Đánh giá tác dụng cao chiết quả muồng hoàng yến (cassia fistula linn) trong điều trị viêm gan trên chuột swiss albino

Bộ CÔNG THƯƠNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐÈ TÀI KHOA HỌC KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CÁP TRƯỜNG Tên đề tài: Đánh giá tác dụng cao chiết muồng hoàng yến (Cassia fistula Linn) điều trị viêm gan chuột Swiss albino Mã số đề tài: 22/1 SV SHTP02 Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thu Viên Đơn vị thực hiện: Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm Thành phố Hồ Chí Minh, năm 2023 LỜI CÁM ƠN Lời đầu nói tiên, nhóm chúng em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ban lãnh đạo trường Đại học Cơng nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh hỗ trợ cấp kinh phí cho nhóm chúng em thực nghiên cứu Đồng thời, nhóm xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Phòng Quản lý khoa học & Hợp tác quốc tế hỗ trợ cấp xét duyệt đề tài cho nhóm chúng em trường cấp kinh phí Chúng em xin cảm ơn thầy cô Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm, trường Đại học Công nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh, bác sĩ từ Khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Quân y 175 Thành phố Hồ Chí Minh, Khoa Huyết học Sinh hóa, Trung Tâm Y Khoa Medic Bệnh viện Hòa Hảo, Viện Pasteur Thành phố Hồ Chí Minh hỗ trợ nhiều cho chúng em trình thực đề tài nghiên cứu Nhân dịp này, chúng em xin cảm ơn Phịng Thí nghiệm Công nghệ Động vật Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm, trường Đại học Công nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện tốt cho chúng em suốt trình nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn! DANH MỤC TỪ VIÉT TẮT SST Từ viết tắt Nghĩa từ SST Từ viết tắt Nghĩa từ ALP Phosphatase kiềm 34 IP Năng lượng ion hóa ALT Alanin aminotransferase 35 K Kali AST 36 KzCrzO Potassium dichromat ATP Adenosin triphosphat 37 KLCT Khối lượng thể CCỈ4 Carbon tetrachloride 38 KB2PO4 CD 39 LDH Lactate dehydrogenase CF 40 LDL Lipoprotein tỷ trọng thấp CFA 41 MDA Malondialdehyde CFB 42 Na Natri 43 Na2HPO4.12H2O 44 NaOH 45 (NH4)2Fe(SO4)2.6H2O Aspartate aminotransferase Crepidiastrum denticulatum Chiết xuất c fistula Potassium dihydrogen phosphate Chiết xuất nước vỏ c fistula Chief xuat ethanol vỏ thân c fistula Chief xuat ethanol c Disodium hydrogen 10 CFL 11 CFM 12 CF-MA 13 CI Chlorua 46 OD Mật độ quang học 14 DEN Diethy Initrosam ine 47 PC Hợp chat phenolic 15 DNA Acid deoxyribonucleic 48 PLT Số lượng tiểu cầu 16 DC Đối chứng 49 RBC Hồng cầu 17 EDTA 50 SGOT fistula phosphat doecahydrat Chief xuat methanol VỎ c fistula Chief xuat methanol c fistula Acid Ethylen Diamin Ammonium iron (II) sulfat ELE 19 EM 20 EtCF Chief xuat ethanol Cassia fistula Linn Effective Microorganism as Chiet xuat ethanol c hexahydrat Serum Glutamic Oxaloaxetic Transaminas Tetra Axetic 18 Sodium hydroxide Serum Glutamic-Pyruvate 51 SGPT 52 SOD Superoxide dismutase 53 TG Triglyceride 54 TGF transaminase fistula 21 GGT Gamma glutamyl Yeu to tăng trưởng biến Yeu tố tăng trưởng biến 22 GSH Glutathione 55 TGF-p 23 H2O2 Hydrogen peroxid 30% 56 TLR4 Yeu tố tăng trưởng biểu bì 24 HBV Virus viêm gan B 57 TN Thí nghiệm 25 HCV Virus viêm gan c 58 TNF-a đổi- beta Yeu tố hoại tử khối u gan- alpha Yeu tố tăng trưởng biến 26 HCHO Formaldehyd solution 59 TGF 27 HDL Lipoprotein mật độ cao 60 Thl Te bào trợ giúp T loại I 28 HSC Te bào hình gan 61 Th2 Te bào trợ giúp T loại II 29 IFN Interferon 62 VG Viêm gan 30 IL-10 Interleukin 10 63 SGOT 31 IL-lp Interleukin beta 64 WBC Bạch cầu 32 IL-2 65 WG Mức tăng cân 33 IL-8 66 XKN Interleukin Interleukin đối Serum Glutamic Oxaloaxetic Transaminas Xylazil: Ketamil: NaCl Tổng quan tài liệu 1.1 Muống hoàng yến (Cassia fistula L.) Muồng hoàng yen (Cassia fistula L.) thuộc phân họ Vang (Caesalpinioideae), họ Đậu (Fabaceae), chi Cassia, Fabales Muồng hồng yến phát triển tốt điều kiện khí hậu khơ, ánh sáng đầy đủ, đất khơ thống, nước c fistula có tính chịu hạn tốt, tính chịu mặn trung bình, có khả chống lại sưong giá, rụng sống tốt khu rừng gió mùa khác c fistula sống độ cao 1300 m, lượng mưa từ 480 đến 720 mm, nhiệt độ từ 18 đến 29°c, phát triển tốt độ pH 5,58,7 [1] 1.2 Tác dụng dược lý muồng hoàng yến Muồng hoàng yến (C fistula) giàu chất chống oxy hóa anthraquinone, flavonoid, alkaloid, terpenoid, đường khử, saponin, tannin, carbonyl, phlobatannin, steroid, acid ferulic, heodin, rhein glucoside, galactomannan, sennosidt A B, tannin, phlobaphen, chat oxyanthraquinon, emodin, acid chrysophanic, fistuacacidin, barbaloin, lupeol, beta-sitosteron hexacosanon Hạt c fistula chứa khoảng 2% anthraquinon, 24% protein thô, 4,5% chat béo thô, 6,5% chat xo thô 50% carbohydrate, vỏ thân chứa hai glycoside flanol glycoside xanthone Lá ghi nhận có 15,88% protein thơ, 6,65% chất béo thô, 20% chất xo thô 39,86% carbohydrate [2] c fistula sử dụng rộng rãi loại thuốc thông thường để điều trị bệnh khác Cây có tác dụng dược lý đa dạng chống ho, bảo vệ gan, chống nhiệt, chống oxy hóa, chống viêm, chống ung thư, chống nấm, chống vi khuẩn, chống ngứa, chống loét, chống động kinh, chữa lành vết thưong, tăng chuyển hóa lipid, hạ sốt, giảm ho Bột sử dụng loại thuốc nhuận tràng, điều trị bệnh dày, trực tràng, chống lại tổn thưong gan, chống oxy hóa, chống lại q trình peroxy hóa lipid, giảm gốc tự gan thận, sản sinh chat isoflavone biochanin A diệt ký sinh trùng [3] 1.3 Những nghiên cứu tác dụng chữa bệnh muồng hoàng yến 1.3.1 ViệtNanv Theo y học dân gian Việt Nam, tất phận muồng hồng yen (Cassia fistula L.) dùng làm thuốc Quả c fistula dùng để điều trị rối loạn đường ruột trẻ em, rét run say thuốc Rễ chữa cảm lạnh, hạ sốt Lá vị nát thoa lên da trực tiếp chữa bệnh da, đau khớp, bệnh phù thũng, liệt nhẹ, c fistula cịn có tác dụng điều trị rối loạn tim mạch, bệnh thần kinh, dạng xuất huyết chảy máu, chứng thừa acid dày, chữa cảm lạnh [4], Cũng theo quan niệm y học cổ truyền Việt Nam, hạt muồng hồng yến sống chưa sơ chế có vị nhạt, tính bình vào kinh can, thận Có tác dụng nhuận tràng, ích thận, sáng mắt, mát gan, giáng hỏa Thảo minh (hạt muồng hoàng yến sơ chế) có vị đắng, mặn, tính hàn vào kinh can, đởm, có tác dụng an thần, hạ huyết áp, mát gan, giáng hỏa [5] Cây muồng hoàng yến ứng dụng làm thuốc chữa trị nhiều loại bệnh nhờ hợp chất tannin đặc biệt quan trọng lõi Với tính kháng khuẩn kháng virus tốt, chất tannin chữa trị tiêu chảy, viêm ruột, đông máu, viêm niêm mạc miệng, viêm loét dày, Ngồi ra, chúng cịn dùng để giải độc, nguyên ngộ độc sắt kẽm kim loại nặng alkaloid [6], Chiết xuất nước c fistula nồng độ khác 2,5, 3,75, 5,0, 6,25 0% (w/w) cải thiện triệu chứng viêm da dạng vảy nến mơ hình chuột [7] 1.3.2 Thế giới: Điều tra hoạt động bảo vệ gan chống oxy hóa chiết xuất ethanol c fistula (ELE) chống lại tổn thương gan diethylnitrosamine gây chuột cho thấy ELE cảm ứng mạnh với enzyme cytochrome P-450, đóng vai trị quan trọng q trình chuyển hóa DEN, phục hồi tổn thương tế bào gan [8], Khảo sát tác dụng hạ đường huyết chiết xuất methanol nước phận c fistula chuột cống Với liều điều trị 250 500 mg/kg khôi phục đáng kể lượng đường huyết huyết chuột [9] EtCF thể tác dụng hạ lipid máu chống oxy hóa chuột [10] Một kết nghiên cứu kết luận chiết xuất nước cùi muồng hồng yến có hoạt tính bảo vệ gan đáng kể Phát nghiên cứu trước chất chiết xuất từ vỏ muồng hồng yến có khả loại bỏ gốc tự thơng qua việc ức chế q trình peroxy hóa lipid CCỈ4 FeSƠ4 gan thận chuột [11] Quả c fistula sử dụng bệnh hen suyễn, tiểu đường, sốt, làm thuốc phá thai, hạ sốt, giảm viêm, vấn đề ngực, cổ họng, gan nhãn khoa, trị rắn cắn, đau bụng, sỏi thận, nhiễm trùng tiết niệu Bột vỏ c fistula loại thuốc tẩy giun sán, điều trị bệnh hắc lào, gout, thấp khớp, sốt rét bệnh gan Đắp vỏ đốt nóng lên cổ điều trị nhiễm độc máu, bệnh than, kiết lỵ, phong, tiểu đường, bệnh đường tiêu hóa, ho viêm họng Chiết xuất nước (CFA) methanol (CFM) vỏ c fistula có tác dụng chống viêm, chống oxy hóa, chống lại q trình peroxy hóa lipid tạo gốc tự gan thận [11] Đặt vấn đề Viêm gan bệnh nhiễm virus số nguyên nhân khác, bao gồm viêm gan tự miễn viêm gan nhiễm trùng virus hay tác dụng phụ thuốc, ma túy, chất độc, rượu Các triệu chứng chung vàng da mắt, nước tiểu đậm, phân nhợt nhạt, có máu đen, chân bụng sưng, buồn nôn, giảm cảm giác thèm ăn, mệt mỏi dai dẳng, da cảm thấy ngứa, dễ bầm tím bình thường, mệt mỏi, giảm lượng suy nhược, đau nhức khớp, đau bụng Trên toàn giới, khoảng 170 triệu người bị nhiễm virus viêm gan c (HCV) mãn tính 350 triệu người khác bị nhiễm virus viêm gan B (HBV) mãn tính (Georg cộng sự, 2001) Neu khơng có biện pháp can thiệp, nhiều thập kỷ, khoảng 15% đến 30% người nhiễm HBV HCV mãn tính phát triển thành xơ gan, bệnh gan giai đoạn cuối ung thư gan, phải ghép gan (Ganem cộng sự, năm 2001) [12] Tại Việt Nam 7,8 triệu người sống chung với bệnh viêm gan B gần triệu người sống chung với bệnh viêm gan c Điều có nghĩa chín người Việt Nam có người bị nhiễm virus viêm gan B (HBV) virus viêm gan c (HCV) Viêm gan B c gây gần 80 000 ca ung thư gan 40 000 ca tử vong năm Một nghiên cứu cho thấy gần 90% bệnh nhân ung thư gan bị nhiễm HBV HCV Trong tỷ lệ mắc bệnh gan Việt Nam ngày tăng cao nhiều trường hợp phát bệnh giai đoạn nặng, khiến việc điều trị trở nên khó khăn phục hồi chức gan gần không thể, gan chịu nhiều tổn thương Cassia fistula Linn có đặc tính bảo vệ gan, chống viêm, kháng khuẩn, kháng nấm chữa lành vết thương Hầu hết loài giàu tamin, flavonoid, glycosid, carbohydrate, acid stearic, oleic, oxalic, linoleic, oxyanthraquinon dan xuất anthraquinon [13] Quả Cassiafistula L chứa acid amin aspartic (15,3%), glutamic (13%) lysin (6,6%) So với acid amin toàn phần rhein, anthraquinon fistulacidin Các hợp chat hoạt tính sinh học phát muồng hoàng yến (C fistula) hầu hết thuộc nhóm protein polysaccharide chất nghiên cứu nhiều Theo y học cổ truyền Việt Nam, phận muồng hoàng yến dùng làm thuốc Re trị cảm lạnh, hạ sốt; Lá chữa bệnh da, đau khớp, phù thũng, liệt nhẹ, rối loạn tim mạch; Quả dùng để điều trị rối loạn, chống viêm giải độc gan, cắt đau, chữa rét run say thuốc, Mặc dù có báo cáo tác dụng c fistula báo cáo Pradeep et al (2010) hiệu chiết xuất c fistula chống viêm gan diethylnitrosamine; Báo cáo Kalantari et al (2011) tác dụng chiết xuất chi Cassia chống tổn thương gan bromobenzene Tuy nhiên, thiếu liệu hỗ trợ tác dụng điều trị viêm gan c fistula Hơn nữa, liệu pháp phát triển theo nguyên tắc tây y thường bị hạn chế hiệu quả, có nguy gây tác dụng phụ tốn Thuốc tây y tăng đào thải nước qua tiêu chảy, nước tiểu, mồ hôi, giảm cảm giác khát thèm ăn, thay đổi điều nhiệt trung tâm Tá dược tạo thay đổi tình trạng hydrat hóa cách giảm thời gian vận chuyển qua đường tiêu hóa tăng tốc độ đường tiêu hóa tính thấm ruột Mối quan tâm gần đến liệu pháp tự nhiên thuốc thay khiến nhà nghiên cứu ý đến thuốc thảo dược truyền thống Do tính hiệu quả, tác dụng phụ tối thiểu mặt điều trị, chi phí thấp góp phần đáng kể phục hồi bệnh gan Mặt khác, thảo dược dễ dàng tiếp cận giá thành rẻ, thu nhận từ “tự nhiên”, phù hợp vói người mẫn cảm vói thuốc Vói tói 65% bệnh nhân gan dùng chế phẩm từ thảo dược thảo dược bảo vệ gan đáng tin cậy khơng đủ việc tìm kiếm ngày gia tăng Tìm tịi thảo dược điều trị viêm gan mục đích hướng tới y học cổ truyền Những thuốc sử dụng hỗ trợ điều trị viêm gan kế sữa (Silybum marianum) ức chế viêm cách kiểm sốt việc sản xuất leukotrienes thúc đẩy q trình sản xuất glutathione gan, rễ bồ công anh (Taraxacum officinale) kích thích sản xuất mật, chống oxy hóa bảo vệ gan, nghệ (Curcuma longa) chống oxy hóa, chống virus gây bệnh viêm gan, muồng hoàng yen (Cassia fistula), hoa cúc (Chamomile recutta), Tuy nhiên, nhiều loại thảo dược làm giảm hiệu số loại thuốc tăng tác dụng phụ sử dụng liều buồn nôn, nôn, tiêu chảy, nhức đầu, chóng mặt, phản ứng dị ứng, tổn thưong gan, vấn đề chảy máu cân nội tiết tố [14], Dữ liệu đáng tin cậy thuốc thảo dược bảo vệ gan không đủ, tác dụng phụ xảy sử dụng lâu dài Muồng hồng yến loại thảo dược q, sinh trưởng phát triển tốt Việt Nam, không độc, có tính kháng oxy hóa, kháng viêm, có hiệu chữa bệnh Hiện nay, có nhiều báo cáo khoa học đề cập đến thành phần hợp chất sinh học tác dụng điều trị bệnh viêm gan từ chiết xuất lá, hoa, hạt vỏ muồng hoàng yến Tuy nhiên, kiến thức hoạt động điều trị viêm gan chiết xuất muồng hoàng yến cịn hạn chế Chính vậy, nghiên cứu thực với mơ hình đánh giá đánh giá tác dụng cao chiết muồng hoàng yen (Cassiafistula Linn) điều trị viêm gan chuột Swiss albino, mục tiêu cần thiết phải tiến hành nghiên cứu Mục tiêu Đánh giá tác dụng chiết xuất ethanol muồng hoàng yến (C fistula) trị bệnh viêm gan chuột Swiss albino Phuong pháp nghiên cứu 4.1 Thuốc thử, hóa chất thiết bị Carbon tetrachloride (CCI4) (Hình 1.1 A) phân tử hydrocacbon clo CCI4 hydrocacbon clo hóa trong, khơng màu, dễ bay ổn định Silymarin, chiết xuất từ hạt kế sữa (Silybum marianum) (Hình 1.1 B), sử dụng điều trị rối loạn chức gan túi mật Thuốc có dạng viên nén bao đường viên nén bao phim Hình 1.1 Hóa chất dược phẩm dùng cho thí nghiệm; A CCI4 dầu ô liu; B Silymarin - Hóa chất: Ethanol, disodium hydrogen phosphat doecahydrat (Na2HPƠ4.12H2O), acid axetic (CH3COOH), hydrogen peroxid 30% (H2O2), acid lactic (CóHóCh), potassium dichromat (K2Cr2Ơ7), potassium dihydrogen phosphat (KH2PO4), sodium hydroxit (NaOH), ammonium iron (II) sulfat hexahydrat- (NH4)2Fe(SC>4)2.6H2O, trichloroacetic acid, sodium ascorbat (vitamin C), formaldehyd solution (HCHO), tris-EDTA, chloroform (CHCh), HC1, xylazin, ketamin NaCl, (Hình 1.2) Hình 1.2 Các loại hóa chất sử dụng cho thí nghiệm 4.2 Vật liệu chiết xuất ethanol muồng hoàng yến 4.2.1 Vật liệu Quả muồng hồng yến (Hình 1.3 A) thu hái quận Liên Chiểu, thành phố Đà Nang Mau lưu phịng thí nghiệm thực vật, Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm, Trường Đại học Cơng nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh Hình 1.3 Vật liệu muồng hoàng yến; A Quả muồng hoàng yến tươi; B Quả muồng hồng yến cẳt lát phơi khơ; c Bột muồng hoàng yến; D EtCF 4.2.2 Chiết xuất ethanol muồng hoàng yến Quả c fistula thu nhận, rửa nước, phơi khô, sấy, nghiền thu bột khơ (Hình 1.3 B C) Sau đó, bột ngâm dung mơi ethanol (95% v/v), ethanol dung môi sử dụng nhiều hịa tan nhiều nhóm hoạt chất, không độc, dễ kiếm Dịch chiết cô đặc bàng thiết bị cô quay chân không (đặt tên EtCF) [15] EtCF thường tối màu (Hình 1.3 D) 4.3 Sàng lọc hóa chất thực vật Thử nghiệm tìm saponin: 300 mg cao chiết đun sôi với mL nước hai phút Hỗn hợp làm nguội, trộn mạnh để ba phút Sự hình thành bọt cho thấy diện saponin Thử nghiệm tìm tannin: Cao chiết, trộn với dung dịch gelatin 1% Kết tủa cho thấy diện tannin Thử nghiệm tìm terpenoid (thử nghiệm Salkowski): mL cao chiết trộn với mL chloroform thêm mL H2SO4 đặc lắc Kết dương tính diện terpenoid ghi nhận xuất màu nâu đỏ Thử nghiệm tìm alkaloid: phân hủy 300 mg cao chiết HC1 2M Dịch lọc có tính acid trộn với amyl alcohol nhiệt độ phòng, kiểm tra lớp cồn cho màu hồng cho thấy có mặt alkaloid Thử nghiệm tìm flavonoid: Sự diện flavonoid xác đinh cách sử dụng dung dịch aluminium chloride 1% methanol, HC1 đậm đạc, magie dung dịch kail hydroxide, xuất bọt màu vàng Thử nghiệm tìm carbohydrate (phép thử Fehling): Trộn lượng bàng dung dich Fehling A dung