Thông tin tài liệu
NTTU-NCKH-04 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tụ - Hạnh phúc Đon vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỎNG KÉT ĐỀ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2018 Tên đê tài: Nguyên cứu thành phan hóa học hoạt tính ức chê enzym acetylcholinesterase phân đoạn dịch chiết từ mật gâu (Vernonia amỵgdalina Del), họ Cúc (Asteraceae) Sổ hợp đồng: 2018.01.45 Chủ nhiệm đê tài: DS Dưong Đinh Chung Đon vị công tác: Khoa Dược Thời gian thực hiện: 06 tháng TP Hồ Chí Minh, ngày 16 tháng 11 năm 2018 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đon vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỎNG KÉT ĐẺ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2018 Tên đề tài: Nguyên cứu thành phần hóa học hoạt tính ức chế enzym acetylcholinesterase phân đoạn dịch chiết từ mật gấu (Vernonia amygdalina Del.), họ Cúc (Asteraceae) Sổ hợp đồng: 2018.01.45 Chủ nhiệm đề tài: DS Dương Đinh Chung Đơn VỊ công tác: Khoa Dược Thời gian thực hiện: 06 tháng Các thành viên phối hợp cộng tác: STT Họ tên Nguyễn Hữu Khánh Quan Chuyên ngành Dược Sĩ Cơ quan công tác Khoa Dược Ký tên MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẤT iv DANH MỤC HÌNH ẢNH V DANH MỰC CÁC BẢNG vi TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN cứu vii MỔ ĐẨU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan thực vật học mật gấu 1.1.1 Họ Asteraceae 1.1.2 Chi Vernonia 1.1.3 Lồi Vemonìa Amygdalina Del 1.1.4 Mô tả thực vật Vernonia Amygdalina Del 1.1.5 Phân bố 1.1.6 Bộ Phận dùng .7 1.2 Thành phần hóa học Mật gấu 1.2.1 Thành phần hóa học 1.2.2 Các họp chat thứ cap Mật gấu 1.3 Tác dụng sinh học Mật gấu 1.3.1 Điều tiị sốt rét 1.3.2 Khả chống oxy hoá 10 1.3.3 Tác dụng bào vệ gan 10 1.3.4 Hạ đường huyết 11 1.3.5 Khả kháng khuân, kháng nấm 12 1.3.6 Khả kháng ung thư 12 i 1.4 Acetylcholin, enzym acetylcholinsterase giả thuyết vai trò hệ cholinergic bệnh Alzheimer 12 1.4.1 Bệnh Alzheimer 12 4.2 Đặc điểm lâm sàng bệnh Alzheimer 13 1.4.3 Điều trị bệnh Alzheimer 14 1.4.4 Acetylcholin - enzym acetylcholinsterase 15 1.5 Phương pháp sàng lọc hoạt tính ức chẻ enzym acetylcholinstera.se in vitro 19 1.5.1 Phương pháp sử dụng thuốc thử Ell man 19 1.5.2 Kỹ thuật quang phổ 20 1.5.3 Kỹ thuật sắc ký lớp mỏng 20 1.5.4 Phương pháp sử dụng thuốc thử muối Fast Blue B 21 1.5.5 Kỹ thuật quang phổ 21 1.5.6 Kỹ thuật sắc ký lóp mỏng 21 CHƯƠNG ĐỔI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIẺN CÚƯ 22 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 23 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.2 Hóa chất, dung môi 23 2.1.3 Dụng cụ, máy móc, thiết bị 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Chiết xuất hoạt chất từ mẫu nghiên cứu 23 2.2.2 Xác định sơ thành phan hóa học 24 2.2.3 Phương pháp xác định hoạt tính ức chế enzym AChE 25 2.2.4 Xác định đặc điẻm động học ức che enzym AChE 28 2.3 Phương pháp xử lý kết 29 CHƯƠNG KỂT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 30 3.1 Chiết xuất phàn đoạn dịch chiết Mật gấu 30 ii 3.2 Kết sơ thành phần hóa học dịch chiết Mật gấu 30 3.3 Ket quà khảo sát anh hường cúa nồng độ dung dich chàt ACT1 thuốc thừ DTNB đèn phương pháp thử 31 3.4 Kết quà đánh giá tác dụng ức chế enzym AChE in vitro Mật gàu (V amygdalina Del., họ Ateraceae) 32 3.5 Kết xác đinh động học ức chế enzym AChE cỉia phàn đoạn EtOAc dịch chiết Mật gấu (Vernonia Amygdalina Del., họ Ateraceae) 35 3.6 Bàn luận 37 3.6.1 Phương pháp đánh giá tác dụng ức chế enzym AChE 37 3.6.2 Khả ức chế enzym AChE in vitro Mật gấu 37 CHƯƠNG KỂT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .41 4.1 Kết luận .41 4.2 Đe nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHÁO 42 iiỉ DANH MỰC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIÈT TẮT Ký hiệu AChE Diễn giải Enzym Acetylcholinesterase ACh Acetylcholine ACTI Acetylthiocholin iodid DTNB Acid 5-5"-dithiobis-2-nitrobenzoic EtOH Ethanol nAChRs Receptor nicotinic acetylcholin MeOH Methanol EtOAc Ethyl acetat n-BuOH n-Butanol SD cv Standard Deviation Coefficient of Variation iv DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Hình V amygdalina: a Cây V amygdalina; b, c Hoa cùa V amygdalina; d Lá V amygdữlina Hình 1.2 Sơ đồ trình thủy phân Ach enzym AchE 17 Hình 1.3 Sơ đồ q trình sinh tơng hợp Acetylcholin 18 Hình 1.4 Vị trí hoạt động be mặt enzym acetylcholin 19 Hình 2.1 Sơ đồ chiẻt xuất phân đoạn tù Mật gấu 24 Hình 2.2 Sơ đồ phân ứng tạo màu với thuốc thử Elman1 25 Hình 2.3 Sơ đo quy trình thử nghiệm tác dụng ức che AChE in vitro 'll Hình 2.4 Sơ đồ quy trinh đánh giá đặc điểm động học ức chế AChE in vitro 29 Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phàn đoạn Mật gấu 30 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn IC50 cùa phàn đoạn cao galantamin 33 Hình 3.3 Đồ thi biẻu diễn khả ức chế enzym AC11E phàn đoạn dịch chiết từ Mật gấu 34 Hình 3.4 Đồ thi biểu diễn khả ức chế enzym AChE chất đối chiếu galantamin 34 Hình 3.5 Đồ thị Lineweaver - Burk cho phân đoạn (Ịch chiết EtOAc 35 Hình 3.6 Đồ thị Dixon plot cho phàn đoạn dich chiết EtOAc để xác định Ki 36 V DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng l.l.Thành phần hóa học 100 g Mật gấu Bảng 2.1 Thành phần phản ứng ACTI DTNB ảnh hưởng đến phương pháp 26 Bảng 3.1 Kết phàn tích sơ thành phần hóa học dịch chiết Mật gấu 31 Bảng 3.2 Anh hưởng nồng độ chat ACTI thuốc thử DTNB đên phương pháp thủ’ 31 Bảng 3.3 Phân tích Anova so sánh ảnh hường nồng độ chat ACTI thuốc thìr DTNB đến phương pháp thừ 32 Bảng 3.4 Thảnh phan cùa hỗn họp phan ling hong thử nghiệm Ellman 32 Bâng 3.5 Giá tn IC50 phân đoạn cao chiết từ Mật gấu galantamin .33 vi TÓM TẮT KÊT QUẢ NGHIÊN cứu Sản phẩm thục đạt - Số liệu sơ thành phần hóa học dịch chiêt mật gau; - Khả ức chế emzym acetylcholinesterase phân đoạn: cao n- Hexan IC50 319,18 ± 50,66 pg/mL; cao chloroform IC50 174,96 ±4,95 pg/mL, cao n- Butanol IC50 113,02 ± 2,71 pg/mL, cao EtOAc 59,58 ± 0,99 pg/mL; - Đặc điểm động học phàn đoạn cao EtOAc: Kiểu ức chế hỗn họp với Ki = 188,7 ±ll,52pg/mL; - 01 đăng tạp chí Công Thương, số 11 năm 2018, ISSN 0866-0577 Sán phân đăng ký thuyết minh - Số liệu thành phần hóa học lồi V amygdalina; - Số liệu thử nghiệm in vitro ức chẻ emzym acetylcholinesterase; - 01 Bài báo tạp chí hong nước tập san nhà trường; - Hướng dẫn 01 Sinh viên tốt nghiệp chuyên nghành Dược Sĩ Thòi gian đăng ký : từ ngày 05/2018 đến ngày 11/2018 Thời gian nộp báo cáo: ngày 29/11/2018 vii MỞ ĐẦU Alzheimer hay biết bệnh sa sút trí tuệ Các nghiên cứu cho thày bệnh sinh phức tạp liên quan đến nhiều yếu tố myloid bet Ap 11 protein tau ,2', viêm thân kinh |3), tôn thương của synap tế bào thần kinh '4| ACh chất dẫn truyền thằn kinh trưng ương, truyền tín hiệu khe synapsis ACh bị thiìy phân enzym acetylcholinesterase (AChE), thành choline acetyl Bệnh nhân bị Alzheimer có sụt giảm đáng kề lượng acetylcholine (ACh)|5L Năm 2012, Tổ chức y tế giới cảnh báo mối lo ngại bệnh gây đưa bệnh Alzheimer vào vàn đẻ sức khòe cộng đong can ưu tiên |471 Nghiên cứu cho thấy có khoảng 35 triệu người mắc bệnh Alzheimer, thống kê châu Á có khoảng gàn 13 triệu người mắc bệnh Alzheimer, dự đoán đến năm 2050 số có thẻ tăng đèn 62,8 triệu người Việt Nam có khoảng triệu người bị sa sút trí tuệ mà dạng điển hình Alzheimer Đây coi bệnh nặng nhóm bệnh sa sút trí tuệ, moi quan tàm hàng đàu nhà lão khoa toàn giới nước ta tuổi thọ trung bình ngày cao, số người mac bệnh ngày nhiều |481 Các thuốc ức chế AChE đóng vai trò quan trọng việc ngăn chặn tiến triển bệnh Alzheimer Hiện số thuốc ức chế AChE sữ dụng lâm sàng donepezil, galantamin, nvastigmin thuốc tăng cường hoạt tính serotonin ,491 Tuy nhiẻn nhược điểm cùa thuốc có số phàn ứng bất lợi, chẳng hạn bn nơn, nơn mửa, tiêu chây đau bling, khó tiêu phát ban da '6|, Do nhu cầu nghiên cứu phát triển thuốc có nguồn gốc từ dược liệu đề hỗ trợ điều tiị Alzheimer cần thiết Các cơng trình nghiên cứu giới vẻ lồi Vemonia.amygdalina Del , thuộc họ Cúc - Asterasceae biết đèn với nhiều công dụng kháng khuân, chỏng virus, chòng viêm, chòng ung thư Việt Nam, chưa có nhiẻu cơng trình nghiên cứu lồi Mặt khác, thành phần thơ nhưỡng khu vực Địng Nam Bộ, Việt Nam phù hợp cho phát tiền Mật gấu Do đó, việc trồng nhân rộng, phát triển, định hướng trồng tập trung thành vùng ngun liệu lồi có hoạt tính dùng trị liệu ... phân đoạn dịch chiết mật gấu (iii) Đánh giá đặc điểm động học ức chế enzym acetylcholinesterase cùa phàn đoạn dịch chiết mật gấu ❖ Phương pháp nghiên cứu: - Xác định thành phần hóa học dịch chiết. .. đoạn dịch chiết từ mật gấu (Vernonia amygdalina Del), họ Cúc (Asterracceae)”: ❖ Mục đích nghiên cứu: (i) Nguyên cứu thành phần hóa học dịch chiết Mật gàu (ii) Đánh giá hoạt tính ức che emzym acetyl... có hoạt tính dùng trị liệu Xuất phát từ yêu cầu thực tẻ tiên đây, tiến hành nghiên cứu đè tài: “Nguyên cứu thành phần hóa học hoạt tính ức che enzym acetylcholinesterase phân đoạn dịch chiết từ
Ngày đăng: 13/11/2022, 08:27
Xem thêm:
