Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân giống cây địa hoàng bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào giai đoạn phòng thí nghiệm

1 TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA NÔNG - LÂM - NGƢ VŨ THỊ HUYỀN NGHIÊN CỨU HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY ĐỊA HỒNG BẰNG PHƢƠNG PHÁP NI CẤY MƠ TẾ BÀO GIAI ĐOẠN PHỊNG THÍ NGHIỆM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành Khoa học Cây trồng Phú Thọ, 2017 TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA NÔNG - LÂM - NGƢ VŨ THỊ HUYỀN NGHIÊN CỨU HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY ĐỊA HỒNG BẰNG PHƢƠNG PHÁP NI CẤY MƠ TẾ BÀO GIAI ĐOẠN PHỊNG THÍ NGHIỆM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành Khoa học Cây trồng NGƢỜI HƢỚNG DẪN: TS PHẠM THANH LOAN THS HÀ THỊ TÂM TIẾN Phú Thọ, 2017 i LỜI CẢM ƠN Đƣợc phân công Khoa Nông - Lâm - Ngƣ, Trƣờng Đại học Hùng Vƣơng tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Trƣờng Đại học Hùng Vƣơng Để hồn thành khóa luận này, tơi xin chân thành bày tỏ lịng biết ơn tới thầy, cô giáo Khoa Nông - Lâm - Ngƣ, trƣờng Đại học Hùng Vƣơng giúp đỡ, bảo tạo điều kiện thuận lợi cho q trình thực khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Phạm Thanh Loan, Trƣởng khoa Nông - Lâm - Ngƣ, ThS Hà Thị Tâm Tiến, giảng viên khoa Nông - Lâm - Ngƣ, ngƣời hƣớng dẫn đề tài khóa luận, tận tình bảo, động viên giúp đỡ suốt q trình thực tập viết khóa luận Cuối cùng, với tất lịng kính trọng biết ơn, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè ngƣời thân ln bên động viên, giúp đỡ tạo động lực cho để tơi hồn thành báo cáo cách tốt Tôi xin chân thành cảm ơn! Phú Thọ, ngày tháng năm 2017 Sinh viên Vũ Thị Huyền ii LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan tồn Thí nghiệm, kết Thí nghiệm tơi trực tiếp thực Các số liệu kết báo cáo khóa luận trung thực chƣa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tôi xin cam đoan thông tin, tài liệu đƣợc trích dẫn báo cáo đƣợc ghi nguồn gốc rõ ràng Phú Thọ, ngày tháng năm 2017 Sinh viên Vũ Thị Huyền iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Địa hoàng 1.1.1 Đặc điểm thực vật học 1.1.2 Điều kiện sinh thái 1.2 Tổng quan phƣơng pháp nhân giống nuôi cấy mô tế bào 1.2.1 Cơ sở khoa học phương pháp nhân giống nuôi cấy mô tế bào 1.2.2 Môi trường nuôi cấy mô tế bào 11 1.2.3 Các giai đoạn nuôi cấy 12 1.2.4 Các điều kiện nuôi cấy in vitro 14 1.2.5 Chất điều hòa sinh trưởng 16 1.3 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 17 1.3.1 Tình hình nghiên cứu nước 17 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 20 Chƣơng Đ I TƢ NG, PHẠM VI, N I DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 22 2.2 Phạm vi nghiên cứu 22 iv 2.3 Nội dung nghiên cứu 22 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 2.4.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 22 2.4.2 Phương pháp xử lý số liệu 26 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng hóa chất khử trùng thời gian khử trùng đến mẫu cấy 27 3.2 Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy đến nảy chồi lát cắt củ Địa hoàng 29 3.3 Ảnh hƣởng Kinetin đến nhân chồi Địa hoàng in vitro 31 3.4 Ảnh hƣởng phối hợp Kinetin BAP đến nhân chồi Địa hoàng in vitro 35 3.5 Ảnh hƣởng IAA đến tạo rễ Địa hoàng in vitro 39 3.5.1 Ảnh hưởng IAA đến tỷ lệ rễ 39 3.5.2 Ảnh hưởng IAA đến số rễ trung bình/cây chiều dài rễ 40 3.6 Ảnh hƣởng phối hợp IAA NAA đến tạo rễ Địa hoàng in vitro 42 3.6.1 Ảnh hưởng phối hợp IAA NAA đến tỷ lệ rễ 42 3.6.2 Ảnh hưởng phối hợp IAA NAA đến số rễ trung bình/cây chiều dài rễ 44 KẾT LUẬN 47 KIẾN NGHỊ 48 v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Nội dung BAP Benzylaminopurine CT Công thức ĐC Đối chứng IAA Indole-3-acetic acid MS Murashige and Skoog NAA Naphthalene Acetic Acid TB Trung bình VW Vaccin and Went vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hƣởng phƣơng pháp khử trùng đến tạo chồi Địa hồng in vitro sau tuần ni cấy 27 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy đến nảy chồi Địa hoàng in vitro 30 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng Kinetin đến nhân chồi Địa hoàng in vitro 32 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng phối hợp Kinetin BAP đến nhân chồi Địa hoàng in vitro 36 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng IAA đến tạo rễ Địa hoàng in vitro 39 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng phối hợp IAA NAA đến tạo rễ Địa hoàng in vitro 42 vii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cây Địa hoàng Hình 1.2 Hoa Địa hồng Hình 1.3 Củ Địa hồng Hình 3.2 Mẫu Địa hoàng 29 Hình 3.3 Sự nảy chồi lát cắt Địa hồng sau tuần ni cấy 30 Hình 3.4 Biểu đồ nảy chồi mẫu Địa hoàng 31 Hình 3.5 Biểu đồ hệ số nhân chồi in vitro Địa hồng 33 Hình 3.6 Sự nhân chồi Địa hồng sau tuần ni cấy 33 Hình 3.7 Biểu đồ chiều cao chồi Địa hoàng in vitro 34 Hình 3.8 Chiều cao chồi Địa hồng in vitro sau tuần ni cấy 34 Hình 3.9 Hệ số nhân chồi in vitro Địa hoàng 36 Hình 3.10 Sự nhân chồi Địa hồng mơi trƣờng 37 Hình 3.11 Biểu đồ chiều cao chồi Địa hồng in vitro 37 Hình 3.12 Chiều cao chồi Địa hoàng in vitro 38 Hình 3.13 Biểu đồ tỷ lệ Địa hoàng in vitro rễ 40 Hình 3.14 Biểu đồ số rễ trung bình/cây Địa hồng in vitro 40 Hình 3.15 Biểu đồ chiều dài rễ Địa hoàng in vitro 41 Hình 3.16 Sự rễ Địa hồng sau tuần ni cấy 41 Hình 3.17 Biểu đồ tỷ lệ Địa hoàng in vitro rễ 43 Hình 3.18 Biểu đồ số rễ trung bình/cây Địa hồng in vitro 44 Hình 3.19 Biểu đồ chiều dài rễ Địa hồng in vitro 44 Hình 3.20 Sự rễ Địa hoàng in vitro 45 Hình 3.21 Sơ đồ quy trình nhân giống in vitro Địa hồng giai đoạn phịng thí nghiệm 46 MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Cây thuốc có vai trị quan trọng cơng tác chăm sóc bảo vệ sức khỏe cộng đồng Theo tài liệu cho thấy, có tới 80% dân số giới sử dụng loại thuốc để chăm sóc sức khỏe ban đầu gần 70 - 80% dân số vùng nông thôn lấy thuốc làm nguồn chữa bệnh chủ yếu Việt Nam nƣớc có khí hậu nhiệt đới, thời tiết quanh năm nóng ẩm từ tạo nên nguồn tài nguyên dƣợc liệu vô phong phú, đa dạng thành phần chủng loại Trong lịch sử phát triển, ngƣời Việt Nam nêu cao chân lý: “Thuốc nam chữa bệnh ngƣời nam” Y tế phát triển, nhu cầu thuốc tạo nguyên liệu cho sản xuất thuốc xuất ngày cao Thuốc từ dƣợc liệu có nhiều triển vọng để phục vụ thị trƣờng 90 triệu dân, để xuất sử dụng làm mỹ phẩm Để đáp ứng nhu cầu đó, ngành dƣợc liệu tích cực nghiên cứu phát dƣợc liệu mới, công dụng giúp điều trị nâng cao sức khỏe cho cộng đồng Do vậy, phát triển công tác nghiên cứu trồng thuốc yêu cầu cần thiết Theo định số 1976/QĐ-TTg ngày 30/10/2013 Thủ tƣớng Chính phủ việc phê duyệt Quy hoạch tổng thể phát triển dƣợc liệu đến năm 2020 định hƣớng đến năm 2030, lồi dƣợc liệu Địa hồng đƣợc ƣu tiên phát triển vùng trung du miền núi Bắc Bộ vùng đồng sơng Hồng với diện tích 200 Căn định số 206/QĐ-BYT ngày 22/1/2015 Bộ Y tế việc ban hành danh mục 54 dƣợc liệu ƣu tiên phát triển giai đoạn 2015-2020, UBND tỉnh Phú Thọ ban bành định số 621/QĐ-UBND, ngày 31/3/2015 danh mục loài dƣợc liệu ƣu tiên phát triển địa bàn Phú Thọ giai đoạn 2015-2020, xác định loài dƣợc liệu Địa hoàng (Rehmanmia glutinosa) loài đƣợc ƣu tiên nghiên cứu phát triển tỉnh Phú Thọ 46 Khử trùng rễ củ Địa hoàng khoảng 90 ngày tuổi HgCl2 0,1% thời gian 10 - 15 phút Vào mẫu củ Địa hồng mơi trƣờng MS bổ sung 0,5 mg/l Kinetin, 30 g/l đƣờng, g/l agar Giai đoạn nhân nhanh chồi Địa hoàng in vitro môi trƣờng MS bổ sung 0,5 mg/l Kinetin 1,0 mg/l BAP, 30 g/l đƣờng, 7,0 g/l agar Giai đoạn tạo hoàn chỉnh: Địa hoàng in vitro mơi trƣờng ½MS bổ sung 0,5 mg/l IAA 1,0 mg/l NAA, 30 g/l đƣờng, 7g/l agar Hình 3.21 Sơ đồ quy trình nhân giống in vitro Địa hồng giai đoạn phịng thí nghiệm 47 KẾT LUẬN Đã xây dựng đƣợc quy trình nhân giống in vitro Địa hồng giai đoạn phịng thí nghiệm Khử trùng rễ củ Địa hoàng HgCl2 0,1% thời gian 10 - 15 phút thích hợp nhất, tỷ lệ mẫu sống đạt 82,22 - 83,33% Môi trƣờng nảy chồi tốt lát cắt Địa hoàng MS có bổ sung 0,5 mg/l Kinetin, 30 g/l đƣờng, g/l agar cho tỷ lệ mẫu bật chồi đạt 83,33% số chồi/mẫu đạt 6,56 Môi trƣờng nhân nhanh chồi Địa hoàng in vitro bổ sung Kinetin tốt MS có bổ sung 0,5 mg/l Kinetin 30 g/l đƣờng, 7,0 g/l agar cho cho hệ số nhân chồi cao đạt 6,22 lần Chiều cao chồi tăng trƣởng mạnh đạt 3,11 cm Môi trƣờng nhân nhanh chồi Địa hoàng in vitro tốt bổ sung kết hợp Kinetin BAP MS có bổ sung 0,5 mg/l Kinetin 1,0 mg/l BAP, 30 g/l đƣờng, 7,0 g/l agar cho cho hệ số nhân chồi cao đạt 7,12 lần Chiều cao chồi tăng trƣởng mạnh đạt 3,64 cm Môi trƣờng rễ Địa hoàng in vitro tốt bổ sung IAA ½MS bổ sung 0,5 mg/l IAA, 30 g/l đƣờng, 7g/l agar cho tỷ lệ rễ đạt 85,56 %, số rễ TB/cây đạt 5,74 rễ, chiều dài rễ đạt 4,16 cm Môi trƣờng rễ Địa hoàng in vitro tốt kết hợp bổ sung IAA NAA ½MS bổ sung 0,5 mg/l IAA 1,0 mg/l NAA, 30 g/l đƣờng, 7g/l agar cho tỷ lệ rễ đạt 94,44%, số rễ TB/cây đạt 6,96 rễ, chiều dài rễ đạt 4,52 cm 48 KIẾN NGHỊ Tiếp tục hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro Địa hồng giai đoạn Nghiên cứu môi trƣờng nhân nhanh Địa hoàng in vitro bổ sung thêm TDZ nồng độ khác phối hợp bổ sung Kinetin, BAP TDZ Nghiên cứu môi trƣờng rễ Địa hoàng in vitro bổ sung thêm IBA nồng độ khác phối hợp bổ sung IAA, NAA IBA TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Đỗ Tất Lợi (2012), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất y học, nhà xuất thời đại Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Trƣơng, Nguyễn Thƣợng Dong, Đỗ Trung Đàm (2003), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam tập 1, NXB khoa học kỹ thuật, 774-781 Nguyễn Bá Hoạt, Nguyễn Duy Thuần (2005), Kỹ thuật trồng, sử dụng chế biến thuốc, NXB Nơng Nghiệp, 74-84 Ngơ Xn Bình (2009), Nuôi cấy mô tế bảo thực vật, sở lý luận ứng dụng, NXB Khoa học kỹ thuật, 34-41 Trịnh Thùy Dƣơng (2015), Nghiên cứu bệnh thối gốc sinh địa (Rhemannia glutinosa Libosch.) đề xuất số biện pháp phòng trừ bệnh Bắc Giang, Luận văn thạc sỹ Nông nghiệp, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Tài liệu Tiếng Anh Albach DC, Li HQ, Zhao N and Jensen SR (2007), “Molecular systematics and phytochemistry of Rehmannia (Scrophulariaceae)”, Biochem Systematics Ecol, 35: 293-300 Bajai YPS (1988), “Biotecnology in Agriculture and Forestry 4, Medicinal and Aromatic plants I”,Springer-Verlag Berlin Heidelberg: 501-511 Cui YY, Hahn EJ, Kozai T, Paek KY (2000), “Number of air exchanges, sucrose concentration, photosynthetic photon flux, and diffirences in photoperiod and dark period temperatures affect growth of Rehmannia glutinosa plantlets in vitro”Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 62: 219-226 Ewelina P, Izabela GK (2014), “Micropopagation of Rehmannia glutinosa Libosch.: production of phenolics and flavonoids and evaluation of antioxidant activity”, Acta Physiol Plant, 36: 1693-1702 10 Ewelina P, Lukasz K, Przemyslaw S, Halina W (2015), “Shoot organogenesis, molecular analysis and secondary metabolite production ofmicropropagated Rehmannia glutinosa Libosch”, Plant Cell Tiss Organ Cult, 120: 539-549 11 Huang KC (1993), “The Pharmacology of Chinese Herbs”, CRC Press, Amsterdam, 281 12 Kim HM, An CS, Joug KY, Choo YK, Park JK, Nam SY (1999), “Rhemania glutinosa inhibits tumor necrosis factor-alpha and interleukin-1 secretion from mouse astrocyte”,Pharmacol Res., 40: 171-176 13 Liu CH, Zhang LJ and Li GS (2002), “Determination of rehmannioside A in root tuber of Rehmannia glutinosa”,Chinese Traditional Herbal Drugs, 33: 706707 14 Mao WY, Li XG, Zhu BM (1983), “Studies on the meristern culture of Rehmannia glutinosa”,Chin Bull Bot, 1: 44-46 15 Park SU, Kim YK and Lee SY (2009), “Improved in-vitro plant regeneration and micro- propagation of Rehmannia glutinosa L”, J Medicinal Plants Res., 3(1): 031-034 16 Shoyama W, Tubek B, Nishioka I (1983), “Clonal multiplication of R glutinosa”,Planta Med, 48: 124-128 17 Xue T, Guo L, Xue JP, Song YX, Lu HD, Zhang AM et al (2012), “Study of the system of tuberous root induction in vitro from Rehmannia glutinosa African Journal of Biotechnology”, 11(28): 7202-7207 18 Xu and Davey (1983), “Shoot Regeneration from Mesophyll Protoplasts and Leaf Explants of Rehmannia glutinosa”, Plant Cell Rep, 2: 55-57 PHỤ LỤC THÀNH PHẦN CÁC CHẤT TRONG MÔI TRƢỜNG Nhóm chất Tên chất MS K V 1650 600 - - - 500 332 453 - - - 200 180.7 146.5 122.1 1900 1900 525 - - - 170 170 250 - 300 - EDTA 37,3 37,26 - FeSO4.7H2O 27,8 27,8 - - - 28 MnSO4 16,9 10 5,078 ZnSO4.7H2O 8,6 - H3BO3 6,2 - Na2MoO4 0,25 0,25 - KI 0,83 0,75 - CoCl2.6H2O 0,025 0,025 - CuSO4.5H2O 0,025 0,025 - Myo inositol 100 - - - 0,4 Thiamin HCl 0,1 - - Pyridoxine HCl 0,5 - - Nicotic acid 0,5 - - NH4NO3 (NH4)2SO4 CaCl2 Ca3(PO4)2 Khoáng đa MgSO4.7H2O lƣợng KNO3 Ca(NO3)2.2H2O KH2PO4 KCl Ferric tatrate.2H2O Khoáng vi lƣợng Glycin Vitamin Hàm lƣợng chất môi trƣờng (mg/l) MS: Murashige & Skoog, V: Vacin & Went, K: Knudson PHỤ LỤC M T SỐ HÌNH ẢNH TRONG QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU Củ Địa hoàng Thao tác khử trùng Thao tác vào mẫu Địa hoàng sau ngày vào mẫu Địa hoàng sau tuần vào mẫu Thao tác cấy chuyển chồi vào Địa hồng in vitro mơi trƣờng mơi trƣờng nhân nhanh nhân nhanh Địa hoàng in vitro sau tuần cấy vào mơi trƣờng nhân nhanh Địa hồng in vitro Sự rễ Địa hoàng in vitro sau môi trƣờng rễ tuần nuôi cấy PHỤ LỤC 3.1 Phụ lục 1: Kết xử lý số liệu thí nghiệm BALANCED ANOVA FOR VARIATE MSONG FILE 4/ 5/17 11: :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu hoan toan ngau nhien VARIATE V003 MSONG LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2425.29 346.470 ****** 0.000 * RESIDUAL 16 1.33358 833486E-01 * TOTAL (CORRECTED) 23 2426.63 105.505 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MNHIEM FILE 4/ 5/17 11: :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu hoan toan ngau nhien VARIATE V004 MNHIEM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2722.96 388.994 ****** 0.000 * RESIDUAL 16 1.99991 124995 * TOTAL (CORRECTED) 23 2724.96 118.476 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MCHET FILE 4/ 5/17 11: :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu hoan toan ngau nhien VARIATE V005 MCHET LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 370.667 52.9524 ****** 0.000 * RESIDUAL 16 666711 416694E-01 * TOTAL (CORRECTED) 23 371.333 16.1449 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 4/ 5/17 11: :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu hoan toan ngau nhien MEANS FOR EFFECT CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 CT7 CT8 CT$ NOS 3 3 3 3 MSONG MNHIEM 9.00000 21.0000 24.6667 4.33333 25.0000 1.00000 21.3333 0.666667 0.000000 30.0000 2.00000 25.0000 4.00000 20.6667 3.00000 15.0000 MCHET 0.000000 1.00000 4.00000 8.00000 0.000000 3.00000 5.33333 12.0000 SE(N= 3) 0.166682 0.204120 0.117855 5%LSD 16DF 0.499715 0.611954 0.353331 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 4/ 5/17 11: :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu hoan toan ngau nhien F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE MSONG MNHIEM MCHET GRAND MEAN (N= 24) NO OBS 24 11.125 24 14.708 24 4.1667 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 10.272 0.28870 2.6 0.0000 10.885 0.35355 2.4 0.0000 4.0181 0.20413 4.9 0.0000 | | | | 3.2 Phụ lục 2: Kết xử lý số liệu thí nghiệm BALANCED ANOVA FOR VARIATE MBAT FILE TN2 31/ 3/17 21:17 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu hoan toan ngau nhien VARIATE V003 MBAT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 28.6667 14.3333 64.50 0.000 * RESIDUAL 1.33333 222222 * TOTAL (CORRECTED) 30.0000 3.75000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOCHOI FILE TN2 31/ 3/17 21:17 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu hoan toan ngau nhien VARIATE V004 SOCHOI LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 15.5570 7.77849 ****** 0.000 * RESIDUAL 110037E-01 183395E-02 * TOTAL (CORRECTED) 15.5680 1.94600 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN2 31/ 3/17 21:17 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu hoan toan ngau nhien MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 NOS 3 MBAT 25.0000 23.3333 20.6667 SOCHOI 6.56000 4.68659 3.35476 SE(N= 3) 0.272165 0.247248E-01 5%LSD 6DF 0.941464 0.855270E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN2 31/ 3/17 21:17 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu hoan toan ngau nhien F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE MBAT SOCHOI GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 23.000 4.8671 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.9365 0.47140 2.0 0.0002 1.3950 0.42825E-01 0.9 0.0000 | | | | 3.3 Phụ lục 3: Kết xử lý số liệu thí nghiệm BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC3 FILE 5/ 5/17 15:19 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan VARIATE V003 HSNC3 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 28.3388 7.08470 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 207423E-01 207423E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 28.3596 2.02568 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC3 FILE 5/ 5/17 15:19 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan VARIATE V004 CCC3 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5.13436 1.28359 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 373369E-02 373369E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.13809 367007 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 5/ 5/17 15:19 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1(ÐC) CT2 CT3 CT4 CT5 NOS 3 3 HSNC3 2.84444 3.54444 6.23333 6.22222 4.72222 CCC3 1.51034 2.06322 3.10805 2.92529 2.59310 SE(N= 3) 0.262947E-01 0.111560E-01 5%LSD 10DF 0.828554E-01 0.351529E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 5/ 5/17 15:19 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC3 CCC3 GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 4.7133 15 2.4400 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.4233 0.45544E-01 1.0 0.0000 0.60581 0.19323E-01 0.8 0.0000 | | | | 3.4 Phụ lục 4: Kết xử lý số liệu thí nghiệm BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 5/ 5/17 16:32 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 13.8529 4.61762 ****** 0.000 * RESIDUAL 814821E-02 101853E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 13.8610 1.26009 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC4 FILE 5/ 5/17 16:32 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan VARIATE V004 CCC4 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.67521 558403 796.76 0.000 * RESIDUAL 560673E-02 700841E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.68082 152801 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 5/ 5/17 16:32 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 (ÐC) CT2 CT3 CT4 NOS 3 3 HSNC 6.23333 6.43333 7.12222 4.23333 CCC4 3.10805 3.36111 3.63889 2.62333 SE(N= 3) 0.184258E-01 0.152844E-01 5%LSD 8DF 0.600846E-01 0.498410E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 5/ 5/17 16:32 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC CCC4 GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 6.0028 12 3.1828 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.1225 0.31914E-01 0.5 0.0000 0.39090 0.26473E-01 0.8 0.0000 | | | | 3.5 Phụ lục 5: Kết xử lý số liệu thí nghiệm BALANCED ANOVA FOR VARIATE RARE FILE 5/ 5/17 21:26 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan VARIATE V003 RARE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 293.600 73.4000 220.20 0.000 * RESIDUAL 10 3.33335 333335 * TOTAL (CORRECTED) 14 296.933 21.2095 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SORE FILE 5/ 5/17 21:26 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan VARIATE V004 SORE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 20.5622 5.14055 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 901695E-02 901695E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 20.5712 1.46937 BALANCED ANOVA FOR VARIATE DAIRE FILE 5/ 5/17 21:26 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan VARIATE V005 DAIRE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 16.5695 4.14239 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 519841E-02 519841E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 16.5747 1.18391 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 5/ 5/17 21:26 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1(ÐC) CT2 CT3 CT4 CT5 NOS 3 3 RARE 14.3333 22.3333 25.6667 17.6667 14.6667 SORE 2.46508 5.43281 5.74000 5.13181 4.43175 DAIRE 1.61873 3.09662 4.16041 4.17754 2.06429 SE(N= 3) 0.333334 0.173368E-01 0.131636E-01 5%LSD 10DF 1.05035 0.546289E-01 0.414790E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 5/ 5/17 21:26 :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE RARE SORE DAIRE GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 18.933 15 4.6403 15 3.0235 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 4.6054 0.57735 3.0 0.0000 1.2122 0.30028E-01 0.6 0.0000 1.0881 0.22800E-01 0.8 0.0000 | | | | 3.6 Phụ lục 6: Kết xử lý số liệu thí nghiệm BALANCED ANOVA FOR VARIATE RARE FILE 5/ 5/17 23: :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan VARIATE V003 RARE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 64.6667 21.5556 86.22 0.000 * RESIDUAL 2.00001 250001 * TOTAL (CORRECTED) 11 66.6667 6.06061 BALANCED ANOVA FOR VARIATE RETB FILE 5/ 5/17 23: :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan VARIATE V004 RETB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 22.2111 7.40371 ****** 0.000 * RESIDUAL 525205E-02 656506E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 22.2164 2.01967 BALANCED ANOVA FOR VARIATE DAIRE FILE 5/ 5/17 23: :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan VARIATE V005 DAIRE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.80621 1.26874 ****** 0.000 * RESIDUAL 267196E-02 333995E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 3.80888 346262 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 5/ 5/17 23: :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 (ÐC) CT2 CT3 CT4 NOS 3 3 RARE 25.6667 26.6667 28.3333 22.0000 RETB 5.74000 6.06268 6.96296 3.28867 DAIRE 4.16041 4.29734 4.52319 3.06122 SE(N= 3) 0.288676 0.147931E-01 0.105514E-01 5%LSD 8DF 0.941342 0.482387E-01 0.344070E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 5/ 5/17 23: :PAGE Thi nghiem thiet ke theo kieu ngau nhien hoan toan F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE RARE RETB DAIRE GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 25.667 12 5.5136 12 4.0105 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.4618 0.50000 1.9 0.0000 1.4212 0.25622E-01 0.5 0.0000 0.58844 0.18276E-01 0.5 0.0000 | | | | Ngày tháng năm 2017 Giảng viên hƣớng dẫn Sinh viên thực (Ký tên) (Ký tên) TS Phạm Thanh Loan Vũ Thị Huyền Giảng viên hƣớng dẫn (Ký tên) ThS Hà Thị Tâm Tiến ... quan phƣơng pháp nhân giống nuôi cấy mô tế bào 1.2.1 Cơ sở khoa học phương pháp nhân giống nuôi cấy mô tế bào 1.2.2 Môi trường nuôi cấy mô tế bào 11 1.2.3 Các giai đoạn nuôi cấy ... hồng phƣơng pháp ni cấy mơ tế bào giai đoạn phịng thí nghiệm 3 Mục tiêu nghiên cứu Hồn thiện đƣợc quy trình nhân giống Địa hồng phƣơng pháp ni cấy mơ tế bào giai đoạn phịng thí nghiệm, góp phần... NGƢ VŨ THỊ HUYỀN NGHIÊN CỨU HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG CÂY ĐỊA HỒNG BẰNG PHƢƠNG PHÁP NI CẤY MƠ TẾ BÀO GIAI ĐOẠN PHỊNG THÍ NGHIỆM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành Khoa học Cây trồng NGƢỜI