Đánh giá tác dụng của cao chiết ethanol lá cù đề (breynia vitis idaea) trong điều trị bệnh viêm dạ dày trên chuột swiss albino

Bộ CÔNG THƯƠNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TƠNG KÉT ĐỀ TÃI KHOA HỌC KÉT QUẢ THựC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG Tên đê tài: Đánh giá tác dụng cao chiết ethanol cù đề (Breynia vitis-idaeà) điều trị bệnh viêm dày chuột Swiss albino Mã số đề tài: 22/1 SV SHTP01 Chủ nhiệm đề tài: Lê Trúc Tiên Đơn vị thực hiện: Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm Thành phố Hồ Chí Minh, năm 2023 LỜI CÁM ƠN Lời đầu tiên, trước bắt đầu đề tài “Đánh giá tác dụng cao chiết ethanol cù đề (Breynia vitis-idaeà) điều trị bệnh viêm dày chuột Swiss albino” Nhóm chúng em xin bày tỏ kính trọng lịng biết on tới Trường Đại học Công Nghiệp TP Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho bọn em học tập thực nghiên cứu khoa học Chúng em xin gửi lời cảm ơn đến đơn vị Viện Pasteur, Bệnh viện Quân y 175, TP.HCM, Trung Tâm Y Khoa Medic Bệnh viện Hòa Hảo giúp đỡ, tạo điều kiện cho chúng em suốt trình hồn thành đề tài Xin cảm ơn thầy cơ, bạn bè bên cạnh động viên, hỗ trợ hồn thành tốt nhiệm vụ Chúng em cố gắng để hoàn thiện báo cáo nghiên cứu hồn chỉnh chắn khơng tránh khỏi thiếu sót hạn chế Nhóm chúng em mong nhận góp ý, nhận xét từ phía thầy để nhóm hồn thiện tập lần rút kinh nghiệm để nghiên cứu sau đạt hiệu tốt Xin chân thành cảm ơn! PHẦN I THƠNG TIN CHUNG I Thơng tín tổng qt 1.1 Tên đề tài: Đánh giá tác dụng cao chiết ethanol cù đề (Breynia vitis-idaeà) điều trị bệnh viêm dày chuột Swiss albino 1.2 Mã số: 22/1 SV SHTP01 1.3 Danh sách chủ trì, thành viên tham gia thực đề tài Họ tên TT (học hàm, học vị) sv Lê Trúc Tiên sv Phan Thị Tuyết Mai sv Võ Quí Như Đơn vị cơng tác Vai trị thực đề tài Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm Chủ nhiệm đề tài Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm Thư ký đề tài Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm Thành viên 1.4 Đơn vị chủ trì: 1.5 Thời gian thực hiện: 1.5.1 Theo hợp đồng: từ tháng 08 năm 2022 đến tháng 08 năm 2023 1.5.2 Gia hạn (nếu có): đến tháng 02 năm 2024 1.5.3 Thực thực tế: từ tháng 08 năm 2022 đến tháng 09 năm 2023 1.6 Những thay đổi so vói thuyết minh ban đầu (nếu có): - vể phương pháp nghiên cứu: + Ở giai đoạn gây cảm ứng viêm dày: thay đổi liều uống nước cất từ 10 ml thành 40mg/kg Liều gây indomethacin từ 0,45 mg/kg thành 45 mg/kg + Ở giai đoạn điều trị viêm dày: thay đổi liều uống omeprazole từ 0,25 mg/kg thành 20 mg/kg Thay đổi liều EtBV từ 100, 200, 300 mg/kg thành 200, 300, 400 mg/kg - kết nghiên cứu: thêm tiêu sàng lọc hóa thực vật EtBV, kháng oxy hóa, cytokine, bỏ tiêu khối lượng quan tương đối, khối lượng thể 1.7 Tổng kinh phí phê duyệt đề tài: 10 triệu đồng II Két nghiên cứu Đặt vấn đề Viêm dày tình trạng viêm niêm mạc dày, thường nhiễm trùng vi khuẩn Helicobacter pylori sử dụng loại thuốc giảm đau chống viêm Bệnh viêm dày phổ biến phụ nữ từ 45-64 tuổi nam giới 65 tuổi Tỷ lệ người mắc bệnh dày Việt Nam cao có nguy co tiến triển nghiêm trọng Việc sử dụng kháng sinh gây tác dụng phụ buồn nôn, nôn, tiêu chảy, nhức đầu, tăng mức đường huyết, chóng mặt, rối loạn giấc ngủ, nhịp tim nhanh Tuy nhiên nhiều kỷ qua, có nhiều loại thảo mộc sử dụng để điều trị viêm loét dày-tá tràng cam thảo (Glycyrrhiza uraỉensis), gừng (Zingiber officinale') Chiết xuất cù đề (B vitis-idaea) thành phần có chứa alkaloid, glycoside, flavonoid saponin có khả làm cho độ sống sót tế bào tăng lên Chiết xuất từ B vitis-idaea làm giảm đường huyết chuột (lúc đói), phục hồi đáng kể mức độ thơng số huyết học, sinh hóa Hoạt động chống oxy hóa ức chế tyrosinase chiết xuất từ B vitis-idaea có cao, chúng có khả ức chế tyrosinase hiệu Việc tìm kiếm loại thuốc thảo dược mói hiệu an tồn để cải thiện liệu pháp điều trị bệnh viêm dày ngày phát triển mạnh Mục tiêu 2.1 Mục tiêu tổng quát Đánh giá tác dụng điều trị bệnh viêm dày chiết xuất ethanol cù đề (B vitis- idaea) chuột Swiss albino 2.2 Mục tiêu cụ thể Xây dựng mô hình gây bệnh viêm dày indomethacin gây đánh giá thành cơng mơ hình dựa kết mô bệnh học số loét, số huyết học, số sinh hóa Xây dựng mơ hình điều trị bệnh viêm dày indomethacin gây đánh giá tác dụng chiết xuất ethanol cù đề (B vitis-idaea) Phuong pháp nghiên cứu 3.1 Thu nhận cao chiết cù đề (B vitis-idaea) 3.1.1 Chuẩn bị chiết xuất B vìtis-ìdaea Lá B vitis-idaea thu hái từ huyện Bảo Lâm, tỉnh Lâm Đồng vào tháng 9/2022 Lá tươi sau thu hái chọn lọc để loại bỏ sâu, héo Sau rửa qua nước máy để loại bỏ tạp chất không mong muốn Tiếp tục phơi khô bóng râm tuần độ ẩm đạt < 12% Sử dụng máy xay nghiền khô (do công ty cổ phần đầu tư Tuấn Tú - Việt Nam sản xuất) để nghiền khô thành bột mịn Bột bảo quản hộp kín, để nơi khô ráo, mát tối tránh sản phẩm bị biến chất tác động nhiệt độ cao, ánh sáng độ ẩm 3.1.2 Chiết xuất cao chiết B vitis-idaea (EtBV) Bột B vitis-idaea chuẩn bị, nạp vào thiết bị Soxhlet, chiết nóng với dung mơi ethanol 70% 24 Dịch chiết lỏng cô đặc thiết bị quay phịng thí nghiệm (Rotavapor® R-100) nhiệt độ không 60°C (hiệu suất 12,65% w/w) Dịch chiết thu nhận (gọi lên EtBV) bảo quản bình hút ẩm nhiệt độ 4°c để sử dụng cho nghiên cứu 3.1.3 Sàng lọc hóa chất thực vật cao chiết B vitis-idaea Sàng lọc hóa chất thực vật phương pháp điều tra tồn hay vắng mặt thành phần hóa chất thực vật tiềm thực vật Thử nghiệm giúp nhà khoa học chẩn đoán thành phần hoạt tính sinh học thực vật 3.2 Thí nghiệm phịng điều trị viêm dày vói EtBV 3.2.1 Bố trí thí nghiệm ♦ Phân nhóm chuột thỉ nghiêm: Ngẫu nhiên hóa làm mù nghiên cứu động vật quan trọng Việc phân bổ ngẫu nhiên động vật cho nhóm thí nghiệm làm cho nhóm giống tất khía cạnh Chọn lọc mù chiến lược sử dụng để giảm thiểu thành kiến chủ quan, giảm sai lệch báo cáo kết Bằng phương pháp ngẫu nhiên hóa làm mù chuột Swiss phân bổ vào nhóm đối chứng nhóm điều trị cho đối tượng có hội nhận phương pháp điều trị can thiệp Những chuột nghiên cứu trơng giống hệt nhau, chúng đánh dấu bút đánh dấu vĩnh viễn để đánh dấu vào gốc đuôi theo mẫu xác định trước Bằng phương pháp đánh dấu đuôi chuột bút tránh vấn đề gây đau gây căng thẳng đến chuột Tuy nhiên, vết mực mờ dần theo thời gian, cần phải áp dụng lặp lại nhiều lần • Mơ hình gây điểu trị bệnh Nghiên cứu thực để đánh giá tác dụng EtBV điều trị bệnh viêm dày (do indomethacin gây ra) chuột (thuốc tham chiếu omeprazol) Nghiên cứu tiến hành giai đoạn: giai đoạn gây bệnh (cảm ứng gây viêm dày) gồm nhóm thí nghiệm, giai đoạn điều trị bệnh (điều trị viêm dày vói EtBV) gồm nhóm thí nghiệm 3.2.2 Uống thuốc cao chiết • Phương pháp uong thuoc indomethacin' Cảm ứng gây viêm dày chuột gây indomethacin thực với liều lượng 45 mg/kg Quy trình cho chuột uống indomethacin thực sau: Chuẩn bị: cân khối lượng chuột tính thể tích indomethacin Chọn gavage phù hợp lau bên kim để loại bỏ tạp chất Kiềm chế: đưa chuột khỏi lồng cố định chắn ỏ tư thẳng đứng Để hai chân trước chuột mở rộng sang bên, đầu cổ bất động, đảm bảo chuột thở tự (quan sát xem lồng ngực có cử động khơng) Quy trình gavage: trượt đầu gavage vào bên trái miệng chuột, sau cửa, trước hàm đầu tiên, dọc theo vòm miệng Nhẹ nhàng đưa thuốc vào miệng chuột (có thể chia thuốc thành nhiều phân số nhỏ để chuột dễ uống) Khi thuốc chuột uống hết, rút kim đưa chuột lồng Theo dõi 10 phút để quan sát biến chứng tiềm ẩn, chuột hoạt động bình thường Phương pháp uống thuốc omeprazol: Điều trị viêm dày vói omeprazole 20 mg/kg (thuốc tham chiếu) Quy trình cho chuột uống omeprazole thực tưong tự quy trình uống indomethacin Vong cao chiết cù để: Tính tốn lượng cao chiết cù đề (EtBV) sử dụng cho chuột tưong quan với khối lượng thể Quy trình cho chuột uống omeprazole thực tương tự quy trình uống indomethacin 3.2.3 Khảo sát tiêu • Định lượng thương tổng thể niêm mạc dày: Kiểm tra tổn thương niêm mạc dày cách sử dụng thấu kính phóng đại (kính lúp) với độ phóng đại lOx để quan sát đếm số lượng tổn thương Đánh giá mức độ loét niêm mạc dày theo thang điểm Reddy cộng (2012) • Hoạt tính chong oxy hóa in vivo: Mau mơ sau thu nhận phân tích phịng thí nghiệm F6 Đồng thời mẫu mô gửi đến Khoa xét nghiệm MEDIC-LAB, Công ty trách nhiệm hữu hạn y tế Hòa Hảo, quận 10, TP HCM để phân tích hoạt độ LPO, CAT MDA • Đo cytokine: Huyết sau thu nhận gửi đến Khoa xét nghiệm MEDIC-LAB, Công ty trách nhiệm hữu hạn y tế Hòa Hảo, quận Bình Tân, TP HCM phân tích xác định lượng TNF-a, IL-lp, IL-6, IL-10 mẫu thu nhận • Huyết học sinh hóa máu: Thu nhận máu theo phưong pháp chọc dò quỹ đạo ngược Máu sau thu nhận phân tích huyết học máy phân tích huyết học tự động phưong pháp đếm số lượng tế bào trực tiếp kính hiển vi nhờ buồng đếm tế bào (Hình 2.18) Các tiêu huyết học bao gồm RBC (hồng cầu), WBC (bạch cầu), LYM (lymphocytes), MONO (monocytes), BA so (basophil), NEU (neutrophil), EOSI (eosinophil), PLT (tiểu cầu) Phân tích sinh hóa máy phân tích sinh hóa tự động tiêu protein tổng, glucose, triglyxerit, ALP, ure, creatine, axit uric Các tiêu huyết học sinh hóa phân tích máy phân tích tự động sau mẫu máu gửi đến Trung tâm y khoa xét nghiệm MEDIC-LAB, Công ty trách nhiệm hữu hạn y tế Hòa Hảo, quận 10, TP HCM • Các thơng so nâng suất: Phưong pháp đo lượng axit toàn phần tự do, phương pháp xác định sản lượng axit • Đo pH: Máy đo pH Hanna HI5222-01 sử dụng để xác định pH sau pha loãng mL dịch dày với mL nước cất • Mơ bệnh học dày: Mô dày sau thu nhận xử lý ngâm tẩm sáp parìn nóng chảy, sau gửi đến khoa giải phẫu bệnh, bệnh viện Quân y 175, thành phố Hồ Chí Minh để xét nghiệm phân tích mơ bệnh dày 3.3 Xử lí số liệu thống kê Dữ liệu xử lí phần mem Microsoft Excel phần mem Statgraphics Centurion XIX trình bày dạng trung bình ± sai số chuẩn giá trị trung bình (Mean ± SD) Dùng phép kiểm tra Fishers LSD để kiểm tra nhiều phạm vi so sánh khác biệt nhóm thí nghiệm Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p