CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập Tự do Hạnh phúc Đơn vị chủ trì Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KÉT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ GIẢNG VIÊN 2020 Tên đề tài NGHIÊN CỨU THÀNH PHÀN.
CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KÉT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2020 Tên đề tài: NGHIÊN CỨU THÀNH PHÀN HÓA HỌC RẺ CÂY DÂY KHAI (COPTOSAPELTA FLAVESCENS KORTH., RUBIACEAE) Số hợp đồng: 2020.01.085 Chủ nhiệm đề tài: ThS Bùi Hoàng Minh Đơn vị công tác: Khoa Dược, ĐH Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: 03/2020 - 11/2020 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU, sơ ĐỒ, HÌNH ẢNH iv CHƯƠNG 1.1 TÔNG QUAN TÀI LIỆU Tổng quan đặc điểm thực vật học 1.1.1 Vị trí bảng phân loại thực vật 1.1.2 Loài Coptosapelta flavescens Korth 1.2 Tổng quan tài liệu thành phần hóa học tác dụng dược lý 1.2.1 Ngoài nước 1.2.2 Trong nước CHƯƠNG 2.1 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu 2.1.2 Dụng cụ, trang thiết bị 2.1.3 Dung mơi hóa chất .7 2.2 Phưong pháp nghiên cứu 2.2.1 Khảo sát sơ thành phần hóa thực vật cao rễ dây Khai 2.2.2 Chiết xuất, phân lập tinh chế 2.2.3 Xác định cấu trúc chất phân lập CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 10 3.1 Khảo sát sơ thành phần hóa thực vật cao rễ dây Khai 10 3.2 Chiết tách phân đoạn từ cao rễ dây Khai 10 3.3 Phân lập tinh chế 11 3.3.1 Phân tách phân đoạn CHCL 11 3.3.2 Phân tách phân đoạn X 13 3.3.3 Phân tách phân đoạn III 14 3.4 Xác định độ tinh khiết xác định cấu trúc chất phân lập 16 3.6.1 ChấtCi 16 3.6.2 Chất c2 .20 KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 24 4.1 Kết luận 24 4.2 Kiến nghị 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC -1 - ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẤT CHCh Chloroform COSY Collerated Spectroscopy - (phổ) tương quan 1H-1H CTPT Công thức phân tử d doublet dd doublet of doublet DMSO Dimethyl sufoxit DPPH 2,2-diphenyl-1 -picrylhydrazyl EtOAc Ethyl Acetat EtOH Ethanol HMBC Hetemonuclear Multiple Bond Correlation HSQC Hetemonuclear Single Bond Correlation SKLM Sac ký lớp mỏng MS Mass spectrometry - khối NMR Nuclear Magnetic Resonance- Cộng hưởng từ hạt nhân PE Pethol ether PTK Phân tử khối s singlet TMS Tetra Methyl Silan uv Ultraiolet - tử ngoại VS Vanilin Sulfuric iii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU, sơ ĐỊ, HÌNH ẢNH Danh mục Bảng Bảng 3.1 Bảng kết khảo sát hóa thực vật cao rễ dây Khai 10 Bảng 3.2 Ket phân đoạn từ sắc ký cột phân đoạn CHCI3 12 Bảng 3.3 Ket phân đoạn từ sắc ký cột phân đoạn III 15 Bảng 3.4 Dữ liệu phổ NMR C1 (500MHz, pyridine-í/5) 17 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR c2 (500MHz, CDCI3) 21 Danh mục Hình Hình 1.1 Đặc điểm hình thái dây Khai Hình 3.1 Sơ đồ kết chiết tách phân đoạn từ cao rễ dây Khai 10 Hình 3.2 Sắc ký đồ phân đoạn CHCI3 11 Hình 3.3 Sắc ký đồ phân đoạn từ sắc ký cột phân đoạn CHCI3 13 Hình 3.4 Sắc ký đồ tủa x.l 13 Hình 3.5 Sắc ký đồ phân đoạn III 14 Hình 3.6 Sắc ký đồ phân đoạn từ sắc ký cột phân đoạn III 16 Hình 3.7 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết C1 mỏng 17 Hình 3.8 Cấu trúc C1 số tương tác HMBC phổ NMR 20 Hình 3.9 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết C2 mỏng 21 Hình 3.10 Cấu trúc C2 số tương tác HMBC phổ NMR 23 IV TÓM TẮT KÉT QUẢ NGHIÊN cứu STT Công việc thực So hóa thực vật cao rễ Kết đạt Bảng kết sơ hóa thực vật dây Khai Chiết tách Phân lập, xác định cấu chất từ phân đoạn CHCI3 phân đoạn: CHCI3, EtOAc, n-BuOH trúc + Ci: acid 3/?-O-(D-quinovopyranosyl)-olean-13-en-27-oic + C2: 3yổ-hydroxy-urs-13-en-27-oic STT í Sản phẩm đăng ký Sản phẩm đạt Báo cáo tổng kết kết nghiên Báo cáo tổng kết cứu đề tài báo đăng tuyển tập Bài báo đăng tạp chí nghiên cứu nghiên cứu khoa học trường khoa học Thời gian thực hiện: 03/2020 - 11/2020 Thời gian nộp báo cáo: V CHƯƠNG l.TỐNG QUAN TÃI LIỆU 1.1 Tổng quan đặc điểm thực vật học 1.1.1 Vị trí bảng phân loại thực vật Theo hệ thống phân loại Takhtajan, vị trí dây Khai (Coptosapelta flavescens Korth.) xếp sau: Giới thực vật (Plantea) Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lóp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lóp Hoa môi (Lamiidae) Bộ Cà phê (Rubiales) Họ Cà phê (Rubiaceae) Chi Coptosapelta Loài flavescens Korth [12] 1.1.2 Loài Coptosapelta flavescens Korth Tên khoa học: Coptosapelta flavescens Korth họ Cà phê (Rubiaceae) Tên đồng danh: Coptosapelta tomentosa (Blume) Vahl ex Heyne var dongnaỉensỉs (Pit.) Phamh, Coptosapelta flavescens var dongnaiensis Pierre ex Pit Tên Việt Nam: Dây khai, Vàng hoan, Dây cổ rùa, Dây họng trâu [4], • Đặc điểm thực vật học: Hoa Quả Hình 1.1 Đặc điểm hình thái dây Khai Loài dây leo, dài 5-7 m, Cành trịn, màu nâu sẫm, lúc non có lơng, sau nhẵn Lá mọc đối, có cuống ngắn, hình bầu dục hình trứng dài 4,5-11 cm, rộng 2,5 - cm, gốc tròn, đầu nhọn; mặt xanh lục, mặt nhạt, có lông nhỏ gân, kèm rụng sớm Cụm hoa mọc đầu cành thành xim, dài 6-8 cm, có lơng; hoa màu vàng, mùi thom hắc, đài có ống hép dại, có lơng; tràng cánh thn nhằn, có ống dài có lơng; nhị đính họng tràng; bầu ơ, nhẵn Quả nang, có núm nhọn đầu, chín nứt làm 2-3 mảnh, chứa nhiều hạt nhỏ có cánh mỏng Rễ chặt có mùi khai nồng, khó chịu nên gọi dây Khai hay rễ Khai [4], • Bộ phận dùng: Rễ dây Khai, thu hái quanh năm, dùng tươi hay khơ [4], • Cơng dụng: Rễ dây Khai dùng đễ chữa vết thương phần mềm (đắp sắc nước uống), giúp vết thương mủ, chóng sinh cơ, mau lên da non Nhân dân Quảng Ngãi dùng rễ Khai làm thuốc bổ máu cho sản phụ giúp lợi sữa, thông huyết dịch Cịn dùng xơng để trị cảm cúm [4], Ở Malaysia, rễ dây Khai dùng dạng nước sắc để diệt giun, chữa đau bụng, sốt, viêm loét mũi [4], Ngoài rễ dùng để chữa kiết lỵ [6] 1.2 Tổng quan tài liệu thành phần hóa học tác dụng dược lý 1.2.1 Ngoài nước: Hiện nay, giới, phân bố đặc hữu, cịn nghiên cứu lồi - Trong nghiên cứu sàng lọc in vitro 21 mẫu dược liệu dùng y học dân tộc Thái Lan để chữa tiêu chảy, kiết lị, dịch chiết aceton c flavescens có hoạt tính mạnh mơ hình thử nghiệm với E histoỉistỉca G instestỉnalỉs Từ cao aceton này, năm 2014 nhóm nghiên cứu Thái Lan phân lập dẫn chất anthraquinon: l-hydroxy-2-hydroxymethylanthraquinon Ở nồng độ thử nghiệm 20 pg/ml, chất có khả ức chế phát triển E histolỉstỉca tương đương Metroninazol (2,5 pg/ml) đặc biệt với nồng độ 2,5 pg/ml, 1hydroxy-2-hydroxymethylanthraquinon cho khả ức chế mạnh Metronidazol G ỉnstestinalis sau ủ 12 [7], Một năm sau, nhóm nghiên cứu tìm chế tác động l-hydroxy-2- hydroxymethylanthraquinon G instestinalis giá trị IC50 = 0,42 pg/ml, chất gây biến đổi màng tế bào cảm ứng apoptosis sau lô thử với Metronidazol chưa có thay đổi đáng kể [6] - Năm 2014, Thái Lan, nhóm nghiên cứu Wipapan Kongyen cộng phân lập dẫn chất Anthraquinon dẫn chất Naphtoquinon từ dịch chiết aceton rễ c flavescens Dựa các phương pháp phổ, cấu trúc hóa học chất xác định l,4-dimethoxy-2-methylanthraquinon (4), 2- amino-3-methoxycarbonyl-1,4-naphthoquinon (5), l-hydroxy-2-hydroxymethyl- anthraquinon (6), l-hydroxy-2-methoxycarbonyl-anthraquinon (7) 2- methoxycarbonyl-anthraquinon (8) Bên cạnh đó, chất tiến hoạt tính sinh học bao gồm: kháng khuẩn (với SA MRSA), chữa kiết lỵ độc tế bào (trên dòng tế bào ung thu thận - Vero cell) Ket cho thấy, dẫn chất anthraquinon, bao gồm: (5), (6), (7) cho tác động mức trung bình, đặc biệt (6) có hoạt tính ức chế G ỉnstestỉnalỉs với giá trị MIC 2,5 pg/ml tương đương với chứng dương Metronidazol Điều hợp lý dân gian, loài dùng để chữa kiết lỵ trẻ em Dịch chiết MeOH thân c flavescens chứng minh có khả hạ huyết áp Ket công bố vào năm 2017 nhóm nghiên cứu thuộc Indonesia Theo nghiên cứu này, dịch chiết MeOH thân c flavescens có tác dụng làm dãn mạch mơ hình gây co mạch vởi phenylephedrin chuột Nghiên cứu cho tác dụng gây polyphenol saponin có thân c flavescens kích hoạt phóng thích NO nội sinh gây dãn mạch Năm 2018, khả kháng viêm ỉn vitro in vivo dịch chiết MeOH rễ c flavescens chứng minh qua nghiên cứu Indonesia Khi so sánh với chứng dương Indomethacin, dịch chiết MeOH từ rễ cho giá trị ECso thấp (1,90 mg/ml so với 10,29 mg/ml) thử nghiệm kháng viêm màng hồng cầu Còn mơ hình gây phù chân chuột carragenan, liều thử 1200 mg/kg cao MeOH cho khả kháng viêm tương đương 20 mg/kg Indomethacin BRUKE Current Data Parameters NAME 110MINH_Cl.l EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20201026 Time 22.33 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT Pyr NS 1536 DS SWH 31250.000 Hz FIDRES 0.476837 Hz AQ 1.0485760 sec RG 198.57 DM 16.000 usee DE 6.50 usee TE 302.9 K DI 2.00000000 sec Dll 0.03000000 sec TDO ======= CHANNEL fl ======== SFO1 125.7990329 MHz NUC1 13C Pl 10.00 usee PLW1 88.00000000 w ======= CHANNEL f2 ======== SFO2 500.2410010 MHz NUC2 1H CPDPRG[2 waltzl6 PCPD2 80.00 usee PLW2 22.00000000 w PLW12 0.35764000 w PLW13 0.17989001 w F2 - Processing parameters SI 32768 SF 125.7853604 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB PC 1.40 “I -' - - ' -1 ■“ 40 20 ppm C1.1-Pyridine-1H 748 BRỤKER Dữ liệu phô 1H-NMR C1 (500MHz, pyridine-áh) Current Data Parameters NAME 11OMINH_C1.1 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20201026 Time 21.12 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT Pyr NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2767999 see RG 72.05 DW 50.000 usec DE 6.50 usec TE 302.0 K DI 1.00000000 see TD0 ======== CHANNEL fl ======== SFO1 500.2420892 MHz NUC1 1H Pl 10.20 usee PLW1 22.00000000 w F2 - Processing parameters SI 65536 SF 500.2397570 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 ppm Dữ liệu phô 1H-NMR C1 (500MHz, pyridine-ế/5) trích vùng 2,8-4,2 ppm 4*994 _ "'"-4*840 4*138 4*130 4*120 4*113 4*103 -4*020 4*005 ^-3*987 3*805 3*799 3*793 3*787 3*781 3*775 3*763 3*721 3*711 3.703 3*685 3*406 3*398 =^3.383 \-3.374 2*849 2*842 2*826 2*818 -4- Dữ liệu phơ 1H-NMR C1 (500MHz, pyridine-d5) trích vùng 0,7-2,6 ppm 2.270 2.250 2.243 2.192 2.159 2.151 2.132 2.123 2.096 2.070 2.051 2.038 2.022 2.009 1.936 1.910 1.906 1.816 1.791 1.777 1.770 1.763 1.743 1.691 1.684 1.674 1.663 1.647 1.635 1.576 1.562 1.545 1.541 1.518 1.473 1.464 1.447 1.438 1.421 1.413 1.320 1.290 1.281 1.262 1.238 1.221 1.212 1.203 1.196 1.176 1.170 1.076 1.069 1.054 1.001 0.982 0.972 0.961 0.948 0.930 0.923 0.915 0.901 0.88 0.818 0.794 0.772 0.757 0.748 -5 Q I ịK PP* W3 rô I X Cl.1-Pyridine-C13CPD &DEPT DEPT90 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm DEPT135 Dữ liệu phô DEPT C1 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 ■■I I I I I I I 60 50 40 30 20 10 ppm C13CPD "'I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm Dữ liệu phô HSQC C1 C1.1-Pyridine-HSQC -7- Dữ liệu phơ HSQC C1 trích vùng 0,6-3,0 ppm C1.1-Pyridine-HSQC ppm 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0 1.8 1.6 -8- 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 ppm Dữ liệu phô HMBC C1 -9- Dữ liệu phô COSY C1 Cl.1-Pyridine-COSYGP BRUKER Current Data Parameters NAME 110MINH-C1.1 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20201027 Time 0.41 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG cosygpppqf TD 2048 SOLVENT Pyr NS DS StìH 4807.692 Hz FIBRES 2.347506 Hz AQ 0.2129920 sec RG 30.85 DH 104.000 usec DE 6.50 usec TE 302.0 K DO 0.00000300 see DI 1.94019794 see Dll 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D13 0.00000400 sec DI6 0.00020000 sec INO 0.00020800 sec ——— CHANNEL fl - = SFO1 500.2419948 MHz NUC1 1H PO 10.20 usee Pl 10.20 usee P17 2500.00 usee PLH1 22.00000000 w PLW10 2.54320002 w ===== GRADIENT CHANNEL == GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 10.00 s P16 1000.00 usee Fl - Acquisition parameters TD 128 SFO1 500.242 MHz FIDRES 37.560097 Hz SM 9.611 ppm FnMODE QF F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.2390000 MHz HDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.40 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 - 10- 1.5 1.0 ppm Fl - Processing parameters SI 1024 MC2 QF SF 500.2390000 MHz HDtí QSINE SSB LB Hz GB Dữ liệu phô HRMS-ESI c2 SCIEx) Created with SCIEX OS 1.2 CENTER FOR RESEARCH AND TECHNOLOGY TRANSFER PHARMACEUTICAL CHEMISTRY LABORATORY 01, Mac Dinh Chi St., Dist 1, Ho Chi Minh City, Vietnam Phone: (84) 907 070 939 ANALYSIS REPORT Injection details Sample name Sample file name Acquisition date Operator C2-CF SER wiff2 - GIANG 10/11/2020 05:48:27 PM CB21261708 Vial position Inject volume Acquisition method Instrument name 31 5.00 ESI _NEG_SCAN X500r QTOF Full mass spectrum Spectrum from C2-CF_(-)ES 2020-11-10-17-48-27.wiff2 (sample 1) - C2-CF_(-)ESI, -TOF M om 0.143 min, noise filtered (noise multiplier = 1.5), Gaussian smoothed (0.5 points) \ 441.3375 2.5e5 2.0e5 “ 1.5e5 I 1.0e5 £ 442.3417 5.0e4 O.OeO*—— 100 311.1696 443 3456 799.6466 509.3260 200 300 500 400 905.6652 _ _ 1_ I I ,1. _._ T _ , _ , _ , _ ,_ _ , _ _ _ ,hi _ ,_ 11 1,1.1 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 1400 Mass/Charge, Da Expanded spectrum Spectrum from C2-CF_(-)ES 2020-11-10-17-48-27.wiff2 (sample 1) - C2-CF_(-)ESI, -TOF M om 0.143 min, noise filtered (noise multiplier = 1.5), Gaussian smoothed (0.5 points) 2.5e5 441.3375 2.0e5 I 1.5e5 I 1.0e5 442.3417 5.0e4 439.3226 443.3456 455.3536 487.3430 -L _ O.OeO* 400 410 420 430 440 450 460 470 480 490 500 Mass/Charge Da Molecular formula prediction Page of - 11 - C2.1-CDC13-C13CPD Dữ liệu phô 13C-NMR C1 (125MHz, CDCh) Current Data Parameters NAME 110MINH_C2.1 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20201027 Time 1.23 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT CDC13 NS 512 DS SWH 31250.000 Hz FIDRES 0.476837 Hz AQ 1.0485760 see RG 198.57 DW 16.000 usec DE 6.50 usec TE 302.5 K DI 2.00000000 see Dỉl 0.03000000 see TD0 ======= CHANNEL fl ====== SFO1 125.7990329 MHz NUC1 13C Pl 10.00 usee PLW1 88.00000000 w == CHANNEL f2 ======== SFO2 500.2410010 MHz NUC2 1H CPDPRG[2 waltzl6 PCPD2 80.00 usee PLW2 22.00000000 w PLW12 0.35764000 w PLW13 0.17989001 w F2 - Processing parameters SI 32768 SF 125.7851951 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB —! - , -ị - , - ị T I - , - I , - , - J , - - , - ị - , - , ị- 220 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 ppm Dữ liệu phô 1H-NMR c2 (500MHz, CDCh) C2.1-CDC13-1H r-ir-ir-irHr-ir-ir-ir-i^r-lr-iciQQOQOOQOOOOQOOOO V// \ĩ ĩ ĩ \ W/Z - 13 - Dữ liệu phô HSQC C2 - 15 - Dữ liệu phô HMBC C2 - 16- Dữ liệu phô COSY C1 C2.1-CDC13-COSYGP BRÙKER Current Data Parameters NAME 110MINH_C2.1 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20201027 Time 2.13 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG cosygpppqf TD 2048 SOLVENT CDC13 NS DS SWH 5952.381 Hz FIBRES 2.906436 Hz AQ 0.1720320 see RG 64.21 DW 84.000 usee DE 6.50 usec TE 302.1 X DO 0.00000300 see DI 1.98115802 see Dll 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D13 0.00000400 sec DI6 0.00020000 sec INO 0.00016800 sec ======== CHANNEL fl ======= SFO1 500.2400686 MHz NUC1 1H PO 10.20 usee Pl 10.20 usee P17 2500.00 usee PLH1 22.00000000 N PLtflO 2.54320002 H == GRADIENT CHANNEL ===== GPNAMỊ1] SMSQ10.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usee Fl - Acquisition parameters TD 128 SFO1 500.2401 MHz FIDRES 46.502975 Hz sw 11.899 ppm FnMODE QF F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.2390121 MHz NDti QSINE SSB LB Hz GB PC 1.40 Fl - Processing parameters SI 1024 MC2 QF SF 500.2390121 MHz NDW QSINE SSB LB Hz GB - 17- ... 3 0,8 3 4,6 3 1,7 l,45m; 1,2 3/77 2,1 3/77; 1,7 5/77 1 6,6 2 8,2 1 6,7 2 0,7 18 0,2 3 2,5 2 5,1 10 6,7 7 6,8 7 8,3 7 5,9 7 2,7 1 8,8 0,9 75 1,3 2s 0,7 7s 0,9 8s 0,9 5s 1,0 0s 4,8 5 /7(1 H; 7,5 Hz) 3,7 07 4,1 27 4,0 07 3,7 9/77... 3,7 9/77 l,64d(? ?,? ??Hz) - - - 18 0,2 ; 4 5,2 ; 3 4,6 ; 3 0,8 ; 8 8,9 ; 5 5,7 ; 3 7,9 ; 2 8,2 8 8,9 ; 5 5,7 ; 3 9,6 ; 1 6,6 5 6,4 ; 37.9 136.8; 5 6,4 ; 2 5,1 ; 3 1,7 ; 3 4,6 ; 4 1,7 3 1,7 ; 4 1,7 ; 7 2,7 ; 7 5,9 ; 8 8,9 - 2,1 3/77 1,2 3/77 1,4 5/77... 3 8,7 2 7,4 7 9,1 3 8,8 5 5,3 1 8,0 3 8,2 3 9,7 5 6,3 3 7,2 1 9,7 3 5,2 13 0,9 13 9,5 1 8,4 2 2,3 4 7,5 5 0,0 38.3 4 0,0 3 0,5 'H COSY (./ Hz) HMBC (H^ Cn) 1,8 /77; 1,1 6/77 1,6 0/77 3,2 044(1 1,5 Hz; Hz) 0,7 6/77 1,5 4/77;