Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý của chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do virus parvo type 2 (CPV2) gây ra và đặc điểm sinh học phân tử của một số chủng CPV2 lưu hành tại miền bắc việt nam

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VÕ VĂN HẢI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA CHÓ MẮC BỆNH VIÊM RUỘT TIÊU CHẢY DO VIRUS PARVO TYPE (CPV2) GÂY RA VÀ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC PHÂN TỬ CỦA MỘT SỐ CHỦNG CPV2 LƯU HÀNH TẠI MIỀN BẮC VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2023 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VÕ VĂN HẢI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA CHÓ MẮC BỆNH VIÊM RUỘT TIÊU CHẢY DO VIRUS PARVO TYPE (CPV2) GÂY RA VÀ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC PHÂN TỬ CỦA MỘT SỐ CHỦNG CPV2 LƯU HÀNH TẠI MIỀN BẮC VIỆT NAM Ngành: Bệnh lý học chữa bệnh vật nuôi Mã số: 64 01 02 Người hướng dẫn: PGS.TS Bùi Trần Anh Đào PGS.TS Lê Văn Phan HÀ NỘI - 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận án cám ơn, thông tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Tác giả luận án Võ Văn Hải i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận án, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận án, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc PGS.TS Bùi Trần Anh Đào, PGS.TS Lê Văn Phan tận tình hướng dẫn, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Bệnh lý thú y, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Phịng thí nghiệm trọng điểm cơng nghệ sinh học VNUA tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức Hệ thống thú y 2Vet giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận án./ Hà Nội, ngày tháng Tác giả luận án Võ Văn Hải ii năm 2023 MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng viii Danh mục hình ix Trích yếu luận án xi Thesis abstract xiii Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài nghiên cứu 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu 1.3.2 Thời gian nghiên cứu 1.3.3 Địa điểm nghiên cứu 1.4 Các đóng góp đề tài 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.5.1 Ý nghĩa khoa học 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Đặc điểm sinh học vi rút parvo 2.1.1 Cấu tạo chung 2.1.2 Vị trí xếp loại 2.1.3 Nguồn gốc chủng CPV2 2.2 Bệnh viêm ruột tiêu chảy vi rút parvo chó 2.2.1 Dịch tễ học iii 2.2.2 Bệnh học 2.2.3 Triệu chứng lâm sàng 10 2.2.4 Bệnh tích 11 2.2.5 Chẩn đoán 16 2.2.6 Điều trị 18 2.2.7 Phòng bệnh 21 2.3 Các nghiên cứu nước giới 23 2.3.1 Các nghiên cứu nước 23 2.3.2 Các nghiên cứu giới 27 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu 36 3.1 Nội dung nghiên cứu 36 3.1.1 Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 36 3.1.2 Nghiên cứu đặc điểm sinh học phân tử chủng vi rút parvo phân lập 36 3.2 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 36 3.3 Phương pháp nghiên cứu 38 3.3.1 Phương pháp thu thập số liệu trực tiếp phòng khám 38 3.3.2 Phương pháp xác định chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 38 3.3.3 Phương pháp làm xét nghiệm huyết học sinh hóa máu chó bị bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 40 3.3.4 Phương pháp mổ khám quan sát biến đổi bệnh lý đại thể 41 3.3.5 Phương pháp làm tiêu bệnh lý vi thể 42 3.3.6 Phương pháp nhuộm hố mơ miễn dịch 45 3.3.7 Phương pháp PCR 48 2.3.8 Phương pháp điện di kiểm tra sản phẩm PCR 50 2.3.9 Phương pháp giải trình tự gen xây dựng phả hệ 50 3.4 Phương pháp xử lý số liệu 51 Phần Kết thảo luận 52 4.1 Kết nghiên cứu đặc điểm bệnh lý CPV2 chó 52 4.1.1 Tỷ lệ mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 chó theo địa phương 52 iv 4.1.2 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo lứa tuổi 53 4.1.3 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo giống 55 4.1.4 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo giới tính 55 4.1.5 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo tình trạng tiêm chủng 56 4.2 Kết nghiên cứu số tiêu sinh lý, sinh hóa máu chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 58 4.3 Kết nghiên cứu triệu chứng lâm sàng, bệnh tích chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 62 4.3.1 Kết nghiên cứu triệu chứng lâm sàng chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 62 4.3.2 Kết nghiên cứu bệnh tích đại thể vi thể chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 64 4.4 Kết xác định phân bố vi rút parvo số quan chó mắc bệnh 73 4.5 Kết phân tích số đặc tính sinh học phân tử CPV2 gây bệnh chó số tỉnh Miền Bắc Việt Nam 78 4.5.1 Kết phân tích trình tự nucleotide acid amin gen VP2 78 4.5.2 Kết phân tích trình tự nucleotide acid amin gen CPV2 95 Phần Kết luận kiến nghị 108 5.1 Kết luận 108 5.1.1 Đặc điểm bệnh lý chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 108 5.1.2 Kết phân tích đặc điểm sinh học phân tử CPV2 108 5.2 Kiến nghị 109 Danh mục cơng trình cơng bố liên quan đến luận án 111 Tài liệu tham khảo 112 Phụ lục 128 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt & aa Ala Arg Asn Asp CCoV CDV CPV CPV2 FFP Gln Glu Gly HA Nghĩa tiếng Việt Và Amino acid (A xít amin) Alanine Arginine Asparagine Aspartic acid Canine corona virus Canine distemper virus Canine parvo virus (vi rút parvo gây bệnh chó) Canine parvo virus type (vi rút parvo type gây bệnh chó) Canine rota virus Cộng Cysteine Diamino benzindin (cơ chất DAB) Dulbecco’s modified Eagle’s medium (môi trường DMEM) Deoxyribonucleic acid (Axit deoxyribonucleic) Ethylene Diamine Tetracetic Acid (A xít etylenediaminetetraacetic) Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (phương pháp miễn dịch gắn enzyme) Fresh Frozen Plasma (Huyết tươi đông lạnh) Glutamine Glutamic acid Glycine Haemagglutination (Phản ứng ngưng kết hồng cầu) HE His IHC Ile IV Leu Lys Met Haematoxylin - Eosin (Thuốc nhuộm tiêu bệnh lý) Histidine Immuno Histochemistry (Hóa mơ miễn dịch tổ chức) Isoleucine Tiêm tĩnh mạch Leucine Lysine Methionine CRoV Cs Cys DAB DMEM DNA EDTA ELISA vi Chữ viết tắt NPO nt PCR Pro Phe RNA RT-PCR s Nghĩa tiếng Việt Nil per os (Phương pháp cho ăn không qua miệng) Nucleotide Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi polymerase) Proline Phenylalanine Ribonucleic acid (A xít ribonucleic) Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp có dùng enzym phiên mã ngược) giây SC Ser Tyr Thr Trp Val VRTC Tiêm da Serine Tyrosin Threonine Tryptophan Valine Viêm ruột tiêu chảy vii DANH MỤC BẢNG TT Tên bảng Trang 3.1 Thông tin mẫu bệnh phẩm sử dụng nghiên cứu 37 3.2 Hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động 43 3.3 Hệ thống nhuộm lần 45 3.4 Hệ thống nhuộm lần 47 3.5 Thành phần phản ứng PCR 49 3.6 Thông tin cặp mồi sử dụng nghiên cứu 49 4.1 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo địa phương 52 4.2 Tỷ lệ chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo lứa tuổi 54 4.3 Tỷ lệ chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo giống 55 4.4 Tỷ lệ chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo giới tính 56 4.5 Tỷ lệ chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 theo tình trạng tiêm vắc xin 57 4.6 Chỉ tiêu sinh lý máu chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 (n=36) 59 4.7 Chỉ tiêu sinh hóa máu chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 (n=36) 61 4.8 Triệu chứng lâm sàng chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 62 4.9 Bệnh tích đại thể chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy CPV2 66 4.10 Bệnh tích vi thể số quan chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV2 69 4.11 Kết phát tế bào dương tính với kháng nguyên CPV2 74 4.12 Thông tin mẫu bệnh phẩm sử dụng nghiên cứu 79 4.13 Tỷ lệ (%) tương đồng trình tự nucleotide (nt) gen VP2 12 chủng vi rút parvo nghiên cứu với với chủng vi rút parvo tham chiếu khác 81 4.14 Tỷ lệ (%) tương đồng trình tự amino acid (aa) gen VP2 12 chủng vi rút parvo nghiên cứu với với chủng vi rút parvo tham chiếu khác 82 4.15 Tỷ lệ tương đồng trình tự nucleotide (nt) (dưới đường chéo) amino acid (aa) (trên đường chéo) chủng CPV2 nghiên cứu với chủng CPV2 tham chiếu khác 100 4.16 So sánh trình tự nt aa chủng CPV2 nghiên cứu với chủng CPV2 tham chiếu khác 101 viii Evaluation of Canine Parvoviral and Coronaviral Enteritis Journal of Animal and Veterinary Advances 8: 720-725 92 Mehmet Ưzkan Timurkan & Tuba Çiğdem Oğuzoğlu (2015) Molecular characterization of virus Parvo (CPV) infection in dogs in Turkey Veterinaria Italiana 51(1): 39-44 93 Mia M M & Hasan M (2021) Update on canine parvovirus infection: A review from the literature Veterinary Sciences: Research and Reviews 7(2): 92-100 94 Milicevic V., D Glisic, ZZ Sapundzic, M Ninkovic, B Milovanovic, L Veljovic, & B Kureljusic (2021) Molecular Epidemiology and Gentic Evolution of Canine Virus parvo Type in Diarrheic Dogs in Serbia From 2008 To 2020 95 Mira F., G Purpari, E Lorusso, S Di Bella, F Gucciardi, C Desario & A Guercio (2018) Introduction of Asian canine virus parvo in Europe through dog importation Transboundary and emerging diseases 65(1): 16-21 96 Miranda C &Thompson G (2016) Canine parvovirus: the worldwide occurrence of antigenic variants J Gen Virol 97(9): 2043-2057 97 Mochizuki, M., Horiuchi, M., Hiragi, H., San Gabriel, M C., Yasuda, N & Uno, T (1996) Isolation of canine parvovirus from a cat manifesting clinical signs of feline panleukopenia Journal of Clinical Microbiology 34(9): 2101 98 Mochizuki, M., R Harasawa & H J V M Nakatani (1993) Antigenic and genomic variabilities among recently prevalent parvoviruses of canine and feline origin in Japan 38(1-2): 1-10 99 Mohan R, Nauriyal DC & Singh KB (1993) Detection of canine parvovirus in feces, using a parvovirus ELISA test kit Indian Vet J 70: 301–303 100 Mohan Raj J, Mukhopadhyay HK, Thanislass J, Antony PX & Pillai RM (2010) Isolation, molecular characterization and phylogenetic analysis of canine parvovirus Infect Genet Evol 10(8): 1237-41 101 Moon B Y., J Jang, S H Kim, Y H Kim, H K Lee, B So & K LeeK (2020) Gentic characterization of canine virus parvo type 2c from domestic dogs in Korea Transboundary and emerging diseases 67(4): 1645-1653 102 Mukhopadhyay HK, Matta SL, Amsaveni S, Antony PX, Thanislass J & Pillai RM (2014) Phylogenetic analysis of canine parvovirus partial VP2 gene in India Virus Genes 48(1): 89-95 103 Mylonakis, M., Kalli, I & Rallis, T (2016) Canine parvoviral enteritis: an update on the clinical diagnosis, treatment, and prevention Vet Med Res Rep 7: 91–100 104 Nakamura M, Y Tohya, T Miyazawa, M Mochizuki, H T T Phung, N H Nguyen, L M T Huynh, L T Nguyen, P N Nguyen, P V Nguyen, N P T Nguyen 121 & H Akashi (2004) A novel antigenic variant of virus Parvo from a Vietnamese dog Arch Virol 149(11): 2261–2269 105 Nandi S & Kumar M (2010) Canine parvovirus: current perspective Indian J Virol 2010 Jun 21(1): 31-44 106 Nandi, S., Chidri, S & Kumar, M (2009) Molecular characterization and phylogenetic analysis of a canine parvovirus isolate in India Veterinární medicína 54(10): 483-490 107 Nappert G, E Dunphy, D Ruben & F A Mann (2002) Determination of serum organic acids in puppies with naturally acquired parvoviral enteritis Can J Vet Res 66(1): 15–8 108 Nguyen Manh, T., Piewbang, C., Rungsipipat, A & Techangamsuwan, S (2021) Molecular and phylogenetic analysis of Vietnamese canine parvovirus 2C originated from dogs reveals a new Asia‐IV clade Transboundary and emerging diseases 68(3): 1445-1453 109 Niskanen, E A., Ihalainen, T O., Kalliolinna, O., H kkinen, M M & VihinenRanta, M (2010) Effect of ATP binding and hydrolysis on dynamics of canine parvovirus NS1 Journal of virology 84(10): 5391-5403 110 Niskanen, E A., Kalliolinna, O., Ihalainen, T O., Häkkinen, M & VihinenRanta, M (2013) Mutations in DNA binding and transactivation domains affect the dynamics of parvovirus NS1 protein Journal of virology 87(21): 1176211774 111 Ohshima T., M Hisaka, K Kawakami, M Kishi, Y Tohya & M Mochizuki (2008) Chronological analysis of canine virus parvo type isolates in Japan Journal of Veterinary Medical Science 70(8): 769-775 112 Organtini L J., A B Allison, T Lukk, C R Parrish & S Hafenstein (2015) Global displacement of canine virus parvo by a host-adapted variant: structural comparison between pandemic viruses with distinct host ranges Journal of virology 89(3): 1909-1912 113 Otto CM, Drobatz KJ & Soter C (1997) Endotoxemia and tumor necrosis factor activity in dogs with naturally occurring parvoviral enteritis J Vet Intern Med 1997 Mar-Apr.11(2): 65-70 114 Otto, Rieser TM, Brooks MB & M W Russell (2000) Evidence of hypercoagulability in dogs with parvoviral enteritis J Am Vet Med Assoc 217(10): 1500–4 115 Otto AJ, Leisewitz AL, Jacobson LS, Jörg M Steiner, Craig G Ruaux & David A Williams (2003) Effect of early enteral nutrition on intestinal permeability, 122 intestinal protein loss, and outcome in dogs with severe parvoviral enteritis J Vet Intern Med 17(6): 791–8 116 Panda D, RC Patra, S Nandi & D Swarup (2009) Oxidative stress indices in gastroenteritis in dogs with canine parvoviral infection Res Vet Sci 86(1): 36–42 117 Parrish, C R., P H O'Connell, J F Evermann & L E Carmichael (1985) Natural variation of canine parvovirus Science 230(4729): 1046 -1048 118 Parrish CR, Have P & Foreyt WJ (1988) The replacement of canine virus parvo strains J Gen Virol global spread and 119 Parrish CR, CF Aquadro & LE Carmichael (1988) Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gen of virus Parvo and related feline, mink, and raccoon virus parvo Virology 166(2): 293-307 120 Parrish CR, CF Aquadro, ML Strassheim, JF Evermann, JY Sgro & HO Mohammed (1991a) Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of virus Parvo J Virol 65: 6544-52 121 Parrish, C R (1991b) Mapping specific functions in the capsid structure of canine parvovirus and 686 feline panleukopenia virus using infectious plasmid clones Virology 183(1): 195-205 687 122 Parrish, C R., Aquadro, C F., Strassheim, M L., Evermann, J F., Sgro, J Y & Mohammed, 688 H O (1991b) Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine 689 parvovirus J Virol 65(12): 6544-52 123 Parrish CR (1999) Host range relationships and the evolution of virus Parvo Vet Microbiol 69: 29–40 124 Parrish CR & Y Kawaoka (2005) The origins of new pandemic viruses: the acquisition of new host ranges by virus Parvo and influenza A viruses Annu Rev Microbiol 59: 553–586 125 Parthiban, S., Mukhopadhyay, H K., Antony, P X & Pillai, R M (2010) Molecular typing of canine parvovirus occurring in Pondicherry by multiplex PCR and PCR–RFLP Indian Journal of Virology 21: 86-89 126 Pereira CA, Monezi TA, Mehnert DU, D'Angelo M & Durigon EL (2000) Molecular characterization of canine parvovirus in Brazil by polymerase chain reaction assay Vet Microbiol 75(2): 127-33 127 Pereira, G.Q., Gomes, L.A., Santos, I.S., Alfieri, A.F & Costa, J.S.W.M.C (2018) Fecal microbiota transplantation in puppies with canine parvovirus infection J Vet Int Med 32(2): 707–711 128 Perez, R., Francia, L., Romero, V., Maya, V., Lopez, I & Hernandez, M (2007) First detection 702 of canine parvovirus type 2c in South America Vet Microbiol 123 124: 147-152 129 Pollock and Carmichael LE (1982) Maternally derived immunity to virus Parvo infection: transfer, decline, and interference with vaccination J Am Vet Med Assoc 180(1): 37-42 130 Pollock (1984a) The virus parvoes I Feline panleukopenia virus and mink enteritis virus Compend Contin Educ Pract Vet 6(3): 227–41 131 Pollock (1984b) The virus parvoes II Virus Parvo Compend Contin Educ Pract Vet 6(7): 653–64 132 Pollock RV & Coyne MJ (1993) Canine virus parvo Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice 23(3): 555-568 133 Prittie (2004) Canine parvoviral enteritis: a review of diagnosis, management, and prevention J Vet Emerg Crit Care.14(3): 167-76 134 Raj J M., H K Mukhopadhyay, J Thanislass, P X Antony & R M Pillai (2010) Isolation, molecular characterization and phylogentic analysis of canine virus parvo Infection, Gentics and Evolution 10(8): 1237-1241 135 Reed AP, Jones EV & Miller TJ (1988) Nucleotide sequence and genome organization of canine virus parvo Journal of virology 62(1): 266-276 136 Riedl, M., Truyen, U., Reese, S & Hartmann, K (2015) Prevalence of antibodies to canine parvovirus and reaction to vaccination in clientowned, healthy dogs Vet Rec 1–8 137 Robinson WF, Huxtable CR & Pass DA (1980) Canine parvoviral myocarditis: a morphological description of the natural disease Vet Pathol 17(3): 282–93 138 Rota, A., Dogliero, A., Muratore, E., Pregel, P., Del Carro, A & Masoero, L (2019) Serological survey of canine parvovirus antibody titres in breeding kennels in northern Italy BMC Vet Res 15(1): 1–5 139 Roy, S., Ahmed, S U., Alam, S., Chowdhury, Q M M K., Sujaur, M., Popy, F Y & Ahmed, J (2018) Prevalence of canine parvoviral enteritis in pet dogs at Dhaka city of Bangladesh Int J Biol Res 6: 14-17 140 Rushton, J (2008) The economics of animal health and production CABI, UK 141 Savigny MR & Macintire DK (2010) Use of oseltamivir in the treatment of canine parvoviral enteritis J Vet Emerg Crit Care 20(1): 132–42 142 Schatzberg SJ, Haley NJ, Barr SC, Parrish C, Steingold S, Summers BA, deLahunta A, Kornegay JN & Sharp NJ (2003) Polymerase chain reaction (PCR) amplification of parvoviral DNA from the brains of dogs and cats with cerebellar 124 hypoplasia J Vet Intern Med 17(4): 538-44 143 Schaudien, D., Polizopoulou, Z., Koutinas, A., Schwab, S., Porombka, D., Baumgartner, W & Herden, C (2010) Leukoencephalopathy associated with parvovirus infection in Cretan hound puppies Journal of clinical microbiology 48(9): 3169-3175 144 Schoeman JP, Goddard A, Leisewitz AL (2013) Biomarkers in canine parvovirus enteritis N Z Vet J 61(4): 217-22 145 Shackelton LA, Parrish CR, Truyen U & Holmes EC (2005) High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore virus parvo Proceedings of the National Academy of Sciences 102(2): 379-384 146 Shakespeare A.S (1999) The incidence of gastroenteritis diagnosis among sick dogs presented to the Onderstepoort Veterinary Academic Hospital correlated with meteorological data: research communication Journal of the South African Veterinary Association 70(2): 95-97 147 Shima FK, Apaa TT & Mosugu JITJOALJ (2015) Epidemiology of Canine Parvovirus Enteritis among Hospitalized Dogs in Effurun/Warri Metropolitan Region of Delta State, Nigeria 02: 1-7 148 Simpson, A A., Chandrasekar, V., Hébert, B., Sullivan, G M., Rossmann, M G., & Parrish, C R (2000) Host range and variability of calcium binding by surface loops in the capsids of canine and feline parvoviruses Journal of molecular biology 300(3): 597-610 149 Smith-Carr, Macintire DK & Swango LJ (1997) Virus Parvo Part I Pathogensis and vaccination Compend Contin Educ Pract Vet 19(2): 125–33 150 Spindel ME, Krecic MR, Slater MR & Vigil N (2018) Evaluation of a Community's Risk for Canine Parvovirus and Distemper Using Antibody Testing and GIS Mapping of Animal Shelter Intakes J Appl Anim Welf Sci 21(4): 362-374 151 Srinivas VMV, Mukhopadhyay HK, Thanislass J, Antony PX and Pillai RM (2013) Molecular epidemiology of canine parvovirus in southern India, Veterinary World 6(10): 744-749 152 Stander N, Wagner WM, A Goddard & Robert M Kirberger (2010) Normal canine pediatric gastrointestinal ultrasonography Vet Radiol Ultrasound 51(1): 75–8 153 Sylvia Anna Ohneise (2013) Virus Parvo in New Zealand 154 Terzungwe, T M., Thaddaeus, A T., Saganuwan, S A., Aondonenge, T A F., Washima, A.-T & Samuel, N J W (2018) The epidemiology of canine parvovirus enteritis in dogs of Makurdi, Benue State, Nigeria 8(3): 48-54 155 Thaiwong, T., Wise, A G., Maes, R K., Mullaney, T & Kiupel, M (2016) 125 Canine Circovirus (CaCV-1) and Canine Parvovirus (CPV-2) recurrent dual infections in a papillon breeding colony Veterinary pathology 53(6): 1204-1209 156 Touihri, L., Bouzid, I., Daoud, R., Desario, C., El Goulli, A F., Decaro, N & Bahloul, C (2009) Molecular characterization of canine parvovirus-2 variants circulating in Tunisia Virus genes 38: 249-258 157 Truyen U, Platzer G, Parrish CR, Hänichen T, Hermanns W, Kaaden OR (1994) Detection of canine parvovirus DNA in paraffin-embedded tissues by polymerase chain reaction Zentralbl Veterinarmed B 41(2): 148-52 158 Truyen U & Parrish C R (1992) Canine and feline host ranges of canine parvovirus and feline panleukopenia virus: distinct host cell tropisms of each virus in vitro and in vivo J Virol 66(9): 5399-5408 159 Truyen U., A Gruenberg, SF Chang, B Obermaier, P Veijalainen & CR Parrish (1995) Evolution of the feline-subgroup virus parvoes and the control of canine host range in vivo Journal of virology 69(8): 4702-4710 160 Truyen, U W E., Evermann, J F., Vieler, E & Parrish, C R (1996a) Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host range Virology 215(2): 186-189 161 Truyen, U., Evermann, J F., Vieler, E & Parrish, C R (1996b) Evolution of canine parvovirus 760 involved loss and gain of feline host range Virology 215: 186-189 162 Truyen U (1999) Emergence and recent evolution of canine virus parvo Veterinary microbiology 69(1-2): 47-50 163 Tsao J., M.S Chapman, M Agbandje W Keller, K Smith H Wu, M Luo, T.J Smith, M.G Rossmann & R.W Compans (1991) The three-dimensional structure of canine virus parvo and its functional implications Science 251: 1456-1464 164 Turk J, Miller M, Brown T, Fales W, Fischer J, Gosser H, Nelson S, Shaw D & Solorzano R (1990) Coliform septicemia and pulmonary disease associated with canine parvoviral enteritis: 88 cases (1987-1988) J Am Vet Med Assoc 196(5): 771-3 165 Url, A., Truyen, U., Rebel-Bauder, A., Weissenböck, H & Schmidt, P (2003) Evidence of parvovirus replication in cerebral neurons of cats J Clin Microbiol 41: 3801-3805 166 Vickers N J (2017) Animal communication: when i’m calling you, will you answer too? Current biology 27(14): R713-R715 167 Vieira M J., E Silva, J Oliveira, A L Vieira, N Decaro, C Desario & Thompson G (2008a) Canine virus parvo 2c infection in central Portugal Journal 126 of veterinary diagnostic investigation 20(4): 488-491 168 Vieira MJ, Silva E, Oliveira J, Ana Luísa Vieira, Nicola Decaro, Costantina Desario, Alexandra Muller, Júlio Carvalheira, Canio Buonavoglia & Gertrude Thompson (2008b) Virus Parvo 2c infection in central Portugal J Vet Diagn Invest 20(4): 488091 169 Waner T S, E Nachmias Mazar, E Keren-Kornblatt & S Harrus (2003) Evaluation of a dot ELISA kit for measuring immunoglobulin M antibodies to virus Parvo and distemper virus Vet Rec 152(19): 588-91 170 Wang J., P Lin, Hi Zhao, Y Cheng, Z Jiang, H Zhu & S Cheng (2016) Continuing evolution of canine virus parvo in China: isolation of novel variants with an Ala5Gly mutation in the VP2 protein Infection, Gentics and Evolution 38: 73-78 171 Weiss, D J., Evanson, O A & BVSc, J S (1999) A retrospective study of canine pancytopenia Veterinary clinical pathology 28(3): 83-88 172 Weissenböck H & Burtscher H (1991) Fluoreszenzserologische und histologische Untersuchungen zur Antigenverteilung bei Parvovirusinfektionen von Hund und Katze [Fluorescence serologic and histologic studies of antigen distribution in parvovirus infections in dogs and cats] Zentralbl Veterinarmed B 38(7): 481-91 173 Wessels BC & Gaffin SL (1986) Anti-endotoxin immunotherapy for virus Parvo endotoxaemia J Small Anim Pract 27(10): 609–15 174 Wilson S, Illambas J, Siedek E, Stirling C, Thomas A, Plevová E, Sture G & Salt J (2014) Vaccination of dogs with canine parvovirus type 2b (CPV-2b) induces neutralising antibody responses to CPV-2a and CPV-2c Vaccine 2014 Sep 22 32(42): 5420-4 175 Xie Q & M.S Chapman (1996) Canine virus parvo capsid structure, analyzed at 2.9 A resolution J Mol Biol 264: 497–520 176 Yilmaz Z & Senturk S (2007) Characterisation of lipid profiles in dogs with parvoviral enteritis J Small Anim Pract 2007 Nov 48(11): 643-50 177 Zhao H., J Wang, Y Jiang, Y Cheng, P Lin, H Zhu & L Guo (2017) Typing of canine virus parvo strains circulating in North‐East China Transboundary and emerging diseases 64(2): 495-503 178 Zhong, Z., Liang, L., Zhao, J., Xu, X., Cao, X., Liu, X & Peng, G (2014) First isolation of new canine parvovirus 2a from Tibetan mastiff and global analysis of the full-length VP2 gene of canine parvoviruses in China International Journal of Molecular Sciences 15(7): 12166-12187 127 PHỤ LỤC PHỤ LỤC MẪU HỒ SƠ BỆNH ÁN CỦA CHĨ TẠI PHỊNG KHÁM THÚ Y 2VET 128 PHỤ LỤC MẪU BẢNG BIỂU THU THẬP THƠNG TIN CA BỆNH TẠI PHỊNG KHÁM 129 PHỤ LỤC BẢNG THU THẬP KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM MÁU ĐƯỢC SỦ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU Các tiêu Mean±SE RBC-Số lượng hồng cầu (tera/l) Hb-Hàm lượng huyết sắc tố (g/dl) HCT-Thể tích khối hồng cầu (%) MCV-Thể tích trung bình hồng cầu (Fl) MCH-Lượng hemoglobin trung bình (Pg) PLT-Số lượng tiểu cầu (giga/l) WBC-Số lượng bạch cầu (giga/l) Tỷ lệ bạch cầu Lympho (%) Tỷ lệ bạch cầu Mono (%) Tỷ lệ bạch cầu trung tính (%) Kết Khoảng tham chiếu* 4,95-7,87 11,9-18,9 35,0-57,0 60-77 19,5-24,5 211-621 5,0-14,1 8-21 2-10 58,0 – 85,0 * Ghi chú: Animal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods (Michael & Harol, 2012) Kết Các tiêu Mean±SE AST (U/L) ALT (U/L) Bilirubin TP (mg/dl) Creatinin (mg/dl) Albumin (g/dl) Protein toàn phần (g/dl) Calci máu (mmol/L) Natri (mmol/L) Kali (mmol/L) Clo (mmol/L) Khoảng tham chiếu* 18-56 17-95 0,2-1,3 0,5-1,4 3,6-5,0 6,0-7,5 2,15-2,60 143-150 4,1-5,4 98-110 * Ghi chú: Animal Clinical Diagnosis by Laboratory Methods (Michael & Harold, 2012) 130 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRIỆU CHỨNG BỆNH TÍCH CHĨ MẮC CPV2, KẾT QUẢ NHUỘM HĨA MƠ MIỄN DỊCH MỘT SỐ CƠ QUAN CHĨ MẮC BỆNH Chó nơn mửa mắc CPV2 Chó mệt mỏi mắc CPV2 Chó tiêu chảy mắc CPV2 Chó bị chết mắc CPV2 131 Một số hình ảnh bệnh tích đại thể chó mắc viêm ruột tiêu chảy CPV Hạch cổ sung huyết; Hạch màng treo ruột sung huyết; Niêm mạc ruột bong tróc, xuất xuyết; Ruột non xuất xuyết; Dạ dày nhợt nhạt, xuất huyết; Phổi sung huyết; Lách sung huyết; Cơ tim nhợt nhạt; Bàng quang xuất huyết 132 Ảnh tiêu mô ruột non nhuộm IHC dương tính: phát kháng nguyên virus Parvo tế bào biểu mô ruột 133 Ảnh tiêu mơ hạch lympho nhuộm IHC dương tính: phát kháng nguyên virus Parvo tế bào lympho Hạch PHỤ LỤC CÁC CHỦNG VIRUS THAM CHIẾU ĐƯỢC SỬ DỤNG ĐỂ PHÂN TÍCH SỰ TƯƠNG ĐỒNG VỀ TRÌNH TỰ GEN CỦA CPV2 Mã hiệu STT (Accession number) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 EU659117 KR002795 JX660690 LC214970 JQ686671 KF676668 MG434745 MF177226 AY742934 JQ268284 MF510157 LC214969 MT106228 MF177239 MF069445 HQ184203 GU392254 GU392245 KY094119 KY083089 EU914139 Type CPV2 CPV2a CPV2a CPV2a CPV2a new CPV2b CPV2a CPV2b CPV2b CPV2b new CPV2c CPV2c CPV2c CPV2c FPV FPV CPV2 CPV2 CPV2 CPV2 CPV2 Tên chủng virus Quốc gia Năm phân lập CPV-6.us.80 CPV/CN/JL1/2013 SC02/2011 CPV/dog/HCM/22/2013 CPV2a-new/China 2011 CPV-JS2 CPV_IZSSI_PA13579id93/2017 1-99 CPV-447 CPV-LZ2 CPV_IZSSI_2743_17 CPV/dog/HCM/7/2013 HN07 288-01 FPV/Raccoon/RC6/BC_2015 HQ184203 KS58 GU392254 Dalian1 GU392245 Shangdong4 KY094119 MEV-SD8 KY083089 Vaccine Singapore EU914139 Pfizer/vaccine/06 Mỹ Trung Quốc Trung Quốc Việt Nam Trung Quốc Trung Quốc Italy Italy Đức Trung Quốc Italy Việt Nam Việt Nam Italy Canada Hàn Quốc Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Singapore Mỹ 1980 2013 2011 2013 2011 2009 2017 1999 1995 2011 2017 2013 2017 2001 2015 2008 2009 2007 2016 2016 2008 134 PHỤ LỤC BẢNG TỶ LỆ % TƯƠNG ĐỒNG VỀ TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE (DƯỚI ĐƯỜNG CHÉO) VÀ ACID AMIN (TRÊN ĐƯỜNG CHÉO) CỦA GEN VP2 GIỮA 12 CHỦNG VIRUS PARVO TRONG NGHIÊN CỨU NÀY VỚI NHAU VÀ VỚI CÁC CHỦNG VIRUS PARVO THAM CHIẾU KHÁC STT Chủng vi-rút OK094438 VNUA/CPV152 OK094439 VNUA/CPV153 OK094440 VNUA/CPV175 OK094441 VNUA/CPV376 OK094442 VNUA/CPV379 OK094443 VNUA/CPV380 OK094444 VNUA/CPV384 OK094445 VNUA/CPV385 VNUA/C17 98,6 98,8 98,8 98,8 98,6 98,8 98,8 98,8 10 VNUA/C31 97,7 97,9 97,9 97,9 97,7 97,9 97,8 97,8 98,6 11 VNUA/C32 97,7 97,9 97,9 97,9 97,7 97,9 97,8 97,8 98,6 100 12 13 VNUA/C35 97,7 97,9 97,9 97,9 97,7 97,9 97,8 97,8 98,6 100 100 100 99,8 99,1 98,8 99,3 98,2 97,7 MF069445 FPV/Raccoon/RC6/BC_ 2015 97,8 98,0 98,0 98,0 97,8 98,0 98,0 98,0 98,7 99,3 99,3 99,3 99,8 99,1 98,8 99,3 98,2 97,7 14 HQ184203 KS58 97,6 97,8 97,8 97,8 97,6 97,8 97,8 97,8 98,5 99,3 99,3 99,3 99,3 15 GU392254 Dalian1 97,7 98,0 98,0 98,0 97,7 98,0 97,9 97,9 98,5 99,0 99,0 99,0 99,2 99,0 16 GU392245 Shangdong4 97,6 97,8 97,8 97,8 97,6 97,8 97,8 97,8 98,4 98,9 98,9 98,9 17 KY094119 MEV-SD8 KY083089 Vaccine Singapore EU914139 Pfizer/vaccine/06 97,8 98,0 98,0 98,0 97,8 98,0 98,0 98,0 98,6 99,2 99,2 99,2 99,3 99,2 99,4 99,3 18 19 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 100 100 100 99,8 100 99,8 99,8 97,9 97,2 97,2 97,2 97,2 97,0 96,7 96,5 96,7 97,9 97,4 99,7 100 100 99,8 100 99,8 99,8 97,9 97,2 97,2 97,2 97,2 97,0 96,7 96,5 96,7 97,9 97,4 99,7 100 100 99,8 100 99,8 99,8 97,9 97,2 97,2 97,2 97,2 97,0 96,7 96,5 96,7 97,9 97,4 99,7 100 100 99,8 100 99,8 99,8 97,9 97,2 97,2 97,2 97,2 97,0 96,7 96,5 96,7 97,9 97,4 100 99,7 99,7 99,7 99,8 100 100 97,7 97,0 97,0 97,0 97,0 96,9 96,5 96,4 96,5 97,7 97,2 99,7 100 100 100 99,7 99,8 99,8 97,9 97,2 97,2 97,2 97,2 97,0 96,7 96,5 96,7 97,9 97,4 99,8 99,9 99,9 99,9 99,8 99,9 100 97,7 97,0 97,0 97,0 97,0 96,9 96,5 96,4 96,5 97,7 97,2 99,8 99,9 99,9 99,9 99,8 99,9 100 97,7 97,0 97,0 97,0 97,0 96,9 96,5 96,4 96,5 97,7 97,2 98,2 98,2 98,2 98,2 98,1 97,4 97,0 97,6 100 99,4 100 100 100 99,8 99,1 98,8 99,3 98,2 97,7 100 100 99,8 99,1 98,8 99,3 98,2 97,7 99 98,9 98,6 99,1 98,1 97,6 99,3 98,6 97,4 96,9 98,9 99,6 98,2 97 97,6 97,0 98,5 98,8 98,8 98,8 98,5 98,8 98,7 98,7 99,9 98,6 98,6 98,6 98,8 98,6 98,5 98,4 98,7 98,3 98,5 98,5 98,5 98,3 98,5 98,5 98,5 99,7 98,4 98,4 98,4 98,5 98,4 98,3 98,2 98,5 99,7 135 96,5 99,4