Thông tín tổng quát1.1.Tênđề tài: Đánh giá tính an toàn và hiệu quả kháng viêm trong điều trị viêm khớp dạngthấp trên chuột Swiss albino của chiếtxuất ethanol láSachi Plukenetia volubiỉi
Bộ CÔNG THƯƠNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỔ HỒ CHÍ MINH OoO BÁO CÁO TỔNG KÉT ĐÈ TÀI KHOA HỌC KẾT QUẢ THựC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CÚT KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG Tên đề tài: Đánh giá tính an tồn hiệu kháng viêm điều trị viêm khớp dạng thấp chuột Swiss albino chiết xuất ethanol Sachi (Plukenetia volubỉlis L.) Mã số đề tài: 21/1SHTP06 Chủ nhiệm đề tài: ThS Trần Thị Phương Nhung Đon vị thực hiện: Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm LỜI CẢM ƠN Đe thực hoàn thành đề tài nghiên cứu khoa học này, nhận hỗ trợ, giúp đỡ, quan tâm, động viên từ nhiều co quan, tổ chức cá nhân, đặc biệt giúp đỡ, tạo điều kiện vật chất tinh thần từ phía nhà trường Chúng tơi xin trân trọng cám on Ban giám hiệu trường Đại học Công nghiệp Tp HCM đồng hành, hỗ trọ giúp đỡ suốt thời gian nghiên cứu để hoàn thành tốt đề tài khoa học Xin gửi lời cảm ơn đến Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm, Trường Đại học Công nghiệp Tp HCM, Viện Pasteur Tp HCM, Bệnh viện Quân y 175 Tp HCM, Bệnh viện ung bướu Tp HCM, Trung tâm Y khoa Medic Hòa Hảo Tp HCM giúp đỡ suốt trình thực đề tài Tuy có nhiều cố gắng, đề tài nghiên cứu khoa học không tránh khỏi thiếu sót Kính mong q thầy cơ, chuyên gia, đồng nghiệp bạn bè người quan tâm đến đề tài đóng góp ý kiến, giúp đỡ để đề tài hoàn thiện Xin chân thành cảm ơn! PHẦN L THƠNG TIN CHUNG I Thơng tín tổng quát 1.1 Tên đề tài: Đánh giá tính an toàn hiệu kháng viêm điều trị viêm khớp dạng thấp chuột Swiss albino chiết xuất ethanol Sachi (Plukenetia volubiỉis L.) 1.2 Mã số: 22/1 SV SHTP01 1.3 Danh sách chủ trì, thành viên tham gia thực đề tài Họ tên TT Đon vị cơng tác Vai trị thực đề tài (học hàm, học vị) Trần Thị Phuong Nhung Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm Chủ nhiệm đề tài Hà Thị Luận Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm Thành viên tham gia Phạm Quang Tiến Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm Thành viên tham gia Nguyễn Ngọc Thanh Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm Tu Thành viên tham gia Lâm Thị Hồng Mến Viện Cơng nghệ Sinh học Thực phẩm Thành viên tham gia 1.4 Đon vị chủ trì: Viện Cơng nghệ Sinh học Thực phẩm, Trường ĐH Công nghiệp Tp HCM 1.5 Thời gian thực hiện: 1.5.1 Theo hợp đồng: từ tháng năm 2021 đến tháng năm 2022 1.5.2 Gia hạn (nếu có): đến tháng năm 2023 1.5.3 Thực thực tế: từ tháng năm 2022 đến tháng năm 2023 1.6 Những thay đổi so vói thuyết minh ban đầu (nếu có): Kết quả: Bổ sung thêm kết hoạt động chất chống oxy hóa, cytokines Loại trừ tiêu đo thể tích chân 1.7 Tổng kinh phí phê duyệt đề tài: 55 triệu đồng II Kết nghiên cứu Đặt vấn đề Mục tiêu Đe tài đánh giá tính an toàn, khả kháng viêm khớp dạng thấp in vivo chuột chiết xuất ethanol Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) Phương pháp nghiên cứu 3.2.2 Chiết xuất ethanol Sacha inchi (EtPV) 3.4 Phương pháp thí nghiệm 3.4.1 Động vật thí nghiệm Chuột Swiss albino, khỏe mạnh, cân nặng 23-25 g (6 tuần tuổi) 30-35 g (7 - tuần tuổi) mua từ Viện Pasteur, TP.HCM 3.4.2 Thử nghiệm độc tính cấp tính bán mãn tính EtPV • Thử nghiêm độc tính cấp tính bán mãn tính • Các thơng so khảo sát: Khối lượng thể quan, Lượng thức ăn nước uống tiêu thụ, Huyết học sinh hóa, Phân tích nước tiểu, Mơ bệnh quan 3.4.3 Đánh giá hoạt tính chống viêm khớp EtPV • Cảm ứng viêm khớp: Gây cảm ứng viêm khớp dạng thấp (RA) cách tiêm 0,1 mL CFA • Nhóm thí nghiệm: 36 chuột Swiss albino chia thành nhóm, con/nhóm • Các thơng số khảo sát: Đường kính khớp điểm viêm khớp, Các thơng số viêm, Phân tích mơ học khớp 3.4 Xử lí số liệu thống kê: số liệu thống kê xử lý Microsoft Excel Statgraphics Centurion XIX Tổng kết kết nghiên cứu 4.1 Sàng lọc hóa chất thực vật EtPV Sàng lọc hóa chất thực vật sơ chiết xuất cho thấy diện alkaloid, flavonoid, saponin, sterol, triterpenoid, phenolic, tannin, phytosterol, diterpene, glycoside carbohydrate Khơng có protein, axit amin, dầu chat béo chiết xuất 4.2 Thử nghiệm độc tính cấp tính bán mãn tính EtPV 4.2.1 Khối lượng thể lượng thức ân, nước uống tiêu thụ 4.2.2 Huyết học sinh hóa 4.2.3 Phân tích nước tiểu 4.2.4 Khối lượng quan 4.2.5 Hình thái giải phẫu đặc điểm mơ học 4.3 Đánh giá hoạt tính chống viêm khớp EtPV 4.3.1 Tác dụng EtPVđối vớì đường kính khớp điếm vỉêm khớp 4.3.2 Tác dụng EtPV đoi với thơng so huyết học sinh hóa 4.3.4 Tác dụng EtPVđoi vởì cytokine gây viêm Đánh giá két đạt kết luận Dữ liệu từ nghiên cứu cho thấy chiết xuất ethanol từ Sacha inchi (P volubilis), không tạo tác dụng phụ tỷ lệ tử vong hành vi chung chuột phạm vi nồng độ lên tới 7000 mg/kg, đó, LD50 đường uống EtPV lớn 7000 mg/kg Đồng thời, nghiên cứu cho thấy EtPV phương thuốc đầy hứa hẹn cho bệnh viêm khớp dạng thấp, thể hoạt tính chống viêm khớp với liều tối ưu khoảng 300 mg/kg Sự diện số hợp chất có hoạt tính sinh học EtPV bao gồm saponin, alkaloid, flavonoid, tannin, terpenoid hợp chất phenolic thể tác dụng chống viêm khớp thông qua điều chế cytokine gây viêm Tóm tắt két (tiếng Việt tiếng Anh) Tiếng Việt Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) loại tiếng có truyền thống sử dụng cho mục đích ăn kiêng làm thuốc thành phần hóa học thực vật đa dạng nó, bao gồm saponin, alkaloid, flavonoid, tannin, terpenoid hợp chat phenolic, có tác dụng kháng khuẩn, chống nhiễm trùng, đặc tính chống viêm, chống oxy hóa giảm đau Nghiên cứu nghiên cứu tính an tồn tiềm điều trị chiết xuất ethanol từ Sacha Inchi (EtPV) thông qua xét nghiệm độc tính cấp tính bán cấp tính Hơn nữa, đánh giá tác dụng EtPV bệnh viêm khớp dạng thấp (RA) chuột, Swiss cung cấp chứng khoa học cho việc phát triển phương thuốc thảo dược chống RA có nguồn gốc từ Sacha inchi Nghiên cứu chứng minh EtPV an toàn xét nghiệm độc tính cấp tính bán cấp tính, khơng quan sát thấy độc tính tác dụng phụ Hơn nữa, EtPV cho thấy giảm đáng kể triệu chứng RA, bao gồm sưng khớp mức độ nghiêm trọng viêm khớp, với điều chỉnh tích cực cytokine gây viêm cải thiện mô bệnh học Những phát cho thấy EtPV hứa hẹn phương pháp điều trị an toàn hiệu RA, đảm bảo khám phá sâu y học cổ truyền Tiếng Anh Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) is a well-known plant traditionally used for both dietary and medicinal purposes due to its diverse phytochemical composition, including saponins, alkaloids, flavonoids, tannins, terpenoids, and phenolic compounds, which exhibit antimicrobial, anti-inflammatory, antioxidant, and analgesic properties This study investigated the safety and therapeutic potential of ethanol extract from Sacha Inchi leaves (EtPV) through acute and sub-acute toxicity tests Furthermore, it evaluated EtPV's effects on rheumatoid arthritis (RA) in Swiss albino mice, providing scientific substantiation for the development of an anti-RA herbal remedy derived from Sacha Inchi leaves The study demonstrated that EtPV was safe in both acute and sub-acute toxicity tests, with no observed toxicity or adverse effects Moreover, EtPV exhibited a significant reduction in RA symptoms, including joint swelling and arthritis severity, along with positive modulation of inflammatory cytokines and histopathological improvements These findings suggest that EtPV may hold promise as a safe and effective treatment for RA, warranting further exploration in traditional medicine III Sản phẩm đề tài, công bố két đào tạo 3.1 Kết nghiên cứu (sản phẩm dạng 1,2,3) Dạng III: Bài báo Nơi công bố (IƯH, Tên báo TT Ghi ISI, SCOPUS) Evaluation of Acute and Subchronic Toxicity Induced by Tạp chi Scopus the Crude Ethanol Extract QỈPlukenetia voỉubiỉis Linneo (Q2) Leaves in Swiss Albino Mice Anti-Arthritis Effect of Ethanol Extract of Sacha inchi Tạp chi Scopus (Plukenetia volubilis L.) Leaves Against Complete (Q2) Freund’s Adjuvant-Induced Arthritis Model in Mice 3.2 Kết đào tạo: Không IV Tình hình sử dụng kinh phí Khoản chi Tổng kinh phí 55,000,000 Cơng lao động Ngun vật liệu, thiết bị, máy móc Chi khác 48,052,500 6,947,500 Phụ lục giải trình khoản chi Cơng lao động (khoa học, phổ thông) TT Nguôi thực Chức danh Nội dung công việc Tổng Số ngày công Hệ số tiền công/b> Đơn giá Thành tiền Lâm Thị Hoàng Mến Thành viên Hà Thị Luận Thành viên Phạm Quang Tiến Thành viên Nguyễn Ngọc Thanh Tú Thành viên Lập kế hoạch, bố trí thí nghiệm Triển khai thực nghiệm, thu thập số liệu Thu thập xử lý số liệu, viết báo cáo Bố trí thí nghiệm, triển khai thực nghiệm Cộng 12 0.43 1,490,000 7,688,400 25 0.43 1,490,000 16,017,500 25 0.43 1,490,000 16,017,500 13 0.43 1,490,000 8,329,100 48,052,500 Nguyên vật liệu, thiết bị, máy móc(/rểw 20 triệu cần có bảng báo giá đính kèm) TT SỐ lưọng Đơn giá Thành Nội dung Đon vị đo tiền Hóa chất xét nghiệm kg 1,250,000 5,000,000 Hóa chất mơi trường 1,947,500 1,947,500 kg Cộng 6,947,500 V Kiến nghị (về phát triển kết nghiên cứu đề tài) Sử dụng quy trình tiêu chuẩn hóa kỹ thuật đại sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), quang phổ phân tử ghép đôi (MS-GC, MS-HPLC) đo độ sáng màu sắc hợp chất dịch chiết dựa cường độ để xác định nồng độ phân tích thành phần hóa học thực vật dịch chiết Tiến hành nghiên cứu chuyên sâu hon nữa, sử dụng phưong pháp Khả hấp thụ gốc oxy (ORAC) Khả chống oxy hóa tưong đưong Trolox (TEAC) 2,2-diphenyl-lpicrylhydrazyl (DPPH) để đo khả chống oxy hóa chiết xuất Sử dụng kỹ thuật PCR thời gian thực (RT-PCR) để định lượng mức độ biểu gen liên quan đến tình trạng viêm oxy hóa tế bào sau xử lý chiết xuất Sử dụng phưong pháp phân tích liên kết DNA đánh giá biểu gen NF-kB để xác định hoạt động protein việc điều chỉnh tình trạng viêm, nhằm đánh giá toàn diện hon tiềm y học truyền thống EtPV đặc tính chống oxy hóa chống viêm -2 ■ , r, t z ft ft -r * VI Phụ lục sản phâm (liệt kê minh chứng sản phâm nêu Phân III): Không Tp HCM, ngày tháng năm Chủ nhiệm đề tài Phòng QLKH&HTQT (ĐƠN VỊ) Trưởng (đơn vị) (Họ tên, chữ ký) PHẰN II BÁO CÁO CHI TIẾT ĐÈ TÀI NGHIÊN cứu KHOA HỌC (báo cáo tổng, kết sau nghiệm thu, bao gồm nội dung góp ý hội đồng nghiệm thù) II Kết nghiên cứu Đặt vấn đề Viêm khớp dạng thấp (RA) bệnh thấp khớp mãn tính, bệnh tự miễn, xảy hệ thống miễn dịch bị rối loạn, công vào màng hoạt dịch khiến màng hoạt dịch viêm đặc hiệu, tích tụ nhiều dịch rỉ viêm gây tổn thưong sụn khớp đầu xưong sụn Bệnh gây thay đổi khớp mơ bị dính biến dạng, ảnh hưởng đến tim, mắt, phổi, gây biến chứng loãng xưong, huyết áp, tim mạch, suy thận [1] Trong năm gần xu hướng mắc bệnh viêm khớp dạng thấp ngày gia tăng Nguyên nhân chủ yếu gây bệnh chế độ sinh hoạt không điều độ, virus công, yếu tố tuổi tác, di truyền, dẫn đến rối loạn hệ thống miễn dịch Theo thông tin từ Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh có khoảng 0,5% dân số Việt Nam 0,5-3% dân số Thế giới mắc bệnh [2] Trong Tây y, việc sử dụng thuốc có chứa thành phần corticoid có đặc tính kháng viêm tác động lên giai đoạn cuối trình tổng hợp prostaglandin, ức chế miễn dịch để chữa bệnh viêm khớp thông dụng [2] Tuy nhiên, lâu dài corticoid gây số tác dụng phụ biến dạng khớp, da mỏng, bị bầm, cushing thuốc, loãng xưong, viêm loét dày tá tràng, [3] Hiện nay, y học Phương đông truyền thống sử dụng thảo dược dân gian ngải cứu (Artemisia vulgaris), đau xương (Tinospora sinensis'), lot (Piper sarmentosum), đỗ trọng (Eucommia uỉmoides), điều trị RA có hiệu rõ rệt dần người bệnh quan tâm Thảo dược dân gian gây tác dụng phụ, tác dụng chữa trị tích tụ dần thể qua trình điều trị kháng lại u tố bất lợi kích thích hợp chất có lợi khác thể hoạt động [4] Trong năm gần đây, biện pháp chữa bệnh sử dụng thảo dược chất bổ sung vào chế độ ăn uống để ngăn ngừa bệnh tật ngày phổ biến Theo WHO, khoảng tỷ người (80% dân số) giới phụ thuộc vào y học cổ truyền để chăm sóc sức khỏe ban đầu [5] Việc sử dụng chiết xuất thảo dược cho thấy tiềm đầy hứa hẹn với nhu cầu tồn cầu cao, cịn nhiều lo ngại độ an toàn chúng [6] Các khảo sát nhiều sản phẩm sử dụng y học cổ truyền gây tác dụng phụ [7] Vì việc tiến hành nghiên cứu độc tính thuốc để xác định tính an tồn trước sử dụng cần thiết Đánh giá tác dụng độc học chiết xuất thuốc dự định sử dụng cho động vật người khía cạnh quan trọng việc trừ tác dụng độc hại tiềm ẩn [8] Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) lồi thực vật có nguồn gốc từ rừng rậm Amazon, thuộc họ Europhorbiaceae Sacha inchi sử dụng làm nguồn thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao Chúng cơng nhận có lợi ích tiềm sức khỏe người Hạt Sacha inchi chứa axit béo khơng bão hịa đa, a-linolenic (ALA), linoleic (LA), gốc (0-3, co -6, 6-tocopherol, dạng tự nhiên vitamin E biết đến với hoạt động chống oxy hóa tiềm chống khối u [9] Sự diện terpenoid, saponin, tannin, glycosid, phytosterol hợp chat phenolic chiết xuất ethanol Sacha inchi cho thấy hoạt tính sinh học chúng kháng khuẩn, kháng viêm, chống oxy hóa giảm đau Các flavonoid Sacha inchi khả ngăn ngừa hình thành loại bỏ gốc tự Chiết xuất Sacha inchi làm giảm khả sống sót té bào ung thư biểu mô phổi cổ tử cung người [10] Quả hạch có hàm lượng a-tocopherol cao chất chuyển hóa hoạt động vitamin E có khả chống oxy hóa, bảo vệ axit béo khơng bão hịa khỏi q trình oxy hóa [11] Dầu hạt Sacha inchi có khả loại bỏ bám dính vi khuẩn Staphylococcus aureus da Theo kinh nghiệm truyền thống dầu hạt Sacha inchi sử dụng để điều trị vết thưong da, giữ ẩm làm liền sẹo [12] vỏ hạt Sacha inchi dùng để xử lý nước chúng có khả hấp thụ sinh học ion Pb2+ Cu2+ [13] Trong dân gian Sacha inchi sử dụng nhiều điều trị bệnh đường tiêu hóa, tiểu đường, chữa viêm đau khớp, Gần đây, Tran Tran (2021) [14] chứng minh việc sử dụng chiết xuất ethanol từ Sacha inchi an toàn Tác dụng điều trị bệnh viêm khớp dạng thấp chiết xuất ethanol Sacha inchi chứng minh qua nghiên cứu Tran cộng (2023) [15] Trong nghiên cứu này, chúng tơi đánh giá tính an toàn hiệu kháng viêm điều trị viêm khớp dạng thấp chuột Swiss albino chiết xuất ethanol Sacha inchi (Plukenetia voỉubilis L.) Mục tiêu Đe tài đánh giá tính an tồn, khả kháng viêm khớp dạng thấp in vivo chuột chiết xuất ethanol Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) Tổng quan tài liệu Trong lịch sử, y học cổ truyền sử dụng ỏ nhiều quốc gia để điều trị nhiều loại bệnh [16] Các hóa chất thực vật có hoạt tính sinh học từ ngun liệu thực vật có nguồn gốc tự nhiên tổng hợp tưong tự hợp chất tự nhiên ngày coi nguồn dược phẩm Tuy nhiên, có chứng cho thấy số chiết xuất thảo dược gây tác dụng phụ trình điều trị [17], làm dấy lên mối lo ngại tính an toàn thuốc thảo