Đánh giá tính an toàn và hiệu quả kháng viêm trong điều trị viêm khớp dạng thấp trên chuột swiss albino của chiết xuất ethanol lá sacha inchi (plukenetia volubilis l )

Thông tín tổng quát1.1.Tênđề tài: Đánh giá tính an toàn và hiệu quả kháng viêm trong điều trị viêm khớp dạngthấp trên chuột Swiss albino của chiếtxuất ethanol láSachi Plukenetia volubiỉi

Bộ CÔNG THƯƠNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỔ HỒ CHÍ MINH

OoO

BÁO CÁO TỔNG KÉT ĐÈ TÀI KHOA HỌC

KẾT QUẢ THựC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CÚT KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG

Tên đề tài: Đánh giá tính an toàn và hiệu quả kháng viêm trong điều trị viêm khớp dạng thấp trên chuột Swiss albino của chiết xuất ethanol lá Sachi

(Plukenetia volubỉlis L.)

Mã số đề tài: 21/1SHTP06

Chủ nhiệm đề tài: ThS Trần Thị Phương Nhung

Đon vị thực hiện: Viện Công nghệ Sinh học và Thực phẩm

LỜI CẢM ƠN

Đe thực hiện và hoàn thành đề tàinghiêncứu khoahọcnày, chúng tôiđã nhận được sự hỗ trợ, giúp đỡ, sự quan tâm, động viên từ nhiều co quan, tổchức vàcá nhân, đặc biệt là sự giúp đỡ,

tạo điều kiện vềvậtchấtvà tinh thầntừ phíanhà trường Chúng tôi xin trân trọngcám on Ban

giám hiệu trường Đại học Công nghiệp Tp HCM đã đồng hành, hỗ trọ và giúp đỡ chúng tôi trongsuốt thời gian nghiên cứu đểhoàn thành tốtđề tài khoa họcnày Xin gửi lời cảm ơn đếnViện Công nghệ Sinh học và Thực phẩm, Trường Đại học Công nghiệp Tp HCM, Viện

Pasteur Tp HCM, Bệnh viện Quân y 175 Tp HCM, Bệnh viện ung bướu Tp HCM, Trung

tâm Ykhoa Medic Hòa Hảo Tp HCM đã giúp đỡ chúng tôi trong suốt quá trình thực hiện đềtài

Tuy có nhiều cốgắng, nhưng trong đề tài nghiên cứu khoa học này không tránh khỏi nhữngthiếu sót Kính mong quý thầycô, các chuyên gia, đồng nghiệp và bạn bè những người quan

tâm đến đề tài đóng góp ý kiến, giúp đỡ để đề tài được hoàn thiện hơn

Xin chân thành cảm ơn!

PHẦN L THÔNG TIN CHUNG

Thành viên tham gia

3 Phạm Quang Tiến Viện Côngnghệ Sinh học

Thành viên tham gia

1.4 Đon vị chủ trì: Viện Công nghệ Sinh học và Thực phẩm, Trường ĐH Công nghiệp

Tp HCM

1.5 Thời gian thực hiện:

1.5.1 Theo hợp đồng: từ tháng 3 năm 2021 đến tháng 9 năm 2022

1.5.2 Giahạn (nếu có): đến tháng 9 năm 2023

1.5.3 Thực hiện thực tế: từ tháng 3 năm 2022 đến tháng 9 năm 2023

1.6 Những thay đổi so vói thuyết minh ban đầu (nếu có):

Kết quả: Bổ sung thêm các kết quả về hoạt động của các chất chống oxy hóa, cytokines.Loại trừ chỉ tiêu đothể tích chân

1.7 Tổng kinh phí được phê duyệt của đề tài: 55 triệu đồng

II Kết quả nghiên cứu

1 Đặt vấn đề

2 Mục tiêu

Đe tài đánhgiá được tính an toàn, khả năng kháng viêm khớpdạngthấp in vivo ở chuột củachiếtxuấtethanol lá Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.)

3 Phương pháp nghiên cứu

3.2.2 Chiết xuất ethanol lá Sacha inchi (EtPV)

3.4 Phương pháp thí nghiệm

3.4.1 Động vật thí nghiệm

Chuột Swiss albino, khỏe mạnh, cân nặng 23-25 g (6 tuần tuổi)và 30-35 g (7 - 8 tuần tuổi)

được muatừ Viện Pasteur, TP.HCM

3.4.2 Thử nghiệm độc tính cấp tính và bán mãn tính của EtPV

• Thử nghiêm độc tính cấp tính và bán mãn tính

• Các thông so khảo sát: Khối lượng cơ thể và cơ quan, Lượng thức ăn và nước uống tiêuthụ, Huyết họcvà sinhhóa, Phân tích nước tiểu, Mô bệnh cơ quan

3.4.3 Đánh giá hoạt tính chống viêm khớp của EtPV

• Cảm ứng viêm khớp: Gây cảm ứng viêm khớp dạng thấp(RA)bằng cách tiêm 0,1 mLCFA

• Nhóm thí nghiệm: 36 con chuột Swiss albino được chiathành 6 nhóm, 6con/nhóm

• Các thông số khảo sát: Đường kính khớp và điểm viêm khớp, Các thông số viêm, Phân tích mô học khớp

3.4 3 Xử lí số liệu thống kê: số liệu được thống kê và xử lý trên Microsoft Excel và Statgraphics Centurion XIX

4 Tổng kết về kết quả nghiên cứu

4.1 Sàng lọc hóa chất thực vật của EtPV

Sàng lọc hóachấtthựcvậtsơ bộ của chiết xuất cho thấy sự hiện diện của alkaloid, flavonoid,

saponin, sterol, triterpenoid, phenolic, tannin, phytosterol, diterpene, glycoside và

carbohydrate Không cóprotein, axit amin, dầu và chatbéo trong chiếtxuất

4.2 Thử nghiệm độc tính cấp tính và bán mãn tính của EtPV

4.2.1 Khối lượng cơ thể và lượng thức ân, nước uống tiêu thụ

4.2.2 Huyết học và sinh hóa

4.2.3 Phân tích nước tiểu

4.2.4 Khối lượng cơ quan

4.2.5 Hình thái giải phẫu và đặc điểm mô học

4.3 Đánh giá hoạt tính chống viêm khớp của EtPV

4.3.1 Tác dụng của EtPVđối vớì đường kính khớp và điếm vỉêm khớp

4.3.2 Tác dụng của EtPV đoi với các thông so huyết học và sinh hóa

4.3.4 Tác dụng của EtPVđoi vởì các cytokine gây viêm

5 Đánh giá các két quả đã đạt được và kết luận

Dữ liệu từ nghiên cứu hiện tại cho thấy chiếtxuất ethanol từ lá Sacha inchi (P volubilis),

không tạo ra bất kỳ tác dụng phụ nào đối với tỷ lệ tử vong và hành vi chung ở chuột trong

phạmvi nồngđộ lên tới 7000 mg/kg, do đó, LD50 đườnguống của EtPV lớn hơn 7000 mg/kg

Đồngthời, nghiên cứu này cũng cho thấy EtPVlà một phương thuốc đầy hứa hẹn cho bệnhviêm khớp dạng thấp,thể hiện hoạt tính chống viêm khớp với liều tối ưu khoảng 300 mg/kg

Sự hiện diệncủamột số hợpchất có hoạt tính sinh học trong EtPVbao gồm saponin, alkaloid, flavonoid, tannin,terpenoid vàcác hợp chất phenolic đã thể hiện tác dụng chống viêm khớp

thông qua điều chế các cytokine gây viêm

6 Tóm tắt két quả (tiếng Việt và tiếng Anh)

Tiếng Việt

Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) làmột loại cây nổi tiếngcótruyền thống được sử dụng

cho cả mục đích ăn kiêng và làm thuốc do thành phần hóa học thực vật đa dạng của nó,bao

gồm saponin, alkaloid, flavonoid, tannin, terpenoid và các hợp chat phenolic, có tác dụng

kháng khuẩn, chống nhiễm trùng, đặctính chốngviêm, chống oxy hóa và giảm đau Nghiên cứunàynghiên cứu tính an toàn vàtiềm năng điều trị của chiếtxuấtethanol từ lá Sacha Inchi

(EtPV) thông qua các xét nghiệm độc tính cấptính vàbán cấp tính Hơn nữa, nó đãđánh giátác dụng của EtPV đối với bệnh viêm khớp dạng thấp (RA) ở chuột, Swiss cung cấp bằng chứng khoa học cho việc pháttriển mộtphương thuốc thảo dược chống RA cónguồn gốc từ

lá Sacha inchi Nghiên cứu đã chứng minh rằng EtPV an toàn trong cả xétnghiệm độc tính

cấp tính và bán cấp tính, không quan sátthấy độc tínhhoặc tácdụng phụ Hơnnữa,EtPV cho

thấy sựgiảm đáng kể các triệu chứng RA, bao gồm sưng khớp và mức độ nghiêm trọng củaviêm khớp, cùngvới sự điều chỉnhtích cực các cytokine gây viêm và cải thiện mô bệnh học

Những phát hiện nàycho thấy EtPV có thể hứa hẹn là phương pháp điều trị an toàn và hiệu

quảđối với RA, đảm bảo sự khám phá sâu hơn trong y học cổ truyền

antimicrobial, anti-inflammatory, antioxidant, and analgesic properties This studyinvestigated the safety and therapeutic potential of ethanol extract from Sacha Inchi leaves

(EtPV)throughacute and sub-acute toxicity tests Furthermore, itevaluated EtPV's effectsonrheumatoid arthritis (RA) in Swiss albino mice, providing scientific substantiation for the development of an anti-RA herbal remedy derived from Sacha Inchi leaves The studydemonstrated that EtPV was safe in both acute and sub-acute toxicitytests, withno observed

toxicityor adverse effects Moreover,EtPVexhibited a significant reductionin RA symptoms,

including joint swelling and arthritisseverity, along with positive modulation of inflammatorycytokines and histopathological improvements These findings suggestthat EtPV may holdpromise as a safe and effective treatmentforRA, warrantingfurther exploration in traditional

medicine

III Sản phẩm đề tài, công bố và két quả đào tạo

3.1 Kết quả nghiên cứu (sản phẩm dạng 1,2,3)

Dạng III: Bài báo

3.2 Kết quả đào tạo: Không

IV Tình hình sử dụng kinh phí

Nơi công bố (IƯH,

ISI, SCOPUS)

Ghi chú

1 Evaluation of Acute and Subchronic Toxicity Induced by

theCrudeEthanol ExtractQỈPlukenetia voỉubiỉis Linneo

Leaves in SwissAlbino Mice

Tạpchi Scopus(Q2)

2 Anti-Arthritis Effect of Ethanol Extract of Sacha inchi

(Plukenetia volubilis L.) Leaves Against Complete

Freund’sAdjuvant-InducedArthritis Model in Mice

Tạp chi Scopus(Q2)

Công lao động Nguyên vật liệu, thiếtbị, máy móc Chi khác

2 Phụ lục giải trình các khoản chi

Công lao động (khoa học, phổ thông)

Đơn giá Thành tiền

Lập kếhoạch, bố

Triển

khai thực nghiệm,

chính

Bố trí thí nghiệm,

V Kiến nghị(về pháttriển các kết quả nghiên cứu của đềtài)

Sử dụng các quy trình được tiêu chuẩn hóa vàcác kỹ thuật hiện đại như sắc ký lỏng hiệunăng cao (HPLC), quang phổ phân tử ghép đôi (MS-GC, MS-HPLC) hoặc đo độ sáng hoặc

màu sắc của các hợp chất trong dịch chiết dựa trên cường độ để xác định nồng độ và phân tích thànhphần hóa học thực vật trong dịch chiết

Tiến hành nghiên cứuchuyên sâu hon nữa, sử dụng các phưong pháp như Khảnăng hấpthụgốc oxy (ORAC) Khảnăng chốngoxy hóa tưong đưong Trolox(TEAC) và 2,2-diphenyl-l-

picrylhydrazyl (DPPH) để đo khảnăng chống oxy hóa của chiết xuất Sử dụng kỹ thuật PCR thời gianthực(RT-PCR) để định lượngmức độ biểu hiện của các gen liên quan đếntình trạngviêm vàoxy hóatrong tế bào sau khi xử lý bằng chiết xuất Sử dụng các phưong pháp phân tích liên kếtDNAhoặc đánh giá biểu hiện gen của NF-kB để xác định hoạt độngcủa protein này trong việc điều chỉnh tình trạng viêm, nhằm đánh giá toàn diện hon về tiềm năng y học

truyền thống của EtPV về đặc tính chống oxy hóa và chống viêm của nó

VI Phụ lục sản phâm (liệtkê minh chứng các sản phâm nêu ở Phân III): Không

Tp HCM, ngày tháng năm

Chủ nhiệm đề tài Phòng QLKH&HTQT (ĐƠN VỊ)

Trưởng (đơn vị) (Họ tên, chữ ký)

PHẰN II BÁO CÁO CHI TIẾT ĐÈ TÀI NGHIÊN cứu KHOA HỌC

(báo cáo tổng, kết sau khi nghiệm thu, đã bao gồm nội dung góp ý của hội đồng nghiệm thù)

II Kết quả nghiên cứu

1 Đặt vấn đề

Viêm khớp dạng thấp(RA) là bệnh thấp khớp mãn tính, là bệnh tự miễn, xảy ra khi hệthốngmiễn dịch bị rối loạn, tấn công vào màng hoạt dịch khiến màng hoạtdịchviêm đặc hiệu, tích

tụ nhiều dịch rỉ viêm gây tổn thưong sụn khớp và đầu xưong dưới sụn Bệnh gây ra những

thay đổi khớp do các mô bị dính hoặc biến dạng, ảnh hưởng đến tim, mắt, phổi, gây biến

chứng loãng xưong, huyết áp, tim mạch, suythận [1] Trong những năm gần đây xu hướng mắc bệnh viêm khớp dạng thấp ngày càng gia tăng Nguyên nhân chủ yếu gây bệnh là do chế

độ sinh hoạt không điều độ, do virus tấn công, yếu tố tuổi tác, di truyền, dẫn đến rối loạn

hệ thống miễn dịch Theo thông tin mới nhấttừ Đại họcYDược thành phố Hồ Chí Minh có

khoảng 0,5% dân số Việt Nam và0,5-3% dân sốThế giới mắc căn bệnh này [2] Trong Tây

y, việc sử dụng thuốc có chứa thành phần corticoid có đặc tính kháng viêm tác động lên giai

đoạn cuối của quá trình tổng hợp prostaglandin, ức chế miễn dịch để chữabệnh viêm khớp

rấtthông dụng [2] Tuy nhiên, về lâu dài corticoid gây ramột số tác dụng phụ như biến dạng

khớp, da mỏng, bịbầm, cushing do thuốc, loãngxưong, viêm loét dạ dày tá tràng, [3] Hiện

nay, y học Phương đông truyền thống sử dụng thảo dược dân gian như lá ngải cứu (Artemisia vulgaris), cây đau xương (Tinospora sinensis'), lá lot (Piper sarmentosum), cây đỗ trọng

(Eucommia uỉmoides), trong điều trị RA có hiệu quả rõ rệt và đang dần đượcngười bệnhquan tâm Thảo dược dân gian ítgây tác dụng phụ, tác dụng chữatrị được tích tụ dần trong

cơthể quaquá trình điều trị có thể khánglại yéu tố bất lợi hoặc kích thích các hợp chấtcó lợi

khác trongcơthểhoạt động [4] Trong những năm gần đây, các biện pháp chữa bệnh sử dụngthảo dược như một chất bổ sung vào chế độ ăn uống để ngăn ngừa bệnh tật ngày càng phổ

biến Theo WHO,khoảng 4 tỷ người (80% dân số) trên thếgiới phụ thuộcvàoy học cổtruyền

để chăm sóc sức khỏe ban đầu [5] Việc sử dụng chiết xuất thảo dược cho thấy tiềm năng đầyhứahẹn với nhu cầu toàn cầu cao, nhưng vẫn còn nhiều lo ngại về độ an toàn củachúng [6] Các cuộc khảo sát mới nhấtđãchỉ rarằng nhiều sảnphẩm được sử dụng trong y học cổtruyền

có thể gây ra những tác dụng phụ [7] Vì vậy việc tiến hànhcác nghiên cứu độc tính trên cây

thuốc để xác định tính an toàn trước khi sử dụng là rất cần thiết Đánh giátác dụng độc học

của chiếtxuấtcâythuốc đượcdự định sử dụng cho độngvật hoặc con người là mộtkhíacạnh

quan trọng trongviệc bài trừtác dụng độc hại tiềm ẩn [8]

Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) làmộtloài thựcvậtcó nguồn gốc từrừng rậm Amazon,

thuộc họ Europhorbiaceae Sacha inchi đã được sử dụng làm nguồn thực phẩm do có giá trịdinh dưỡng cao Chúng được công nhận là có những lợi ích tiềm năng đối với sức khỏe con

người Hạt Sacha inchi chứa các axit béo không bão hòa đa, như a-linolenic (ALA), linoleic

(LA), các gốccủa(0-3, co -6, 6-tocopherol, dạng tự nhiên của vitamin E vàđược biết đến vớihoạt động chống oxy hóavàtiềm năng chống khối u [9] Sự hiện diện của terpenoid, saponin, tannin, glycosid, phytosterol và các hợp chatphenolictrong chiết xuất ethanol lá Sacha inchi cho thấy hoạt tính sinh học của chúngnhư kháng khuẩn, kháng viêm, chống oxy hóavà giảm đau Các flavonoid trong láSacha inchi khảnăng ngăn ngừasự hìnhthành và loạibỏ các gốc

tự do Chiết xuất lá Sacha inchi có thể làm giảm khả năng sống sót của té bào ung thư biểu

mô phổi và cổ tử cung ởngười [10] Quả hạch có hàm lượng a-tocopherol cao là chất chuyểnhóa hoạt động của vitamin E và có khảnăng chống oxy hóa, bảo vệ các axit béo khôngbão

hòa khỏi quá trình oxy hóa [11] Dầu hạt Sachainchi cókhảnăng loại bỏ sự bám dính của vi

khuẩn Staphylococcus aureus trên da Theo kinh nghiệm truyền thống dầu hạt Sacha inchi được sử dụng để điều trị vếtthưong trên da,giữ ẩm và làm liền sẹo [12] vỏ hạt Sacha inchi được dùng để xử lý nước vì chúng có khả năng hấp thụ sinh học các ion Pb2+ và Cu2+ [13].Trong dân gian Sacha inchi được sử dụng nhiều trong điều trị các bệnh về đường tiêu hóa, tiểu đường, chữa viêm đau khớp, Gần đây, Tran và Tran (2021) [14] đãchứng minh rằng việc sử dụng chiếtxuấtethanol từ láSacha inchilà an toàn Tác dụng điều trị bệnh viêm khớp

dạng thấpbởi chiếtxuấtethanol lá Sacha inchi cũng đã được chứng minh qua nghiêncứu của

Tran vàcộng sự (2023) [15] Trong nghiên cứu này, chúng tôi đánh giá tính an toàn và hiệu

quả kháng viêm trong điều trị viêm khớp dạng thấp trên chuột Swiss albino củachiết xuất

ethanol lá Sacha inchi (Plukenetia voỉubilis L.)

2 Mục tiêu

Đe tài đánh giá được tính an toàn, khả năng kháng viêm khớp dạng thấp in vivo ở chuột củachiếtxuấtethanol lá Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.)

3 Tổng quan tài liệu

Trong lịch sử, y học cổ truyền đã được sử dụngỏ nhiều quốc gia để điềutrị nhiều loại bệnh

[16] Các hóa chất thực vật có hoạt tính sinh học từ nguyên liệu thực vật có nguồn gốc tựnhiên hoặc tổng hợp tưongtự các hợp chấttự nhiên ngày càng được coi lànguồn chính của

dược phẩm Tuy nhiên, cũng có bằng chứng chothấy một số chiếtxuấtthảo dược gây ra tác dụng phụ trong quá trình điều trị [17],làm dấy lên mối lo ngại về tính an toàn củathuốc thảo

dược [18] Dođó, sự an toàn của nguyên liệu thực vật cần phải được kiểm tratrướckhi chúng

có thể được sử dụng để kiểm soát bệnh tật [19] Tầm quan trọngcủa việc điều tra khoa học

về độc tính củathuốc thảo dược bản địa cũng đã được WHO nhấn mạnh như một phần của

việc đánh giáan toàn của các sản phẩm thảo dược [20] Plukenetia volubiỉis L., thường đượcgọi là sacha inchi, là một loại cây lâu năm thuộc họEuphorbiaceae Nó có nguồn gốc ở vùng

nhiệt đói Nam Mỹ, một số quần đảo Windward ở Caribe và được trồng thương mại ở ĐôngNamÁ Dầu từ hạt sacha inchi đãđược báo cáolà cóchứanhiều loại axitbéo không bão hòa,

y- và ô-tocopherol, và được người dân bản địasửdụng theotruyền thống cho mục đích thẩm

mỹ, điều trị các vấn đề thấp khớp và đau nhức cơbắp trong nhiều thế kỷ [21] Gần đây, nhiều ứng dụng y học của hạt và dầu của loại cây này đã được thảo luận Giá trị dược lý của chiếtxuất từ câyp volubilis lần đầu tiên đượcghi nhận trong tài liệu tham khảo [22] Huamán và cộng sự (2008) và Garmendia và cộng sự (2011) đã sử dụng chiết xuất từ hạt và lá của p volubilis để giảm thành phần lipid ở bệnh nhân mắc bệnh mỡ máu sau ăn [23] và giảm cholesterol ở bệnh nhân có cholesterol máu cao [24] Một cuộc điều tra khác từAna Karina

et al (2013) trên 4 dịch chiết lá tươi p volubiỉis bao gồm metanol (MEL), etanol (EEL), cloroform (CEL) và dung dịch nước (AEL) chothấy chúng có hoạt tính chống oxy hóa và

chốngtăng sinh chống lại tế bàoHeLa Các chấtchiếtxuất cũng có thể kích thích sựtăng sinh

tếbào trong tếbàonguyên bào sợi 3T3 [25].Việcsử dụngP voỉubiỉislàm thuốc truyền thống

để điều chỉnh cholesterol,cải thiện tiêu hóa và ngăn ngừa bệnh tiểu đường hoặc rối loạn nhận

thức cũng đã đượcnghiên cứu [26] Tuy nhiên, sự an toàn của chiếtxuấtthực vật phải đượcđượcxácnhận đểtránh mọi rủi ro vềsứckhỏe vàtheo nỗ lực tốt nhất của chúng tôi kiến thức đánh giá độc tính của chiết xuất ethanol của láp volubilis chưa được thực hiện bởi bất kỳ

nhóm nghiên cứu nào Do đó, công việc này nhằm mụcđích kiểm trađộc tính cấp tính và bán mãn tính của EtPV ở chuột Swiss, hình thành nền tảng cho các nghiên cứu tiếp theo về tác dụng dượclý của EtPV in vivo

Viêm khớpdạng heumatoid (RA) là một rối loạn tự miễn dịch đặctrưng bởi tìnhtrạng mãn

tính viêm ở một số khớp nhỏ ở cổ tay, bàn tay, ngón tay và bàn chân, dẫn đến trong sự xâmnhập của các tế bàomiễn dịch,xói mòn sụn và xương,cũng như hoạtdịchtăng sản màng hoạt

dịch của bệnh nhân [27, 28] Nó không chỉ gây đau, sưng và suy giảm chức năng ở khớp nhưng cũng dẫn đến một số bệnh hậu quả mang tính hệthốngnhư rối loạn tim mạch, bệnh xơ

cơ vàung thư huyết học và thận [28] Bệnh nhân RA cũng phải đối mặt với nguy cơ khuyếttậtvà tử vong cao hơn cũng như chế độ chăm sóc sức khỏecao hơn, đặc biệt làtrong 10 năm

đầu tiên kểtừ khi bệnh bắtđầu [29] Ngoài ra, Saíĩri và cộng sự (2019) [30] đã đề xuất RA là

một trong những giải pháp toàn cầu lớn về gánh nặng y tế công cộng với việc ước tính tỷ lệ

mắc RA theo độ tuổi và tỷ lệmắc hàng năm khoảng 246,6 và 14,9 vào năm 2017, cóxu hướng

tăng lên trong những năm gần đây Một loạt cácliệu pháp đã được pháttriển cho RA điều trịbằng thuốc chống thấp khớp thông thường (DMARD), chẳng hạn như methotrexate,leflunomide, sulfasalazine, hydroxychloroquine, cũng như DMARD sinh học nhắm vào cácphân tử cụ thể hoặc con đường phân tử liên quan với phản ứng viêm RA (Infliximab, Tocilizumab, Abatacept, Rituximab, An akin ra, V.V.), cho đến các phân tử nhỏ tiềm năng mớibao gồm Jakinibs, Baricitinib, Tofacitinib [27, 28] Đen nay, Liên đoàn chốngthấp khớpchâu

Âu đề xuất chế độ methotrexate (25 mg/tuần) cộng với glucocorticoid là thuốc hàng đầu đểđiều trị RA [27] Tuy nhiên, có một phần đáng kể bệnh nhân RA không đáp ứng tốt với các

phưong pháp điều trị hiện có và có nhiều tác dụng phụ đã quan sát thấy trong quá trình tiếp

xúc lâu dài với DMARD [28, 31].Vì vậy, việc phát hiện ra các phưong pháp tiếp cận thay thế cho các phưong pháp truyền thống và thuốc hiện đại không những có hiệu quả cao hon mà

còn ít tác dụng phụ hon làmộtnhiệm vụ quan trọng, đặc biệt làtừ các cây thuốc cổ truyền có

đã được biết đến từ lâu về tính hiệu quả và tính an toàn của chúng [32] Gần đây, một số nghiên cứu đã nhấn mạnh ứng dụng các loại thuốc hoặc công thức thảo dược, bao gồm

Sesamum indicum, Plantago Major, và công thức Ayurvedic VatariGuggulu như chất bổ sung

để điềutrị RA [33, 34, 35]

Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) là một loại cây có dầu thuộc Họ Europhobiaceae cónguồn gốc từ lưu vực sông Amazon và sau đó được trồng ỏ một số nước châu Á như TrungQuốc, Thái Lan, Việt Nam, Campuchia, Lào, V.V., cũng nhưNam vàTrungMỹlàcây ăn được

[36, 37] Dầu hạt sachainchi cũng đã được sử dụng như một phưong thuốc truyền thốngtrong

y học dân tộc Peru, đặc biệt là để điều trị vết thưong ngoài da, đau cơ và viêm khớpdạng thấp [36, 37, 38] Gần đây, một số nghiên cứu cho rang Sacha inchi sở hữu một số hoạt tính sinh

học và tác dụng có lợi chẳng hạn như tác dụng chống oxy hóa, kháng khuẩn và chống ung thư, cũngnhư làm giảm bớt tăng huyết áp [10, 36, 39, 40] Trong nghiên cứu này, chúng tôi

đã đánh giátác dụng chống viêm khớpcủa chiếtxuấtethanol từ lá Sacha inchi trong mô hìnhviêm khớp dạng thấp do chất bổ trợ hoàn chỉnh (CFA) của Freund và nghiên cứu cơchếtác dụng chống viêm khớp của chiếtxuất

4 Phương pháp nghiên cứu

4.1 Thuốc thử, hóa chất và thiết bị

Chất bổ trợ hoàn chỉnhcủa Freund (F5881) được muatừ MilliporeSigma (Hoa Kỳ); Mobic (meloxicam) được cung cấp từ Boehringer Ingelheim (Đức); các hóa chất vàthuốc thử khác

nhưethanol, methanol, chì axetat, chloroform, axit axetic, axit sunfuric, axit galic, quercetin, thuốc thử Folin-Ciocalteu, nhôm clorua được thu mua từ MilliporeSigma (Burlington,MA) Microtome (Histo-Line, Ý), kính hiển vi quanghọcBX41, Olympus (Tokyo, NhậtBản),

máy phân tích huyết học tự động (Nihon Kohden MEK-9100,NhậtBản), máy phân tích sinh

hóa tự động (KENZA 240 TX/ISE, Pháp), máy đo quang phổ (SP-3000 cộng với optima,NhậtBản),

4.2 Vật liệu và chiết xuất ethanol lá Sacha inchi (EtPV)

4.2.1 Vật liệu

Tháng 10năm 2019, lá Sachainchi (P. voỉubiỉis) tươi đượcthu nhận tại trang trại của Công

ty Miền Đông, thành phố Buôn Ma Thuột, tỉnh Daklak Tháng4 năm 2021, lá Sacha inchi (P volubilis) tươi được thu nhận tại trang trại dược liệu của Công ty cổ phần Inca Sachi ViệtNam, Tp Pleiku, Tỉnh Gia Lai Lá tươi sau khi thu hái về được chọn lọc để loại bỏ nhữnglá sâu, héo Sau đó lá được rửa sạch quanước máy để loại bỏ các tạp chất không mong muốn.Tiếptục phơi khô lá dưới bóng râm, sau đó sấykhô ở60°C chođến khi độ ẩm đạt < 12%.Vật liệu khô đượcnghiền trong máy xay thành bột và sàng bộtthông qua rây có đường kính 200

mm để đạt được kích thước đồng nhất Bột lá sau đó được đóng gói hút chân không, đựng trong túi PEvà bảo quản ởnhiệt độ 0-4°C cho đến khi sử dụngchocác thí nghiệm tiếp theo

4.2.2 Chiết xuất ethanol lá Sacha ỉnchỉ (EtPV)

1 kg bột lá được ngâm với 5 lítethanol 96% và lắc liên tụcbằng máy lắc trong 4ngày Dungdịch được lọc qua bông gòn và giấy lọc Whatman số 4 Dịch lọc sau đó được cô đặc trong

thiết bị cô quaychân không Chiếtxuấtethanolthô của lá Sacha inchi (được đặttên là EtPV)

đã được thu thập, cân và bảo quản trong bao bì không thấm nước và không khí, được giữ trongtủ lạnh ở 4°c và bọc trong giấy nhôm để ngăn ánh sáng trước khi sử dụng cho các thí nghiệm tiếptheo

4.3 Sàng lọc hóa chất thực vật

Đe xác nhận sự hiện diện các lớp hợp chất có hoạt tính sinh họctrong EtPV, việc sàng lọchóa chất thực vật được thực hiện bằng các phương pháp tiêu chuẩn: Tannin (thử nghiệm

Braymer và Iron chloride), Flavonoid (thử nghiệm Lead acetate và Alkaline), Saponin (thử

nghiệm Foam và Froth), Steroid (thử nghiệm Salkowski), Glycoside (thử nghiệm Keller-

Kelliani và Borntrager), Alkaloid (thử nghiệm Hager và Mayer), Protein và Axit amin (thử

nghiệm Xanthoproteic và Biuret), Carbohydrate(thử nghiệm Molisch), Phenolic(thửnghiệmFerric chloride và Magnesium, HC1), Terpenoid (thử nghiệm Liebermann -Burchard và

Copper acetate), Phytosterol (thử nghiệm Libermann-Burchard), Dầu và Chất béo (thử

nghiệm Saponification) [41 - 50]

Hàm lượng polyphenol tổng số (TPC) trong dịch chiết được xác định bằng phưong phápFolin-Ciocalteu 0,5 mLdịchchiết,2,5 mL thuốc thử Folin-Ciocalteu [10%(v/v)hòa tan trongnước] và 2,5 mLNaHCCh [7,5% (75 mg/mL)] được ủ Ở45°c trong45 phút Mẩutrắng được

chuẩn bị đồngthời bằng cách trộn 0,5 mL ethanol, 2,5 mLthuốc thử Folin-Ciocalteu và 2,5

mL NaHCCh Độ hấp thụ được đo ở bước sóng 765 nm bằng máy đo quang phổ Axit galic

(GA) được sử dụng làm chất chuẩn và tổng số phenol đượcbiểu thị bằng đưong lượng axitgalic trên gam dịch chiết khô (mg GAE/g) [51] Hàm lượng flavonoid tổng số (TFC) được đobằng phưong pháp mô tảbởi Wahab và cộng sự (2018) [51] vói một vài sửađổi nhỏ, 0,5 mLdịch chiết được bổ sung 0,2 1Ì1L dung dịch methanol nhôm clorua 10% (w/v), 0,2 mL dungdịch CHsCOOK 1 M và nước cất Độ hấp thụ của hỗn hợp hoặc mẫu trắng được đo ở bước sóng 415 nm sau khi đã được giữ trong bóng tối ở nhiệtđộ phòng trong 30 phút Tổng hàmlượng flavonoid được xác định thông qua một đường chuẩncủa quercetin Kết quảđược biểu

thị bằng miligam đưong lượng quercetin trên gam dịch chiết khô(mg QE/g)

4.4 Phương pháp thí nghiệm

4.4.1 Động vật thí nghiệm

Chuột Swiss albino, khỏe mạnh, cân nặng 23-25 g(6 tuần tuổi)và 30-35 g(7 - 8 tuần tuổi)đượcmuatừViện Pasteur, TP.HCM Chuột được nuôi trongnhà chăm sóc động vật, tại vườnthực nghiệm, trường Đại học Công nghiệp TP.HCM trong 7-15 ngày để thích nghi với điều kiện phòng thí nghiệm (6 chuột/lồng) Những con chuột được tiếp cận tự do với thức ăn tiêuchuẩn dành cho động vật gặm nhấm và nước lọc Mỗi con chuột được xác định bằng cách đánhdấu trên đuôi bằng bút đánh dấu vĩnh viễn Các thử nghiệm đã được thực hiện tuân thủ

nghiêm ngặttheo Tuyên bo Basel (2010) [52], pháp luật Việt Nam (Luật Chăn nuôi, Luật số 32/2018/QH14) [53] vàquy trình tuân thủ Hướng dẫn Thử nghiệm tiền lâm sàng và lâm sàng

thuốc đông y, thuốc từ dược liệu (Quyết định 141/QĐ-K2ĐT) của Cục Khoa học Công nghệ

và Đào tạo, Bộ Y tế ViệtNam, 2015 [54]

4.4.2 Thử nghiệm độc tính cấp tính và bán mãn tính của EtPV

• Thử nghiêm độc tính cấp tính và bán mãn tính

* Thử nghiệm độc tính cấp tính'. Thử nghiệmđộc tính cấp tính của EtPV được thực hiệnbằng cách sử dụng phương pháp thử nghiệm “Lên vàXuống” theo hướng dẫn số 425 của Tổ chức

Phát triển Kinh tế (OECD) [55] với một vài sửa đổi nhỏ Việc sửa đổi dựa trên Hướng dẫnThử nghiệmtiền lâm sàng và lâm sàng thuốcđông y,thuốctừ dược liệu (Quyết định 141/QĐ-

K2ĐT) của ủy ban Khoa học Công nghệ và Đào tạo, Bộ Ytế (2015) [54], Liều lượng được

tính toán dựa trên hàm lượng chất khô trong dịch chiết (1000, 3000, 5000 và 7000 mg/kg) [54, 56], Những con chuột được chia ngẫu nhiên thành5 nhóm (6 con chuột/nhóm), một nhóm đối chứng và bốn nhóm xử lý bằng EtPV Các nhóm điều trị được dùng EtPV bằng đườnguống với lượng EtPV được chia thành 8 phần nhỏ và cho uống liên tục trong 16 giờ, sau khi chuột đã được nhịn ăn quađêm Nhóm đối chứng được cho uống nước cất Những thay đổi

da, lông, mắt, niêm mạc, nhịpthở, phản ứng, hành vi, vận động, tiết nướcbọt, tiêu chảy, buồnngủ vàcác dấu hiệu ngộ độc hoặc tử vong được quan sát mỗi giờtrong 24 giờ sau khi dùng

thuốcvà tiếp tục quan sát một lần mỗi ngày trong 14ngày tiếp theo [57] Cuối giai đoạn thửnghiệm, các con vật đã chết do hít phải CƠ2 quá liều và được phẫu thuật [58] Các cơ quannội tạng đã được thu thập để phân tích khối lượng cơ quan tương đối và mô bệnh học

* Thử nghiệm độc tỉnh bán mãn tính'. Nghiên cứu độc tính bán mãn tính qua đường miệng được thực hiện theo hướng dẫn số 408 của OECD [59] với một chút sửa đổi theo Quyếtđịnh

141/QĐ-K2ĐT của ủy ban Khoahọc Côngnghệ và Đàotạo, BộY tế [54] Chuột được chiathành 5 nhóm (n = 6) Nhóm đối chứng sử dụng nước cất, 4 nhóm thử nghiệm dùng EtPV với

liều 100, 300, 500 và700 mg/kg, liên tục trong 90 ngày Trước khi được điều trị bằng EtPV,

chuột được nhịn ăn qua đêm Khối lượng cơthể chuột được cân đo hàng tuần, lượng thức ăn

và lượng nước uống được ghi lại mỗi ngày Vào ngày thứ 90 (kếtthúc đợt thử nghiệm), mẫu

máu đã được đưađi xét nghiệm huyết học, sinh hóa và nước tiểu cũng được thu thập để phân tích Sau đó những con chuột bị hy sinhbằng cách hítkhí CO2 quá liều,gan, thận và tim đượcthu thập đểtiếptục phân tích [58]

• Các thông so khảo sát

* Khối lượng cơ thể và cơ quan

Khối lượng cơthể củacác con vật được đo hàng tuần trong quá trình thử nghiệm bằng cânđiệntử GS-SHINKO(Nhật Bản) Mứctăng cân được tính theo công thức

Vào ngày thí nghiệm cuối cùng, nhữngcon chuột đãbị hy sinh bằng cách hít phải khí CƠ2

quá liều Các co quan gan, thận và tim được thu nhận và cân đo khối lượng bằng cân phân tích Entris Sartorius (Đức) Khối lượng co quan tưong đối (ROW) được tính theo công thức.Khối lượngtươngđốicủa cơ quan(%) = - K11Ổ‘ r X100 [60]

* Lượng thức ăn và nước uống tiêu thụ: Lượng thức ăn và nước uống mà động vật sử dụng

hàng ngày đã được ghi lại Đo trước khi cho từng nhóm ăn, uống và vào cuối ngày, thức ăn

vànướcuống còn lại được thu thập, sau đó làm phép tính ngoại suy để tính lượng thức ăn và

nướcuống tiêu thụ trongngày Đon vị đo cho thức ăn tiêu thụ là (g/ngày) và nướcuống tiêuthụ là (mL/ngày) [61]

* Huyết học và sinh hóa: Những con chuột đã đượcnhịn đói qua đêmtrước khi thửnghiệm, được gây mê bằng hỗn hợp Xylazil:Ketamil:NaCl (XKN-2:3:3) và máu được thu thập bằng phưong phápthu nhận máu mắt Các mẫu huyết học được đặttrong ống có chứa chất chống

đông máu (EDTA) Phân tích huyếthọc được thực hiện bằng máy phân tích huyết học tự động(Nihon Kohden MEK-9100, Nhật Bản) để phân tích hồng cầu (RBC), huyết sắc tố (HGB),

tiểu cầu (PLT), bạch cầu (WBC), bạch cầu mono (MONO), bạch cầu lympho(LYM) và bạch

cầu hạt (GRA) Máu để phân tích sinh hóa được đặtnhẹ nhàng trong ống tron để tránh tan

máu Các thông số sinh hóa huyết thanh aspartate amino transferase (AST), alanine

aminotransferase (ALT),phosphatase kiềm (ALP), tổng protein, glucose, triglyceride, urê và creatinine được ước tính bang cách sử dụng máy phân tích sinh hóatự (Selectra E, Vitalab, spankeren, Hà Lan)

* Phân tích nước tiểu: Chuột được nhốt riêng trong lồng kính đã khử trùng, có sẵn nước nhưng không có thức ăn Nước tiểu được thu thập 0,3 mL trong 16 giờ Các thông số xét

nghiệm bao gồm thể tích, pH, khối lượng riêng, thể xeton, tế bào máu, glucose và protein

trong nước tiểu được phân tích bằng máy phân tích nước tiểu SiemensClinitek (Đức)

* Mô bệnh cơ quan: Tim, gan và thận sau khi được thu thập và xử lý đã được ngâm trong

formaldehyde (10%) Sau đó, chúng được làm sạch bằng xylen và nhúng vào sáp paraíĩn

(nóngchảy ở60°C) Sử dụng microtome để cắt khối mô thành các phần (dày 5 pm) Tiếp tục

khử parafin bằng xylen và hydrat hóa ỏ nồng độ cồn giảm dần Sau đó, nhuộm bằng thuốc

nhuộm H&E, làm khô và quan sát trên kính hiển vi quang học (x200)

4.4.3 Đánh giá hoạt tính chống viêm khớp của EtPV

• Lựa chọn liều lượng: Tính an toàn của chiết xuất ethanol từ lá Sachainchi đã được báocáo

trong nghiên cứu trước đây [14],nghiêncứu này đãxácnhận EtPVan toàn ởliều cấptính lên

tới 7000 mg/kg và liều bán mãntính lên tới 700 mg/kg.Do đó, ba liều EtPV(100, 200 và 300

mg/kg) đã được chọn để sử dụng trong nghiên cứu để đánh giá hoạt tính chống viêm khớp của EtPV

• Cảm ứng viêm khớp: Gâycảm ứng viêm khớp dạng thấp(RA)bằng cách tiêm 0,1 mLCFAvào trong da bàn chân của chi sau bên phải của chuột Viêm khớp đã được phát triển trong

khoảngthời gian 7 ngày Vào cuối ngày thứ 7, tất cả các con vật pháttriển các dấu hiệu của

bệnh RA như sưng, đỏ, cứng khớp và khó cử động chi Điều trị bằng EtPV bắt đầu từ ngàythứ 8 và tiếp tục đến ngày thứ 28 Đường kính mắt cá chân vàchỉ số viêm khớpcủa chuột thí nghiệm đượcghi nhận hàng tuần trong quá trình thí nghiệm

• Nhóm thí nghiệm: Các nhóm thử nghiệm được thiết kế theo mô tả của Cui và cộng sự

(2019) [62] với một vài sửa đổi nhỏ 36 con chuộtSwiss albino được chiathành 6 nhóm, mỗi

nhóm gồm 6 con chuột Nhóm đối chứng gồm những con chuột khỏe mạnh được cho uống

nước muối sinh lí; Nhóm CFA (nhóm không được điều trị) những con chuột bị RA đã đượcuống nước muối sinh lí; Nhóm CFA-Mobic(nhóm được điều trị tiêu chuẩn), chuột bị RA đãnhận được thuốc tiêu chuẩn Mobic (0,2 mg/kg); nhóm CFA-EtPVioo, nhóm CFA-EtPV200 vànhóm CFA-EtPV300, chuột bị RA đã nhận EtPV vói các liều tưong ứng là 100, 200 và 300 mg/kg Tất cả các động vật được cho uống vói liều chỉ định lànước muối sinh lí, thuốc tham chiếu hoặc chiếtxuất hàng ngày trong 3 tuần (từ ngày 8 đến ngày 28)

• Các thông số khảo sát

* Đường kính khớp và điểm viêm khớp: Những thay đổi về đường kính khớp mắt cá chân của

chuột được kiểm tra hàng tuần bằng thước cặp Vernier (Mitutoyo, Nhật Bản) Điểm viêm khớp được đánh giá hàng tuần theo phưong pháp của Cui và cộng sự (2019) [62] Mức độ

nghiêm trọng của viêm khớp ở bàn chân được phân loại và chấm điểm từ 0 đến 4, trong đó

điểm 0: không sưng; điểm 1: sưng hoặc ban đỏ ở mộttrong cácngón chân; điểm 2: sưng và

ban đỏ ở một hoặc nhiều ngón chân; điểm 3: sưng nặng và ban đỏở cổ tay hoặc mắt cá chân;điểm 4: sưng khớp ỏ ngón chân hoặc mắt cá chân, hoặc biến dạng nặng và khôngthể sử dụng

chi Điểm viêm khớpở mỗi con chuộtđược đánh giátheo sự thay đổi của ban đỏ, phù nề của

khớp được tiêm và sự liên quan của các khớp không đượctiêm khác (điểm của cả hai chi sau được tính); Như vậy, tổng số điểm viêm khớp tối đa trên mỗi con chuột là 8

* Các thông số viêm: Vào ngày thí nghiệm cuối cùng (ngày 28), những con chuộtbị hy sinh

bằng cách hít khí CƠ2 quá liều Các mẫu máu đượcthu thập thông qua chọc dò tim để xác

định các thông số huyết học, sinh hóa và xét nghiệm cytokine gây viêm Các khớp mắt cá

chân được thu thập để phân tích mô học và các bộ phận khác của bàn chân phù nề được mổ

xẻ đểkiểm trahoạt tính chốngoxy hóa Mộtnửalượng máu nhận đượctừ độngvật thí nghiệm

được giữtrong các ống chứa EDTA để kiểm tra các thông số huyết học bao gồm tổng số hồng cầu (RBC) và số lượng bạch cầu (WBC),số lượng các loại bạch cầu khác nhau [tế bào lympho (LYM), bạch cầu đơn nhân (MONO), bạch cầu hạt (GRA)], tốc độ lắng hồng Cầu-ESR đượcxác định bằng phương pháp Westergren (1957) [63] Phần máu còn lại được bảo quản trong

các ống BD Vacutainer™ SST (Thermo, MA, USA) và được ủ trong30 phút Sau đó, huyếtthanh được tách ra khỏi các mẫu máu bằng cáchly tâm (3000 vòng/phút trong 15 phútở 4°C)

Dịch nổi được sử dụng để đo nồng độ protein phản ứng c (CRP), yếu tố dạng thấp (RF) và cytokines CRP được xác định theo quy trình Voila và cộng sự (1981) [64] và RF được đobằng phương pháp của Johnson và Fraulk (1976) [65] Nồng độ của các cytokine tiền viêm (TNF)-a, interferon (IFN)-y, interleukin (IL)-Ip, IL-6 và cytokine kháng viêm IL-10, đượcxác định bằng cách sử dụng bộ công cụ thương mại theo hướng dẫn của nhà sản xuất

(RayBiotech, Inc., Norcross, GA)

* Phần tích mô học khớp: Các khớp của chi sau bên phải được tách ra khỏi chuột và ngâm trong formaldehyde (10%) trong 24 h Sau đó, các mẫu được khử canxi, rửabằng nước máyđang chảy và một loạt nồng độ cồn, tiếp tục nhúng vào paraíin Mỗi mẫu vật đượccắt thành các phần 4-5 Lim bang microtome (Histo-Line, Ý) Mô đãđược khử sáp, bù nước và nhuộm

haematoxylin và eosin Tiêu bản được quan sát và đánh giá dưới kính hiển vi quang học

(BX41, Olympus, Tokyo,Nhật Bản)

4.4 3 Xử lí số liệu thống kê

Số liệu được thống kê và xử lý trên Microsoft Excel Mỗi thí nghiệm được lặp lại 3 lần và

lấy kết quả là trung bình ± độ lệch chuẩn (Mean ± SD) Sử dụng phần mềm Statgraphics Centurion XIX để phân tích thống kê số liệu thí nghiệm và đánh giá sự khác biệt giữa các mẫu phân tích Phân tích phương sai ANOVA đã được sửdụng đểxác định sự khác nhau giữa

các mẫu làcóý nghĩahay không Sự khác biệt có ý nghĩathống kê khi p < 0,05

5 Tổng kết về kết quả nghiên cứu

5.1 Sàng lọc hóa chất thực vật của EtPV

Sàng lọc hóachấtthựcvật sơ bộ của chiết xuất cho thấy sự hiện diện của alkaloid, flavonoid,

saponin, sterol, triterpenoid, phenolic, tannin, phytosterol, diterpene, glycoside vàcarbohydrate Không có protein, axit amin, dầu và chat béo trong chiếtxuất Sự có mặt của

các chất trên trong dịch chiết ethanol của lá Pỉukenetia volubilis L đã được báo cáo trong

nghiêncứu của Tran và Tran (2021) [14], Tran và cộng sự (2023) [15] và phù hợp với kết quả nghiên cứu củaNascimento và cộng sự (2013) [10] Hàm lượng polyphenol trong EtPV là 42,67 ± 0,81 mg GAE/g, trong khi hàm lượng flavonoid tổng số là 8,85 ± 0,08 mg QE/g.Những kết quả này phù hợp với các báo cáo trước đó [10, 66] đã quan sát thấy sự hiện diện của các dải màu đặc trưngbởi các hợp chat phenolic, terpenoid, terpen, steroid, carbohydrate

và flavonoid trongchiếtxuấtethanol củaP voỉubiỉis. Bên cạnh đó, Castillo và cộngsự(2010) [66] đã chỉ ra saponin, flavonoid, steroid, alkaloid và tanin là thành phần của chiết xuất và axit amin không thể phát hiện được Nhiều nghiên cứu đã gợi ý rằng cả flavonoid và polyphenol đều cóthể điều chỉnh phản ứng viêm bằng cách nhắm mục tiêu vào một số cơché

và đường dẫn tín hiệu [67-69] Theo Ambriz-Perez và cộng sự (2016) [68], các hợp chấtphenolic không chỉ ức chế quá trình sản xuất hoặc hoạt động của mộtsố chất trung gian gâyviêm như prostaglandin E2 cónguồn gốc từ cyclooxygenase vàcác cytokine tiền viêm (IL6, TNFa, )mà còn làm thayđổi quá trình tổng hợpeicosanoid, kích hoạt các tếbào miễn dịch

và biểu hiện của nitric oxide synthase và cyclooxygenase-2 Hơn nữa, yếu tố hạt nhân-kB

hoặc Nrf-2, hai yếu tố phiên mãnổi tiếng liên quan đến quá trình gây viêm và chống oxy hóa,

có thể được điều chỉnhbởi các hợp chất phenolic [68] Gần đây, Al-Khayri và cộng sự(2022)

[70] đã đềxuấtrằng flavonoidcó thểlàm giảm phản ứng viêm thông qua nhiều cơ chế, ví dụ,

ức chế con đường MAPK vàNF-kB hoặc yếu tố phiên mã protein-1 Quercetin, một thành viên nổi tiếng của flavonoid, đã được ghi nhận vềtác dụng ức chế bạch cầutrung tính và trùnghợp actin [69] Ngoài ra, apigenin, cũng là một thành viên khác của flavonoid, có thể ức chế

quá trình phosphoryl hóa p65 (tiểu đơn vị của con đường gâyviêm NF-kB) và ngăn chặn quátrình sản xuất nitrit oxit và cyclooxygenase-2 trong đại thực bào [71] Nhiều flavonoid, bao

gồm luteolin, genistein và íĩsetin, cũngđãđược báo cáo về khảnăng ức chếcác cytokinegâyviêm, chẳng hạn như sản xuấtTNFavàIL6 [70] Sự hiện diện của các hợpchấthoạttính sinh

học nhưflavonoid và hợp chất phenolic có thể điều chỉnh phản ứng viêm, ngụ ý cơsở cho tác dụng chống viêm khớpcủa dịch chiết

5.2 Thử nghiệm độc tính cấp tính và bán mãn tính của EtPV

5.2.1 Khối lượng cơ thể và lượng thức ân, nước uống tiêu thụ

Lượngthức ăn và lượng nước tiêu thụ của năm nhóm đượctrình bày trong Bảng 1 Cụ thể,

lượng thức ăn trung bình là 6,16 ± 1,28 g/ngày đối với nhóm điều trị và 4,07 ± 1,62 g/ngàyđối với nhóm đối chứng, trong khi lượng nước tiêu thụ lần lượt là 6,71 ± 1,32 mL/ngày đối

với nhóm điều trị và 4,52 ± 1,24 mL/ngày đối với nhóm đối chứng Mặc dù lượngthức ăn và

nước uông của các nhóm thử nghiệm tăng lên, nhưng vân năm trong phạm vi lượng thức ăn

và nước uống củachuột Swiss albino bình thường (lượng thức ăn từ 3,1 ±0,1 đến 6,3 ± 0,3

g/ngày; lượngnước uống là3,9 ± 0,2 đến 8,2 ± 0,3 mL/ngày) theo kết luận từAbdulrahman

và cộng sự (2004) [72] Các kết quả trên chỉ ra rằng EtPV không gây rasự ức chế thèm ăn và các tác động có hại đối với sự pháttriển của chuột Sức khỏe bình thườngcủa chuột cho thấy

không có thay đổi đáng kểnào về hoạt động sinh lý cũng như chuyển hóa của chúng [73]

Bảng 1 Ảnh hưởng củaEtPV đối vói lượngthức ăn, lượngnước tiêu thụ và khối lượng cơ

thể chuột bằng các thử nghiệm độc tính cấp tính và bán mãn tínhNhóm

Lượng thức ăn trưng bình (g/ngày)

Lượng nước trung bình (mL/ngày)

Khối lượng cơ thể Khối lượng thực tề

ăn [75] Tuy nhiên, ở các nhóm thử nghiệm với các liều khác của EtPV không khác biệt vềmức tăng cân so với đối chứng (p > 0,05) Kết quảnày tương tự với một nghiên cứu trước đây, nó đã được báo cáo trong mộtnghiên cứu liên quan đượcthực hiện bởi Rodeiro et al

(2018) kiểmtrađộc tính cấp tính củabột thu được từ hạtP voỉubiỉisrằng việc sử dụng nguyên

liệu không ảnh hưởng đáng kể đến việc tăng khối lượng cơthể, lượng thức ăn và nước uống tiêu thụ của những con chuột được nghiên cứu Cũng không có sự khácbiệt đáng kể về cácthông số huyết học và sinh hóa, khối lượng các cơ quan, hìnhthái giải phẫu và các đặc điểm

mô học giữanhóm đối chứng vànhóm điềutrị đã được báo cáo trong công trình này [75]

5.2.2 Huyết học và sinh hóa

Ảnh hưởng của chiếtxuấtláP volubilis đốivới các thông số huyết họcđược trình bày trong

Bảng 2 So với các nhóm đối chứng, không có sự khác biệt đáng kể nào về số lượng tế bào lympho, bạch cầu mono và bạch cầu hạt ở các nhóm được điều trị bằng EtPV Tuy nhiên, sự

khác biệt vềRBC, PLT vàWBC giữanhóm đốichứng và nhóm sửdụngEtPVliều cao là đáng chú ý RBC của các nhóm được sử dụng EtPV liều 7000 mg/kg là 8,24 ± 0,45 X 10ố tế

bào/mm3, trong khi đó là 7,39 ± 0,29 X 10ố tếbào/mm3 đốivới nhóm đối chứng PLT là 699,56

± 29,78 103 tế bào/mm3 đối với nhóm được điều trị bằng EtPV700 mg/kg so với 602,02 ±

23,56 X 103 tế bào/mm3 đối với nhóm đối chứng Ngoài ra, nhóm được xử lýbằng EtPV 7000 mg/kg có số lượng bạch cầu là 3,46 ± 0,47 X 103 tế bào/mm3, trong khi đó là 2,56 ± 0,34xio3tế bào/mm3 đối với nhóm đối chứng Hàm lượng RBC, PLT và WBC của các nhóm điều

trị cao hơn so với các nhóm đối chứng, điều này có thể giải thích làdo phản ứng nhẹ của cơthể do sử dụng EtPV và biến thể của từng con chuột [76], tuy nhiên các giátrị này vẫn nằm

trong phạm vi tương ứng với chuột Swiss albino bình thường [77] Sự khác biệt về mức độ ALT, AST vàALP đã được nhận thấy giữa các nhóm nghiên cứu (Bảng 3) Nồng độ ALT và

Bảng 2 Ảnh hưởng củaEtPV đến các thông số huyết học ở chuột trong thử nghiệm độc tính

cấp tính và bán mãn tính

Các giá trị được hiến thị dưới dạng Mean ± SD Giá trị khác biệt đáng kế so với giá trị tương ứng của nhóm đối chứng (*p < 0,05) được đánh dấu hoa thị Ghi chú: Lymphocytes (Bạch cầu lympho), Monocytes (Bạch cầu mono), Granulocytes (Bạch cầu hạt).

Nhóm RBC

(xioổtb/mm3)

RGB (g/dL)

PLT (xio3tb/mm3)

WBC (xio3tb/mm3)

Lymphocytes (%)

Monocyte (%)

Granulocytes (%)

Thử nghiệm độc tính cấp tính

Đối 7,68a 1 l,28a 589,76a 2,68a 39,53 5,78a 52,35 chứng ± 0,26 ±0,39 ± 41,27 ± 0,32 ± 1,22 ± 0,39 ±1,11

1000 7,92 11,42 634,52 2,91 41,34 6,02 54,26 mg/kg ±0,32 ± 0,42 ± 38,52 ±0,34 ± 2,01 ±0,19 ± 1,99

3000 8,01 12,29 689,45b 3,12 40,92 6,33b 53,77 mg/kg ±0,31 ± 0,58 ± 46,33 ±0,28 ± 1,78 ± 0,25 ± 1,04

5000 8,44b 1 l,92b 646,69 3,33 41,67 5,98 52,99 mg/kg ± 0,29 ±0,64 ± 55,07 ±0,38 ± 2,04 ±0,22 ± 1,14

300 7,99 13,01 648,68 2,75 39,95 5,94b 54,02 mg/kg ±0,35 ± 0,28 ±41,11 ±0,19 ± 1,22 ± 0,36 ± 1,32

500 8,18 12,89 687,61b 3,01b 41,45 5,56 53,98 mg/kg ±0,28 ±0,16 ± 39,45 ±0,28 ±1,80 ±0,17 ± 1,19

700 8,84b 13,12b 699,56b 2,99 42,09b 5,64 54,77 mg/kg ±0,17 ±0,23 ± 29,78 ±0,26 ± 1,26 ±0,43 ± 1,37