Báo cáo Thực Hành Sinh Học Tế Bào

MỞ ĐẦU  Lược Sử Ra Đời Và Phát Triểm Của Sinh Học Tế Bào Sử dụng kính hiển vi để nghiêm cứu các vi sinh vật, phát hiện ra tế bào và xây dựng học thuyết tế bào vào những năm 1838 – 1839

TRƯỜNG: CAO ĐẲNG KINH TẾ CÔNG NGHỆ TP HCM

KHOA: CÔNG NGHỆ SINH HỌC

BÁO CÁO

Thực Hành :

SINH HỌC TẾ BÀO

TP.HCM, Tháng 9/2011

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG CAO ĐẲNG KINH TẾ - CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH

KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC

BÁO CÁO

Thực Hành : SINH HỌC TẾ BÀO

GVHD: Thạc sĩ LÊ QUỲNH HOA SVTH: Chung Thuận Nguyên 1021090113

Quách Lê Minh 1021010002 Trần Thị Thùy Dương 1021090036 Phạm Thị Minh 1021090059 Huỳnh Lượm 1021090138

Tp Hồ Chí Minh – 2011

Mục Lục

LỜI CẢM ƠN 5

NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN 6

MỞ ĐẦU 7

Bài 1: Quan Sát Tế Bào 8

I QUAN SÁT TẾ BÀO 8

1 Tế bào ở nhân không điển hình ở tảo lam 8

1.1 Cách làm tiêu bản 8

1.2 Quan sát 8

1.3 Lục lạp trong tế bào lá cây rong xương gà 8

1.3.1 Giới thiệu 8

1.3.2 Cách làm tiêu bản 9

1.4 Sắc lạp và màng bảo vệ của tế bào biểu bì quả ớt chin 9

1.4.1 Giới thiệu 9

1.4.2 Cách làm tiêu bản 10

1.4.3 Quan sát 10

1.2.4 Vô sắc lạp ở tế bào biểu bì là khoai lang 10

1.2.5 Vật thể tích lũy trong không bào 11

1.3 Kết luận và nhận xét 13

BÀI: 2 ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC ION KALI VÀ CANXI LÊN ĐỘ NHỚT CỦA CHẤT NGUYÊN SINH 14

2.1 Đối tượng hóa chất và dụng cụ thí nghiệm 14

2.1.1 Đối tượng 14

2.1.2 Hóa chất 14

2.1.3 Dụng cụ thí nghiệm 14

2.2 Cách tiến hành 14

2.3 kết quả 15

2.4 Kết luận và nhận xét 16

BÀI 3: HIỆN TƯỢNG CO NGUYÊN SINH VÀ PHẢN CO

NGUYÊN SINH 18

3.1Đối tượng, hoá chất và dụng cụ thí nghiệm 18

3.1.1Đối Tượng 18

3.1.2Hoá chất 18

3.1.3Dụng Cụ Thí Nghiệm 18

3.2Cách tiến hành 19

3.3Kết luận 19

BÀI 5: TÍNH THẤM CỦA TẾ BÀO CHẤT SỐNG VÀ CHẾT ĐỐI VỚI DỊCH BÀO 20

5.1Đối tượng, hoá chất và dụng cụ thí nghiệm 20

5.1.1Đối tượng 20

5.1.3Dụng cụ thí nghiệm 20

5.2Cánh tiến hành 20

5.3 Kết Luận 21

BÀI 6: XÁC ĐỊNH ÁP SUẤT THẨM THẤU CỦA TẾ BÀO THỰC VẬT BẰNG PHƯƠNG PHÁP CO NGUYÊN SINH 23

6.1.1 Đối tượng 23

6.1.2 Hóa chất 23

6.1.3 Dụng cụ thí nghiệm 23

6.1.4 Cách tiến hành 23

6.1.5 Kết luận và nhận xét 24

BÀI 7 : XÁC ĐỊNH SỨC HÚT NƯỚC CỦA TẾ BÀO THỰC VẬT BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐƠN GIẢN 27

7.1 ĐỐI TƯỢNG, HÓA CHẤT VÀ DỤNG CỤ THÍ NGHIỆM 27

7.1.1 Đối tượng 27

7.1.2Hóa chất 27

7.1.3Dụng cụ thí nghệm 27

7.2 CÁCH TIẾN HÀNH 27

7.3 KẾT QUẢ 28

7.3.1 KẾT LUẬN VÀ NHẬN XÉT 28

BÀI 8: RÚT SẮC TỐ LÁ VÀ THỰC HIỆN MỘT SỐ PHẢN ỨNG LÝ HÓA CỦA DIỆP LỤC 30

8.1 Đối tượng, hóa chất và dụng cụ thí nghiệm 30

8.1.1 Đối tượng 30

8.1.2 Hóa chất 30

8.1.3 Dụng cụ thí nghiệm 30

8.2 Cách tiến hành 31

8.2.1 Quan sát hiện tượng huỳnh quang 31

8.2.2 Xà phòng hóa diệp lục bằng kiềm 32

8.2.3 Tạo pheophytin và khử lien kết kim loại 32

BÀI 9: TÍNH CHẤT CẢM QUAN CỦA DIỆP LỤC 34

9.1 Đối tượng, hóa chất và dụng cụ thí nghiệm 34

9.1.1 Đối tượng 34

9.1.2 Hóa chất 34

9.1.3 Dụng cụ thí nghiệm 34

9.2 Cách tiến hành 34

9.3 Kết luận và giải thích 35

BÀI 10 : PHÁT HIỆN TINH BỘT VÀ PROTEIN HÌNH THÀNH TRONG QUANG HỢP 37

10.1ĐỐI TƯỢNG, HÓA CHẤT VÀ DỤNG CỤ THÍ NGHIỆM 37

10.1.1Đối tượng 37

10.1.2Hóa chất 37

10.1.3 Dụng cụ thí nghiệm 37

10.2CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH 37

10.2 1Phát hiện tinh bột 37

10.3 KẾT LUẬN VÀ NHẬN XÉT 38

LỜI CẢM ƠN

Lời cảm ơn xin chân thành gửi đến

Ban Giám Hiệu và quý thầy cô trường Cao Đẳng Kinh Tế Công Nghệ

đã tận tình giảng dạy,truyền đạt những kiến thức bồ ích cho chúng em Đặc biệt là cô Lê Quỳnh Hoa đã tạo điều kiện thuận lợi,cho chúng em những ý kiến bổ ích trong bài báo cáo này.

Bài báo cáo khó tránh khỏi những thiếu sót.Kính mong cô đóng góp ý kiến để bài báo cáo được hoàn chỉnh hơn.

Nhóm thực hiện

NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN

MỞ ĐẦU

 Lược Sử Ra Đời Và Phát Triểm Của Sinh Học Tế Bào

Sử dụng kính hiển vi để nghiêm cứu các vi sinh vật, phát hiện ra tế bào và xây dựng học thuyết tế bào vào những năm 1838 – 1839 đã khai sinh ra Tế bào học (Cytology) F.Engels đã từng đánh giá học thuyết tế bào là một trong ba phát

kiến vĩ đại của thế kỷ XIX ( cùng với học thuyết tiến hoá của Darwin và thuyết bảo tồn năng lượng ) Học thuyết tế bào đã gây ảnh hưởng to lớn đối với các

chuyên nghành sinh học và từ đó hình thành các chuyên nghành mới như giải

phẩu hiển vi, sinh lý tế bào, di truyền tế bào, bệnh học tế bào Một dẩn chứng

rõ ràng nhất là các quy luật của Mendel được phát hiện từ năm 1865 nhưng chưa được công nhận vì chưa có cơ sở tế bào Các cơ sở tế bào của quy luật Mendel như cấu trúc nhiễm sắc thể của tế bào, hiện tượng phân bào nguyên nhiễm, phân bào giảm nhiễm, thụ tinh cũng như các tập tính của nhiễm sắc thể qua phân bào

và thụ tinh chỉ được phát hiện sau thời Mendel từ năm 1870 – 1890 Vì vậy vào năm 190o, quy luật Mendel được “ tái phát hiện “ bởi ba nhà nghiêm cứu là

De Vries, Corens, và Tchermark đã được công nhận rộng rãi vì đã có cơ sở tế

bào học của nó

 Sang thế kỷ XX, Tế bào học phát triểm nhanh chóng không chỉ nhờ ứng dụng các phương pháp hiện đại như ly tâm siêu tốc, kính hiển vi điện tử, nuôi cấy tế bào mà còn nhờ sự tích hợp giữa Tế bào học với Di truyền

học, sinh học phân tử, sinh học phát triểm, Miễm dịch học để ra đời các chuyên nghành trung gian như Di truyền tế bào,Tế bào học phân tử, Miển dịch học tế bào mà bản thân Tế bào học trước đây chỉ bó hẹp nghiêm

cứu cấu trúc của tế bào thì nay cũng được mở rộng nghiên cứu các lĩnh

vực sinh lý, di truyền, tiến hoá và đi sâu vào cơ chế phân tử của tế bào,

của các cấu trúc tế bào và được gọi là sinh học tế bào( cell Biologer)

Bài 1: Quan Sát Tế Bào

I QUAN SÁT TẾ BÀO

1 Tế bào ở nhân không điển hình ở tảo lam

1.1 Cách làm tiêu bản

- Lấy một vài sợi tảo lam, để lên lame, nhỏ lên trên các sợi tảo một giọt nước,

đậy lame lên, quan sát

1.2 Quan sát

- Ở vật kính 10x, chọn trên tiêu bản đám nào thưa thớt đưa vào vi trường rồichuyển sang vật kính 40x Quan sát một sợi tảo có màu xanh, gồm nhiều đốt,mỗi đốt là một tế bào Trong tế bào, các chất trong bào tương phân tán xungquanh tế bào, màu xanh sẫm, giữa tế bào có một vùng sáng đó là vùng nhân chưađiển hình Cuối cùng xem sợi tảo dưới vật kính 100x (sử dụng dầu soi kinh hiểnvi)

- Tảo lam trong điều kiện đang hoạt động có cử động uốn lượn hình sin

1.3 Lục lạp trong tế bào lá cây rong xương gà

1.3.1 Giới thiệu

- Loại không có màu gọi là vô sắc lạp, loại có màu gọi là sắc lạp và lục lạp.Các lạp thể này có nguồn gốc chung và có thể biến đổi từ dạng này sang dạngkhác Chẳng hạn khi lục lạp biến thành sắc lạp cho hợp với ánh sáng yếu thì láxanh biến thành lá đỏ hay lá vàng Còn vô sắc lạp thì khi tích lũy diệp lục có thểbiến đổi thành lục lục lạp và cũng có thể trở thành sắc lạp

- Lục lạp là cơ quan khởi nguyên tổng hợp nên Cacbonhydrat trong tế bào thựcvật Chúng có mặt trong các lá cây xanh Ở tảo, lục lạp có nhiều dạng gọi là sắcthể, cũng có chức năng tổng hợp và tích lũy tinh bột

- Dưới kính hiển vi quang học, lục lạp có dạng hình cầu hoặc hình bầu dục,màu lục sáng, kích thước vài Micromet Bên trong lục lạp chứa chất nền và cáchạt nhỏ bắt màu thẩm hơn Phía ngoài là hai lớp màng mỏng.

1.3.2 Cách làm tiêu bản

Ngắt lấy một đoạn lá ở phần ngoài của chồi rong, đặt lên phiến kính, nhỏ vàomột giọt nước, đậy lamen, đưa ra quan sát

Chú ý: Trước đó lá rong được ngâm trong nước ấm từ 370 – 400, hoặc để trong

chậu có ánh nắng, hoặc có thể nhỏ một vài giọt ancol để kích động sự vậnchuyển của mọi chất của tế bào và hạt diệp lục

1.3.2 Quan sát

- Quan sát ở vật kính 10x và 40x

- Ở vật kính 10x, di chuyển tiêu bản để quan sát những tế bào ở vùng mép của

lá rong, vì ở mép lá rong số ít hơn nên thưa hơn ở phía trong của lá (có khoảng 1– 2 lớp), hơn nữa tế bào trong hơn, dễ nhìn hơn

- Sau khi đã nhỉn thấy ở vật kính 10x, chuyển sang quan sát ở vật kính 40x Tếbào có dạng hình chữ nhật, xếp hang như những viên gạch, trong bào tương của

tế bào chứa các hạt lục lạp hình tròn hay hình bầu dục sáng màu

- Quan sát kỹ sẽ thấy ở một số đám tế bào có sự chuyển động của các lục lạp

Sự chuyển động này là chuyển động thụ động theo dòng nội chất của tế bào Cáclục lạp đi chuyển men theo màng tế bào và đi theo một đường vòng hoặc đi rồichuyển trở lại

1.4 Sắc lạp và màng bảo vệ của tế bào biểu bì quả ớt chin

1.4.1 Giới thiệu

- Sắc lạp không có chứa diệp lục mà chứa các chất màu khác như màu vàng đỏ,

da cam và thường gặp là chất màu đỏ vàng Caroteoit Có thể thấy các sắc lạp lớntrong tế bào biểu bì quả ớt chin, trong cánh hoa hồng, trong củ cà rốt v.v…

- Sắc lạp được tạo thành từ tiền lạp thể hoặc từ lục lạp Nếu từ tiền lạp thể thìchất màu kết tinh trong tiền lạp thể và làm biến dạng nó Thường các tinh thểCarotenoide hình kim làm rách màng của sắc lạp và hình chóp tinh thể nhô hẳnvào trong bào tương của tế bào Nếu như phát sinh từ lục lạp thì trong lục lạpCarotenoit tích lũy dần, các hạt nhỏ tiêu biến đi, các thể hình thoi hay hình liềm

được tạo thành từ hệ thống bán mỏng Đôi khi Carptenoit ở dạng hòa tan trongcác giọt dầu Sắc lạp chứa các Vitamin A,D và các kim loại Fe, Cu, Mn,Zn.

- Về chức năng, sắc lạp tổng hợp Gluxit nhưng sử dụng ánh sáng mà lục lạpkhông dùng hoặc là ánh sáng sau khi đã xuyên qua các tầng nước bề mặt biểnhoặc tầng mây khí quyển những mùa nắng yếu

1.4.2 Cách làm tiêu bản

- Lấy dao hoặc lưỡi dao lam cắt một mảnh vỏ quả ớt chín thật mỏng (loại ớt quảto) Dùng dao cạo bỏ phần thịt của vỏ quả, giữ lại phần biểu bì, đặt lên phiếnkính, nhỏ lên một giọt glycerin, đậy lá kính và quan sát

1.4.3 Quan sát

- Quan sát ở vật kính 10x và 40x, nếu được sử dụng vật kính 100x để xem

- Quan sát ở vật kính 10x phía mép của lá cắt biểu bì vỏ quả ớt (chỗ lát cắtmỏng), sau đó chuyển sang vật kính 40x để quan sát Các tế bào biểu bì quả ớtchín có hình đa giác, nhưng thường là sáu cạnh Trong bào tương có các hạt sắclạp hình thoi màu đỏ da cam, màng tế bào biểu bì quả ớt là một mảng dày, nhữngrãnh này gọi là rãnh liên bào

- Muốn nhìn rõ rãnh liên bào phải nhấp nháy ốc vi cấp và hạ hộp tụ quangxuống một chút ( hoặc giảm ánh sáng một chút)

1.2.4 Vô sắc lạp ở tế bào biểu bì là khoai lang

ở nguyên sinh động vật và tế bào gan Ở một số tế bào động vật khác, trong một

số điều kiện đặc biệt như lúc đói, lúc các quá trình trao đổi nước, muối , bị rốiloạn cũng thấy xuất hiện không bào

Không bào có hình đa dạng: Hình cầu, mạng lưới, tổ sâu… Ở một số tế bào thựcvật già, không bào chiếm gần hết tế bào, bào trương chỉ còn một lớp mỏng nằmgiáp một phía của màng tế bào

Không bào tham gia quá trình trao đổi nước nhờ áp suất thẩm thấu Thành phần

và nồng độ các chất hòa tan trong dung dịch không bào quyết định áp suất thẩmthấu của tế bào thực vật

Còn làm nhiệm vụ tích lũy nhiều chất dự trữ như Cacbonhydrat, protid và một sốsản phẩm của tế bào

Các không bào hình thành tử ẩm thực bào hay hình thành đế bao bọc các thànhphần không còn hoạt động sống trong bào tương nữa, gọi là không bào tiêu hóahay không bào tự tiêu.

Cách làm tiêu bản

Vỏ hành khô bóc ở củ hành, lấy phần vảy màu nâu bóng, chon vảy mỏng

và trong, cắt ra từng mảnh nhỏ cở 0.5cm* 0.5cm, cho vào ống nghiệm, đun sôivới glycerin 20% trong 5-10 phút bằng ngọn lửa đèn cồn, sau đó lấy ra làm tiêubản với glycerin đặc

Quan sát

Quan sát vật kính 10x và 40x

Các tế bào vỏ củ hành khô hình đa diện, trong phần bào tương và khôngbào (đã teo khô) có các tinh thể oxalate canxi hình que hoặc hình chữ nhật dàinhỏ, nằm riêng lẻ hoặc chồng lên nhau Những tinh thể này lúc nhỏ nằm trongkhông bào, tích lũy trong bào tương của tế bào Sau đó khi tế bào lớn lên thì tinhthể này quá lớn, phá vở không bào tích lũy chúng, trở thành những thể vùi trong

tế bào

1.2.6 Hạt tinh bột dự trữ trong tế bào củ khoai tây

Giới thiệu

Dưới kình hiển vi, các hạt tinh bột là những tinh thể vùi chiết quang mạnh

và có nhiều lớp Sự tăng lượng tinh bột trong hat không lien tục nên hạt thường

có cấu tạo thành từng lớp và trung tâm tinh thể thường bị chuyển dịch Lúc hạttinh bột càng lớn, màng ngoài căng dần và có thể bị vỡ

Cách làm tiêu bản

Cắt củ khoai tây thành nhiều mảnh, chọn một mảnh, cạo lấy tinh bột ở mặt lát cắtcủa mảnh khoai tây đã chọn phết lên lam Nhỏ một giọt iode 5%0 vào, đậylamen

Quan sát

Quan sát ở vật kính 10x và 40x

Những hạt tinh bột màu tím nhạt hoặc màu xanh tím, có hình bầu dục, hình tròn,

to nhỏ không đều nhau Tâm của hạt tinh bột lệch về một phía Hạ hộp tụ quang

và điều chỉnh ốc vi cấp để quan sát vật kính 40x sẽ nhìn thấy các vòng khôngđồng đều của quá trình thành hạt tinh bột

1.3 Kết luận và nhận xét

Sử dụng dầu soi kính hiển vi khi dung ở vật kính x100:

Đó là loại dầu đặc biệt mà người ta dùng trong trường hợp phải dùng "vậtkính dầu" Cụ thể thì nó là thế này:

Bình thường thì độ phóng đại của kính hiển vi sẽ bằng tích số giữa độphóng đại của vật kính và độ phóng đại của thị kính Khi chúng ta cần quan sátđến độ phóng đại lớn nhất của kính hiển vi thì lúc này cần một môi trường trongsuốt giữa vật kính và mẫu soi thì mới có thể quan sát được

Bình thường không khí cũng không có màu gì hết nhưng dù sao giữakhông khí và thủy tinh ở đầu vật kinh cũng là 2 loại môi trường khác xa nhaunên dễ dẫn đến việc khúc xạ ánh sáng đẫn đến khó quan sát

Trong trường hợp này người ta phải nhỏ một giọt dầu soi kính vào chỗmẫu soi và giọt dầu này chính là chất lỏng kết nối vật kính tới mẫu soi, hạn chếkhúc xạ ánh sáng nên việc soi mẫu sẽ dễ dàng hơn

Hình ảnh các tế bào

BÀI: 2 ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC ION KALI VÀ CANXI LÊN ĐỘ NHỚT

CỦA CHẤT NGUYÊN SINH

2.1 Đối tượng hóa chất và dụng cụ thí nghiệm

 Lưỡi dao la 2cái

 Kim mũi mác 1 cái

 Kính hiển vi 1 cái

 Lamevà lamelle 4 cặp

2.2 Cách tiến hành

 Lấy 4 mẫu lớp tế bào hành cùng vị trí lấy trên một củ hành

 Cho lên một lam kính thứ nhất một giọt NaCl

 Cho lên một lam kính thứ hai một giọt CaCl2

 Đánh dấu ký hiệu cho mỗi lam kính

 Cho vào mỗi dung dịch một mảnh hành đỏ rất mỏng, đậy lamelle lại

 Để tránh bị khô thỉnh thoảng nhỏ them một giọt tương ứng

 Ghi thời gian cho mảnh hành vào dung dịch và quan sát dưới kính hiển vi.Ghi lại thời gian bắt đầu co nguyên sinh ( Không tính dãy tế bào ngoàicùng, vì có thể lúc cắt chúng đã bị tổn thương)

 Làm 2 mẫu còn lại tương tự như trên.

Lưu ý: - Không nhỏ NaCl và CaCl2 lên cùng một mẫu

- Ion K+ và ion Ca2+ nhỏ lên mẫu phải cùng thời gian

- Để một thời gian nếu muốn xem lại thì nhỏ lại vài giọt dung dịchtương ứng lên mẫu

- Ion K+ và ion Ca2+ nhỏ lên mẫu phải cùng thời gian

Thời gian co nguyên sinh

2.4 Kết luận và nhận xét

Mẫu 1: Quá trình co nguyên sinh xảy ra nhanh hơn mẫu 2

Các ion của mối khoáng có mặt trong môi trường ảnh hưởng lên hệ keo của chấtnguyên sinh, có thể thay đổi độ nhớt chất nguyên sinh

* Các ion hóa trị một như Na + , K + , …

Làm giảm độ nhớt và tăng hoạt động sinh lí

Mẫu chứa ion hóa trị I có độ nhớt thấp, tế bào chất dễ tách khỏi thành tếbào

Vì thế thời gian co nguyên sinh xảy ra càng nhanh

+ Natri làm tăng độ ưa nước và khả năng ngậm nước của keo chấtnguyên sinh do đó ảnh hưởng thuận lợi với quá trình trao đổi nước, và bảo đảmtrạng thái trẻ lâu về sinh lý của mô (cường độ quá trình tổng hợp chiếm ưu thế

so với các quá trình phân hủy)

*Các ion có hóa trị cao như Ca 2+ , Al 3+ , Mg 2+ …

Làm đặc co nguyên sinh và tăng độ nhớt, làm giảm hoạt động sống

Mẫu chứa ion hóa trị II, III, … độ nhớt của tế bào lớn, tế bào chất tách khỏithành tế bào một cách khó khăn Nên thời gian co nguyên sinh lõm sâu hơn

+ Canxi ảnh hưởng đến tính thấm của màng, sự vận động của tế bào chất, hoạtđộng của enzim, phân bào và nhiều quá trình khác

Hình: Co nguyên sinh lồi

Hình: Co nguyên sinh lõm