Đánh giá tác dụng giảm đau của sản phẩm cao sản xuất từ Dây Khai (Coptosapelta Flavescens Korth., Rubiaceae)

NTTU-NCKH-04 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TƠNG KẾT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2019 - 2020 Tên đề tài: ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA SẢN PHÁM CAO SẢN XUẤT TÙ DÂY KHAI (COPTOSAPELTA FLA VESCENS KORTH., RUBIACEAE) Số hợp đồng: 2020.01.093 Chủ nhiệm đề tài: HOÀNG THỊ PHƯƠNG LIÊN Đơn vị công tác: KHOA DƯỢC - TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYÊN TẤT THÀNH Thời gian thực hiện: Tháng 3/2020 - tháng 11/2020 TP Hồ Chỉ Minh, ngày 27 thảng 11 năm 2020 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA SẢN PHẤM CAO SẢN XUẤT TÙ DÂY KHAI (COPTOSAPELTA FLAVESCENS KORTH., RUBIACEAE) Mục tiêu: Sản phẩm cao sản xuất từ Dây khai (Cao Khai) sử dụng dân gian để điều trị đau khóp, sưng viêm Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu tác dụng giảm đau dược liệu Vì vậy, nghiên cứu thực nhằm khảo sát tác động giảm đau Cao Khai, góp phần sử dụng dược liệu hiệu quả, an tồn Phương pháp nghiên cứu: Thử nghiệm giảm đau ngoại biên sử dụng mơ hình gây đau quặn bang acid acetic chuột nhắt trắng Sau dùng thuốc 60 phút, tất chuột gây đau cách tiêm phúc mô dung dịch acid acetic 1% Đem số lần đau quặn thời gian đau quặn chuột mồi phút vòng 40 phút sau gây đau Thuốc đối chứng thử nghiệm giảm đau ngoại biên diclofenac mg/kg Thử nghiệm giảm đau trung ương sử dụng mơ hình gây đau phương pháp nhúng chuột Nhúng chuột vào nước nóng 52 ± 0,5°C Tiềm thời giật tính từ lúc nhúng tới lúc chuột giật mạnh đuôi lên Lựa chọn chuột có tiềm thời giật giây vào thử nghiệm Tiếp tục ghi nhận tiềm thời giật đuôi thời điếm: 60, 90, 120, 150 phút sau dùng thuốc Thuốc đối chứng morphin, liều mg/kg Ket quả: Trong thử nghiệm giảm đau ngoại biên, có khác biệt có ý nghĩa thong kê lô uống Cao Khai 800 mg/kg số lần đau (0 - 30 phút) thời gian đau (0 - 35 phút) so với lô chứng bệnh(p < 0,05) số lần đau quặn thời gian đau quặn so sánh lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng dương, lô Cao Khai 400 m/kg so với lơ chứng bệnh khác biệt khơng có ý nghía thống kê (p < 0,05) Trong thử nghiệm giảm đau trung ương, có tiềm thời giật lô Cao Khai 800 mg/kg thời điếm 150 phút khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh Như vậy, Cao Khai với liều 800 mg/kg the tác động giảm đau ngoại biên mơ hình gây đau bang acid acetic thể tác động giảm đau trung ương yếu mơ hình nhúng đuôi chuột Cao Khai chưa hiệu giảm đau với liều 400 mg/kg Từ khóa: Acid acetic, giảm đau ngoại biên, giảm đau trung ương, Cao Khai, Coptosapelta flavescens MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỪ VIẾT TẮT iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH V MỞ ĐẦU .1 CHUƠNG 1.1 TÓNG QUAN TÀI LIỆU Tổng quan Dây khai 1.1.1 Danh pháp 1.1.2 VỊ trí bảng phân loại thực vật 1.1.3 Mơ tả hình thái 1.1.4 Phân bố 1.1.5 Bộ phận dùng 1.1.6 Thành phần hóa học 1.1.7 Tác dụng dược lý 1.1.8 ứng dụng Y học cổ truyền 1.2 Đại cương đau 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Phân loại 1.2.3 Sinh lý cảm giác đau 1.2.4 Ngưỡng đau 1.2.5 Cơ chế tác dụng thuốc giảm đau 1.2.6 Các nhóm thuốc giảm đau 1.2.7 Các mơ hình khảo sát tác dụng giảm đau 10 CHUƠNG 2.1 NỘI DUNG VÀ PHUƠNG pháp nghiên cửu 14 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.1 Thú vật thử nghiệm 14 2.1.2 Đối tượng thử nghiệm 14 2.1.3 Hóa chất, thiết bị 14 2.2 Phương pháp nghiên cứu 15 2.2.1 Khảo sát tác động giảm đau ngoại biên phương pháp gây đau quặn acid acetic 15 2.2.2 Khảo sát tác động giảm đau trung ương phương pháp nhúng đuôi chuột 17 2.2.3 Xử lý số liệu phân tích thống kê .19 CHƯƠNG 3.1 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 20 Khảo sát tác động giảm đau ngoại biên mơ hình gây đau quặn bang acid acetic 20 3.1.1 Khảo sát mơ hình gây đau quặn bang acid acetic 20 3.1.2 Khảo sát tác dụng giảm đau ngoại biên Cao Khai liều 400 mg/kg 23 3.1.3 Khảo sát tác dụng giảm đau ngoại biên Cao Khai liều 800 mg/kg 24 3.2 Khảo sát tác động giảm đau trung ương mơ hình nhúng chuột 27 3.2.1 Lựa chọn chuột vào thử nghiệm 27 3.2.2 Khảo sát mơ hình gây đau phươngpháp nhúng đuôi chuột 27 3.2.3 Khảo sát tác dụng giảm đau trung ương Cao Khai 28 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 30 4.1 Kết luận 30 4.2 Đe nghị 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO 32 11 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt GC-MS HEK-293 IASP NF-kB NSAIDs SSRI Nghĩa tiếng Anh Gas Nghĩa tiếng Việt Chromatography-Mass Phuong pháp sac ký khí - khối phố Spectrometry Human Embryonic Kidney 293 cells Te bào thận bào thai người 293 International Association for the Hiệp hội quốc te nghiên cứu Study of Pain đau Nuclear factor-KB Yeu to nhân kappa B Non-steroidal anti-inflammatory Nhóm thuốc kháng viêm khơng steroid drugs Selective serotonin reuptake Nhóm thuốc ức chế tái thu hồi inhibitors TCA Tricyclic antidepressants TNF-a Tumor necrosis factor-a serotonin chọn lọc Nhóm thuốc chống trầm cảm ba vịng Yeu tố hoại tử u - alpha iiỉ DANH MỤC • BẢNG Bảng 3.1 Số lần đau quặn lô chuột thử nghiệm giảm đau ngoại biên (lần) 20 Bảng 3.2 Thời gian đau quặn lô chuột thử nghiệm giảm đau ngoại biên (giây) 21 Bảng 3.3 Tỷ lệ giảm số lần đau quặn lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng bệnh 25 Bảng 3.4 Tỷ lệ giảm thòi gian đau quặn lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng bệnh 26 Bảng 3.5 Tiềm thời giật đuôi lô chuột thử nghiệm nhúng đuôi (giây) 27 IV DANH MỤC HÌNH • Hình 1.1 Hình thái Dây khai tự nhiên Hình 2.1 Cao Khai bột Cao Khai 14 Hình 2.2 Biếu chuột đau quặn thử nghiệm khảo sát tác động giảm đau ngoại biên 16 Hình 2.3 Quy trình thực khảo sát tác động giảm đau ngoại biên Cao Khai 17 Hình 2.4 Biểu giật đuôi chuột thử nghiệm giảm đau trung ương 18 Hình 2.5 Quy trình thực khảo sát tác động giảm đau trung ương Cao Khai 19 Hình 3.1 Số lần đau quặn chuột lô chứng bệnh lô chứng dương 21 Hình 3.2 Thời gian đau quặn chuột lô chửng bệnh lô chứng dương 22 Hình 3.3 Số lần đau quặn chuột lô Cao Khai 400 mg/kg 23 Hình 3.4 Thời gian đau quặn chuột lô Cao Khai 400 mg/kg 24 Hình 3.5 Số lần đau quặn chuột lô Cao Khai 800 mg/kg 25 Hình 3.6 Thời gian đau quặn chuột lô Cao Khai 800 mg/kg 26 Hình 3.7 Tiềm thời giật lơ chứng bệnh lơ chứng dương 28 Hình 3.8 Tiềm thời giật đuôi lô chuột thử nghiệm 29 V TÓM TÁT KÉT QUẢ NGHIÊN cứu STT Ket đạt Công việc thực Tong quan đề tài - đề cương thông qua Thu thập tài liệu hội đồng Khảo sát tác động giảm đau ngoại Bảng số liệu kết tác động giảm đau biên sản phâm cao sản xuât từ ngoại biên sản phẩm cao sản xuất từ Dây khai mơ hình gây đau quặn Dây khai mơ hình gây đau quặn bang acid acetic bang acid acetic Khảo sát tác động giảm đau trung Bảng số liệu kết tác động giảm đau ương sản phẩm cao sản xuất từ trung ương sản phẩm cao sản xuất từ Dây khai mơ hình nhúng Dây khai mơ hình nhúng chuột chuột STT 01 báo đăng Tạp chí Khoa học Tổng hợp số liệu, hồn thành báo Cơng nghệ trường Đại học Nguyễn Tất cáo Thành Sản phẩm đăng ký Sản phẩm đạt Ket tác động giảm đau ngoại Ket tác động giảm đau ngoại biên biên mô hình gây đau quặn mơ hình gây đau quặn bang acid acetic bang acid acetic Ket tác động giảm đau trung Ket tác động giảm đau trung ương ương mơ hình nhúng chuột mơ hình nhúng chuột 01 báo đăng Tạp chí Khoa học Cơng nghệ trường Đại học Nguyễn Tất Thành Bài báo khoa học Thời gian thực hiện: Tháng 3/2020 - tháng 11/2020 Thời gian nộp báo cáo: tháng 11/2020 VI MỞ ĐÀU Đau cảm nhận khó chịu cảm giác cảm xúc, thường liên quan đến tổn thương mơ, bệnh nhân cảm nhận Thông thường, đau dấu hiệu triệu chứng Với phát triển ngành y học giới, nhiều thuốc tìm sử dụng rộng rãi với mục đích giảm đau, paracetamol, nhóm thuốc NSAIDs, opioids Tuy nhiên, bên cạnh tác dụng điều trị, nhóm thuốc thường gây nhiều tác dụng không mong muốn như: dung nạp thuốc, lệ thuộc thuốc, loét dày, độc gan, rối loạn đông máu [4], [6] Ngày nay, xu hướng sâu vào nghiên cứu, tìm kiếm họp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học cao xác minh kinh nghiệm y học cổ truyền thu hút nhiều quan tâm giới chun mơn Nhiều cơng trình nghiên cứu nhằm xác định nhóm chất có thực vật công dụng thuốc cổ truyền, dân gian thực Dây khai dược liệu thường sử dụng dân gian với nhiều mục đích khác nhau, đặc biệt để điều trị đau, thấp khóp [8], [9], [10] Các sản phẩm cao sản xuất từ Dây khai sử dụng với tên gọi “Cao Khai” Hiện nay, Việt Nam giới có số nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý cùa Dây khai Các nghiên cứu phân lập số cấu trúc saponin anthraquinon Nhiều nghiên cứu thực khảo sát tác dụng trị ký sinh trùng [18], kháng viêm [5], [17], hạ huyết áp [16] Dây khai, góp phần chứng minh hiệu điều trị dược liệu theo kinh nghiệm dân gian Tuy nhiên, chưa có kết nghiên cứu tác dụng giảm đau sản phâm cao sản xuất từ Dây Khai Nhằm góp phần sử dụng dược liệu cách hiệu quả, tiến hành đề tài “Đánh giá tác dụng giảm đau sản phẩm cao sản xuất từ Dây khai (Coptosapelta flavescens Korth., Rubiaceae)” với mục tiêu cụ thể: • Khảo sát tác dụng giảm đau ngoại biên sản phẩm cao sản xuất từ Dây khai • Khảo sát tác dụng giảm đau trung ương sản phẩm cao sản xuất từ Dây khai CHƯƠNG 1.1 TÔNG QUAN TÀI LIỆU Tổng quan Dây khai 1.1.1 Danh pháp Tên khoa học: Coptosapelta flavescens Korth., họ Cà phê (Rubiaceae) Tên đồng danh : Coptosapelta tomentosa (Blume) Vahl ex Heyne var dongnaiensis (Pit.) Phamh, Coptosapelta flavescens var dongnaiensis Pierre ex Pit Tên Việt Nam : Dây khai, Vàng hoan, Dây cổ rùa, Dây họng trâu 1.1.2 VỊ trí bảng phân loại thực vật Giới: Thực vật (Plante) Ngành: Ngọc lan (Magnoliophyta) Lóp: Hai mầm (Magnoliopsida) Bộ: Long đởm (Gentianales) Họ: Cà phê (Rubiaceae) Chi: Coptosapelta Lồi: Coptosapelta flavescens Korth 1.1.3 Mơ tả hình thái Dây khai có dạng dây leo gồ, dài 5-7m Rễ chặt có mùi khai nồng, khó chịu nên có người cịn gọi Rễ khai [8] Dây leo dài 5-1 Om, cành tròn màu xám có lơng mịn, sau chuyển sang màu nâu sầm, nhằn bóng Lá mọc đối, ngun hình trái xoan thn, dài 4-9cm, rộng 3-6cm, gốc trịn, chóp nhọn có lơng gân mặt dưới, kèm rụng sớm Cụm hoa ngọn, hình xim dài 6-8cm, có lơng; hoa màu vàng tươi, mùi thơm hắc Lá đài hình trái xoan, ống đài dài mm, hình trứng Cánh hoa 5, dài Imm, rộng 2mm, hình dải, tù nhẵn; ống tràng dài mm có long nhung Nhị 5, dài 12mm, đính họng, nhị mảnh, dài l,5mm; bao phấn hình dải, có mũi nhọn gốc, nhọn đầu, có lơng mềm lưng Bầu có ơ; vịi dài 9mm, mảnh; đầu nhụy dài 8mm, phồng, dạng thoi; noãn nhiều; giá noãn có thùy Quả nang có núm nhọn đầu, nhằn, chia 2-3 mảnh, chứa nhiều hạt có cánh Hoa tháng 9- 12, tháng - [8] TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y tế (2015), Hướng dẫn thử nghiệm phi lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu, tr 9-20 Đồ Trung Đàm (2017), Phương pháp xác định độc tính thuốc, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr.15-189 Đồ Trung Đàm (2017), Thuốc giảm đau chống viêm phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr 17-426 Mai Tất Tố, Vũ Thị Trâm (2012), Dược lý học tập 1, Nhà xuất Y học, Hà Nội Nguyền Thướng, Trần Hùng (2002), "Bước đầu nghiên cứu mặt dược liệu học Dây khai (Coptosapelta tomentosa var dongnaiense)", Tạp chí dược học, 7, tr.8 - 11 Trần Thị Thu Hằng (2017), Dược lực học, Nhà xuất Phương Đơng, Hồ Chí Minh Trần Thị Vân Anh, Trần Hùng, (2010), "Nghiên cứu thành phần hóa học Dây Khai (Coptosapelta tomentosà) theo định hướng tác dụng kháng viêm", Tạp Y học Thành phố Hồ Chỉ Minh, 14(1) Viện Dược Liệu (2003), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập I, Nhà xuất bán Khoa học kỹ thuật, tr 645 - 646 VÕ Văn Chi, (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất YHọc, tr 383 10 Võ Văn Minh, Phạm Thị Kim Thoa, Nguyễn Thị Kim, (2014), "Cây thuốc người Hre đề xuất số giải pháp bảo tồn, phát triến huyện Ba Tơ, tỉnh Quảng Ngãi", Tạp Khoa học Lâm nghiệp, sô 1, tr.3206 - 3215 Tiếng Anh 11 Daniel Le Bars, Manuela Gozariu, Samuel w Cadden (2001), "Animal Models of Nociception", Pharmacological Reviews, 53(4), pp 597-652 12 Fitriyana (2018), "Identification of Active Compounds in the Root of Merung (Coptosapelta tomentosa Valeton K Heyne", IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 144 13 Hounkong K., et al., (2015), "Mechanisms of l-hydroxy-2- hydroxymethylanthraquinone from Coptosapelta flavescens as an anti-giardial activity", Acta Tropica, 146, pp 11-16 32 14 K w Line (2005) "Ethnobotanical study of medicinal plants used by the Jah Hut peoples in Malaysia Indian" J Med Sci, 59(4), 156 - 161] 15 Katherine E Hanlon, et al, Chapter One - Constitutive Activity at the Cannabinoid CB1 Receptor and Behavioral Responses, Methods in Enzymology, Academic Press, Volume 484, 2010,pp.3-30 16 Kosala K et al (2017), "In vitro Exploration of Vasodilation Activity of the Methanol Extract of the Coptosapelta flavescens Korth stem", Journal of Islamic Medicine Research 1, pp 10-14 17 Kosala K et al (2018), "In vitro and In vivo Anti-inflammatory Activities of Coptosapelta flavescens Korth Root’s Methanol Extract", Journal of Applied Pharmaceutical Science 8, pp 42 - 48 18 Kruawan Hounkong, et al (2014), "Anti-intestinal protozoan activities of l-hydroxy-2- hydroxymethylanthraquinone from Coptosapelta flavescens”, Asian Pacific Journal of Tropical Disease, 4(6), pp 457 - 462 19 Nursanti, Novriyanti, Dan Cory Wulan (2018) "Various Types of Potential Drug Plants in Muhammad Sabki Urban Forest Jambi City" Media Konservasi, 23(2), 169-177 20 Oscar Herrera-Calderon,et al, "Phytochemical screening, antioxidant activity and analgesic effect of Waltheria ovata Cav roots in mice”, Asian Pacific Journal of Tropical Disease, 6(12), pp 1000-1003 21 Raja SN, et al, (2020), "The revised International Association for the Study of Pain definition of pain: concepts, challenges, and compromises", Pain, 161(9), pp 1976-1982 22 Tran T V A et al (2015), "Screening of Vietnamese medicinal plants for NF-kB signaling inhibitors: assessing the activity of flavonoids from the stem bark of Oroxylum indicum", Journal of ethnopharmacology 159, pp 36-42 23 V Sasikala, s Saravanan, T Parimelazhagan, (2011) "Analgesic and anti-inflammatory activities of Passiflora foetida L.”, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 4(8), pp 600-603 24 Wipapan Kongyen, et al (2014), "Anthraquinone and naphthoquinone derivatives from the roots of Coptosapelta favescens" Natural product communications, 9(2), pp 21922 33 Phụ lục 1: số lần đau chuột thử nghiệm giảm đau ngoại biên khoảng thời gian Lơ chuột CB CD CK400 CK800 Khoảng thịi gian (phút) > 10> 15>20>2515 20 25 30 32 34 25 20 >3035 >3540 4 14 12 17 16 21 16 10 10 10 21 20 20 15 34 24 20 10 16 10 10 22 21 12 17 11 3 3 0 18 16 15 4 3 13 24 22 11 11 14 10 13 4 10 15 13 17 11 18 20 16 10 10 8 17 14 6 3 21 13 21 4 10 25 21 18 13 16 5 11 5 13 38 25 17 16 12 12 11 11 2 7 4 1 11 13 13 5 12 21 17 15 13 10 7 0 0 0 0 20 17 5 0 0 0 0 20 14 12 STT 0-5 28 >510 35 18 26 15 4 22 20 18 16 10 23 PL-1 Phụ lục 2:Thời gian đau chuột thử nghiệm giảm đau ngoại biên khoảng thời gian (giây) Lô chuột CB CD CK400 CK800 28,74 >510 40,78 Khoảng thòi gian (phút) > 10> 15>20>2515 20 25 30 21,08 26,34 24,23 14,92 9,37 66,90 59,12 18,34 7,40 4,50 21,27 26,89 17,39 17,50 11,98 63,50 47,83 71,00 3,47 44,83 40,97 1,73 19,56 21,24 10,96 17,57 >3035 6,03 >3540 2,37 4,29 2,87 0,93 8,37 7,36 49,38 13,16 30,44 11,17 2,94 28,16 12,54 8,44 15,32 0,00 19,30 13,56 3,71 3,36 1,19 0,48 17,24 9,26 15,19 7,45 1,51 49,24 21,33 30,09 13,56 9,20 9,71 7,66 5,55 6,87 20,24 16,89 24,26 6,61 3,52 2,61 0,82 6,96 4,86 1,61 0,72 0,00 0,56 28,09 9,11 10,79 11,62 3,04 5,81 0,67 1,79 0,00 0,00 0,00 6,63 20,26 14,16 4,75 4,24 0,00 3,78 1,46 3,93 2,1 0,94 1,4 1,41 0,14 0,00 1,94 14,54 25,33 23,01 9,07 12,96 3,84 0,87 5,89 9,46 6,78 5,59 6,8 2,56 1,4 1,27 5,67 9,51 8,38 10,59 6,29 4,97 1,32 0,74 17,57 21,91 14,67 7,94 8,57 7,45 6,43 8,18 5,87 13,27 23,74 16,26 12,85 1,82 2,11 2,45 69,00 26,66 22,58 6,65 7,19 6,07 4,72 14,96 70,6 75,5 60,07 56,51 60,03 21,99 1,71 17,32 13,18 24,83 8,63 7,45 8,72 10,46 4,20 2,26 11,54 44,98 67,5 64,6 55,17 11,42 22,69 16,74 2,63 21,07 19,51 13,6 7,14 0,56 0,50 0,92 1,43 8,35 10,54 13,45 4,57 3,15 4,49 0,72 0,00 2,06 6,22 4,44 5,23 3,64 2,92 0,00 0,00 8,02 6,68 4,37 2,91 2,45 2,32 1,73 12,9 26,3 16,36 10,08 5,42 0,00 16,02 17,81 9,12 8,21 2,11 6,48 0,92 9,77 0,66 3,37 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1,54 25,57 16,58 6,3 4,39 5,42 4,00 4,33 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,32 3,82 4,28 2,52 1,66 0,78 0,9 2,39 STT 0-5 PL-2 Phụ lục 3: Tiềm thời giật đuôi chuột thủ’ nghiệm giảm đau trung ương thời điểm khảo sát (giây) Lô chuột CB CD CK400 CK800 Thòi điểm khảo sát (phút) STT 60 90 120 150 0,78 1,10 1,81 1,81 2,15 1,28 2,19 1,75 2,6 2,03 1,19 1,00 2,09 2,25 1,2 1,47 1,62 1,82 1,91 1,56 1,45 1,66 1,97 2,18 1,53 1,63 2,25 2,40 2,72 2,47 1,13 1,16 1,63 1,56 1,53 1,75 1,97 2,34 2,38 2,06 1,81 10,00 4,84 1,16 10,00 10,00 3,9 10,00 2,5 10,00 1,72 1,12 10,00 6,47 10,00 2,37 10,00 1,72 10,00 1,35 10,00 10,00 10,00 10,00 6,41 3,84 1,5 0,72 1,16 5,85 10,00 2,6 10,00 6,10 10,00 3,25 10,00 10,00 10,00 1,46 1,66 1,63 1,41 2,03 1,53 2,78 2,00 2,16 1,12 1,91 1,25 2,18 1,75 2,06 0,69 1,43 1,54 1,56 1,53 1,34 2,22 2,06 3,00 1,88 1,38 1,60 2,53 2,69 2,4 1,32 1,97 2,75 2,56 2,65 1,68 1,78 2,53 3,62 2,69 1,58 2,06 2,62 2,5 2,63 1,28 2,19 1,75 2,6 2,03 0,94 1,94 2,69 1,50 2,15 1,53 2,35 2,19 1,90 2,82 1,20 2,25 2,09 2,25 2,87 0,75 1,00 1,62 1,82 1,82 1,09 2,13 2,35 3,09 2,25 1,28 2,34 2,41 1,81 2,82 PL-3 Phụ lục 4: Các sản phẩm đề tài Phụ lục 4.1 Kết tác động giảm đau ngoại biên mơ hình gây đau quặn acid acetic Khoảng thời gian (phut) Thời gian đau quặn lô chuột thử nghiệm giảm đau ngoại biên (giây) CB CD CK400 CK800 0-5 9,88 ±2,94 3,88 ± 1,30 7,38 ±2,14 3,00* ± 1,7 >5-10 23,88 ± 2,46 12,5* ± 1,54 18,75 ±3,48 11,63** ±3,19 >10-15 21,75 ±2,21 12** ±2,00 14,25 ±2,24 10,63** ±2,43 >15-20 19,00 ±2,34 10,88* ±2,36 11,13 ± 2,26 6,63** ± 1,56 >20-25 11,75 ±2,34 6,5 ± 1,60 7,75 ± 1,67 5,13* ± 1,25 >25-30 10,38 ± 1,96 4,75* ± 1,05 7,00 ± 1,55 4,25* ± 1,03 >30-35 6,13 ± 1,19 1,75** ±0,53 5,25 ± 1,19 3,75 ± 1,00 >35-40 2,63 ± 0,89 1,75 ±0,59 4,38 ± 1,35 2,13 ±0,79 *: p < 0,05 so với lô CB, **: p < 0,01 so với lơ CB Khoảng thịi gian (phut) Thời gian đau quặn lô chuột thử nghiệm giảm đau ngoại biên (giây) CB CD CK400 CK800 0-5 11,04 ±3,12 2,90* ± 0,98 8,70 ±2,25 2,10** ± 1,58 >5-10 40,92 ± 6,68 12,42** ±2,88 34,25 ± 8,63 10,22** ±3,89 >10-15 33,33 ±5,13 12,46** ± 2,73 30,84 ±9,16 8,49** ± 2,62 >15-20 25,70 ± 6,75 11,15* ±3,06 25,74 ±8,17 4,60** ± 1,34 >20-25 16,65 ±5,19 5,46* ± 1,33 20,02 ± 7,86 3,48** ± 1,02 >25-30 12,44 ±3,02 4,52* ± 1,37 13,29 ±6,79 2,61 **±0,86 >30-35 7,51 ± 1,57 1,37** ±0,54 8,36 ±3,12 2,60* ± 1,14 >35-40 2,64 ±0,91 1,16 ±0,49 6,25 ± 2,5 1,56 ±0,59 *: p < 0,05 so với lô CB, **: p < 0,01 so với lô CB PL-4 Phụ lục 4.2 Ket tác động giảm đau trung ương mơ hình nhúng chuột Tiềm thời giật đuôi lô chuột thử nghiệm nhúng đuôi (giây) Lô thử nghiệm phút 60 phút 90 phút 120 phút 150 phút CB 1,34 ±0,11 1,57 ± 0,18 1,95 ±0,11 2,17 ± 0,14 1,91 ±0,12 CD 1,32 ±0,13 8,81** ±0,61 7,63** ±0,94 7,44** ± 1,26 7,10** ± 1,42 CK400 1,32 ±0,11 1,73 ±0,11 2,25 ±0,17 2,32 ± 0,27 2,18 ± 0,14 CK800 1,21 ±0,1 2,03 ±0,16 2,22 ±0,14 2,18 ± 0,19 2,42* ±0,15 *: p < 0,05 so với lô CB, **: p < 0,01 so với lô CB Phụ lục 4.3 Bài báo đăng Tạp chí Khoa học Cơng nghệ - Trường Đại học Nguyễn Tất Thành Phụ lục 5: Thuyết minh đề tài họp đồng thực đề tài NCKH (đã ký) PL-5 Đánh giá tác dụng giảm đau sản phẩm cao sản xuất từ Dây khai (Coptosapelta flavescens Korth., Rubiaceae) Hoàng Thị Phương Liên1’*, Nguyễn Thị Bạch Tuyết1, Đặng Đại Phúc1, Nguyền Thị Mộng Quỳnh1, Nguyễn Thị Minh Xuân', Phạm Trí Nhựt2, Bạch Long Giang2 Khoa Dược, Trường Đại học Nguyền Tất Thành, Tp Hồ Chí Minh Viện Kỹ thuật Công nghệ cao NTT, Trường Đại học Nguyền Tất Thành, Tp Hồ Chí Minh *htplien@ntt.edu.vn Tóm tắt: Sản phấm cao sàn xuất từ Dây khai (Cao Khai) sử dụng dân gian đế giám đau, kháng viêm Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu tác dụng giảm đau cùa dược liệu Vỉ vậy, nghiên cứu thực nham khảo sát tác động giám đau Cao Khai Thữ nghiệm giảm đau ngoại biên sữ dụng mơ hình gây đau quặn acid acetic % tiêm phúc mô chuột nhắt trang, so sánh so lần đau quặn thời gian đau quặn lơ chuột phút vịng 40 phút sau gây đau Thử nghiệm giâm đau trung ương sử dụng mơ hình gây đau bang phương pháp nhúng chuột vào nước nóng 52 ± o,5°c So sánh tiềm thời giật đuôi thời điểm 60, 90, 120, 150 phút sau dùng thuốc Thuốc đối chứng thứ nghiệm diclofenac morphin Ket thống kê cho thấy, Cao Khai 400 mg/kg chưa tác dụng giảm đau ngoại biên giảm đau trung ương (p > 0,05) Cao Khai 800 mg/kg tác động giâm đau ngoại biên thông qua việc làm giảm so lần đau quặn (phút - 30) thời gian đau quặn (phút - 35) trinh khảo sát (p < 0,05) thử nghiệm giảm đau trung ương, Cao Khai 800 mg/kg thể tác động làm tăng tiềm thời cảm nhận đau 150 phút (p < 0,05) Từ khóa Acid acetic, giảm đau ngoại biên, giảm đau trung ương, Cao Khai, Coptosapelta flavescens Đặt vấn đề Dây khai (Coptosapelta flavescens Korth., Rubiaceae) thường sữ dụng dân gian với nhiều mục đích khác nhau, đặc biệt đe giảm đau, trị viêm khớp [1], [2] Nhiều nghiên cứu thực kháo sát thành phần hóa học [3], [4], tác dụng trị ký sinh trùng [5], [6], [7] hạ huyết áp [8], kháng viêm [3], [4], [9] cúa Dây Khai Đe tài thực nhằm đánh giá tác dụng giảm đau cũa sản phẩm cao sàn xuất từ rễ Dây khai (Cao Khai), tạo sờ khoa học cho việc sứ dụng dược liệu an toàn, hiệu quà 2.1 Nội dung phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Động vật thí nghiệm: Chuột nhắt trắng giống Swiss albino từ đen tuần tuổi, giới tính đực, khóe mạnh, khơng dị tật, trọng từ 20 - 25 g cung cấp bời Viện Vaccin Sinh phẩm Y tế Nha Trang Chuột nuôi ổn định ngày trước tiến hành thứ nghiệm Trong trình thữ nghiệm chuột cung cấp đầy đù thức ăn (cám viên) nước uống Đoi tượng thử nghiệm: Cao Khai thu thập từ tinh Ninh Thuận Hóa chất, thiết bị thường quy phịng thí nghiệm 2.2 Phương pháp nghiên cứu Kháo sát tác động giám đau ngoại biên phương pháp gãy đau quặn bang acid acetic Ket quâ nghiên cứu độc tính cấp cho thấy, Cao Khai khơng gây tính cấp cho chuột thí nghiệm liều 5000 mg/kg trọng lượng chuột, nghĩa giá trị LD50 khoảng cao 5000 mg/kg trọng lượng chuột Liều cho tác động dược lý thường khoảng 1/20 tới 1/5 LD50 [10] Do đó, đề tài sứ dụng liều 400 rng/kg 800 mg/kg đế tiển hành thứ nghiệm khảo sát tác dụng giảm đau cùa cao thuốc Chia chuột ngầu nhiên thành lô, mồi lô gồm Lô chứng bệnh (CB): uống nước cất Lô chứng dương (CD): uống diclofenac với liều 5mg/kg [11], [12] Lô thứ nghiệm (CK400): uống Cao Khai với liều 400 mg/kg the trọng chuột Lô thứ nghiệm (CK800): uống Cao Khai với liều 800 mg/kg thể trọng chuột Điều kiện cho uống tiêm 0,1 ml/10g trọng chuột Sau dùng thuốc 60 phút, tất cà chuột gây đau cách tiêm phúc mô dung dịch acid acetic 1% pha nước muôi sinh lý Mồi chuột đặt vào bocal thũy tinh riêng Đem số lần thời gian đau quặn chuột (biếu hiện: toàn thân vươn dài, ườn cong người, cá hai chân sau duỗi ra, hóp bụng) mồi phút vòng 40 phút sau thời điềm tiêm dung dịch acid acetic So sánh số lần đau quặn thời gian đau quặn thời điểm lô [13], [14] Kháo sát tác động giám đau trung ương phương pháp nhúng đuôi chuột Phương pháp ghi nhận tiềm thời cảm nhận đau cùa chuột: Nhúng đuôi chuột vào nước nóng được cài sằn nhiệt độ 52 ± o,5°c Sừ dụng đong hồ bấm giây đế ghi nhận tiềm thời chuột, lúcnhúng đuôi vào nước kết thúc đuôi quầy mạnh khỏi nước Đo lần liên tiếp mồi thời điếm ghi nhận tiềm thời dài Dùng bơng gịn lau khơ chuột sau mồi lần nhúng Neu sau 10 giây chuột phản ứng cần rút chuột khỏi nước nóng đế tránh tốn thương chuột ghi nhận tiềm thời 10 giây [13], [15], Trước thực thi nghiệm, đo tiềm thời càm nhận đau cùa chuột, ghi nhận tiềm thời thời điếm (to) Những chuột có tiềm thời cảm nhận đau khơng giây chia ngầu nhiên thành lô, lô Lô chứng bệnh (CB): uống nước cất Lô chứng dương (CD): uống morphin, liều 5mg/kg trọng lượng chuột [16] Lô thứ nghiệm (CK400): uống Cao Khai với liều 400 mg/kg trọng chuột Lô thừ nghiệm (CK800): uống Cao Khai với liều 800 mg/kg the trọng chuột Điều kiện cho uống 0,1 ml/10g thể trọng chuột Ghi nhận so sánh tiềm thời cám nhận đau lô thời điếm 60, 90, 120, 150 phút sau uống chất thử nghiệm [10], 2.3 Xử lý số liệu phân tích thống kê Ket quà xữ lý phần mem Microsoft Excel phần mềm SPSS 20.0 trinh bày dạng trung binh ± sai số chuẩn cùa giá trị trung bình (Mean ± SEM) Dùng phép kiểm Mann-Whitney phép kiem Kruskal - Wallis đe so sánh khác biệt lô thữ nghiệm Sự khác biệt có ỷ nghĩa thống kê p < 0,05 3.1 KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Khảo sát tác động giảm đau ngoại biên mơ hình gây đau quặn acid acetic Ket so lan đau quặn thừ nghiệm giảm đau ngoại biên Ket quà so lần đau quận lô chuột thử nghiệm mơ hình gây đau quặn bang acid acetic mồi phút the Báng 3.1 hình 3.1 Bàng 3.1 Số lần đau quặn lô chuột thử nghiệm giảm đau ngoại biên (lần) Lô thử nghiệm Khoảng thời gian (phút) 0-5 >5-10 > 10-15 >15-20 CB 9,88 ± 2,94 23,88 ± 2,46 21,75 ±2,21 19,00 ±2,34 CD 3,88 ± 1,30 12,5* ± 1,54 12** ±2,00 10,88* ±2,36 CK400 7,38 ±2,14 18,75 ±3,48 14,25 ±2,24 11,13 ±2,26 CK800 3,00* ± 1,7 11,63** ±3,19 10,63** ±2,43 6,63** ± 1,56 Lô thử nghiệm Khoảng thời gian (phút) >20-25 >25-30 >30-35 >35-40 CB 11,75 ±2,34 10,38 ± 1,96 6,13 ± 1,19 2,63 ± 0,89 CD 6,5 ± 1,60 4,75* ± 1,05 1,75** ±0,53 1,75 ±0,59 CK400 7,75 ± 1,67 7± 1,55 5,25 ± 1,19 4,38 ± 1,35 CK800 5,13* ± 1,25 4,25* ± 1,03 3,75 ± 1,00 *: p < 0,05 so với lô CB, **: p < 0,01 so với lô CB 2,13 ±0,79 □ LỊCB DLỊCD DLỊCK400 E1LƠCK800 *: p < 0,05 so với lô CB, **: p < 0,01 so với lô CB Hình 3.1: So lần đau quặn lơ chuột thử nghiệm giám đau ngoại biên (lần) Tiêm phúc mô acid acetic gây nên đau quặn chuột Các đau bắt đầu xuất vòng phút sau tiêm kéo dài suốt 40 phút thử nhiệm Trong tất cà khoảng thời gian khảo sát, số lan đau quặn cùa lô chứng dương giảm so với lô chứng bệnh Đặc biệt khoảng - 10, 10 - 15, 15 - 20, 25 - 30, 30 - 35 phút, khác biệt đạt ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Số lần đau quặn cùa lô Cao Khai 400 mg/kg so với lô chứng bệnh trong khoảng thời gian khảo sát khác biệt khơng có ỷ nghĩa thống kê (p > 0,05) Vậy, Cao Khai 400 mg/kg chưa hiệu làm giâm số lần đau quặn chuột mơ hình giảm đau ngoại biên Trong tẩt khoáng thời gian khảo sát, số lần đau quặn cùa lô Cao Khai 800 mg/kg giâm so với lô chứng bệnh Đặc biệt 30 phút đầu, khác biệt đạt ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Tý lệ làm giảm số lần đau quặn cùa lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng bệnh thể Bàng 3.2 Bàng 3.2 Tỷ lệ giàm số lần đau quặn cùa lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng bệnh Khoảng thời gian (phút) Lô thử nghiệm 0-5 CK800 69,62% >10-15 >5-10 51,15% 51,31% >20-25 >15-20 65,13% 56,38% >25-30 59,04% >30-35 >35-40 19,05% 38,78% Cao Khai với liều 800 mg/kg dùng đường uống thể tác động giảm số lần đau quặn tất cà khoảng thời gian từ - 30 phút, tỷ lệ làm giâm số lần đau khoáng thời gian dao động từ 51,15% tới 69,62% Sự khác biệt không cỏ ý nghĩa thống kê số lần đau lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng dương (p > 0,05) Như vậy, Cao Khai 800 mg/kg làm giảm so lần đau quặn so với lô chứng bệnh (0 - 30 phút) tác động tương đương với thuốc đối chứng Kết quã thời đau quặn thử nghiệm giám đau ngoại biên Ket thời gian đau quặn lơ chuột thử nghiệm mơ hình gây đau quặn acid acetic mồi phút the Báng 3.3 hình 3.2 Bàng 3.3 Thời gian đau quặn cũa lô chuột thừ nghiệm giâm đau ngoại biên (giây) Khoảng thời gian (phút) Lô thử nghiệm 0-5 >5-10 >10-15 >15-20 CB 11,04 ±3,12 40,92 ± 6,68 33,33 ±5,13 25,70 ±6,75 CD 2,90* ± 0,98 12,42** ±2,88 12,46** ±2,73 11,15* ±3,06 CK400 8,70 ±2,25 34,25 ± 8,63 30,84 ±9,16 25,74 ±8,17 CK800 2,10** ± 1,58 10,22** ±3,89 8,49** ± 2,62 4,60** ± 1,34 Khoảng thòi gian (phút) Lô thử nghiêm >20-25 >25-30 >30-35 >35-40 CB 16,65 ±5,19 12,44 ±3,02 7,51 ± 1,57 2,64 ±0,91 CD 5.46* ± 1,33 4,52* ± 1,37 1,37** ±0,54 1,16 ±0,49 CK400 20,02 ± 7,86 13,29 ±6,79 8,36 ±3,12 6,25 ± 2,5 CK800 3,48** ± 1,02 2,61 **±0,86 2,60* ± 1,14 1,56 ±0,59 *: p < 0,05 so với lô CB, **: p < 0,01 so với lô CB □ LỊCB nLịCD nL0CK400 E3LƠCK800 *: p < 0,05 so với lô CB, **: p < 0,01 so với lô CB Hình 3.2 Thời gian đau quặn cùa lơ chuột thử nghiệm giảm đau ngoại biên (giây) Sau tiêm acid acetic, chuột xuất đau quặn bắt đầu vòng phút sau tiêm kéo dài đến hết thời gian theo dõi Trong toàn khoảng thời gian kháo sát, thời gian đau quặn cũa lô chứng dương giảm so với lô chứng bệnh Đặc biệt khoảng - 10, 10 - 15, 15 - 20, 20 - 25, 25 - 30, 30 - 35 phút, khác biệt đạt ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Thời gian đau quặn cũa lô Cao Khai 400 mg/kg khác biệt ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bệnh (p > 0,05) Vậy, Cao Khai 400 mg/kg chưa the hiệu quã làm giảm thời gian đau quặn chuột mơ hình giám đau ngoại biên Trong tất cà khoáng thời gian khảo sát, thời gian đau quặn cũa lô Cao Khai 800 mg/kg giám so với lô chứng bệnh Đặc biệt 35 phút đau, khác biệt đạt ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Tỳ lệ làm giảm thời gian đau quặn lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng bệnh thê Báng 3.4 Bàng 3.4 Tỳ lệ giảm thời gian đau quặn lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng bệnh Lô thử nghiệm CK800 Khoảng thòi gian (phút) 0-5 80,98% >5-10 75,02% >10-15 74,53% >15-20 82,10% >20-25 79,10% >25-30 79,02% >30-35 65,38% >35-40 40,91% Cao Khai với liều 800 mg/kg dùng đường uống thể tác động giâm thời gian đau quặn tất cà khoáng thời gian từ - 35 phút, tỷ lệ làm giảm thời gian đau đau khoảng thời gian dao động từ 65,38% tới 82,10% Sự khác biệt khơng có ý nghĩa thong kê so thời gian đau quặn lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng dương (p > 0,05) Như vậy, Cao Khai 800 mg/kg làm giàm thời gian đau quặn so với lô chứng bệnh (0 - 35 phút) tác động tương đương với thuốc đối chứng 3.2 Khảo sát tác động giảm đau trung ưig mơ hình nhúng chuột Ket tiềm thời giật đuôi lô chuột thữ nghiệm mơ hình nhúng thời điếm 0, 60, 90, 120, 150 phút thể Bâng 3.5 hình 3.3 Bảng 3.5 Tiềm thời giật cùa lô chuột thừ nghiệm nhúng đuôi (giây) Thời điếm khảo sát (phút) Lô thử nghiệm 60 90 120 150 CB 1,34 ±0,11 1,57 ± 0,18 1,95 ±0,11 2,17 ± 0,14 1,91 ±0,12 CD 1,32 ±0,13 8,81 **±0,61 7,63** ± 0,94 7,44** ± 1,26 7,10** ± 1,42 CK400 1,32 ±0,11 1,73 ±0,11 2,25 ±0,17 2,32 ±0,27 2,18 ± 0,14 CK800 1,21 ±0,1 2,03 ±0,16 2,22 ±0,14 2,18 ± 0,19 2,42* ±0,15 *: p < 0,05 so với lô CB, **: p < 0,01 so với lô CB □ LỎCB ŨLỊCD ŨLỊCK400 E1LƠCK800 *: p < 0,05 so với lô CB, **: p < 0,01 so với lô CB Hình 3.1 Tiềm thời giật lơ chuột thử nghiệm nhúng đuôi (giây) Trước uống thuốc thữ nghiệm (thời điếm 0), chuột chia ngầu nhiên thành lơ, khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê tiềm thời cãm nhận đau lô (p > 0,05) tất cà thời điểm khão sát sau uống thuốc, chuột lơ chứng dương có tiềm thời giật đơi dài rõ rệt so với lô chứng bệnh chúng tỏ morphin thể tác dụng giảm đau chuột (p < 0,01) tất cá thời điếm 60, 90, 120 150 phút sau uống thuốc, tiềm thời giật đuôi lô Cao Khai 400 mg/kg Cao Khai 800 mg/kg dài so với lô chứng bệnh, khác biệt chi có ý nghĩa thống kê với lô Cao Khai 800 mg/kg thời diem 150 phút sau uống thuốc (p < 0,05) Khi so sánh tiềm thời giật đuôi cùa lô Cao Khai 800 mg/kg so với lô chứng dương thời điếm 150 phút sau uống thuốc cho thấy khác biệt có ý nghĩa thống kê (p< 0,01), cho thấy Cao Khai với liều 800 mg/kg có tác dụng giảm đau trung ương thời điểm tác động tương đoi yếu [13] hiệu quà không đạt bàng thuốc đối chứng morphin (p < 0,05) Ket luận Cao Khai với liều 800 mg/kg hiệu quà giảm đau ngoại biên thông qua giảm so lần đau quặn thời gian đau quặn đa so thời điếm khâo sát mơ hình gây đau bang acid acetic Tuy nhiên Cao Khai với liều 400 mg/kg chưa thể hiệu q giàm đau ngoại biên mơ hình Cao Khai liều 800 mg/kg thể hiệu quà giảm đau trung ương yếu thời điểm 150 phút thứ nghiệm nhúng đuôi chuột Cao Khai với liều 400 mg/kg chưa hiệu quà giảm đau trung ương mơ hình Vậy, Cao Khai dược liệu tiềm có the sữ dụng điều trị giảm đau Lời cám ơn: Nghiên cứu tài trợ bời Trường Đại học Nguyễn Tất Thành khuôn khố đề tài mã so 2020.01.93 Chúng xin cảm ơn Trường Đại học Nguyền Tất Thành hỗ trợ thời gian phương tiện vật chát cho nghiên cứu Study on analgesic effect of root extract of Coptosapelta flavescens Korth., Rubiaceae Hoang Thi Phuong Lien1'*, Nguyen Thi Bach Tuyet1, Dang Dai Phuc1, Nguyen Thi Mong Quynh1, Nguyen Thi Minh Xuan1, Pham Tri Nhut2, Bach Long Giang2 Faculty of Pharmacy, Nguyen Tat Thanh University, Ho Chi Minh city NTT Hi-Tech Institude, Nguyen Tat Thanh University, Ho Chi Minh city *htplien@ntt.edu.vn Summary': Cao Khai (the root extract of Coptosapelta flavescens Korth., Rubiaceae) is a traditional remedy in treatment of pain, inflammation In the present study, we investigated the analgesic effect of Cao Khai Peripheral analgesic activity test used acetic acid-induced writhing model in mice by counting the number of writhes and the total time of writhes every minutes in 40 minutes after the injection Central antinociceptive activity was evaluated with the tail-flick method in which the tail is immersed in hot water at 52 ± 0,5°C The latency time were measured at 60, 90, 120 and 150 minutes Diclofenac and morphine were used as a control in these experiments Cao Khai 400 mg/kg has not shown the effect on peripheral analgesic and central analgesic (p> 0.05) Cao Khai 800 mg/kg exhibits peripheral analgesic effect by reducing the number of writhes (min - 30) and the total time of writhes (min - 35) (p