Nghiên cứu thử nghiệm sản xuất chế phẩm bột huyết từ huyết heo

BỘ CÔNG THƢƠNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ==== ==== BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƢỜNG NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT CHẾ PHẨM BỘT HUYẾT TỪ HUYẾT HEO Mã số 2142012 Chủ nhiệm đề tài ThS LÊ NHẤT TÂM Cộng tác viên Ths LÊ VĂN NHẤT HOÀI TP HỒ CHÍ MINH, 112013 1 CHƢƠNG 1 MỞ ĐẦU 1 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Thức ăn gia súc là một trong những nguồn cung cấp thức ăn chủ yếu cho các động vật nuôi gia súc, gia cầm trong từng hộ gia đình hay chăn nuôi với quy mô công nghiệp.

BỘ CÔNG THƢƠNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ==== ==== BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƢỜNG NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT CHẾ PHẨM BỘT HUYẾT TỪ HUYẾT HEO Mã số: 2142012 Chủ nhiệm đề tài: ThS LÊ NHẤT TÂM Cộng tác viên: Ths LÊ VĂN NHẤT HOÀI TP HỒ CHÍ MINH, 11/2013 CHƢƠNG MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Thức ăn gia súc nguồn cung cấp thức ăn chủ yếu cho động vật nuôi gia súc, gia cầm hộ gia đình hay chăn ni với quy mơ cơng nghiệp Trên thị trƣờng số liệu từ báo tinkinhte.com viết theo số liệu thống kê Tổng cục Hải quan Việt Nam, ―kim ngạch nhập mặt hàng thức ăn gia súc nguyên liệu tháng 1/2010 đạt 148,93 triệu USD, chiếm 2,4% tổng kim ngạch nhập nƣớc tăng 163,5% so với kỳ năm ngoái‖[1] Và dự báo năm tới tổng kim ngạch nhập thức ăn gia súc nguyên liệu tăng cao không ngừng Hiện nƣớc đua sản xuất thức ăn gia súc với giá trị lợi nhuận cao sản xuất từ nguồn nguyên liệu rẻ tiền, trình sản xuất không phức tạp nhƣng hàm lƣợng chất dinh dƣỡng cao mang lại nguồn thu ngoại tệ lớn Trong dân số tăng nhanh nhu cầu thực phẩm tăng cao chƣa thấy thúc đẩy ngành chăn nuôi phát triển vƣợt bậc gia súc nhƣ gia cầm với quy mơ từ hộ gia đình quy mơ cơng nghiệp Tại Việt Nam có nhiều công ty sản xuất thức ăn gia súc mang thành tựu lớn Dựa nguồn nguyên liệu rẻ tiền, dồi nhƣ ngô, sắn lát, cám gạo, hay phế phẩm chứa hàm lƣợng dinh dƣỡng cao nhƣ bột cá tra, basa, bột cá biển, bột vỏ sò, ốc, cua, ghẹ… hay men bia men rƣợu chiếm hàm lƣợng đạm đến 70-73% Nƣớc ta nƣớc có ngành chăn ni phát triển mạnh, ngành chăn ni lợn với sản lƣợng thịt lợn đứng thứ giới với tổng đàn lợn 27 triệu năm 2010 Do nguồn nguyên liệu huyết lợn nguồn nguyên liệu dồi rẻ tiền Việt Nam thuận lợi cho việc sản xuất bột huyết bổ sung thức ăn gia súc cho ngành chăn nuôi Mặt khác nhằm đa dạng hóa sản phẩm thức ăn chăn ni thị trƣờng cung cấp nguồn thức ăn chứa hàm lƣợng dinh dƣỡng cao mà không sử dụng chất phụ gia tăng trƣởng cho vật nuôi đảm bảo sức khỏe an toàn cho ngƣời tiêu thụ gia súc gia cầm 1.2 LÍ DO CHỌN ĐỀ TÀI Trong năm qua với phát triển kinh tế đất nƣớc ngành chăn ni gia súc có nhiều tiến vƣợt bậc số lƣợng lẫn chất lƣợng Giá trị sản lƣợng ngành chăn nuôi tăng theo hàng năm mức tăng trƣởng từ 7- 8% Theo thống kê Cục Chăn Nuôi sản lƣợng thịt lợn nƣớc ta trung bình tháng nƣớc sản xuất tiêu thụ khoảng 290-300 ngàn thịt lợn hơi, mức tiêu thụ thịt lợn chiếm 78-80%, gia cầm chiếm 12-13%, trâu, bò chiếm 7-8%, dự báo tổng sản lƣợng thịt lợn sản xuất tháng đầu năm 2010 đạt khoảng 1,77 triệu tấn, tăng khoảng 3,5% so với kỳ năm 2009 Trong vùng sản xuất thịt lợn có tỷ trọng lớn lần lƣợt là: đồng sông Hồng 29%, ĐBSCL 18% Đông Nam khoảng 12% Tuy nhiên từ 1/3 đến nửa thể gia súc cho thịt, sữa, trứng lông không đƣợc ngƣời sử dụng Các phần thừa thƣờng khơng đƣợc sử dụng ngun liệu đầu vào q trình chế biến nhằm tạo sản phẩm hữu ích Các sản phẩm bột thịt xƣơng, bột thịt, bột gia cầm, bột lông vũ, bột máu, bột cá, mỡ động vật Chúng đƣợc bổ sung vào thức ăn gia súc, gia cầm, thủy sản sinh vật cảnh để góp phần tăng thêm giá trị dinh dƣỡng Ngoài việc chế biến sử dụng phụ phẩm giết mổ góp phần cải thiện chất lƣợng môi trƣờng, sức khỏe gia súc sức khỏe cộng đồng Hơn với phát triển ngành chăn nuôi ngành công nghiệp sản xuất thức ăn gia súc có tiến đáng kể Sản xuất thức ăn công nghiệp tăng số lƣợng tuyệt đối nhƣ tƣơng đối so với tổng số thức ăn tiêu thụ Ông Lê Bá Lịch, Chủ tịch Hiệp hội Thức ăn chăn nuôi cho biết: ―Hiện tại, nguyên liệu thức ăn chăn nuôi nƣớc đáp ứng 75-78% nhu cầu sản xuất, nƣớc ta phải nhập 20% nguyên liệu giàu lƣợng, 80% loại thức ăn bổ sung, 80-90% thức ăn giàu đạm 90% chất phụ gia‖ Và nghịch lý giá thức ăn chăn nuôi Việt Nam đắt so với giá ký hợp đồng nguyên liệu nhập cảng từ 10 đến 15% Và theo số liệu Cục Chăn nuôi cho thấy: Thời gian vừa qua, giá thức ăn chăn nuôi tăng - 10% khiến cho giá sản phẩm chăn ni tăng từ 30 - 40%, có lúc tăng 50% Dự kiến thời gian tới, giá thức ăn chăn ni cịn tăng khó khăn nguyên liệu sản xuất Một trạng xãy lò giết mổ Việt Nam nói chung thành phố Hồ Chính Minh nói chung huyết sau trình giết mổ gần nhƣ đƣợc sử dụng ít, bỏ dẫn tới gây ô nhiểm môi trƣờng, vi sinh vật phát triển, nguy mầm móng bịnh tật hình thành v.v… Một trạng mà từ trƣớc tới nhà chăn ni mặn mà với sản phẩm bột huyết mùi Hàm lƣợng sắt bột huyết theo nghiên cứu trƣớc lớn khoảng 2500-4000ppm (Tony.J.Cunha, 1997) nên đƣợc khuyến cáo bổ sung tối đa khẩn phần thức ăn gia súc 4% (Cunha, 1977; Wahlstrom Libal, 1977; Miller, 1990) Từ vấn đề nêu nhóm chọn nghiên cứu đề tài “ Bước đầu Khảo sát qui trình sản xuất bột huyết (có loại Sắt)” Bột huyết sấy khơ đƣợc sản xuất từ huyết tƣơi, động vật không chứa tạp chất nhƣ lông, chất chứa dày……Sản phẩm bột huyết nguồn thức ăn giàu protein lysine tự nhiên sử dụng cho ngành chế biến thức ăn chăn nuôi Bảng 1.1: Thành phần dinh dƣỡng bột huyết sấy khô [17] Thành phần Hàm lƣợng Năng lƣợng, kcal/kg CP (%) 3625 88.9 Mỡ (%) Ca (%) P (%) 1.0 0.4 0.3 Các Axít amin(%) Methionin Cystin Lysine Threonine Histidine Isolucine Valine Tryptophan Arginine Leucine Phenylalanine Tyrosine Glycine Serine 0.6 0.5 7.1 3.2 3.5 1.0 7.3 1.3 3.6 10.5 5.7 2.1 4.6 4.3 Với bảng ta thấy bột huyết cung cấp nhiều axit amin đặc biệt Leucithin góp phần tăng thêm giá trị dinh dƣỡng cho gia suc, gia cầm… bổ sung vào thức ăn chăn nuôi Hơn đề tài thành công đƣợc đƣa vào sản xuất dƣới qui mô công nghiệp thúc đẩy phát triển ngành chế biến phụ phẩm cung cấp số lƣợng lớn loại thức ăn bổ sung cho ngành thức ăn chăn nuôi 1.3 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Xuất phát từ yêu cầu nên tập trung tiến hành khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến trình tạo tủa protein, loại sắt, chuyển kết tủa dạng bột bảo quản chúng Nhóm tiến hành khảo sát đƣa thông số tối ƣu cho yếu tố Các yếu tố ảnh hƣởng đến q trình tạo tủa protein cần khảo sát bao gồm:  Khảo sát nồng độ muối NaCl  Khảo sát pH tối ƣu cho trình kết tủa protein  Khảo sát trình tách sắt khỏi huyết  Khảo sát thời gian đun cách thủy  Khảo sát nhiệt độ sấy  Khảo sát phụ gia cho trình chống mốc  Thử nghiệm bột huyết thu nhận đƣợc chuột so sánh với bột huyết thị trƣờng dựa khả tăng trọng  Khảo sát sơ bao bì cho sản phẩm  Đánh giá giá trị lƣợng tiêu vi sinh sản phẩm CHƢƠNG TỔNG QUAN 2.1 NGUYÊN LIỆU HUYẾT 2.1.1 Kỹ thuật lấy huyết heo Việt Nam 2.1.1.1 Chọc huyết Sau kẹp điện làm cho heo bất tỉnh phải chọc huyết Thời gian lấy huyết khoảng 20-30 giây Nếu lấy huyết chậm sau 20 giây heo có khả hồi tỉnh, gây khó khăn cho việc chọc huyết Ở số nƣớc có cơng nghiệp phát triển, có luật pháp quy định phải lấy huyết vòng 15 giây sau ngƣng cung cấp dòng điện 2.1.1.2 Lấy huyết  Lấy huyết vị trí nằm Phƣơng pháp đƣợc dùng chủ yếu lị mổ thủ cơng (Cơng ty TNHH Thực Phẩm Rạng Đông lấy huyết theo phƣơng pháp này) Gia súc đƣợc đặt nằm nghiêng sàn, đầu dốc xuống dƣới  Lấy huyết vị trí treo thẳng đứng Phƣơng pháp đƣợc áp dụng phổ biến lị mổ cơng nghiệp (Cơng ty Chế Biến Thực Phẩm Nam Phong Công ty Vissan lấy huyết theo phƣơng pháp này) Sau treo vật lên, dùng dao rạch đƣờng dài khoảng 20-30 cm họng, máu chảy mạnh thu đƣợc lƣợng huyết nhiều so với phƣơng pháp giết mổ nằm Nhƣng huyết dễ bị lẫn tạp chất theo với huyết (chất chứa cỏ, phân, …), lƣợng huyết đƣợc lấy 3.2-4.5% trọng lƣợng vật (Liễn cộng sự, 1997) 2.1.2 Đặc tính hình thái học tính chất vật lý, hóa học huyết 2.1.2.1 Tính chất vật lý Huyết dịch lỏng, nhớt, vị mặn Ở trạng thái sinh lý bình thƣờng, màu huyết thay đổi từ màu đỏ tƣơi (huyết động mạch) đến màu đỏ tím (huyết tĩnh mạch) Cấu trúc huyết gồm hai phần rõ rệt: phần lỏng gọi huyết tƣơng (huyết sinh sợi huyết), phần hữu hình gọi huyết cầu (hồng cầu loại bạch cầu) Tỉ lệ huyết tƣơng huyết cầu khác loại gia súc Huyết nặng nƣớc, tỉ trọng huyết dao động từ 1.05-1.06 Huyết có phản ứng kiềm yếu, độ pH huyết biến động từ 7,587.81 a Đặc tính hình thái học huyết Khi lƣu thơng hệ mạch, huyết dịch lỏng Khi khỏi thể, huyết kết lại thành khối, tƣợng đơng huyết Đó q trình lý hố phức tạp với tham gia 20 yếu tố bao gồm hàng chuỗi phản ứng Kết phản ứng trƣớc thúc đẩy cho phản ứng sau đƣợc thực hiện, nhƣ dây chuyền đơng máu đƣợc hồn thành Nên phản ứng bị ngừng trệ dây chuyền đơng máu bị ảnh hƣởng b Cơ chế trình đơng máu Cơ chế q trình tóm tắt thành giai đoạn sau:  Giai đoạn l: Tạo thromboplastin (thrombokinase): mạch máu bị đứt, tiểu cầu va phải chỗ đứt giải phóng chất dạng chƣa hoạt động gọi Prothromboplastin (Prothrombokinase) Dạng đƣợc hoạt hố yếu tố đơng máu huyết tƣơng IV, V, VIII, IX, XII chuyển thành dạng hoạt động gọi thromboplastin (thrombokinase) : Yếu tố IV (Ca++), V, Prothromboplastin Thromboplastin VIII, IX, XII  Giai đoạn 2: Prothrombin 2 - globulin, gan sản xuất, có trọng lƣợng phân tử 68700, nồng độ máu bình thƣờng 15mg/100ml máu Khi phức hợp prothrombinase hình thành, dƣới tác dụng thromboplastin với yếu tố IV, V, VII, X chất có sẵn huyết tƣơng dạng chƣa hoạt động prothrombin đƣợc hoạt hoá thành enzym ngƣng huyết gọi thrombin Giai đoạn cần có mặt ion Ca2+ Sự hình thành thrombin từ prothrombin nhanh, đƣợc tính vài giây Thrombokinase Prothrobin Thrombin Yếu tố IV, V, VII, X  Giai đoạn 3: Fibrinogen protein gan sản xuất, trọng lƣợng phân tử 340000, nồng độ máu bình thƣờng 100 - 700mg/100ml máu Bình thƣờng fibrinogen khó vào dịch kẽ Khi thành mạch tăng tính thấm fibrinogen vào dịch kẽ bị đơng lại yếu tố gây đông máu vào dịch kẽ Thrombin sau đƣợc hình thành chuyển fibrinogen thành fibrin đơn phân Các fibrin đơn phân tự trùng hợp thành fibrin dạng sợi Một mạng lƣới fibrin hình thành đƣợc ổn định nhờ globulin A Giai đoạn có tham gia ion Ca2+ Các tế bào máu đƣợc giữ lại lƣới fibrin, mạng lƣới hình thành màng đơng tạo nên cục máu đơng Do đó, chất máu đơng hình thành lƣới fibrin từ fibrinogen nhờ thrombin Thrombin Fibrinogen Fibrin Yếu tố IV, VIII Các yếu tố đông máu: − Yếu tố I: fibrinogen − Yếu tố II: prothrombin − Yếu tố III: thromboplastin mô − Yếu tố IV: ion Ca ++ Cục máu đông − − − − − − − − Yếu tố V: proaccelerin Yếu tố VII: proconvertin Yếu tố VIII: globulin A chốngƣa chảy máu (antihemophilic globin - AHG) Yếu tố IX: globulin B chốngƣa chảy máu (plasma thromboplastin component - PTC) Yếu tố X: Stuart – Prower Yếu tố XI: globulin C chốngƣa chảy máu (plasma thromboplastin antecedent - PTA) Yếu tố XII: Hageman Yếu tố XIII: ổn định fibrin (fibrin stabilizing factor - FSF)  Sự co cục máu đơng: sau cục máu đơng hình thành, bắt đầu co lại rỉ huyết (huyết tƣơng bị lấy fibrinogen đƣợc gọi huyết thanh) Tiểu cầu có vai trị quan trọng cho co cục máu đơng Tiểu cầu có tác dụng gắn sợi fibrin lại với ổn định vững fibrin Tiểu cầu bám lƣới fibrin, co rút làm cho lƣới fibrin co theo, đồng thời với giải phóng yếu tố VIII tiểu cầu làm cho cục máu đông co mạnh Co cục máu đơng cịn có tham gia thrombin, ion Ca2+ Cục máu đông lúc bền vững, giữ cho mép thành mạch tổn thƣơng khép lại gần tạo điều kiện thuận lợi cho bền vững khối huyết đơng  Sơ đồ tóm tắt q trình đơng máu: Tiểu cầu vỡ Prothrombin Ca2+ Fibrinogen Thromboplastin Ca Ca2+ 2+ Thrombin Fibrin Cục máu đông Nguyên liệu huyết Khảo sát hàm lƣợng muối cho q trình chống đơng huyết Khảo sát pH cho q trình kết tủa huyết Khảo sát hàm lƣợng đệm photphat đệm citrate cho trình tạo phức với Fe có huyết Khảo sát thời gian đun cách thủy để thu tủa bột huyết nhiệt độ sấy đến hàm lƣợng chất khơ hịa tan Khảo sát hàm lƣợng chất chống mốc Kiểm tra chất lƣợng bảo quản Sản phẩm Hình 3.2: Sơ đồ bố trí thí nghiệm 3.4.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát hàm lượng NaCl lên q trình chống đơng huyết  Mục đích Nhằm xác định hàm lƣợng NaCl tối ƣu để chống đông tụ protein huyết giúp dễ dàng trình bảo quản huyết ln dạng lỏng, thuận lợi cho 39 việc tiến hành thí nghiệm Ngăn cản sợi fibrin tạo thành mạng lƣới liên kết phần tử huyết, tránh cho đông tụ huyết xảy  Cách tiến hành: hút 100ml dịch huyết vào becher, bổ sung lƣợng muối NaCl cần thiết vào khuấy cho muối hòa tan vào huyết, để yên tính thời gian Quan sát, thấy xuất màng đơng kết thúc thí nghiệm, ghi lại thời gian chống đơng huyết Trong q trình quan sát, đảo nhẹ becher để dễ dàng quan sát màng đông huyết  Tiến hành với bƣớc nhảy 5%  Thơng số thay đổi: thí nghiệm tìm khoảng chống đông huyết muối ăn nồng độ đƣợc tăng theo thứ tự 0, 10%  Hàm mục tiêu: thời gian chống đông  Tiến hành với bƣớc nhảy 1%  Thơng số thay đổi: thí nghiệm tìm nồng độ chống đơng huyết tốt muối ăn nồng độ đƣợc tăng theo thứ tự 1%, 2%, 3% ,4% , 5% sau thực thí nghiệm thơ với bƣớc nhảy thí nghiệm  Hàm mục tiêu: thời gian chống đơng 3.4.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát pH cho q trình kết tủa huyết  Mục đích: Nhằm xác định pH tối ƣu dịch huyết pI (Isoelectrics point-điểm đẳng điện) để kết tủa protein trình lọc rửa protein khơng bị thất nhiều Vì thay đổi pH môi trƣờng, mức độ tủa protein thay đổi Ở pH thấp, protein tích điện dƣơng nhóm amin proton hóa (thu nhận proton) Ở giá trị pH cao, protein tích điện âm nhóm carbocyl phân tử protein bị proton (mất H+) Tại giá trị pI, protein khơng tích điện, điều làm giảm tính tan protein protein khơng cịn khả tƣơng tác với mơi trƣờng Khi đó, phân tử protein tách khỏi môi trƣờng 40 Nguyên liệu huyết Hút mẫu, 100ml/ mẫu Thêm vào 10ml EDTA 5% Chỉnh pH HCl 10% 4.5 5.5 6.5 7.5 6.0 6.5 Để yên 30 phút Đun sôi 45 phút Lọc rửa Bã lọc Kiểm tra hàm lƣợng sắt Kết Hình 3.3: Quy trình khảo sát nồng độ pH tối ƣu kết tủa protein 41 7.0  Cách tiến hành Hút mẫu, mẫu 100ml huyết, chỉnh pH lần lƣợt 4; 4,5; 5; 5,5; 6; 6,5;7; để yên 30 phút Đun sôi để kết tủa protein, sau lọc đem sấy 1050C đến khối lƣợng không đổi Khối lƣợng kết tủa thu đƣợc cho ta biết khoảng pH tối ƣu cho q trình đơng tụ protein Ngồi ra, thử nhanh cách lấy nƣớc lọc dịch kết tủa, thử với dung dịch TCA 10% mẫu kết tủa nhiều mẫu lƣợng kết tủa thu đƣợc  Thơng số thay đổi: khảo sát pH 4; 4,5; 5; 5,5; 6; 6,5;7  Thông số cố định: khối lƣợng kết tủa thu đƣợc 3.4.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát hàm lượng đệm phosphate đệm citrate lên trình khử sắt  Mục đích Tách sắt máu nhằm giảm mùi cho sản phẩm, tăng tính ngon miệng, tăng khả thu nhận bột huyết cho gia súc Thí nghiệm tách ion sắt hai hổn hợp muối khác hỗn hợp muối citrat photphat đƣợc nhà khoa nghiên cứu nhƣ tài liệu [7],[8],[9] đề cập Sự tạo phức Fe hai hỗn hợp muối tạo phức tan, phức dễ dàng loại q trình lọc rữa Ngồi để ức chế trình thẩm màu bột huyết bổ sung hàm lƣợng hỗn hợp NaNO2 KNO3 200ppm theo khuyến cáo nông nghiệp hòa kỳ (USDA)  Cách tiến hành Các mẫu đƣợc đựng bercher 250 ml, becher chứa 250ml dịch huyết đƣợc bổ sung 4% muối nhằm chống đông huyết Tất mẫu đƣợc chỉnh pH 6.5 HCl 10%, sau bổ sung chất tách sắt nồng độ khác nhau, riêng mẫu trắng chỉnh pH mà không bổ sung chất khử sắt Tiến hành gia nhiệt, khống chế 60-65°C, thời gian 45 phút Thu kết tủa cho vào túi vải có chất liệu nilong 42 nhỏ, rửa mẫu nƣớc cho phức hịa tan Để đánh giá q trình rữa hồn tồn hay khơng thử cách lấy dịch thử, axit hóa HNO3 ( chuyển dạng Fe3+), sau thử với dụng dịch KSCN 5% có màu đỏ máu cịn sắt Mẫu sau sấy khô, đem kiểm tra hàm lƣợng Fe cịn lại bột huyết Ngun liệu máu Chống đơng Chỉnh pH (pH = 6.5) Tách sắt đệm citrate Tách sắt đệm phosphate Bổ sung NaNO2, KNO3 200ppm Gia nhiệt Rửa Vắt Sấy Kiểm tra hàm lƣợng sắt Bán sản phẩm Hình 3.4: Quy trình khảo sát ảnh hƣởng đệm phosphate đệm citrate 43 a Khảo sát ảnh hƣởng đệm citrate đến trình khử sắt bột huyết  Tiến hành khảo sát với bƣớc nhảy 5%  Thông số thay đổi: khử sắt đệm citrate nồng độ 0; 5; 10; 15; 20%  Hàm mục tiêu: hàm lƣợng sắt lại  Tiến hành khảo sát với bƣớc nhảy 1%  Thông số thay đổi: khử sắt đệm citrate nồng độ 8, 9, 10, 11, 12%  Hàm mục tiêu: hàm lƣợng sắt lại Phức sắt citrat tồn hai dạng Fe2+ Fe3+ tồn nhiều dạng khác nhƣ theo nghiên cứu [7] [9] , dạng bền là: b Khảo sát hàm lƣợng đệm phosphate đến trình khử sắt bột huyết  Tiến hành khảo sát với bƣớc nhảy 5%  Thông số thay đổi: khử sắt đệm phosphate nồng độ 0; 5; 10; 15; 20%  Hàm mục tiêu: hàm lƣợng sắt lại  Tiến hành khảo sát với bƣớc nhảy 1%  Thông số thay đổi: khử sắt đệm phosphate nồng độ 10; 11; 12, 13, 14%  Hàm mục tiêu: hàm lƣợng sắt lại  Chuẩn bị đệm phosphate  Dung dịch NaH2PO4 0.2M: 27.8g NaH2PO4 hòa tan định mức nƣớc đến 1000ml  Dung dịch Na2HPO4 0.2M: 53.05 Na2HPO4.7H2O 71.7g Na2HPO4.12H2O hòa tan định mức nƣớc đến 1000ml 44  Dung dịch đệm phosphate có pH khác phụ thuộc vào số ml dung dịch NaH2PO4 0.2M số ml dung dịch Na2HPO4 0.2M Khi thêm 39ml dung dịch NaH2PO4 0.2M 61ml dung dịch Na2HPO4 0.2M pH đạt từ 6.5-7 3.4.3.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát thời gian đun cách thủy để thu kết tủa bột huyết  Mục đích Gia nhiệt giúp tạo điều kiện để hình thành kết tủa tách kết tủa khỏi nƣớc, đƣa dịch huyết từ trạng thái keo tụ dạng kết tủa vơ định hình Nhiệt độ q trình gia nhiệt đƣợc khống chế 70  2oC khoảng thời gian khác  Cách tiến hành  Thông số khảo sát: gia nhiệt khoảng thời gian 15; 30; 45; 60 phút  Hàm mục tiêu: khối lƣợng kết tủa 3.4.3.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát nhiệt độ sấy thời gian sấy  Mục đích Nhằm giảm hàm lƣợng nƣớc cịn lại sau q trình lọc tạo sản phẩm dạng bột khô, điều làm giúp kéo dài thời gian bảo quản  Cách tiến hành  Thông số khảo sát: o Khảo sát nhiệt độ sấy mức 35; 40; 45oC o Khảo sát thời gian sấy mức 7, 10, 15h  Hàm mục tiêu: hàm ẩm sản phẩm 3.4.3.6 Thí nghiệm 6: Khảo sát loại hàm lượng chất chống mốc cho sản phẩm bột huyết  Mục đích Sản phẩm bột huyết có hàm ẩm khoảng 18%, điều kiện thích hợp để vi sinh vật phát triển, đặc biệt nấm mốc, điều gây bất lợi cho q trình bảo 45 quản Mục đích khảo sát loại lƣợng phụ gia bảo quản nhằm ngăn ngừa nấm mốc, giúp sản phẩm ổn định chất lƣợng thời gian bảo quản  Cách tiến hành Mẫu bột huyết đƣợc tiến hành theo quy trình thu đƣợc từ thí nghiệm khảo sát 1, 2, 3, Cân mẫu, mẫu 100g huyết thu đƣợc sau trình sấy Lần lƣợt bổ sung kali sorbate natri benzoate nồng độ 0.1% 0.2% vào mẫu, mẫu cịn lại để khơng Sau cho vào túi PE, ghép mí bảo quản điều kiện thƣờng 30 ngày, gửi mẫu kiểm tổng hàm lƣợng nấm mốc trung tâm đo lƣờng chất lƣợng để chọn loại phụ gia sử dụng  Khảo sát loại phụ gia sử dụng  Thông số khảo sát: nồng độ kali sorbate natri benzoate đƣợc thay đổi nhƣ sau: 0, 0.1, 0.2%  Hàm mục tiêu: Tổng số nấm mốc  Khảo sát lƣợng phụ gia sử dụng  Thông số khảo sát: nồng độ natri benzoate đƣợc thay đổi nhƣ sau: 0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2%  Hàm mục tiêu: Tổng số nấm mốc 46 Nguyên liệu huyết Bổ sung NaCl chống đông Chỉnh pH tối ƣu+ Đệm thuốc thử loại sắt Đun sôi cách thủy 700C Lọc ,rửa, thu bã Thu bã lọc Sấy 450C Bán thành phẩm Cân mẫu, 100g/1 mẫu Bổ sung chất chống mốc 0% 0.1% 0.2% 0% 0.05% 0.1% Sấy 450C Lƣu mẫu 30 ngày Kiểm tra tổng hàm lƣợng nấm mốc Kết Hình 3.5: Quy trình khảo sát chất chống mốc 47 0.15% 3.4.3.7 Thí nghiệm 7: Đánh giá chất lượng bột huyết thử nghiệm bột huyết thị trường trọng lượng chuột ni có bổ sung bột huyết  Đối tƣợng nghiên cứu  Bột huyết đƣợc tách sắt (do phịng thí nghiệm)  Bột huyết chƣa tách sắt mua Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lƣờng Chất lƣợng (QUATEST3) Địa chỉ: 49 Pasteur, quận 1, TP.HCM  Bột huyết đƣợc hòa với cám viên nghiền mịn đƣợc trộn nƣớc để tạo kết dính tạo thành viên thức ăn  Động vật nghiên cứu Chuột nhắt trắng đực bệnh, khoảng 5-6 tuần tuổi, trọng lƣợng trung bình 18-27g mua viện Pasteur Tp.HCM  Phƣơng pháp Chuột thí nghiệm đƣợc chia làm Lô  Lô 1: Lô đối chứng âm, chuột đƣợc cho ăn cám viên mua viện Pasteur  Lô 2: Lô đối chứng dƣơng, chuột đƣợc cho ăn cám viên có bổ sung bột huyết Trung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lƣờng Chất lƣợng (QUATEST 3) cung cấp  Lơ 3: Lơ thí nghiệm, chuột đƣợc cho ăn cám viên có bổ sung bột huyết tách sắt thí nghiệm Thí nghiệm khảo sát 35 chuột, lô 1, lô lô ứng với hàm lƣợng bột huyết riêng (5%, 7%, 10%), lô chuột nhắt trắng Chuột đƣợc nuôi ổn định ngày nhốt riêng chuồng (1 chuồng/1con) nhằm giúp chuột thích ứng với điều kiên nuôi sau mua Thí nghiệm đƣợc khảo sát tuần Chuột đƣợc cho ăn lần ngày vào lúc sáng ngày thức ăn thí nghiệm chuẩn bị sẵn, lƣợng thức ăn cho ăn 3g/con chuột Điều kiện nuôi nhiệt độ chuồng nuôi: 25-350C, 48 độ ẩm môi trƣờng: 60-80%, ngày thay trấu lần Cuối tuần kiểm tra trọng lƣợng chuột  Bố trí thí nghiệm Thí nghiệm đƣợc bố trí theo bảng sau: Bảng 3.2: Bố trí thí nghiệm khảo sát bột huyết tách sắt Nhóm (-) (+) ( TN ) Lơ (5con/ lơ) Thức ăn thí nghiệm Cám viên Liều lƣợng (1 con) Cám viên có 5% bột huyết chƣa tách sắt Cám viên có 7% bột huyết chƣa tách sắt Cám viên có 10% bột huyết chƣa tách sắt Cám viên có 5% bột huyết tách sắt Cám viên có 7% bột huyết tách sắt Cám viên có 10% bột huyết tách sắt 3g 3g 3g 3g 3g 3g 3g ( - ): nhóm đối chứng âm, chuột ăn thức ăn cám viên mua viện Pasteur ( + ): nhóm đối chứng dƣơng, chuột ăn cám viên có hàm lƣợng bột huyết chƣa tách sắt ứng với lô 5%, 7%, 10% doTrung tâm Kỹ thuật Tiêu chuẩn Đo lƣờng Chất lƣợng (QUATEST 3) cung cấp (TN): nhóm thí nghiệm, chuột ăn cám viên có bổ sung hàm lƣợng bột huyết đƣợc tách sắt ứng với lô 5%, 7%, 10% (do phịng thí nghiệm) 49 3.4.3.8 Thí nghiệm 8: Nghiên cứu bao bì cho trình bảo quản Mẫu bột huyết đƣợc cân đóng gói vào loại bao bì PE bao bì tráng bạc khối lƣợng bao 100g, bổ sung chất chống mốc nồng độ 0.1% nhƣ vừa khảo sát thí nghiệm trên, sản phẩm đƣợc bảo quản điều kiện thống mát, nhiệt độ phịng Sau tháng, mẫu đƣợc kiểm tra trung tâm để kiểm tra phát triển nấm mốc Bột huyết Cân định lƣợng Vào bao Bao bì PE Bao bì tráng bạc Ghép mí Bảo quản Phân tích Kết Hình 3.6: Quy trình nghiên cứu bao bì cho sản phẩm 3.4.3.9 Thí nghiệm 9: Đánh giá giá trị lượng tiêu vi sinh sản phẩm Từ thơng số tìm đƣợc tiến hành sản xuất lƣu trữ, sau phân tích số tiêu để đấnh giá chất lƣợng thành phầm nhƣ: 50          Hàm ẩm Hàm lƣợng protein Hàm lƣợng cacbonhydrate Hàm lƣợng lipid Hàm lƣợng sắt Hàm lƣợng NaCl Tổng số nấm mốc Samonela E.coli 3.4.4 Một số tiêu phân tích 3.4.4.1 Xác định hàm lượng sắt Đem mẫu cân gram Đem nung mẫu 800°C (vơ hóa mẫu) mẫu trắng hoàn toàn Lúc Sắt dạng oxyt Hút ml HNO3 đậm đặc, ml HCl 10% vào mẫu, nung bếp điện để sơi nhẹ để chuyển tồn sắt Fe3+ Lọc mẫu định mức nƣớc cất thành 100ml Hút 10 ml mẫu định mức vào erlen Nhỏ 7-8 giọt acid sulphosalicylic 10%, tiếp tục nhỏ giọt NH4OH 10% để có màu đỏ tím Thí nghiệm đƣợc lặp lại lần để thu đƣợc kết Các phản ứng phƣơng pháp chuẩn độ sắt EDTA xảy nhƣ sau: Trong môi trƣờng pH từ : 2.5-3 Fe3+ + H2SSal H2Y2- + Fe3+ FeSSal+ + 2H+ FeY- + 2H+ Xác định điểm cuối: H2Y2- + FeSSal+ FeY- + H2SSal Đỏ tím Vàng chanh  Kết quả: ( 51 ) 3.4.4.2 Xác định hàm ẩm Cân khoảng 5g mẫu, sấy 105oC đến khối lƣợng không đổi, cân lại khối lƣợng %ẩm = (m1 – m2)/m3 * 100%  m1: khối lƣợng mẫu chén sau sấy 105oC đến khối lƣợng không đổi (g)  m2: khối lƣợng chén (g)  m3: khối lƣợng mẫu (g) 3.4.5 Xử lý số liệu  Số liệu thu thập đƣợc xử lý phần mềm Excel Statgraphics Centurion XV 52 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 ẢNH HƢỞNG CỦA NỒNG ĐỘ NaCl LÊN KHẢ NĂNG CHỐNG ĐÔNG HUYẾT Bảng 4.1: Kết chống đông huyết NaCl nồng độ 0%, 5%, 10% Nồng độ (g/100ml) Thời gian chống đông (phút) 0% 5.50a  0.57 5% 1326.67b  9.88 10% 979.33c  7.23 Thời gian chống đông (phút) Ghi chú: Các ký tự a, b, c cột biểu diễn khác biệt theo thống kê với  = 5% 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 10 Nồng độ NaCl (%) Hình 4.1: Đồ thị biểu diễn biến thiên thời gian theo nồng độ muối Trong điều kiện bình thƣờng, sau giết mổ vài phút, dịch huyết đơng lại gây khó khăn trình thực khảo sát sau Nhận thấy NaCl có khả chống đơng huyết ngăn cản sợi fibrin tạo thành mạng lƣới liên kết phần tử huyết, đồng thời giúp ổn định điện tích bề mặt tiểu cầu, tránh bám dính, đo 53 ... Thí nghiệm 7: Đánh giá chất lượng bột huyết thử nghiệm bột huyết thị trường trọng lượng chuột ni có bổ sung bột huyết  Đối tƣợng nghiên cứu  Bột huyết đƣợc tách sắt (do phịng thí nghiệm)  Bột. .. trình nghiền để đƣa sản phẩm dạng bột, đồng thời làm mịn sản phẩm, tăng tính cảm quan cho sản phẩm Sau sấy xong, sản phẩm đƣợc cho vào máy nghiền để làm nhỏ sản phẩm Sản phẩm sau nghiền đƣợc... Libal, 1977; Miller, 1990) Từ vấn đề nêu nhóm chọn nghiên cứu đề tài “ Bước đầu Khảo sát qui trình sản xuất bột huyết (có loại Sắt)” Bột huyết sấy khô đƣợc sản xuất từ huyết tƣơi, động vật không