Mục đích:
Nhằm xác định pH tối ƣu của dịch huyết về pI (Isoelectrics point-điểm đẳng điện) để kết tủa protein trong q trình lọc rửa protein khơng bị thất thốt nhiều. Vì khi thay đổi pH của môi trƣờng, mức độ tủa của protein cũng thay đổi. Ở pH thấp, protein tích điện dƣơng vì nhóm amin proton hóa (thu nhận proton). Ở giá trị pH cao, protein tích điện âm vì các nhóm carbocyl trong phân tử protein bị mất đi proton (mất H+). Tại giá trị pI, protein khơng tích điện, điều này làm giảm tính tan của protein vì protein khơng cịn khả năng tƣơng tác với môi trƣờng. Khi đó, các phân tử protein sẽ tách ra khỏi môi trƣờng.
Để yên 30 phút Đun sôi 45 phút Lọc rửa Bã lọc Kiểm tra hàm lƣợng sắt Kết quả Nguyên liệu huyết
Hút 7 mẫu, 100ml/ mẫu
Thêm vào 10ml EDTA 5%
4.5 5.5 6.5 7.5 6.0 6.5 7.0
Chỉnh pH bằng HCl 10%
Cách tiến hành
Hút 7 mẫu, mỗi mẫu 100ml huyết, chỉnh pH về lần lƣợt 4; 4,5; 5; 5,5; 6; 6,5;7; để yên 30 phút. Đun sơi để kết tủa protein, sau đó lọc rồi đem sấy ở 1050C đến khối lƣợng không đổi. Khối lƣợng kết tủa thu đƣợc cho ta biết khoảng pH tối ƣu cho q trình đơng tụ protein. Ngồi ra, có thể thử nhanh bằng cách lấy nƣớc lọc của dịch kết tủa, thử với dung dịch TCA 10% nếu mẫu nào có thể kết tủa nhiều thì mẫu đó lƣợng kết tủa thu đƣợc là ít.
Thơng số thay đổi: khảo sát ở các pH 4; 4,5; 5; 5,5; 6; 6,5;7
Thông số cố định: khối lƣợng kết tủa thu đƣợc