Đặc Điểm Lâm Sàng, Cận Lâm Sàng Và Nhận Xét Kết Quả Điều Trị Bệnh Không Có Gammaglobulin Máu Liên Kết Nhiễm Sắc Thể X.pdf

Untitled BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN THỊ VÂN ANH ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, CẬN LÂM SÀNG VÀ NHẬN XÉT KẾT QUẢ ĐIỀU TRỊ BỆNH KHÔNG CÓ GAMMAGLOBULIN MÁU LIÊN KẾT NHIỄM SẮC THỂ X[.]

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN THỊ VÂN ANH ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, CẬN LÂM SÀNG VÀ NHẬN XÉT KẾT QUẢ ĐIỀU TRỊ BỆNH KHƠNG CĨ GAMMAGLOBULIN MÁU LIÊN KẾT NHIỄM SẮC THỂ X LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI -*** - NGUYỄN THỊ VÂN ANH ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, CẬN LÂM SÀNG VÀ NHẬN XÉT KẾT QUẢ ĐIỀU TRỊ BỆNH KHƠNG CĨ GAMMAGLOBULIN MÁU LIÊN KẾT NHIỄM SẮC THỂ X Chuyên ngành: Nhi khoa Mã số: 62720135 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Lê Thị Minh Hương TS Vũ Văn Quang HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Lê Thị Minh Hương TS Vũ Văn Quang - hai người thầy hết lịng dìu dắt tơi từ bước cơng tác nghiên cứu Những người thầy tận tình hướng dẫn thực đề tài, giúp giải nhiều khó khăn vướng mắc q trình thực luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến toàn thể bác sỹ, điều dưỡng Khoa Miễn dịch - Dị ứng - Khớp, Khoa Sinh hoá, Khoa Xét nghiệm huyết học, Khoa Di truyền Sinh học phân tử Bệnh viện Nhi Trung ương, giúp đỡ tơi thực hồn thành luận án Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới: Các Thầy Cô Bộ môn Nhi Trường Đại học Y Hà Nội Các thầy nhiệt tình dẫn, đào tạo, giúp trưởng thành lĩnh vực nghiên cứu khoa học Đảng ủy, Ban Giám đốc khoa phòng Bệnh viện Nhi Trung ương, tạo điều kiện thuận lợi cho công tác, học tập, nghiên cứu hoàn thành luận án Đảng ủy, Ban Giám hiệu, phòng Đào tạo Sau đại học trường Đại học Y Hà Nội kiến tạo môi trường đào tạo chuyên nghiệp giúp trưởng thành học tập, nghiên cứu hoàn thành luận án Những bệnh nhân gia đình người bệnh đồng hành thực nghiên cứu cung cấp cho số liệu vô quý giá để tơi hồn thành luận án Cuối cùng, xin cảm ơn Bố, Mẹ hai bên gia đình, cám ơn Chồng nguồn động viên to lớn giúp đỡ, cổ vũ phấn đấu học tập nghiên cứu hoàn thành luận án Hà Nội, ngày 20 tháng 11 năm 2019 Tác giả luận án Nguyễn Thị Vân Anh LỜI CAM ĐOAN Tôi là Nguyễn Thị Vân Anh, nghiên cứu sinh khóa 34 Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Nhi khoa, xin cam đoan: Đây là luận án bản thân trực tiếp thực dưới sự hướng dẫn của PGS.TS Lê Thị Minh Hương và TS Vũ Văn Quang Công trình này không trùng lặp với bất kỳ nghiên cứu nào khác đã được công bố ngoài nước Các số liệu và thông tin nghiên cứu là hoàn toàn chính xác, trung thực và khách quan, đã được xác nhận và chấp thuận của sở nơi nghiên cứu Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước pháp luật về những cam kết này Hà Nội, ngày 20 tháng 11 năm 2019 Người viết cam đoan Nguyễn Thị Vân Anh DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Tiếng Anh ARN Acid Ribonucleic BCG Bacillus Calmette Guérin BN Tiếng Việt Vaccine Lao Bệnh nhân BTK Bruton tyrosine kinase c.DNA Complementary DNA ADN bổ sung CD Cluster of differentiation Cụm biệt hoá EBV Epstein-Barr Virus HIV Human Immunodeficiency Viruses IgA Immunoglobulin A Immunoglobulin A IgG Immunoglobulin G Immunoglobulin G IgM Immunoglobulin M Immunoglobulin M IVIG Intravenous immunoglobulin Globulin miễn dịch tiêm tĩnh mạch Kb Kilo base kDa kilo Dalton mARN messenger ARN ARN thông tin MLPA Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification Kỹ thuật khuếch đại đa mồi dựa vào phản ứng nối NST Nhiễm sắc thể PCR Polymerase chain reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp SCIG Subcutaneous Immunoglobulin Globulin miễn dịch tiêm da sIg Surface Immunoglobulin Kháng thể bề mặt TBG Hematopoietic stem cells Tế bào gốc tạo máu XLA X-linked Agammaglobulinemia Bệnh khơng có Gammaglobulin máu liên kết nhiễm sắc thể X MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Khái niệm 1.2 Lịch sử nghiên cứu 1.3 Dịch tễ học 1.4 Cơ sở di truyền, sinh lý học 1.4.1 Gen BTK 1.4.2 Protein BTK 1.4.3 Tế bào lympho B 1.5 Đặc điểm lâm sàng 10 1.5.1 Tuổi khởi phát triệu chứng nhiễm trùng tuổi chẩn đoán bệnh XLA 11 1.5.2 Bệnh lý nhiễm trùng 12 1.5.3 Bệnh lý khớp 16 1.5.4 Bệnh lý tự miễn 17 1.5.5 Bệnh lý huyết học bệnh lý ác tính 18 1.5.6 Tiền sử gia đình 18 1.6 Đặc điểm cận lâm sàng 19 1.6.1 Nồng độ kháng thể 19 1.6.2 Công thức máu ngoại vi 19 1.6.3 Số lượng tế bào lympho nhóm 20 1.6.4 Phân tích gen BTK 21 1.6.5 Chẩn đoán hình ảnh 23 1.7 Điều trị 24 1.7.1 Liệu pháp điều trị thay thế Globulin miễn dịch 24 1.7.2 Điều trị nhiễm trùng 29 1.7.3 Điều trị bệnh lý tự miễn 30 1.7.4 Chăm sóc bệnh nhân XLA 31 1.7.5 Một số phương pháp điều trị 32 1.8 Tình hình nghiên cứu bệnh XLA 34 1.8.1 Tình hình nghiên cứu thế giới 34 1.8.2 Tình hình nghiên cứu tại Việt Nam 35 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1 Đối tượng nghiên cứu 36 2.1.1 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân 36 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 37 2.2 Phương pháp nghiên cứu 37 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 37 2.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 37 2.2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 37 2.2.4 Quy trình nghiên cứu 38 2.2.5 Các số nghiên cứu 39 2.2.6 Các quy trình xét nghiệm 44 2.2.7 Xử lý số liệu 51 2.2.8 Kỹ thuật khắc phục sai số nhiễu 52 2.2.9 Đạo đức của đề tài 52 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 54 3.1 Đặc điểm lâm sàng xét nghiệm miễn dịch 54 3.1.1 Đặc điểm chung của bệnh nhân 54 3.1.2 Tiền sử bệnh nhân 55 3.1.3 Tiền sử gia đình 63 3.1.4 Đặc điểm lâm sàng thời điểm chẩn đoán bệnh 64 3.1.5 Nồng độ kháng thể 69 3.1.6 Công thức máu 69 3.1.7 Số lượng tế bào lympho nhóm 71 3.1.8 Căn nguyên gây bệnh 72 3.2 Phân tích gen BTK 72 3.2.1 Tỷ lệ phát đột biến 72 3.2.2 Kiểu đột biến điểm 73 3.2.3 Phân bố đột biến gen BTK 74 3.2.4 Vị trí các đột biến gen BTK 74 3.2.5 Đột biến mất đoạn 75 3.2.6 Phân bố đột biến vùng chức 77 3.2.7 Đột biến 78 3.2.8 Đặc điểm của bệnh nhân có đột biến 83 3.2.9 Đặc điểm của bệnh nhân khơng tìm thấy đột biến 84 3.2.10 Kiểu gen của mẹ chị em gái bệnh nhân 85 3.3 Điều trị 86 3.3.1 Liều điều trị 87 3.3.2 Triệu chứng lâm sàng thời gian điều trị 87 3.3.3 Nồng độ kháng thể thời gian điều trị 89 3.3.4 Mối liên quan giữa triệu chứng lâm sàng nồng độ IgG đáy 92 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 93 4.1 Triệu chứng lâm sàng xét nghiệm miễn dịch 93 4.1.1 Đặc điểm chung của nhóm nghiên cứu 93 4.1.2 Tiền sử bệnh 96 4.1.3 Tiền sử gia đình 105 4.1.4 Tình trạng nhiễm khuẩn giai đoạn chẩn đoán bệnh XLA 106 4.1.5 Nồng độ kháng thể 110 4.1.6 Công thức máu 112 4.1.7 Số lượng tế bào lympho nhóm 112 4.2 Phân tích gen 113 4.2.1 Đặc điểm đột biến gen BTK 114 4.2.2 Vị trí đột biến 115 4.2.3 Đột biến 116 4.2.4 Đặc điểm bệnh nhân không phát đột biến gen BTK 118 4.2.5 Phân tích gen của mẹ chị em gái bệnh nhân 119 4.3 Điều trị 120 4.3.1 Liều điều trị 120 4.3.2 Đặc điểm lâm sàng được điều trị IVIG 122 4.3.3 Nồng độ Globulin miễn dịch trước sau đợt điều trị 124 4.3.4 Mối tương quan giữa triệu chứng lâm sàng nồng độ Globulin miễn dịch 124 4.3.5 Tiên lượng 125 KẾT LUẬN 126 KIẾN NGHỊ VÀ HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO 128 DANH MỤC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần phản ứng PCR 48 Bảng 3.1 Tuổi khởi phát đợt nhiễm khuẩn 56 Bảng 3.2 Bệnh đợt nhiễm khuẩn của bệnh nhân 56 Bảng 3.3 Tần suất nhiễm khuẩn trước được chẩn đoán giai đoạn trẻ tuổi 59 Bảng 3.4 Tần suất nhiễm khuẩn trước được chẩn đoán giai đoạn trẻ từ tới tuổi 60 Bảng 3.5 Tần suất nhiễm khuẩn trước được chẩn đoán giai đoạn trẻ từ tới tuổi 61 Bảng 3.6 Tần suất nhiễm khuẩn trước được chẩn đoán giai đoạn trẻ từ tới tuổi 62 Bảng 3.7 Tần suất nhiễm khuẩn trước được chẩn đoán giai đoạn trẻ từ tới tuổi 63 Bảng 3.8 Bệnh nhiễm khuẩn tại thời điểm chẩn đoán bệnh XLA 65 Bảng 3.9 Phân bố tuổi tại thời điểm bệnh nhân chẩn đoán bệnh XLA 66 Bảng 3.10 Thời gian chẩn đoán muộn tiền sử gia đình 67 Bảng 3.11 Mối liên quan giữa mức độ nhiễm khuẩn nặng thời điểm chẩn đoán bệnh tuổi chẩn đoán 67 Bảng 3.12 Mối liên quan giữa tiền sử gia đình và thời gian được chẩn đoán 68 Bảng 3.13 Nồng độ kháng thể tại thời điểm chẩn đoán 69 Bảng 3.14 Số lượng bạch cầu tại thời điểm chẩn đoán 69 Bảng 3.15 Số lượng bạch cầu trung tính tại thời điểm chẩn đoán 70 Bảng 3.16 Nồng độ Hemoglobin của bệnh nhân tại thời điểm được chẩn đoán 70 Bảng 3.17 Số lượng tế bào lympho nhóm tại thời điểm 71 Bảng 3.18 Phân bố nguyên vi khuẩn gây bệnh đợt chẩn đoán 72 CDS:Bruton's tyrosin 424 CDS: Putative Query 51 241 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 64671 444 CDS: Putative Query 301 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query 64731 361 64791 421 64851 481 64911 541 64971 601 65031 661 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 65091 CDS: Putative Query 58 721 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query 65151 451 59 781 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 65211 452 CDS: Putative Query 79 841 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 65271 472 CDS: Putative Query 99 901 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 65331 492 CDS: Putative Query 119 961 Q Y D V A I K M I K E G S M S E D E F I E E A K V M M~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ TGAAGAAGCCAAAGTCATGATGTGAGTTATAGCCCAAACTCAACTCTCAATCTATTTGCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGAAGAAGCCAAAGTCATGATGTGAGTTATAGCCCAAACTCAACTCTCAATCTATTTGCT E E A K V M M~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ GGAGTCTAGGAATTCACACAACAACCCACTGAGGCTTAAAGATGACTTACAGTAAGAGAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGAGTCTAGGAATTCACACAACAACCCACTGAGGCTTAAAGATGACTTACAGTAAGAGAG ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 14R ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ GTTTGGGACGAGGGACTGAAGTTTACCTTTAACTGGCGGTAGTCCTAAGTGCTAAGATAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GTTTGGGACGAGGGACTGAAGTTTACCTTTAACTGGCGGTAGTCCTAAGTGCTAAGATAA ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ TAGTTTCTGTGCCTTAGATATTGGTTGAGAATAGTGGTGATCATGGGTGTGTACCATCTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TAGTTTCTGTGCCTTAGATATTGGTTGAGAATAGTGGTGATCATGGGTGTGTACCATCTC ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ AGTAGCATTTGGGGGTAGATGTAGAAAATTAAACTTTCAAGAGAAATATTCTAATTTAGC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGTAGCATTTGGGGGTAGATGTAGAAAATTAAACTTTCAAGAGAAATATTCTAATTTAGC ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ CTTAGCGTTCTTTCATTCCTGGACTTGTTTCTTTTTCAATTGATGGGCTCCAAATCCCTG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTTAGCGTTCTTTCATTCCTGGACTTGTTTCTTTTTCAATTGATGGGCTCCAAATCCCTG ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ CTTGCTTCCACATTTTAAGCACTTTTGAGATTTAGGGTGGGAAAGAGGAAAATAAACTTG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTTGCTTCCACATTTTAAGCACTTTTGAGATTTAGGGTGGGAAAGAGGAAAATAAACTTG ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ CTGGTGTGACCCCTTATCTGATGCTCTACTCCTAGGTCAGCCCCTTCCTCCCCAGCCCCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTGGTGTGACCCCTTATCTGATGCTCTACTCCTAGGTCAGCCCCTTCCTCCCCAGCCCCT ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 15F ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ N TTATTGCTATTATGCAGAGCCAAAAGGAGAAGACTAGTTCCTTGCCTTTCCTGTAGGAAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTATTGCTATTATGCAGAGCCAAAAGGAGAAGACTAGTTCCTTGCCTTTCCTGTAGGAAT ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ N L S H E K L V Q L Y G V C T K Q R P I F CTTTCCCATGAGAAGCTGGTGCAGTTGTATGGCGTCTGCACCAAGCAGCGCCCCATCTTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTTTCCCATGAGAAGCTGGTGCAGTTGTATGGCGTCTGCACCAAGCAGCGCCCCATCTTC L S H E K L V Q L Y G V C T K Q R P I F I I T E Y M A N G C L L N Y L R E M R H ATCATCACTGAGTACATGGCCAATGGCTGCCTCCTGAACTACCTGAGGGAGATGCGCCAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATCATCACTGAGTACATGGCCAATGGCTGCCTCCTGAACTACCTGAGGGAGATGCGCCAC I I T E Y M A N G C L L N Y L R E M R H R F Q T Q Q L L E M C K D V C E A M E Y CGCTTCCAGACTCAGCAGCTGCTAGAGATGTGCAAGGATGTCTGTGAAGCCATGGAATAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CGCTTCCAGACTCAGCAGCTGCTAGAGATGTGCAAGGATGTCTGTGAAGCCATGGAATAC R F Q T Q Q L L E M C K D V C E A M E Y L E S K Q F L H R D L CTGGAGTCAAAGCAGTTCCTTCACCGAGACCTGGTGGGACCTTAGAAGGATTGGCCTAGG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| 300 64730 360 64790 420 64850 480 64910 540 64970 600 65030 660 65090 720 65150 780 65210 840 65270 900 65330 960 65390 1020 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 65391 512 CTGGAGTCAAAGCAGTTCCTTCACCGAGACCTGGTGGGACCTTAGAAGGATTGGCCTAGG L E S K Q F L H R D L ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ Query 1021 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 65451 ACAAAGGGCTGATGGGGTGGAAGTAGCAGTGGAAGATATA 1060 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACAAAGGGCTGATGGGGTGGAAGTAGCAGTGGAAGATATA 65490 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 15R 65450 EXON 16-17-18: Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin GCTTTGTGCCTTTAACCTCTGTGCTGGGGACGGAGTCTCACTGGTCTCTGTTTGCACTAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| 66719 GCTTTGTGCCTTTAACCTCTGTGCTGGGGACGGAGTCTCACTGGTCTCTGTTTGCACTAC ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 16F A A R N C L V N D Q G V V K V S D F G 61 AGGCAGCTCGAAACTGTTTGGTAAACGATCAAGGAGTTGTTAAAGTATCTGATTTCGGCC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| 66779 AGGCAGCTCGAAACTGTTTGGTAAACGATCAAGGAGTTGTTAAAGTATCTGATTTCGGCC 523 ~~ A A R N C L V N D Q G V V K V S D F G CDS: Putative Query 20 121 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 66839 542 CDS: Putative Query 181 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 66899 241 66959 301 67019 361 67079 421 67139 481 67199 541 67259 CDS: Putative Query 601 Sbjct 67319 L S R~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ TGTCCAGGTGAGTGTGGCTTTTTCATCTTTCCCTCCAGAAGTAAAAATAGCACAGTATGA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGTCCAGGTGAGTGTGGCTTTTTCATCTTTCCCTCCAGAAGTAAAAATAGCACAGTATGA L S R~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ AACATGGGTAGGTGTTACAGTTTTAATCCTCTCCTTTTCttttttttCTCATTCTAGCGT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AACATGGGTAGGTGTTACAGTTTTAATCCTCTCCTTTTCTTTTTTTTCTCATTCTAGCGT ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 16R ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ TTTCTGCCGATCTTTCTATTCTTTTTCTTCCTCTGAGTTATTTAAGCCACCTCTTTCATc |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTTCTGCCGATCTTTCTATTCTTTTTCTTCCTCTGAGTTATTTAAGCCACCTCTTTCATC ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ cttttgttttattgtcatatccctttccttcctttctccctttatctctacctcctcttt |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTTTTGTTTTATTGTCATATCCCTTTCCTTCCTTTCTCCCTTTATCTCTACCTCCTCTTT ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ tttAAATCTATTTCCCCAATACCTTATCTTGATCTATTAATCCTGATGACTTTACTCCAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTTAAATCTATTTCCCCAATACCTTATCTTGATCTATTAATCCTGATGACTTTACTCCAT ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ TCCTCCTTCTTTCTTAATCAGTCTAATTCCCAGTGACAACTGCagataaaaggaagggaa |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TCCTCCTTCTTTCTTAATCAGTCTAATTCCCAGTGACAACTGCAGATAAAAGGAAGGGAA ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ggagaagagcagagaaaggaaaggtggatagagaagaggaagggagTACCTACTAGATCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGAGAAGAGCAGAGAAAGGAAAGGTGGATAGAGAAGAGGAAGGGAGTACCTACTAGATCT ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ TATTTCACTTCATCCTTCTTGTAACCATATTGTCAATCAGGAAAGCTCAATCAGATACAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TATTTCACTTCATCCTTCTTGTAACCATATTGTCAATCAGGAAAGCTCAATCAGATACAA ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ AAACAGGAAATTCGTTAAAAGTAACGTTTGTAGAAGATACTAGTTGAGGAGGAGAGACTT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAACAGGAAATTCGTTAAAAGTAACGTTTGTAGAAGATACTAGTTGAGGAGGAGAGACTT 60 66778 120 66838 180 66898 240 66958 300 67018 360 67078 420 67138 480 67198 540 67258 600 67318 660 67378 CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 661 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 67379 CDS: Putative Query 23 721 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 67439 545 CDS: Putative Query 27 781 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 67499 549 CDS: Putative Query 47 841 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 67559 569 CDS: Putative Query 901 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query 67619 960 67679 1020 67739 1080 67799 1140 67859 1200 67919 1260 67979 1320 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 68039 CDS: Putative Query 62 1380 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ TTGAGAAAGCCTGTGTGTGTTTGTGACACTCTTGTGACCGTGCCAAGAAAACGTAAGCAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTGAGAAAGCCTGTGTGTGTTTGTGACACTCTTGTGACCGTGCCAAGAAAACGTAAGCAA ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 17F ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ Y V L D ATATCAAGCCTCCAAATCCTAATGCAACAAGTCCTGAATCCCTTGCAGGTATGTCCTGGA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATATCAAGCCTCCAAATCCTAATGCAACAAGTCCTGAATCCCTTGCAGGTATGTCCTGGA ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ Y V L D D E Y T S S V G S K F P V R W S P P E V TGATGAATACACAAGCTCAGTAGGCTCCAAATTTCCAGTCCGGTGGTCCCCACCGGAAGT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGATGAATACACAAGCTCAGTAGGCTCCAAATTTCCAGTCCGGTGGTCCCCACCGGAAGT D E Y T S S V G S K F P V R W S P P E V L M Y S K F S S K S D I W A F ~~~~~~~~~~~~~ CCTGATGTATAGCAAGTTCAGCAGCAAATCTGACATTTGGGCTTTTGGTAAGTGGATAAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCTGATGTATAGCAAGTTCAGCAGCAAATCTGACATTTGGGCTTTTGGTAAGTGGATAAG L M Y S K F S S K S D I W A F ~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ATTACACAGATTATACAGCTCAAAGGATAAGAAATGCAAT-GGGAAAATTCACACTTTGC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||| ATTACACAGATTATACAGCTCAAAGGATAAGAAATGCAATGGGGAAAATTCACACTTTGC ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ AACCTCCACAGAGATATTGTTCTTGCTTTCATTCTTCCAATCCTTGGGGAGTGCTTACTG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AACCTCCACAGAGATATTGTTCTTGCTTTCATTCTTCCAATCCTTGGGGAGTGCTTACTG ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 17R ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ TGTGTCAGCCACCACAGGGGTTTCTGAGGATGAAAACTAAACTGGACATGATCTCTGCCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGTGTCAGCCACCACAGGGGTTTCTGAGGATGAAAACTAAACTGGACATGATCTCTGCCT ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ TTTTAGAACTTAAACCATGTTAAGGAAAACAATTCATTCAGTTTTCAACAGCTTCTGAAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTTTAGAACTTAAACCATGTTAAGGAAAACAATTCATTCAGTTTTCAACAGCTTCTGAAT ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ACTGATTATGTACCAGGCACTCTGCCAGACCCTATAACTGCAAAGACAAATAAGATGCTG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACTGATTATGTACCAGGCACTCTGCCAGACCCTATAACTGCAAAGACAAATAAGATGCTG ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ TCTCTCTTCTAGAGGAGTTAATAGTCTAGTACGACCTTGATCTCCATCTAGTGTGGTCAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TCTCTCTTCTAGAGGAGTTAATAGTCTAGTACGACCTTGATCTCCATCTAGTGTGGTCAG ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ TACTATAGCAGAAATTTGGGCAAAATATAAAAAGCACAGAGCGGGGAACCAACTGATTCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TACTATAGCAGAAATTTGGGCAAAATATAAAAAGCACAGAGCGGGGAACCAACTGATTCT ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ AATCTTTGAGGTTGATCTAGGAAGACTAGGACCCCTGCTATCCAAAAAGACTGCAAACCA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AATCTTTGAGGTTGATCTAGGAAGACTAGGACCCCTGCTATCCAAAAAGACTGCAAACCA ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 18F ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~G V L M W E I Y S L G K ATTTAATAAtttttttCACCTTCTAGGGGTTTTGATGTGGGAAATTTACTCCCTGGGGAA 720 67438 780 67498 840 67558 900 67618 959 67678 1019 67738 1079 67798 1139 67858 1199 67918 1259 67978 1319 68038 1379 68098 1439 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 68099 584 CDS: Putative Query 74 1440 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 68159 596 CDS: Putative Query 94 1500 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 68219 616 CDS: Putative Query 114 1560 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 68279 636 Query 1620 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 68339 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATTTAATAATTTTTTTCACCTTCTAGGGGTTTTGATGTGGGAAATTTACTCCCTGGGGAA ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~G V L M W E I Y S L G K M P Y E R F T N S E T A E H I A Q G L R GATGCCATATGAGAGATTTACTAACAGTGAGACTGCTGAACACATTGCCCAAGGCCTACG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GATGCCATATGAGAGATTTACTAACAGTGAGACTGCTGAACACATTGCCCAAGGCCTACG M P Y E R F T N S E T A E H I A Q G L R L Y R P H L A S E K V Y T I M Y S C W H TCTCTACAGGCCTCATCTGGCTTCAGAGAAGGTATATACCATCATGTACAGTTGCTGGCA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TCTCTACAGGCCTCATCTGGCTTCAGAGAAGGTATATACCATCATGTACAGTTGCTGGCA L Y R P H L A S E K V Y T I M Y S C W H E TGAGGTAAGTGCTTTATTAGGATCTCTTAAATTATTTCCTTGAATCTACTTGCCCATTTA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGAGGTAAGTGCTTTATTAGGATCTCTTAAATTATTTCCTTGAATCTACTTGCCCATTTA E ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ GCTGGCCATTCAGCCACCAAAGACTG |||||||||||||||||||||||||| GCTGGCCATTCAGCCACCAAAGACTG ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 68158 1499 68218 1559 68278 1619 68338 1645 68364 18R EXON 19: CDS: Putative Query Sbjct CDS:Bruton's tyrosin CDS: Putative Query 71401 71401 71461 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 71461 CDS: Putative Query 637 71521 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 71521 637 CDS: Putative Query 657 71581 Sbjct CDS:Bruton's tyrosin 71581 657 Query 71641 Sbjct 71641 Query 71701 Sbjct 71701 Query 71761 Sbjct 71761 Query 71821 Sbjct 71821 Query 71881 Sbjct 71881 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ACAGGGCATGCTACTGGGCATAGAGCATATATTTAATAAACATTTGCTGCTTACTCATTG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACAGGGCATGCTACTGGGCATAGAGCATATATTTAATAAACATTTGCTGCTTACTCATTG ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 19F ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ CATTTCCCTTGAATTCTGGATTCTAGCCACTCTAACACTTTACTTTTTCTTTGGTTTTAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CATTTCCCTTGAATTCTGGATTCTAGCCACTCTAACACTTTACTTTTTCTTTGGTTTTAG ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ K A D E R P T F K I L L S N I L D V M D AAAGCAGATGAGCGTCCCACTTTCAAAATTCTTCTGAGCAATATTCTAGATGTCATGGAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAAGCAGATGAGCGTCCCACTTTCAAAATTCTTCTGAGCAATATTCTAGATGTCATGGAT K A D E R P T F K I L L S N I L D V M D E E S * GAAGAATCCTGAGCTCGCCAATAAGCTTCTTGGTTCTACTTCTCTTCTCCACAAGCCCCA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GAAGAATCCTGAGCTCGCCAATAAGCTTCTTGGTTCTACTTCTCTTCTCCACAAGCCCCA E E S 71460 71460 71520 71520 71580 71580 71640 71640 ATTTCACTTTCTCAGAGGAAATCCCAAGCTTAGGAGCCCTGGAGCCTTTGTGCTCCCACT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATTTCACTTTCTCAGAGGAAATCCCAAGCTTAGGAGCCCTGGAGCCTTTGTGCTCCCACT 71700 CAATACAAAAAGGCCCCTCTCTACATCTGGGAATGCACCTCTTCTTTGATTCCCTGGGAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CAATACAAAAAGGCCCCTCTCTACATCTGGGAATGCACCTCTTCTTTGATTCCCTGGGAT 71760 AGTGGCTTCTGAGCAAAGGCCAAGAAATTATTGTGCCTGAAATTTCCCGAGAGAATTAAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGTGGCTTCTGAGCAAAGGCCAAGAAATTATTGTGCCTGAAATTTCCCGAGAGAATTAAG 71820 ACAGACTGAATTTGCGATGAAAATATTTTTTAGGAGGGAGGATGTAAATAGCCGCACAAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACAGACTGAATTTGCGATGAAAATATTTTTTAGGAGGGAGGATGTAAATAGCCGCACAAA 71880 GGGGTCCAACAGCTCTTTGAGTAGGCATTTGGTAGAGCTTgggggtgtgtgtgtgggggt |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGGGTCCAACAGCTCTTTGAGTAGGCATTTGGTAGAGCTTGGGGGTGTGTGTGTGGGGGT 71940 71700 71760 71820 71880 71940 Query 71941 Sbjct 71941 Query 72001 Sbjct 72001 Query 72061 Sbjct 72061 Query 72121 Sbjct 72121 gGACCGAATTTGGCAAGAATGAAATGGTGTCATAAAGATGGGAGGGGAGGGTGTTTTGAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGACCGAATTTGGCAAGAATGAAATGGTGTCATAAAGATGGGAGGGGAGGGTGTTTTGAT AAAATAAAATTACTAGAAAGCTTGAAAGTCTTTGGTATCTCTATTAATCATGCAGCCTCC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAAATAAAATTACTAGAAAGCTTGAAAGTCTTTGGTATCTCTATTAATCATGCAGCCTCC CTGAAGCGCCCTATCTCAGTATTCCAGAAAGCTGCTGTGTAGCATTAGTTTGGCATATTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTGAAGCGCCCTATCTCAGTATTCCAGAAAGCTGCTGTGTAGCATTAGTTTGGCATATTC 19R CTACACTGAGAACTCGACAGGATCCTCCAGGTTTAAGCCCTCTTGTTAACTCCTGCCTCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTACACTGAGAACTCGACAGGATCCTCCAGGTTTAAGCCCTCTTGTTAACTCCTGCCTCT 72000 72000 72060 72060 72120 72120 72180 72180 Phụ lục TRÌNH TỰ MỒI PHẢN ỨNG PCR MỒI ĐƠN Đoạn Tên X1 Mồi xuôi (sense) Tên E1F AAGACATTGGTTTAGGTCAGGA E1R X2 X3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 E2F E3F Mồi ngược (antisene) AGCCATGCTGTCTCTCTGGT GAAACTAGGTAGCTAGGCTGA E2R AAGAAAGATCTAAGGCCAAGTC CCTGGTGCCACCTCACTTTG E3R CATCACCAGTCTATTTACAGAG E4F AAAGGCTTCTAGTACCTAAGGA E4R ACCCCTTCTAATTGTGTTACAG E5F AGTACTTTCAAGGTCTTTCTCC E5R CCTTTCCTTCTTTCTTTGGAAAC E6F AAAACATGCAAATGGTGGCTTC E6R ACCCTTGGGAGAGTGATGGA E7F TCCCTGACCAAACCTGTCCTT E7R AGTGTGTTCTTAGGGCTTGAC E8F GTAAGCCAGAGAGTTGGGAGA E8R GGGAATTATGCCGCAGCACT E9F GGCATATGAATCTGTCTCCTG E9R AGAGAGAGTTCCTCCTGGAAG E10F GGGTGCTGTAACCTCCAATC E10R GAACAGGCCCTCAGTTCAAG E11F CAAGCGTGGAACTTGGCAGTA E12R CTCTTATCACCTTGTCCTGCAT E13F AAGTGAGGATGTGTGAGGCAT E13R CCACCCTCACCCCAGAGAAAT E14F TCCTATTTCTACCCCAGTAGG E14R CTTTAAGCCTCAGTGGGTTGT E15F GATGCTCTACTCCTAGGTCAG E15R ATATCTTCCACTGCTACTTCCA E16F GCTTTGTGCCTTTAACCTCTG E16R CTGTAACACCTACCCATGTTTC E17F TTGTGACACTCTTGTGACCGT E17R TGTGGAGGTTGCAAAGTGTGA E18F TGTTCTAGGGAGACTGGTCC E18R CAGTCTTTGGTGGCTGAATGG E19F ACATTTGCTGCTTACTCATTGC E19R CTTCAGGGAGGCTGCATGAT THÀNH PHẦN PHẢN ỨNG PCR MỒI ĐƠN Thành phần phản ứng Thể tích (µl) Bigdye v3.1 5X buffer Mồi xi/mồi ngược 10 µM H2O 12 Sản phẩm PCR tinh sạch Tổng thể tích 20 Asscess number gen BTK là: U78027.1 Phụ lục PHƯƠNG PHÁP MLPA Bước 1: Biến tính sợi ADN (Denaturation) Bước 2: Lai các đầu dò (Hybridization): Hỗn hợp đầu dò MLPA được thêm vào mẫu ADN đã được biến tính Hai phần của đầu được bắt cặp với trình tự đích Bước 3: Ghép nối Các đầu dò được ghép nhờ enzyme lai ghép chịu nhiệt Bước 4: Khuếch đại Một cặp mồi nhất được sử dụng để khuếch đại tất cả các đầu dò đã được ghép nối Mỗi sản phẩm khuếch đại của các đầu dò có độ lớn khác không trùng với (130 480 bp) - Quy trình: + Biến tính và lai các đầu dò: Lấy μl ADN (50- 200 ng ADN) cho vào ống PCR 0,2 ml Ủ mẫu theo chu trình 98°C phút, sau đó đợi mẫu giảm nhiệt độ xuống 25°C Thêm 1,5 μl dung dịch SALSA probemix và 1,5 μl dung dịch MLPA buffer vào tube trộn đều Ủ mẫu theo chu trình 95°C phút 60°C 16 + Phản ứng ghép nối: Giảm nhiệt độ mẫu xuống 54°C Trong nhiệt độ của mẫu 54°C, thêm 32 μl dung dịch Ligase-65 trộn đều Ủ 15 phút ở 54°C, sau đó ủ 15 phút ở 98°C Pha dung dịch Ligation: Pha μl dung dịch Ligase-65 buffer A, μl dung dịch Ligase-65 buffer B, 25 μl nước dH2O, μl dung dịch Ligase-65 (brown cap) trộn đều + Phản ứng PCR: Trộn hỗn hợp mới: μl dung dịch SALSA PCR buffer + 26 μl water + 10 μl sản phẩm của phản ứng ghép nối Pha hỗn hợp dung dịch Polymerase: μl dung dịch SALSA PCRprimers + μl dung dịch SALSA Enzyme Dilution buffer + 5,5 μl dH2O+ 0.5 μl SALSA Polymerase Đặt mẫu vào máy gia nhiệt ở nhiệt độ 60°C, thêm 10 μl hỗn hợp Polymerase vào tube, sau đó trộn đều thực phản ứng PCR Chu trình nhiệt: 95°C 30 giây 60°C 30 giây 35 chu kỳ 72°C 60 giây 72°C 20 phút Chuyển mẫu vào rack 96 giếng dùng cho máy 3130 Genetic Analyser Đặt tên mẫu, phương pháp phân tích Chọn chương trình Fragment Chạy mẫu Phụ lục KẾT QUẢ TÁCH ADN TỔNG SỐ CỦA 31 BỆNH NHÂN XLA-01 Nguyễn A 2012 Nồng độ ADN (ng/µl) 56 XLA-02 Hồ Nam P 2011 44 1,8 XLA-03 Phùng Minh H 2010 66 1,85 XLA-04 Lê Khải A 2011 46 1,95 XLA-05 Hoàng Duy A 2011 45 1,8 XLA-06 Nguyễn Tiến Đ 2003 65 1,9 XLA-07 Nguyễn Xuân L 2013 35 1,9 XLA-08 Đỗ Đại D 2011 44 2,0 XLA-09 Đỗ Gia H 2012 48 2,0 10 XLA-10 Đỗ Văn N 2014 54 1,9 11 XLA-11 Nguyễn Hoàng H 2015 36 1,8 12 XLA-12 Đường Minh P 2001 48 1,9 13 XLA-13 Đỗ Đình D 2011 66 1,85 14 XLA-14 Nghiêm Xuân H 2010 55 1,95 15 XLA-15 Vũ Nguyên K 2008 38 1,9 16 XLA-16 Cao Viết Á 2011 55 1,8 17 XLA-17 Nguyễn Duy H 2008 34 1,9 18 XLA-18 Phạm Văn Đ 2015 42 1,9 19 XLA-19 Lê Việt B 2016 35 1,9 20 XLA-20 Nguyễn Gia B 2005 45 2,0 21 XLA-21 Trình Công H 2006 46 2,0 Stt Mã số BN Họ tên Năm sinh Độ tinh sạch (A260/A280) 1,9 22 XLA-22 Đoàn Đình Gia B 2013 23 2,8 23 XLA-23 Vũ Đăng K 2010 28 1,9 24 XLA-24 Vũ Đức P 2013 75 1,9 25 XLA-25 Trần Công H 2012 49 2,0 26 XLA-26 Mai Quang V 2014 35 1,9 27 XLA-27 Mai Xuân P 2016 33 1,8 28 XLA-28 Bùi Văn Q 2008 78 2,0 29 XLA-29 Vũ Văn H 2004 54 1,9 30 XLA-30 Lê Tuấn A 2011 56 1,9 31 XLA-31 Lò Văn T 2008 38 2.0 Phụ Lục DANH SÁCH ĐỘT BIẾN GEN CỦA 31 BỆNH NHÂN Mã số BN XLA-01 XLA-02 XLA-03 XLA-04 XLA-05 XLA-06 XLA-07 XLA-08 XLA-09 XLA-10 XLA-11 XLA-12 XLA-13 XLA-14 XLA-15 XLA-16 XLA-17 XLA-18 XLA-19 XLA-20 XLA-21 XLA-22 XLA-23 XLA-24 XLA-25 XLA-26 XLA-27 XLA-28 XLA-29 XLA-30 XLA-31 Phân tích gen của bệnh nhân c.DNA Protein Dạng đột biến Vị trí c.1735G>C p.Asp579His Sai nghĩa Exon 17 c.1908+2_11delinsC p.IVS18+2_11delinsC Vị trí cắt, nối Intron 18 c.752G>A p.Trp251Ter Vô nghĩa Exon c.117_119del p.Tyr39Tyrfs* Dịch khung Exon c.521-1G>A p.IVS6-1G>A Vị trí cắt, nối Intron c.37C>T p.Arg13Ter Vô nghĩa Exon c.1876delG p.Ala582Leufs*5 Dịch khung Exon 17 c.1768A>T p.Ile590Phe Sai nghĩa Exon 18 Không tìm thấy đột biến Không tìm thấy đột biến c.763C>T p.Arg255Ter Vô nghĩa Exon c.1782delG p.Gly594Glyfs*52 Dịch khung Exon 18 c.1714_1715insTA p.Ser572Ilefs*15 Dịch khung Exon 17 c.1657delA p.Ser553Alafs*3 Dịch khung Exon 17 c.1610delT p.Val537Aspfs*2 Dịch khung Exon 16 c.1908+2_11delinsC p.IVS18+2_11delinsC Vị trí cắt, nối Intron 18 c.953C>T p.Ser318Phe Sai nghĩa Exon 11 c.843G>A p.Trp281Ter Vô nghĩa Exon 10 c.1578_1581del p.Cys527Trpfs*2 Dịch khung Exon 16 Không tìm thấy đột biến c.1249A>T p.Lys417Ter Vô nghĩa exon 14 c.649+5G>C p.IVS11+5G>C Vị trí cắt, nối Intron 11 c.118T>G p.Tyr40Asp Sai nghĩa Exon c.628insA p.Pro210Thrfs*6 Dịch khung Exon c.1651T>A p.Tyr551Asn Sai nghĩa Exon 17 Mất đoạn exon 2-5 Mất đoạn Exon 2-5 Mất đoạn exon 2-5 Mất đoạn Exon 2-5 c.862C>T p.Arg288Trp Sai nghĩa Exon 10 c.456delT p.Tyr152Tyrfs*19 Dịch khung Exon Không tìm thấy đột biến c.753G>A p.Trp251Ter Vô nghĩa exon Phụ lục DANH SÁCH MẸ VÀ CHỊ EM GÁI BỆNH NHÂN XLA Họ tên Đột biến Stt Labcode XLA-01M Nguyễn Thị Nhung Dị hợp tử đột biến p.Asp579His XLA-01S Nguyễn Thị Thu An Dị hợp tử đột biến p.Asp579His XLA-02M Nguyễn Thị Long XLA-03M Vũ Thị Thuỳ Dương Dị hợp tử đột biến p.IVS18+2delTAAGTGCTTinsC Không phát đột biến gene BTK XLA-04M Bùi Hương Giang Dị hợp tử đột biến p.Tyr39Tyrfs* XLA-05M Hoàng Thị Thuỷ Dị hợp tử đột biến p.IVS6-1G>A XLA-06M Lương Thị Thu Hà Dị hợp tử đột biến p.Arg13Ter XLA-07M Nguyễn Thị Huyền Dị hợp tử đột biến p.Ala582Leufs*5 XLA-08M Nguyễn Thị Hường Dị hợp tử đột biến p.Ile590Phe 10 XLA-11M Phan Thị Phượng Dị hợp tử đột biến p.Arg255Ter 11 XLA-12M Lê Thị Bích Ngọc Dị hợp tử đột biến p.K595RfsX52 12 XLA-12S Đường Nam Khanh Dị hợp tử đột biến p.K595RfsX52 Tiền sử Mẹ của bệnh nhân Nguyễn Anh (XLA-01) Chị của bệnh nhân Nguyễn Anh (XLA-01) Mẹ của bệnh nhân Hồ Nam Phong (XLA-02) Mẹ của bệnh nhân Phùng Minh Hiếu (XLA-03) Mẹ của bệnh nhân Lê Khải Anh (XLA-04) Mẹ của bệnh nhân Hoàng Duy Anh (XLA-05) Mẹ của bệnh nhân Nguyễn Tiến Đạt (XLA-06) Mẹ của bệnh nhân Nguyễn Xuân Long (XLA-07) Mẹ của bệnh nhân Đỗ Đại Dương (XLA-08) Mẹ của bệnh nhân Nguyễn Hoàng Hải (XLA-11) Mẹ của bệnh nhân Đường Minh Phúc (XLA-12) Chị của bệnh nhân Đường Minh Phúc (XLA-12) 13 XLA-13M 14 XLA-14M Đinh Thị Nguyệt Phan Thị Thu Ánh Dị hợp tử đột biến p.S572fsX15 15 XLA-15M Nguyễn Thị Thơ 16 XLA-15S Vũ Thị Thanh Huyền Không phát đột biến gene BTK 17 XLA-16M Võ Thị Phúc 18 XLA-17M Mai Thị Oanh Dị hợp tử đột biến p.IVS18+2delTAAGTGCTTTinsC Dị hợp tử đột biến p.Ser318Phe 19 XlA-18M Phạm Thị Lan Không phát đột biến gene BTK 20 XLA-19M Nguyễn Thị Nhân Dị hợp tử đột biến p.C527WfsX2 21 XLA-21M Mai Thị Thu Loan Dị hợp tử đột biến p.Lys417Ter 22 XLA-22M Đinh Thị Thuỳ Linh Dị hợp tử đột biến p.IVS11+5G>C 23 XLA-22S Đoàn Ngọc Bảo Chi Không phát đột biến gene BTK 24 XLA-23M 25 XLA-23S Trịnh Thị Hồng Dị hợp tử đột biến p.Tyr40Asp Nhung Vũ Ngọc Bích Dị hợp tử đột biến p.Tyr40Asp 26 XLA-24M Trần Thị Ngọc Dị hợp tử đột biến p.S553AfsX3 Dị hợp tử đột biến p.V537DfsX2 Dị hợp tử đột biến p.P210TfsX6 Mẹ của bệnh nhân của Đỗ Đình Duy (XLA-13) Mẹ của bệnh nhân Nghiêm Xuân Huy (XLA-14) Mẹ của bệnh nhân Vũ Nguyên Khôi (XLA-15) Chị của bệnh nhân Vũ Nguyên Khôi (XLA-15) Mẹ của bệnh nhân Cao Viết Ánh (XLA-16) Mẹ của bệnh nhân Nguyễn Duy Hoàng (XLA-17) Mẹ của bệnh nhân Phạm Văn Đông (XLA-18) Mẹ của bệnh nhân Lê Việt Bách (XLA-19) Mẹ của bệnh nhân Trình Cơng Hải (XLA-21) Mẹ của bệnh nhân Đoàn Đình Gia Bảo (XLA-22) Chị của bệnh nhân Đoàn Đình Gia Bảo (XLA-22) Mẹ của bệnh nhân Vũ Đăng Khoa (XLA-23) Chị của bệnh nhân Vũ Đăng Khoa (XLA-23) Mẹ của bệnh nhân Vũ Đức Phát (XLA-24) 27 XLA-24S1 Vũ Thị Hồng Xuyên Không phát đột biến gene BTK 28 XLA-24S2 Vũ Thanh Hà Dị hợp tử đột biến p.P210TfsX6 29 XLA-25M Tô Thị Hồng Hạnh Dị hợp tử đột biến p.Tyr551Asn 30 XLA-26M Lâm Thị Dung 31 XLA-28M Nguyễn Thị Hương Dị hợp tử đột biến p.Arg288Trp 32 XLA-28S Bùi Thị Hà Dị hợp tử đột biến p.Arg288Trp 33 XLA-29M Nguyễn Thị Thương Dị hợp tử đột biến p.Y152YfsX19 34 XLA-29S Vũ Thị Hảo Không phát đột biến gene BTK 35 XLA-31M Lò Thị Nòi Dị hợp tử đột biến p.Trp251Ter 36 XLA-31S Lò Thị Ngọc Dị hợp tử đột biến p.Trp251Ter Phương Dị hợp tử đột biến mất đoạn exon 2-5 Chị gái của bệnh nhân Vũ Đức Phát (XLA-24) Em gái của bệnh nhân Vũ Đức Phát (XLA-24) Mẹ của bệnh nhân Trần Công Huân (XLA-25) Mẹ của bệnh nhân Mai Quang Vinh (XLA-26) Mai Xuân Phúc (XLA27) Mẹ của bênh nhân Bùi Văn Quang (XLA-28) Chị của bênh nhân Bùi Văn Quang (XLA-28) Mẹ của bệnh nhân Vũ Văn Hải (XLA-30) Chị của bệnh nhân Vũ Văn Hải (XLA-30) Mẹ của bệnh nhân Lò Văn Tài (XLA31) Chị của bệnh nhân Lò Văn Tài (XLA31) Phụ lục 10 BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU TÀI LIỆU THAM KHẢO M B J andH B R (2007) Popul ati on preval ence of di agnosed prim ary i mm unodeficiency di seases i n t he Unit ed St at es J Cli n Immunol , 27 (5), 497–502 Modell V , Qui nn J., Orange J et al (2016) Pri m ary i mm unodefi ci enci es worl dwi de: an updat ed overvi ew from t he Jeffrey Mo del l Centers Gl obal Net work Immu nol Res, 64 (3), 736-753 D V , I V andal S P e (1993) The gene i nvol ved i n X-l i nked agam magl obuli naemi a i s a m em ber of t he src fami l y of prot ei n -t yrosi ne ki nases Nat ure, 361, 226–233 Tsukada S., Saffran D C andRawl i ngs D J (1993) Defi ci ent expressi on of a B cell cyt opl asm ic t yrosi ne ki nase i n hum an X-li nked agamm agl obul i nemi a Cell, 72 (2), 279–290 Chen X.-F., Wang W.-F., Zhang Y -D et al (2016) Cl i ni cal charact eri st ics and geneti c profil es of 174 pat ient s wi t h X -li nked agamm agl obuli nemi a Medi ci ne, 95 (32), Pl ebani A , Soresi na A , Rondelli R et al (2002) Cli nical, Imm unol ogical, and Mol ecul ar Anal ysi s i n a Large Cohort of Pa ti ent s wit h X-Li nked Agam m agl obuli nemi a: An It al ian Multi cent er St udy Cli ni cal Immun ol ogy, 104 (3), 221-230 A B., W Y andME C (2006) Genot ype phenot ype correl ati ons i n X-l i nked agam magl obuli nem ia Cl i n Immunol , 118, 195– 200 Granados E L., Di ego R P d andCerdan A F (2005) A genot ype phenot ype correlati on st udy i n a group of 54 pati ent s wi t h X-li nked agamm agl obuli nemi a J All ergy Cl i n Immunol , 116, 690–697 Ho ward V., Greene J M andPahwa S (2006) The healt h st at us and qual it y of l i fe of adult s wi t h X-l i nked agamm agl obul i nemi a Cli ni cal Immun ol ogy, 118, 201–208 10 Bousfi A., Jeddane L l andPi card C (2018) The 2017 IUIS Phenot ypi c Classi fi cati on for Pri mary Imm unodeficiencies J Cl i n Immunol , 38, 129–143 11 Fri ed A J andBoni l la F A (2009) Pat hogenesi s, di agnosi s, and management of pri mary anti body deficiencies and i nfecti ons Cli n Mi crobi ol Rev, 22 (3), 396-414 12 Conley M E., Not arangel o L D andEtzi oni A (1999) Di agnosti c Crit eri a for Pri mary Imm unodeficiencies Cli ni cal Immunol ogy, 93, 190–197 13 S G G , Mel ohradsky K andal R H e (2013) The Germ an nat i onal regi stry for prim ary i mm unodeficiencies Cl i n Exp Immunol , 173 (2), 372–380 14 Vol okha T t., PacM M andal K e (2009) Geneti c and dem ographic feat ures of X-li nked agamm agl obu‐ li nemi a i n Eastern and Cent ral Europe: a cohort st udy Mol Immun ol , 46 (10), 2140–2146 15 RA H andAD W (1993) Prim ary hypogamm agl obul i naemi a: a survey of cl i ni cal m anifestati ons and com pl icati ons Q J Med, 86, 31–42 16 HD O andCIE S (1996) X-li nked agam magl obuli nem ia A cli nical and m ol ecul ar anal ysi s Medi ci ne (Bal ti more), 75, 287–299 17 JA W., MC M andHM L (2006) X-li nked agamm agl obuli nemi a: report on a Uni t ed St at es regi stry of 201 pat ient s Med Balti m, 85, 193–202 18 Abol hassania H , Hi rbod-Mobarakeha A andal S S e (2015) Mortalit y and m orbi dit y i n pat ient s wi t h X-l i nked agamm agl obul i naemi a Al lergol Immun opat hol (Madr), 43 (1), 62-66 19 P S andCIE S (1995) Molecular and cell ular aspect s of X-l i nked agam magl obuli nem ia Adv Immunol , 59, 135–223 20 Reference G H (2019) BTK gene U S Nati onal Li brary of Medici ne, htt ps: // ghr nl m ni h gov/ gene/ BTK, 21 P S., S M andal S H e (1994) Genom ic organi sati on of m ouse and huma n Brut on's agamm agl obuli nemi a t yrosi ne ki nase 153, 5607-5618 22 Ghonai um A., Zi egler J B andTri dgell D (1996) Bil at eral chroni c conj unct i vi ti s and corneal scarri ng i n a boy wit h X-li nked hypogam m a- gl obuli naemi a J Paedi at r Chi l d Heal t h, 32, 463–465 23 S M., P S andE S C I (1996) Cel l-specific expressi on of hum an Brut on's agamm agl obul i nemi a t yrosi ne ki nase (Bt k) gene i s regulated by Sp1- and Spi -1/ PU 1-fami l y m emebers Oncogene, 13, 955-1964 24 Roifman C M., Berger M andNot arangel o L D (2008) Managem ent of pri m ary anti body defi ci ency wit h replacem ent t herapy: summ ary of gui deli nes Immu nol Al lergy Cli n Nort h Am, 28 (4), 875-876, x 25 CIE S., B B andal H G P e (1994) Expressi on of Brut on’s agam magl obuli nem ia t yrosi ne ki nase gene, BTK, i s sel ecti vel y down-regul at ed i n T l ym phocytes and pl asma cel l s J Immunol , 152, 557–565 26 RC A., RG N andal R H e (1994) Appl i cati onofcarriert esti ng t o geneti c counseli ng for X-l i nked agamm agl obul i nemi a Am J Hum Genet, 54 (1), 25–35 27 L Y., Y M andal C S E e (1996) Mutati ons i n t he m u heavy-chai n gene i n pati ent s wi t h agam m agl obuli nemi a N Engl J Med, 335, 1486-1493 28 G M., DB W andal M R e (2002) The prot ei n ki nase com ple - ment of t he hum an genome Science, 298, 912–1934 29 G D andBurg V d (2011) Educati onal paper: prim ary anti body defi ci enci es Eur J Pedi at r, 170 (6), 693-702 30 Y M., E C -S andal W Y e (1998) Mut ati ons i n t he human l am bda5/ 14 gene resul t i n B cell defi ci ency and agam magl obu li nem ia J Exp Med, 187, 71-77 31 AK D , T Y., D F et al (2007) Cutti ng edge: a hypom orphic m ut at i on i n Ig- beta (CD79b) i n a pati ent wi t h i mm unodefi ci ency and a l eaky defect i n B cell devel opm ent J Immu nol ogy, 179, 2055-2059 32 ME C., AK D andal Q A e (2012) Agam m agl obuli nem ia and absent B li neage cell s i n a pati ent lacki ng t he p85al pha subunit of PI3K J Exp Med, 209, 463-470 33 Q P., N M andal B J e (2002) Lack of IgA i n C(m u) -deficient pati ent s Nat Immunol , 3, 595–596 34 Morwood K , Bourne H andPhi l pot R (2004) Phenot ypic vari abili t y: Cli nical presentati on bet ween t he 6t h year and t he 60t h year i n a famil y wit h X-l i nked agam magl obuli nem ia J All ergy Cli n Immun ol , 113 (783-785), 35 ME C andV H (2002) Cl i ni cal fi ndi ngs leadi ng t o t he di agnosi s of X-li nked agam magl obuli nem ia J Pedi at r, 141, 566–571 36 M M , A A andal F A e (2004) X-l i nked agam magl obuli nem ia: a survey of 33 Irani an pati ent s Immunol Invest, 33, 81–93 37 MJ B., RN H andal O Y e (1996) Di scordant phenot ype i n si bli ngs wit h X-li nked agam m agl obuli nem ia Am J Hum Genet i cs, 58, 477–483 38 SJ K , RN H andal S S e (1996) A novel m ut at i on (Cys145- st op) i n Brut on’s t yrosi ne ki nase i s associ at ed wi t h newl y diagnosed X-l i nked agamm gl obuli nem ia i n a 51-year-ol d m al e Mol Med, 2, 619–623 39 DC S., O P andal F H M e (1994) A poi nt m ut at i on i n t he SH2 dom n of Brut on’s t yrosi ne ki nase i n at ypical X-l i nked agam magobul i nemi a N Eng J Med, 330, 1488–1491 40 Smit h C I E andConl ey M E (2013) X-Li nked agam m agl obuli nemi a and aut osom al recessi ve agamm agl obul i nemi a Pri mary Immunodef i ciency Di seases: A Mol ecul ar and Geneti c Approach, Oxf ord Uni versit y Press, Chapt er 25, 299-316 41 Conley M E., Dobbs A K., Farm er D M et al (2009) Pri mary B cell i mm unodefici encies: com pari sons and contrast s Annu Rev Immu nol , 27, 199-227 42 E L.-G., AS P andMB H (2002) Cli nical and m olecular anal ysi s of pat ient s wi t h defect s i n m u heavy chai n gene J Cli n Invest, 110, 1029–1035 43 P Q., S F andal C J e (2000) Ent erovi ral meni ngoencephali ti s i n X-li nked agam m agl obuli nemi a: i nt ensi ve imm unogl obul i n t herapy and sequent i al vi ral det ecti on i n cerebrospi nal fl ui d by pol ym era se chai n react i on Pedi at r Infect Di s J, 19, 1106–1108 44 Zi egner U H., Kobayashi R H , Cunni ngham-Rundl es C et al (2002) Progressi ve neurodegenerati on i n pati ent s wi t h prim ary imm unodefi ci ency di sease on IVIG t reatm ent Cli n Immunol , 102 (1), 19-24 45 C M., G D andal H A e Fail ure t o clear persi stent vacci nederi ved neurovi rul ent poli ovi rus i nfect i on i n an im m unodefi ci ent m an Lancet, 363, 1509–1513 46 HJ T., P L andal P G e Towards t he desi gn of com bi nati on t herapy for t he t reat ment of ent erovi rus i nfecti ons Anti vi ral Res, 90, 213–217 47 L K., Varpul a M andLii ppo K (1999) Pul m onary abnormalit ies i n pat ient s wi t h pri mary hypogam m agl obuli nemi a J All ergy Cli n Immunol , 104, 1031–1036 48 P Q., M D andJ D B (1999) Earl y and prol onged i nt ravenous i mm unogl obulin replacem ent t herapy i n chil dhood agam m agl obuli nemi a: a retrospecti ve survey of 31 pati ent s J Pedi at r, 134, 589–596 49 A R andJ M An unusual case of Cam pyl obacter j ej uni peri carditi s i n a pat ient wi t h X-li nked agamm agl obuli nemi a Ann All ergy Ast hma Immunol , 89 (4), 362–367 50 Hansel T T., O'Nei l l D P , Yee M L et al (1990) Infecti ve conj uncti viti s and corneal scarri ng i n t hree brot hers wi t h sex l i nked hypogam magl obuli naemi a (Brut on's di sease) Bri ti sh Journal of Opht hal mol ogy, 74 (2), 118-120 51 Franz A., Webst er D B andFurr P M (1997) Mycoplasm al art hri ti s i n pati ent s wit h prim ary imm unogl obul i n defi ci ency: c li nical feat ures and outcom e i n 18 pati ent s Briti sh Journal of Rheumat ol ogy, 36, 661–668 52 C P., E D A andal C P e (2003) Juveni le onset psoriati c art hri - ti s i n a pat ient wit h X-li nked agam m agl obuli nemi a (Brut on’s di sease) Scand J Rheumat ol y, 32, 309–311 53 Verbruggen G D B S., Deforce D, et al (2005) X-li nked agamm agl obul i nemi a and rheum at oi d art hrit i s Ann Rheum Di s, 64, 1075–1078 54 S M., D W -E andal D G e (2001) Devel opm ent of t ype di abetes despi te severe heredit ary B-l ym phocyte defi ci ency New Engl and Journal Medeci ne, 345, 1036–1040 55 C C., S F andO H (2000) Regi onal enteri ti s associated wit h enterovi rus i n a pati ent wi t h X-l i nked agamm agl obul i nemi a N Engl J Med, 342, 1611–1612 56 Herm aszewski RA W A (1993) Prim ary hypogamm agl obul i- naemi a: a survey of cli ni cal m ani fest at i ons and com pl icat i ons Q J Med, 86, 31–42 57 JW v d M., RS W andal S P e (1993) Col orect al cancer i n pati ent s wit h X-l i nked agam magl obuli naemi a Lancet, 1439–1440 58 LA B., KM T andal M F e (2008) Cli n Gast roent erol Hepat ol 6, 115–119 59 JM E S., V V andM V (2001) X-li nked agamm agl obuli naem ia and squam ous l ung cancer Eur Respi r J, 17, 570–572 60 Esenboga S andAyvaz D C a d (2018) Cli ni cal and Geneti c Feat ures of t he Pati ent s wit h X-Li nked Agam m agl obuli nemi a from Turkey: Si ngl e Center Experi ence Scandi navi an Journal of Immunol ogy, 87 (e12647), 1-8 61 PF R q andMC G R (1999) Neut ropenia as earl y m ani fest ati on of XLA: Report on pati ent s Esp Pedi at r, 51 (3), 235–240 62 Wood P., Stanwort h S., Burt on J et al (2007) Recognit i on, cl i ni cal di agnosi s and m anagem ent of pat ient s wi t h pri m ary an ti body deficiencies: a system ati c revi ew Cli n Exp Immunol , 149, 410–423 63 Tobon G J., Izqui erdo J H andCanas C A (2013) B l ym phocytes: devel opm ent, t ol erance, and t heir role i n aut oim m uni t y -focus on syst em ic l upus eryt hem at osus Aut oi mmune Di s, 2013, 827254 64 Bảo T V., Hương T T T andHoan P T (2016) Đột bi ến gen Nhà xuất bản gi áo dục, 166-169 65 Vũ H A (2013) Đột biến gen BTK t rên bệnh nhân t hi ếu Gamm agl obul i n m áu li ên kết nhi ễm sắc t hể X Tạp chí Nghi ên cứu y học, 17 (5), 195-199 66 J L., KEM B andal V J e (2005) Brut on’s t yrosi ne ki nase: cell bi ol ogy, sequence conservati on, m ut at i on spect rum, si RNA m odi fi cati ons and expressi on profil i ng Immun ol Rev, 203, 200–215 67 J V l., CI S andM V (2006) BTKbase: t he m ut ati on dat abase for X-l i nked agam magl obuli nem ia Hu m Mut at, 27, 1209–1217 68 ME C., A B andal H T V e (2005) Geneti c anal ysi s of pati ent s wit h defect s i n earl y B cell devel opm ent Immunol Rev, 203, 216–234 69 E H F., M W andO B (1998) Mut at i on screeni ng of t he BTK gene i n 56 fami li es wi t h X-li nked agamm agl obuli nemia (XLA): 47 uni que m ut ati ons wi t hout correl ati on t o cl i ni cal course Pedi at ri cs, 101, 276–284, BK D andJH M (1980) Mut ageni c deami nati on of cyt osi ne resi dues i n DNA Nat ure, 287, 560–561 70 D R., ME C andal R J e (2001) A conti guous del et i on syndrom e of X-li nked agamm agl obuli nemi a and sensori neural deafness Pedi at r All ergy Immunol , 12, 107–111 71 MC v Z., C G andal N N e (2008) Gross deleti ons i nvol vi ng IGHM, BTK, or Art emi s: a m odel for genom ic lesi ons m edi at ed by t ransposabl e el ement s Am J Hum Genet i cs, 82, 320–332 72 J R , Y M andal R D e (1999) Unusual m ut at i ons i n Bt k: An i nsert i on, a dupli cati on, an i nversi on and four l arge dele ti ons Cl i n Immunol , 90, 28–37 73 ME C., JD P andal N S e (2005) Two i ndependent ret rotransposon i nserti ons at t he same sit e wi t hi n t he codi ng regi on of BTK Hum Mut at, 25, 324–325 74 E H F., M W andal B O e (1998) Mut at i on screeni ng of t he BTK gene i n 56 fami li es wi t h X-li nked agamm agl obuli nemi a (XLA): 47 uni que m ut ati ons wi t hout correl ati on t o cl i ni cal course Pedi at ri cs, 101, 276–284 75 C B O (1952) Agam m agl obul i nemi a Pedi at ri cs, 9, 722–728 76 S H., R G andal S C e (2002) Subcut aneous IgG i nfusi ons i n pati ent s wi t h pri mary ant i body defi ci enci es: decreased ti me of deli very wi t h m ntai ned safet y Cli n Immu nol , 104, 237-241 77 Marti n T D (2006) IGIV: cont ent s, properti es, and m et hods of i ndust ri al producti on evol vi ng cl oser t o a m ore physi ol ogi c product Int Immunop har macol , (4), 517-522 78 Mat ucci A., Maggi E andVul t aggi o A (2014) Mechani sm s of act i on of Ig preparat i ons: im m unom odulat ory and ant i-i nfl am mat ory effect s Front Immunol , 5, 690 79 Baerenwal dt A., Bi burged M andNi m m erjahn F (2010) Mechani sm s of acti on of i ntravenous i mm unogl obuli ns Expert Rev Cl i n Immunol , (3), 425–434 80 J S., Y S andal Y P e (2008) What i s t he cont ent of t he m agic draft IVIG? Aut oi mmune Rev, 7, 435–439 81 Ki ani-Ali khan S , Yong P F K andGrosse-Kreul D (2012) Imm unogl obuli n replacem ent t herapy: i s t here a rol e for IgA and IgM J All ergy Cli n , 130, 553–554 82 Maarschal k-Ell erbroek L J (2011) Imm unogl obuli n t reat m ent i n prim ary ant i body defi ci ency Int J Anti mi crob, 37 (5), 396-404 83 Pi lett e C., Ouadrhi ri Y andGoddi ng V (2001) Lung m ucosal i mm unit y: im m unogl obuli n-A revi sit ed Eur Respi r J, 18, 571–588 84 Baum ann U., Miescher S andVonarburg C (2014) Im m unogl obuli n repl acement t herapy i n anti body deficiency syndromes: are we reall y doi ng enough? Cl i n Exp Immunol , 178 Suppl 1, 83-85 85 E S (1998) Im m unodefi ci ency di sorders general conditi ons 4t h edit i on, Phi ladel phi a (PA): Saunders, 86 CM R., H L andEW G (1987) Hi gh-dose versus l ow-dose i nt ravenous i mm unogl obul i n i n hypogam m agl obuli naem ia and chronic l ung di sease Lancet, 8541, 1075–1077 87 HW E., JW v D M andal K C e (2001) The effect of t wo different dosages of i nt ravenous im m unogl obul i n on t he i nci de nce of recurrent i nfecti ons i n pati ent s wi t h prim ary hypogamm agl obul i nemi a A randomi zed, double-bli nd, m ul ti cent er crossover t ri al Ann Int ern Med, 135(3), 165–174 88 Sri aroon P andBall ow M (2015) Im m unogl obuli n Repl acement Therapy for Pri mary Imm unodeficiency Immunol All ergy Cli n Nort h Am, 35, 89 JS O , WJ G andal N R e (2010) Im pact of t rough IgG on pneum oni a i nci dence i n prim ary i mm unodefi ci ency: a m et a -anal ysi s of cli nical st udies Cli n Immunol , 137(1), 21–30 90 Chen Y., St irli ng R G andPaul E Longit udi nal decli ne i n l ung functi on i n pati ent s wit h prim ary i mm unogl obul i n deficiencies J All ergy Cli n Immunol , 127, 1414–1417 91 VR B (2013) ll ustrat i ve cases on i ndi vi duali zi ng im m unogl obul i n t herapy i n prim ary i mm unodefici ency di sease Ann All ergy Ast hma Immunol , 2013; 111(6 Suppl ), S10–13 92 Orange J S., Bel ohradsky B H , Berger M et al (2012) Eval uati on of correl ati on bet ween dose and cl i ni cal outcom es i n subcut aneous im m unogl obuli n repl acement t herapy Cli n Exp Immu nol , 169 (2), 172-181 93 Lucas M., Lee M., Lortan J et al (2010) Infecti on out com es i n pati ent s wi t h comm on variable im m unodefi ci ency di sorders: rel ati onshi p t o i mm unogl obuli n t herapy over 22 years J All ergy Cli n Immunol , 125 (6), 1354-1360 e1354 94 Qui nt i I., Soresi na A., Guerra A et al (2011) Effect i veness of i mm unogl obuli n replacem ent t herapy on cli nical out com e i n pati ent s wit h prim ary ant i body defi ci enci es: result s fr om a m ulti cent er prospecti ve cohort st udy J Cl i n Immunol , 31 (3), 315-322 95 Bari s S., Ercan H andal H H C e (2011) Effi c acy of Int ravenous Im m unogl obuli n Treatm ent i n Chil dren wi t h Com m on Vari abl e Im m unodefi ci ency J Investi g All ergol Cli n Immun ol , 21(7), 514-521 96 J K., I Q andal E M e (2014) Is dosi ng of t herapeuti c i mm unogl obuli ns optim al ? A revi ew of a t hree -decade l ong debat e i n europe Front Immunol , 5, 629 97 PL Y., J B andal B M e (2010) Use of i nt ravenous im m unogl obul i n and adj uncti ve t herapi es i n t he t reatm ent of prim ary i mm unodeficiencies: a worki ng group report of and st udy by t he Prim ary Im m unodefi ci ency Com mit tee of t he Am erican Academ y of Al l ergy Ast hm a and Im m unol ogy Cli n Immunol , 135, 255-263 98 GJ A., GH J andBR L (2010) Primary im m unodefi - ci ency and aut oim m uni t y: l essons from hum an di seases Scand J Immunol , 71, 317–328 99 N A., A M andal J -T M e (2013) Eval uat i on of CD4 + CD2 + FOXP3 + regul at ory T cell s functi on i n pat ient s wi t h com m on vari abl e i mm unodefi ci ency Cel l Immunol , 281, 129–133 100 C S., M D andL G (2009) Ri sk of seri ous i nfecti ons duri ng rit uxim ab, abat acept and anaki nra t reat m ent s for rheum at oi d art hri ti s: m et a-anal yses of random i sed pl acebo-cont roll ed trial s Ann Rheum Di s, 68, 25–32 101 Agarwal S andMayer L (2013) Di agnosi s and treat ment of gast roi nt est i nal di sorders i n pat ient s wi t h pri mary im m unodefi ci ency Cli n Gast roent erol Hepat ol, 11 (9), 1050-1063 102 AS P., J R andME C (2003) Reconsti t uti on of B cell functi on i n m uri ne m odel s of i mm unodeficiency Cl i n Immunol , 107, 90–97 103 V H., LA M andME C (2003) St em cel l t ransplant s for pati ent s wi t h X-li nked agamm agl obuli nemi a Cli n Immun ol , 107, 98– 102 104 Abu-Arj a R F., Cherni n L R andAbusi n G e a (2015) Successful hemat opoieti c cel l t ransplantati on i n a pati ent wit h X-l i nked agam magl obuli nem ia and acut e m yel oi d l eukemi a Pedi at r Bl ood Cancer, 62 (9), 1674-1676 105 Ikegame K , Im K., Yam ashit a M et al (2016) Al l ogenei c st em cel l t ranspl antati on for X-l i nked agamm agl obul i nemi a usi ng reduced i ntensit y condit i oni ng as a m odel of t he reconsti t uti on of hum oral im m unit y J Hemat ol Oncol, 9, 106 Thanh K H (2004) Liệu pháp gen - Nguyên l ý ứng dụng, Nhà xuất Khoa học kỹ t huật, 21-33 107 Ai ut i A., Sl avi n S andAker M (2002) Correcti on of ADA-SCI D by stem cell gene t herapy com bi ned wi t h nonm yel oabl at i ve condit i oni ng Sci ence, 296, 2410–2413 108 Kang H J., Bart hol om ae C C., Paruzynski A et al (2011) Retrovi ral gene t herapy for X-li nked chronic granul om at ous di sease: result s from phase I/ II trial Mol Ther, 19 (11), 2092-2101 109 Bozt ug K., Schmi dt M , Schwarzer A et al (2010) Stem -cel l gene t herapy for t he Wi skott -Al dri ch syndrom e N Engl J Med, 363 (20), 1918-1927 110 Yu P W., Tabuchi R S., Kat o R M et al (2004) Sust ned correcti on of B-cel l devel opment and funct i on i n a m uri ne m odel of X-li nked agamm agl obuli nemi a (XLA) usi ng retrovi ral -m edi at ed gene t ransfer Bl ood, 104 (5), 1281-1290, Ng Y Y., Baert M R , Pi ke-Overzet K et al (2010) Correct i on of B-cell devel opm ent i n Bt k-deficient mi ce usi ng lenti vi ral vect ors wit h codon -opt im ized hum an BTK Leukemi a, 24 (9), 1617-1630 111 P Q , M D , J D B et al (1999) Earl y and prol onged i nt ravenous im m unogl ob uli n t herapy i n chil dhood agam m agl obuli nem ia: A ret rospecti ve survey of 31 pati ent s J Pedi at r, 134, 589 –596 112 Mỹ L T (2011) Đặc ểm bệnh nhân t hi ếu Gamm agl obul i n máu có li ên quan nhiễm sắc t hể gi ới tí nh t ại bệnh viện Nhi đồng TP Hồ Chí Mi nh Tạp chí Nghi ên cứu y học, Tập 1, phụ san số 4, 113 Vu Q V., Wada T andLe H T M (2014) Cl i ni cal and m ut ati onal feat ures of Vi et nam ese chil dren wi t h X-li nked agamm agl obul i nemi a BMC Pedi at ri cs, 14 (129), 1-5 114 Chadha N K (2015) Brodsky and Fri edm an Scales and Cli nical Tonsi l Size Gradi ng i n Chi l dren JAMA Ot ol aryngol ogy - Head and Neck Surgery, 141 (10), 1-5 115 L L Y., M J B andY Y C (1992) Bi phasi c ri se of serum im m unogl obul i ns G and A and sex i nfl uence on serum i mm unogl obuli n M i n norm al Chi nese chi l dren J Paedi at r Chil d Heal t h, 28 (3), 240-243 116 Ư ơng B v N T (2014) Sổ t ay khoảng t ham chiếu 10-30 117 ER S (2004) Imm unodeficiency Di sorders: General Consi derati ons In: St iehm ER Im m unol ogi c Di seases i n Infant & Chil dren El sevier Saunders, Phil adel phi a., 5t h edi ti on, 289-355 118 Anh N T V., Hương L T M andDươn g T N (2012) Báo cáo ca bệnh vô gam m agl obuli n huyết l iên quan đến nhiễm sắc t hể X ở t rẻ em Tạp chí y dược l âm sàng, (2), 65-69 119 Zhang Z Y., Zhao X D., Jiang L P et al (2010) Cl i ni cal charact eri st ics and m ol ecular anal ysi s of 21 Chi nese chil dren wi t h congeni tal agamm agl obul i nemi a Scand J Immun ol , 72 (5), 454-459 120 Lee P P., Chen T X., Jiang L P et al (2010) Cl i ni cal charact eri st i cs and genot ype-phenot ype correl at i on i n 62 pat ient s wi t h X-li nked agamm agl obul i nemi a J Cli n Immun ol , 30 (1), 121-131 121 Suri D andBhatt S (2017) Serial Serum Imm unogl obuli n G (IgG) Trough Level s i n Pat i ent s wi t h X-l i nked Agam magl obuli nem ia on Replacem ent Therapy wi t h Intravenous Imm unogl obul i n: It s Correl ati on wit h Infecti ons i n Indi an Chil dren J Cli n Immu nol , 37 (3), 311–318 122 Takada H., Kanegane H., Nom ura A et al (2004) Fem al e agam magl obuli nemi a due t o t he Brut on t yrosi ne ki nase deficiency caused by ext rem el y skewed X-chrom osom e i nact i vati on Bl ood, 103 (1), 185-187 123 E C W., W J E andD L H (2009) Low bi rt h wei ght and respirat ory di sease i n adult hood: a populati on-based case-control st udy Am erican j ournal of respi rat ory and crit ical care m edi ci ne 180 (2), 176-180 124 Nguyễn N L andVăn Đ H (2006) Các quan và tế bào t ham gi a vào trì nh mi ễn dị ch Sách miễn dịch học, 32-45 125 Abbas A K., Li cht man A H andPil la S (2015) Basi c Im m unol ogy - Functi ons and Di sorders of t he Im m une Syst em El sevi er, 126 Basi le N., Dani eli an S., Ol eastro M et al (2009) Cli ni cal and m ol ecul ar anal ysi s of 49 pat ient s wi t h X -li nked agamm agl obul i nemi a from a si ngl e cent er i n Argenti na J Cli n Immunol , 29 (1), 123-129 127 Chun J -K., Lee T J., Song J W et al (2008) Anal ysi s of Cli nical Present ati ons of Brut on Di sease: A Revi ew of 20 Years of Accum ulated Data from Pediatric Pat ient s at Severance Hospi t al Yonsei Medi cal Journal , 49 (1), 128 Aadam Z., Kechout N , Barakat A et al (2016) X-Li nked Agam m agobuli nem ia i n a Large Series of Nort h Afri can Pat ient s: Frequency, Cli ni cal Feat ures and Novel BTK Mut ati ons 36(3):187-94, 36 (3), 187-194 129 Agham ohamm adi A , Moi n M., Farhoudi A et al (2004) Effi cacy of i ntravenous i mm unogl obuli n on t he preventi on of pneum oni a i n pati ent s wit h agam m agl obuli nemi a FEMS Immunol ogy & Medical Mi crobi ol ogy, 40 (2), 113-118 130 Cunni ngham-Rundl es C (2011) Aut oim m unit y i n prim ary imm une deficiency: t aki ng l essons from our pat ient s Cl i n Exp Immunol , 164 Suppl 2, 6-11 131 Sordet C., Cant agrel A., Schaeverbeke T et al (2005) Bone and j oi nt di sease associ at ed wi t h pri mary im m une deficiencie s Joi nt Bone Spi ne, 72 (6), 503-514 132 Qi n X., Ji ang L P., Tang X M et al (2013) Cli nical feat ures and m ut ati on anal ysi s of X-li nked agam m agl obuli nemi a i n 20 Chi nese pati ent s Worl d J Pedi at r, (3), 273-277 133 Agham ohamm adi A , Fi ori ni M., Moi n M et al (2006) Cl i ni cal, Im m unol ogi cal and Mol ecul ar Charact eri sti cs of 37 Irani an Pati ent s wit h X-Li nked Agam m agl obuli nemi a Int ernati onal Archi ves of All ergy and Immunol ogy, 141 (4), 408-414 134 E C M., M F D., K D A et al (2008) A mi ni m all y hypom orphi c m ut ati on i n Bt k resulti ng i n reduced B cell num bers b ut no cl i ni cal di sease Cli n Exp Immunol , 152 (1), 39-44 135 Stewart D M., Ti an L andNel son D L (2001) A Case of X-Li nked Agam m agl obuli nemi a Di agnosed i n Adul t hood Cli nical Immunol ogy, 99 (1), 94-99 136 Trà L N., Khanh N C., Nhạn N T et al (2016) Sự phát t ri ển hệ t hống mi ễn dịch ở t rẻ em Sách gi áo khoa Nhi khoa, Nhà xuất Y học, 1456-1465 137 G G., H C andal C S e (2002) Effi ci ency of i mm unogl obuli n G repl acem ent t herapy i n com m on vari abl e i mm unodefi ci ency: correl at i ons wi t h cl i ni cal phenot ype and pol ym orphi sm of t he neonat al Fc recept or Briti sh Soci et y f or Immunol ogy, Cl i ni cal and Experi ment al Immunol ogy, 171, 186–119 138 B G H , M F., I C et al (2000) Ki nase m utant Bt k result s i n at ypi cal X-li nked agamm agl obuli naem ia phenot ype Cl i n Exp Immunol , 120, 346 – 350 139 A J., L B., L A et al (1996) X-l i nked agamm agl obul i nemi a wi t h a “l eaky” phenot ype Archives of Di sease i n Chil dhood, 74, 548–549 140 V M., P O andal P A e (2000) X-chrom osom e i nacti vat i on and m ut ati on patt ern i n t he Brut on´s t yrosi ne ki nase gene i n pati ent s wi t h X-li nked agamm agl obuli nemi a Mol Med, 6, 104-113 141 L Y., Y M andal C.-S E e Mut ati ons i n t he m heavy chai n gene i n pat ient s wi t h agamm agl obul i nemi a N Engl J Med, 335, 1486-1493 142 Vali aho J , Smit h C I andVi hi nen M (2006) BTKbase: t he m ut at i on dat abase for X-li nked agam m agl obuli nemi a Hum Mut at, 27 (12), 1209-1217 143 MJ B., RN H andal O Y e Di scordant phenot ype i n si bl i ngs wi t h X-l i nked agam magl obuli nem ia Am J Hu m Genet i cs, 58, 477–483 144 C W X , Y W andal K H e (2005) Gene di agnosi s of X-li nked agamm agl obuli nemi a Zhonghua Er Ke Za Zhi,, 43 (6), 449-452 145 I V., L L andal H J M e (1997) Mut ati on patt ern i n t he Brut on’s t yrosi ne ki nase gene i n 26 unr el at ed pat ient s wi t h X-li nked agamm agl obul i nemi a Humai n Mut at at i on, 9, 418-425 146 Perez E E., Orange J S., Bonil la F et al (2017) Updat e on t he use of i mm unogl obuli n i n hum an di sease: A revi ew of evi dence J All ergy Cl i n Immunol , 139 (3S), S1-S46 147 C C R andC B (1999) Comm on variable im m uno- defi ci ency: cl i ni cal and i mm unol ogical feat ures of 248 pati ent s Cli n Immunol , 92, 34–48