoxynucleotide triphosphate): Nucleotide gồm Adenine, Guanine, Cytozine, H P Thymine EtBr (Ethidium bromide): hóa chất nhuộm DNA FTTDCD (Failure to thrive and dyslipidemia caused by citrin deficiency): Không phát triển rối loạn lipid máu thiếu citrin GS: Glutamine synthetase U Kb (kilo base): đơn vị đo kích thước DNA kDa (kilo Dalton): đơn vị đo khối lượng protein NADH (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Hydrogen): Năng lượng khử NADH H NICCD (Neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency): Vàng da ứ mật khởi phát giai đoạn sơ sinh NASH (Nonalcoholic steatohepatitis): Viêm gan nhiễm mỡ khơng rượu NGS (Next generation sequencing): Giải trình tự hệ MCT (Medium chain triglyceride): Chất béo chuỗi trung tính MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification): Kỹ thuật khuếch đại đa mồi dựa vào phản ứng nối MS (Mass Spectrometry): Kỹ thuật để đo tỉ lệ khối/điện tích ion mRNA (message ribonucleic axit): RNA thông tin PCR (Polymerase Chain Reaction): Phản ứng trùng hợp chuỗi RFLP (Restriction fragement length polymophism): Đa hình đoạn cắt giới hạn vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Đột biến phát người bệnh bị thiếu hụt Citrin 11 Bảng 2.1 Các biến số nghiên cứu 25 Bảng 2.2 Trình tự cặp mồi kiểm tra lại đột biến 27 Bảng 2.3 Trình tự cặp mồi phản ứng PCR/PCR-RFLP 27 Bảng 2.4 Trình tự 18 cặp mồi dùng giải trình tự gen 27 Bảng 2.8 Kích thước sản phẩm cắt enzyme đột biến sàng lọc kỹ thuật PCR/PCR-RFLP 29 Bảng 3.1 Phân bố người bệnh theo giới độ tuổi phát bệnh trung bình 32 H P Bảng 3.2 Tóm tắt kỹ thuật sinh học phân tử sử dụng chẩn đoán bệnh thiếu hụt Citrin 32 Bảng 3.3 Tỷ lệ loại kiểu gen nghiên cứu 41 Bảng 3.4 Các loại kiểu gen người bệnh 41 Bảng 3.5 Kết xác định tỷ lệ loại đột biến gen SLC25A13 43 U Bảng 3.6 Các loại đột biến nghiên cứu 42 Bảng 3.7 Sự phân bố đột biến gen SLC25A13 43 Bảng 3.8 Phân loại đột biến gen SLC25A13 44 H Bảng 3.9 Xét nghiệm sinh hóa người bệnh mã số WBCT170102 47 Bảng 3.10 Xét nghiệm sinh hóa người bệnh mã số WBCTS210304 48 Bảng 3.11 Sàng lọc axit amin người bệnh mã số WBCTS210304 49 Bảng 2.5 Thành phần pha hóa chất PCR 96 Bảng 2.6 Thành phần pha hóa chất cắt enzyme 97 Bảng 2.7 Thành phần pha hóa chất PCR sợi đơn 98 vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc gen SLC25A13 sơ đồ tóm tắt vị trí 30 đột biến gen SLC25A13 [12] 10 Hình 1.2 Sơ đồ chuyển hóa chu trình urê thoi malate-aspartate 13 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 24 Hình 3.1 Hình ảnh điện di sản phẩm cắt enzyme đột biến I 33 Hình 3.2 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR đột biến III 34 Hình 3.3 Hình ảnh điện di sản phẩm cắt enzyme đột biến X 35 Hình 3.4 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR đột biến XIX 35 H P Hình 3.5 Hình ảnh trình tự gen có đột biến p.M1T 36 Hình 3.6 Hình ảnh trình tự gen có đột biến p.L45F 37 Hình 3.7 Hình ảnh trình tự gen có đột biến IVS11+1G>A 37 Hình 3.8 Hình ảnh trình tự gen có đột biến I 38 Hình 3.9 Hình ảnh trình tự gen có đột biến p.V411M 38 U Hình 3.10 Hình ảnh trình tự gen có đột biến p.R588Q 39 Hình 3.11 Hình ảnh trình tự gen có đột biến p.R467* 39 Hình 3.12 Hình ảnh trình tự gen bị đột biến [c.1956C>A;c.1962 delT] 40 H Hình 3.13 Hình ảnh trình tự gen bị đột biến [c.1956C>A; c.1962 delT] 40 Hình 3.14 Phả hệ, hình ảnh điện di sản phẩm cắt enzyme đột biến I trình tự đoạn gen bị đột biến [ c.1956C>A; c.1962 delT] 45 Hình 3.15 Phả hệ, điện di agarose đột biến c.851_854del trình tự gen có đột biến p.Y24_72Ifs*10 46 viii TÓM TẮT NGHIÊN CỨU Thiếu hụt Citrin bệnh di truyền lặn nhiễm sắc thể thường, gặp giới đột biến gen SLC25A13 Bệnh gồm thể lâm sàng NICCD CTLN2, có độ tuổi khởi phát khác Xét nghiệm di truyền nhằm phát đột biến gen để chẩn đoán xác định sở để điều trị cho người bệnh sở để sàng lọc cho thành viên gia đình chẩn đốn trước sịnh Vậy, đột biến gen SLC25A13 người Việt Nam có khác biệt so với cơng bố y văn? Đột biến phổ biến kiểu gen phổ biến? Nghiên cứu thực để làm rõ nội dung Nghiên cứu thực 122 người bệnh từ 122 gia đình có độ tuổi từ 0-1 tuổi Khoa Di truyền sinh học phân tử, bệnh H P viện Nhi Trung ương Nghiên cứu thực hồi cứu, mô tả cắt ngang từ tháng 01/2018-04/2018 tiến cứu, mô tả cắt ngang từ 05/2022-07/2002 Số liệu đột biến gen thu thập phiếu thông tin người bệnh phát kỹ thuật PCR/PCR-RFLP giải trình tự gen trực tiếp Trong tổng số 122 người bệnh, 99 người có kiểu gen đồng hợp tử 23 người có kiểu gen dị hợp tử kép Kết U nghiên cứu xác định kiểu gen, kiểu gen đồng hợp tử đột biến c851_854del phổ biến Tổng số 12 đột biến gen SLC25A13 khác tìm thấy nghiên cứu gồm đột biến [c.1956C>A;c.1962del] c.70-63_132del 10 đột H biến công bố (p.R284Rfs*3, IVS11+1G>A, p.A554fs*570, IVS6+5G>A, p.A584fs*585, c.2T>C, c.135G>C, c.1231G>A, c.1399C>T, c.1763G>A) Như vậy, đột biến gen SLC25A13 xảy toàn gen Đột biến c.851_854del đột biến phổ biến nhất, IVS16ins đột biến phổ biến thứ hai người bệnh thiếu hụt Citrin Việt Nam Kiểu gen đồng hợp tử đột biến c.851_854del phổ biến người bệnh thiếu hụt Citrin Việt Nam Phát đột biến gen SLC25A13 tiêu chuẩn vàng để chẩn đoán xác định bệnh Thiếu hụt Citrin, đồng thời cịn sở để tư vấn di truyền, tư vấn di truyền trước sinh trước hôn nhân cho người mang gen bệnh ĐẶT VẤN ĐỀ Thiếu hụt citrin bệnh di truyền chuyển hóa gây bệnh vàng da, ứ mật gan trẻ sơ sinh (NICCD) Gen khiếm khuyết bệnh nhân thiếu hụt citrin SLC25A13, nằm nhiễm sắc thể 7q21.3, mô tả lần người bệnh mắc bệnh citrullinemia loại II người lớn (1) Gen mã hóa citrin, chất mang aspartate (Asp)-glutamate (Glu) màng ty thể, tham gia vào q trình tạo gluconeogenesis, đường phân hiếu khí chuyển động aspartate từ ty thể đến tế bào chất, thành phần thoi malate-aspartate NADH Nó mô tả lần người Nhật Bản người Đông Á coi bệnh liên quan đến sắc tộc (2) Người bệnh NICCD có xác định Israel, Cộng hịa H P Séc, Vương quốc Anh Hoa Kỳ, nhiên đột biến quần thể khác với đột biến phổ biến châu Á Đột biến gen SLC25A13 đa dạng, gồm nhiều loại đột biến xảy toàn gen Cho đến nay, khoảng 100 đột biến khác phát gen SLC25A13 Tại Việt Nam, số nghiên cứu thiếu hụt Citrin mô tả đặc điểm U lâm sàng, cận lâm sàng người bệnh Nghiên cứu đột biến gen SLC25A13 cịn hạn chế nghiên cứu sàng lọc bốn đột biến xác định gen SLC25A13 mà chưa thể tầm soát hết tồn bất thường xảy gen (14,15) H Ngồi ra, đột biến gen SLC25A13 có đặc trưng chủng tộc (1) nên dựa liệu công bố giới để làm sở để phát đột biến gen người Việt Nam hiệu khơng cao Thêm nữa, phát đột biến gen SLC25A13 khơng có ý nghĩa quan trọng chẩn đoán xác định bệnh thiếu hụt Citrin mà mang lại liệu quan trọng đột biến gen người bệnh mắc thiếu hụt Citrin Từ đó, nghiên cứu xác định đột biến thường gặp vùng gen thường xảy đột biến, giúp cho việc chẩn đoán nhanh người bệnh điều trị kịp thời Vì bệnh thiếu hụt Citrin khởi phát sớm, lâm sàng khơng điển hình nên đơi việc chẩn đốn bệnh gặp khó khăn bị bỏ sót khiến người bệnh đối mặt với nguy nhiều biến chứng nguy hiểm ảnh hưởng lâu dài đến chất lượng sống Dù vậy, đa số người bệnh tự thích nghi với bệnh độ tuổi từ đến 12 97 o Exon 1: 95oC - giây, [95oC - 30 giây, 62oC – phút, 72oC – phút] x 32 chu kỳ, 72oC -15 phút, giữ lạnh 20 oC o Exon 6, 10: 95oC - giây, [95oC - 30 giây, 54oC – phút, 72oC – phút] x 32 chu kỳ, 72oC -15 phút, giữ lạnh 20 oC o Các exon lại: 95oC - giây, [95oC - 30 giây, 57oC – phút, 72oC – phút] x 32 chu kỳ, 72oC -15 phút, giữ lạnh 20 oC - Chu trình nhiệt PCR cho cặp mồi thiết kế thêm cho đột biến mới: o Exon 1: 95oC - giây, [95oC - 30 giây, 58oC – phút, 72oC – 30 giây] x 35 chu kỳ, 72oC - phút, giữ lạnh 20 oC Sản phẩm PCR bảo quản nhiệt độ 4-20°C để sử dụng cho H P bước Sản phẩm PCR đột biến III, XIX điện di thạch agarose 3% 1% chụp ảnh lại thạch điện để phân tích kết người bệnh  Kỹ thuật PCR-RFLP PCR cho đột biến gồm đột biến c.851_854del, X thực tương tự mục 2.8.3.3 Sản phẩm PCR đột biến tiếp tục cắt enzyme U Tail Tas I (Bảng 2.6) điều kiện thích hợp Phản ứng cắt enzyme ủ nhiệt độ 65o C từ đến 10 Sản phẩm cắt enzyme đột biến c.851_854del, X điện di thạch agarose 3% H Bảng 8.2 Thành phần pha hóa chất cắt enzyme Hóa chất dH2O 10X buffer 10µ/µl Tail Tas I Thể tích (µl) 12,7 0,3 Sản phẩm PCR Tổng số 20  Tinh sản phẩm PCR Tinh sản phẩm PCR thực kit tinh chuyên dụng hãng Qiagen (Đức) Sản phẩm PCR giữ lại màng lọc chuyên dụng, trình 98 tự mồi thừa, dNTPs thừa phân hủy loại bỏ qua màng lọc Quá trình thực sau: - Kiểm tra sản phẩm PCR phương pháp điện di agarose trước tinh - Thêm 100 µl dung dịch Binding buffer B2 vào ống chứa 25 µl sản phẩm PCR (bổ sung theo thể tích 4/1 (4 thể tích đệm thể tích mẫu), trộn - Chuyển tồn dung dịch vào cột lọc Pure Link Spin Column để sẵn tuýp, ly tâm 13.000 vòng phút, loại bỏ dịch - Thêm 650 µl dung dịch Wash buffer (W1) vào cột lọc ly tâm 13.000 vòng phút, bỏ dịch tiếp tục ly tâm 13.000 vòng phút - Chuyển cột lọc sang ống eppendorf 1.5ml vô trùng chuẩn bị sẵn, bổ H P sung 50 µl đệm EB (Elution buffer) vào cột lọc; Để nhiệt độ phịng phút sau ly tâm 13.000 vòng phút - Sản phẩm tinh điện di kiểm tra thạch agarose 1% - Sản phẩm PCR tinh bảo quản - 4°C trường hợp dùng lưu trữ -20°C U  Kỹ thuật giải trình tự gen theo phương pháp Sanger Giải trình tự trực tiếp máy giải trình tự tự động ABI PRISM 3500 Genetic Analyzer machine (Applied Biosystem, Hoa Kỳ) thực sau: - H PCR mồi đơn: Sử dụng mồi xuôi mồi ngược để tổng hợp DNA sợi đơn Thành phần PCR sợi đơn sử dụng ddNTPs đánh dấu huỳnh quang Các thành phần phản ứng pha sau (Bảng 2.7): Bảng 8.3 Thành phần pha hóa chất PCR sợi đơn Hóa chất dH2O 5X bigdye v3.1 buffer BigDye v3.1 Termination reaction kit Thể tích (µl) 5,7 0,3 10 µM mồi ngược/ mồi ngược Sản phẩm PCR tinh Tổng thể tích 10 99 - Chu trình nhiệt cho PCR sợi đơn: 96oC – phút, [96oC - 10 giây, 50oC – giây, 60oC – phút] x 25 chu kỳ, giữ lạnh 4oC - Tinh sản phẩm PCR mồi đơn: Sản phẩm PCR tinh sử dụng kít tinh BigDyeX Terminater Chuẩn bị hóa chất tinh sản phẩm PCR sợi đơn sau Dung dịch SAM Solution BigDye Xterminator trộn theo thể tích 4.5 đến (v/v) vòng 24 trước sử dụng o Trộn dung dịch trên, bổ sung 55 µl dung dịch chuẩn bị vào ống 0.2 µl PCR sợi đơn o Trộn dung dịch có ống PCR 30 phút, sau ly tâm ống PCR với tốc độ 13.000 vòng/phút phút - H P Nhỏ mẫu vào plate đựng mẫu 96 giếng Hút 20 µl sản phẩm tinh PCR mồi đơn nhỏ vào giếng plate chứa mẫu 96 giếng - Thiết lập thư mục giải trình tự: đánh số tên mẫu chạy tương ứng plate 96 giếng lựa chọn chương trình giải trình tự thích hợp - Tiến hành chạy máy giải trình tự tự động: Đặt khay chứa mẫu vào vị trí U máy giải trình tự gen tiến hành điện di mao quản máy ABI3500 H BỘ Y TẾ Biểu mẫu TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG BIÊN BẢN GIẢI TRÌNH CHỈNH SỬA CÁC GĨP Ý ĐỀ CƯƠNG/LUẬN VĂN/LUẬN ÁN/CHUYÊN ĐỀ LUẬN ÁN Họ tên học viên: Nguyễn Thị Mai Hương Tên đề tài: Một số đặc điểm đột biến gen SLC25A13 người bệnh bị thiếu hụt Citrin bệnh viện Nhi Trung ương giai đoạn 2018 – 2022 Nội dung góp ý Phần giải trình học viên (Liệt kê nội dung góp ý theo thứ tự phần đề cương/luận văn/luận án/chuyên đề) (Nêu rõ chỉnh sửa nào, phần nào, trang Nếu không chỉnh sửa,giải thích lý khơng chỉnh sửa) TT H P Định hướng chuyên ngành luận văn/luận án …… … Tóm tắt H - Viết lại theo format trường - Cách dùng tên đột biến không đồng - Cần đề cập biến thể phần tóm tắt U Tên đề tài luận văn/luận án/chuyên đề - Học viên sửa lại tóm tắt nghiên cứu theo hướng dẫn trường (Trang viii) - Học viên sửa thống cách gọi tên đột biến mức độ cDNA cho tất đột biến - Học viên bổ sung biến thể vào tóm tắt nghiên cứu Đặt vấn đề … Mục tiêu nghiên cứu - Xem thay đổi điều chỉnh nội dung mục tiêu - Học viên sửa lại mục tiêu nghiên cứu theo góp ý phản biện Mục tiêu “Xác định đột biến….” mục tiêu Nên đổi động từ mục tiêu mục tiêu “Mô tả tỷ lệ đột biến…” (Trang 1) thu gọn làm mục tiêu Khung lý thuyết/cây vấn đề … Đối tượng phương pháp nghiên cứu - Bổ sung khuyến cáo - Học viên xin chân thành xin lỗi sai giải Hội di truyền Hoa kì trình phản biện kín (Học viên nhầm mục 2.9.1.3 thành mục 2.9.1.2) Trong luận văn, học viên bổ sung tiêu chuẩn nhận định biến thể Hộ di truyền Hoa Kì H P mục 2.9.1.3 (Trang 29) - Hạn chế sử dụng dấu gạch - Học viên chỉnh sửa lại toàn luận văn, đặc biệt ngang đầu dòng, viết thành phần Đối tượng phương pháp nghiên cứu Học viên đoạn văn bỏ bớt dấu gạch ngang đầu dòng viết lại thành đoạn văn - Xem xét trình bày lại - Học viên trình cụ thể thiết kế nghiên cứu, phương theo thiết kế nghiên cứu pháp chọn mẫu theo thiết kế nghiên cứu gồm giai U đoạn tiến cứu hồi cứu Mỗi giai đoạn, học viên làm rõ lượng mẫu cách thức thu thập số liệu nghiên H cứu (Trang 21-22) - Chuyển bớt nội dung thiết - Học viên chuyển nội dung có phần trang thiết bị bị, kỹ thuật sang phụ lục phương pháp kỹ thuật sang phụ lục 6,7 - Sửa lại sơ đồ nghiên cứu - Học viên sửa lại sơ đồ nghiên cứu dựa thiết kế nghiên cứu (trình bày rõ giai đoạn hồi cứu tiến cứu) - Đối chiếu thời gian nghiên -Học viên đối chiếu với định Hội đồng đạo cứu với định Hội đức (QĐ có hiệu lực từ 19/05) thiết kế nghiên cứu đồng đạo đức phù hợp với thời gian - Hiệu chỉnh lại biến số - Học viên chỉnh sửa biến nghiên cứu làm rõ tiêu nghiên cứu chuẩn chọn mẫu chủ đích nội dung phương pháp chọn mẫu (Trang 23) - Hạn chế nghiên cứu - Học viên sửa hạn chế nghiên cứu Theo đó, hạn cần sửa lại chế nghiên cứu chưa giải trình tự tồn gen cho 109 bệnh nhân có đột biến đồng hợp dị hợp kép sàng lọc PCR-RFLP Kết nghiên cứu - Xem xét trình bày lại theo góp ý, khơng nhắc lại - Học viên bỏ toàn nội dung nhắc đến kỹ thuật phương pháp chương kỹ thuật sử dụng - Đưa thêm alen đột biến - Trên hình 3.14 3.15 trình bày đột biến thứ người bệnh có alen, theo đột biến thể hình ảnh điện đột biến di (3.14b 3.15b) đột biến minh họa hình ảnh trình tự gen bị đột biến (Trang 43-44) - Chuyển nội dung kỹ thuật lên chương 2, không nhắc - Học viên bỏ toàn nội dung nhắc đến kỹ thuật phương pháp chương lại - Chuyển chữ số thập phân sang theo chuẩn Tiếng H P - Học viên chuyển toàn dấu “.” sang dấu “,” chữ số thập phân toàn luận văn Việt - Giải thích “n” bảng 3.1 gì? (Trang 30) U Bàn luận - Xem xét trình bày lại theo góp ý 10 - Học viên bổ súng thích “n” bảng 3.1 Kết luận -Học viên lược bỏ nội dung nhắc lại kỹ thuật thống cách viết tên đột biến phần bàn luận H - Thống viết tên - Học viên sửa lại thống cách viết tên đột biến đột biến theo qui ước quốc tế - Viết thành đoạn văn - Học viên viết lại thành đoạn văn theo mục tiêu nghiên cứu (Trang 60) 11 Khuyến nghị - Xem xét trình bày lại theo góp ý phản biện, xem xét khuyến nghị cuối 12 Tài liệu tham khảo - Học viên gộp khuyến nghị cuối vào nội dung (khuyến nghị 3, trang 61) - Thống cách viết tài liệu tham khảo, có đưa - Học viên bỏ toàn đường link tài liệu tham khảo, chỉnh lại lề link hay không, chỉnh lại lề - Format lại cho thống - Học viên format lại toàn phần tài liệu tham khảo, chỉnh sửa theo qui định trường - Học viên format lại toàn phần tài liệu tham khảo, chỉnh sửa theo qui định trường 13 Công cụ nghiên cứu … 14 Các góp ý khác - Câu hỏi 1: Thay đổi mục H P - Học viên đồng ý thay đổi nội dung mục tiêu 1, theo góp ý phản biện trình bày lại luận tiêu văn (Trang 1) - Câu hỏi 2: 18 cặp mồi học - 18 trình tự mồi tặng Giáo sư Hàn Quốc, họ viên tự thiết kế hay từ dùng “in house” (sử dụng phịng thí nghiệm, chưa nguồn nào? cơng bố) học viên bổ sung nội dung vào luận U văn (trang 25) H - Câu hỏi 3: Tại không - Xét nghiệm đột biến đặc trưng có mặt hay làm Realtime PCR? khơng có mặt đột biến đột biến thể băng/vạch hình ảnh điện di Đây xét nghiệm định tính nên khơng cần thiết sử dụng realtime PCR Thứ 2, xét nghiệm PCR-RFLP có giá cạnh tranh realtime PCR - Câu hỏi 4: Làm để - Xác định lưu hành đột biến gia đình người xác định lưu hành bệnh cách sàng lọc đột biến biết người đột biến thành bệnh (target mutation) Kết sàng lọc đột biến viên gia đình người cung cấp thông tin lưu hành chúng gia đình bệnh? người bệnh - Câu hỏi 5: Các mẫu đo - Một số mẫu có lượng DNA cao lúc hút mẫu tách DNA có kết cao bất DNA, kỹ thuật viên lấy phần lớn bạch cầu để tách thường sao? mẫu khác có lượng bạch cầu hơn, dó lượng DNA thu có khác - 6: Sốt lỗi tả, dấu - Học viên rà sốt tồn lỗi tả, sửa lỗi câu từ cách lỗi câu, từ luận văn Lưu ý: - Có dịng kẻ góp ý phần giải trình thẳng hàng với góp ý - Học viên/NCS giải trình theo thứ tự phần (nếu có) đề cương/luận văn/luận án/chuyên đề, không nêu tên chức danh người góp ý - Đối với giải trình Hội đồng bảo vệ luận án cấp sở cần có thêm xác nhận phản biện chủ tịch hội đồng - Đối với giải trình Hội đồng luận án cấp trường, cần có thêm xác nhận chủ tịch hội đồng Ngày 07 tháng 11 năm 2022 Học viên (ký ghi rõ họ tên) H P Nguyễn Thị Mai Hương Xác nhận GV hướng dẫn Xác nhận GV hướng dẫn (nếu có) Xác nhận GV hỗ trợ (nếu có) (ký ghi rõ họ tên) (ký ghi rõ họ tên) (ký ghi rõ họ tên) U H TS BS Ngô Diễm Ngọc Ý kiến thành viên HĐ/chủ tịch HĐ (Nếu phân công): ………………………………………………………………………………………… …… ………………………………………………………………………………………… …… Ngày 06 tháng 12 năm 2022 Đại diện hội đồng (ký ghi rõ họ tên) H P H U H P H U H P H U H P H U H P H U H P H U H P H U