Thực hành dược lí 2

z ĐẠI HỌC DUY TÂN KHOA DƯỢC Giáo trình THỰC HÀNH DƯỢC LÝ ĐÀ NẴNG, 2018 NỘI DUNG THỰC TẬP DƯỢC LÝ NĂM HỌC 2016 – 2017 TT Tên - Nội dung Bài 1:Vị trí tác dụng của strychnin tủy sống Bài 2:Tác dụng lợi niệu của furosemid Bài 3:Tác dụng của heparin sodium quá trình đơng máu Bài 4: Tác dụng của thuốc lên đồng tử mắt Bài 5: Tác dụng gây tê dẫn truyền thần kinh của Procaine Bài 6: Độc tính cấp - xác định liều LD50 - Độc tính cấp của strychnin sulfat Thi thực tập MỘT SỐ QUY ĐỊNH Ở PHÒNG THỰC TẬP DƯỢC LÝ NỘI QUY CHUNG Khi vào phòng thực tập dược lý, sinh viên cần tuân thủ các quy định sau:  Mang áo blouse, trang, găng tay, khăn giấy (sinh viên tự chuẩn bị)  Giờ giấc: buổi sáng bắt đầu từ giờ, buổi chiều từ 13 Sinh viên đến muộn 15 phút không được thực tập Nếu xin nghỉ buổi thực tập phải có đơn xin phép trước mợt ngày có lí chính đáng phải bù lại buổi khác  Đọc trước thực tập lý thuyết liên quan  Phải ghi chép kết vào sổ báo cáo thực tập  Thận trọng, tỉ mỉ tiến hành thí nghiệm Tiêm liều cho thú vật theo qui tắc một người thực hiện, một người kiểm tra I TRẬT TỰ  Giữ gìn trật tự chung, không trao đổi ồn ào, lớn tiếng, không được di dời bàn ghế ờn tiếng đợng ảnh hưởng đến thú vật làm sai lệch kết II VỆ SINH  Sinh viên phải dọn dẹp vệ sinh sau thú đại tiện tiểu tiện bỏ vào bao rác  Không đổ rác, phân vào các bồn nước Rác phải bỏ vào các bocal Cuối buổi thực tập, tập trung rác vào thùng rác đem đổ Sau buổi thực tập, phải lau dọn mặt bàn, sàn nhà, bocal, dụng cụ thí nghiệm Sinh viên làm hư hỏng dụng cụ phải báo lại có trách nhiệm bời hồn  Mỗi buổi thực tập phân cơng nhóm làm vệ sinh ch̀ng trại nuôi chuột, thỏ cho chuột thỏ ăn theo hướng dẫn của giảng viên III THÚ VẬT  Luôn nhẹ tay với thú vật thí nghiệm, mạnh tay ảnh hưởng làm sai lệch kết thực tập làm cho thú  Không được đụng chạm thường xuyên vào thú vật không cần thử thuốc  Thú vật sau thực tập xong phải được phân loại riêng: thú chết, thú sớng Nếu thú vật chết sinh viên phân loại riêng bao rác đem đổ nơi thích hợp Bài VỊ TRÍ TÁC DỤNG CỦA STRYCHNIN TRÊN TỦY SỐNG MỤC ĐÍCH THÍ NGHIỆM Chứng minh tác dụng chọn lọc của strychnin tủy sống CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM - Động vật thí nghiệm: ếch đồng khỏe mạnh, nặng 150,0±15,0g, không phân biệt giống, đủ tiêu chuẩn thí nghiệm - Thuốc thí nghiệm: dung dịch strychnin sulfat 0,1% - Dụng cụ thí nghiệm: bộ phẫu thuật động vật nhỏ, bàn mổ ếch, bơm – kim tiêm các loại, kim chọc tủy, lồng nhốt ếch, đồng hồ bấm giây, bông, kim khâu … TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM - Đặt ếch bàn - Kích thích quan sát đáp ứng bình thường của ếch (kích thích bằng cách gõ xuống bàn, soi ánh sáng đèn pin vào mắt ếch kích thích trực tiếp bằng cách dùng kim châm vào chân ếch) - Tiêm vào túi bạch huyết hàm của ếch 1,0ml dung dịch strychnin sulfat 0,1% (1,0mg/con) Sau 10-15 phút, strychnin có tác dụng kích thích ếch thấy ếch co giật CHỈ TIÊU VÀ PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ: - Đánh giá hoạt đợng bình thường của ếch (khơng có co giật) - Diễn biến quá trình thí nghiệm: lần lượt kích thích quan sát đáp ứng sau  Kích thích bằng âm thanh, ánh sáng, học với cường độ vào hai bên cẳng chân ếch, so sánh đáp ứng  Kích thích cường độ vào da ếch, so sánh đáp ứng  Dùng kéo luồn qua miệng ếch, cắt bỏ hàm qua hai mắt ếch (loại bỏ não ếch) Chờ sau phút kích thích lại quan sát đáp ứng - Dùng kim chọc tủy phá bỏ tủy sống của ếch, kích thích lại quan sát đáp ứng NHẬN ĐỊNH KẾT QUA - Giải thích kết thí nghiệm - Nếu ứng dụng lâm sàng của các thuốc kích thích thần kinh trung ương BÀI TÁC DỤNG LỢI NIỆU CỦA FUROSEMID MỤC ĐÍCH THÍ NGHIỆM Chứng minh tác dụng lợi niệu của furosemid CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM - Động vật thí nghiệm: thỏ nhà trưởng thành, khỏe mạnh, cân nặng 2,0±0,2kg, không phân biệt giống - Thuốc thí nghiệm: dung dịch furosemid 0,1% - Dụng cụ thí nghiệm: bơm – kim tiêm các loại, bộ phẫu thuật động vật nhỏ, cannula thủy tinh, khay đựng nước tiểu, lồng nhốt thỏ, đồng hồ bấm giây … TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM - Cố định ngửa thỏ bàn mổ Sử dụng ống thông tiểu để thông đường tiểu của thỏ Cho nước tiểu chảy vào khay đựng để xác định sớ lượng nước tiểu bình thường - Tiêm chậm tĩnh mạch vành tai thỏ dung dịch furosemid 0,1% x 0,5ml/kg (0,5mg furosemid/kg) CHỈ TIÊU VÀ PHƯƠNG PHÁP LƯỢNG GIÁ - Đo sớ lượng nước tiểu bình thường: xác định số lượng nước tiểu chảy phút, xác định V1 (ml) - Thời gian xuất hiện tác dụng lợi tiểu (giây) - Cường độ tác dụng lợi niệu của furosemid (xác định V ml) vào thời điểm sau 10 phút kể từ lúc tiêm furosemid NHẬN ĐỊNH KẾT QUA - So sánh V2 V1 - Nêu đặc điểm tác dụng lợi niệu của furosemid giải thích chế - Nêu ứng dụng lâm sàng của furosemid BÀI TÁC DỤNG CỦA HEPARIN SODIUM TRÊN QUÁ TRÌNH ĐÔNG MÁU MỤC ĐÍCH THÍ NGHIỆM - Chứng minh tác dụng chống đông của heparin sodium CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM - Động vật thí nghiệm: thỏ nhà trưởng thành, khỏe mạnh, cân nặng 2.0±0.2kg, không phân biệt giống, đủ tiêu chuẩn thí nghiệm - Thuốc thí nghiệm: dung dịch heparin sodium 1000 IU/ml - Dụng cụ thí nghiệm: bơm kim tiêm các loại, lam kính thủy tinh, chuồng nhốt thỏ, đồng hồ bấm giây … TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM - Nhốt thỏ vào hộp, dùng kim tiêm chích vào tĩnh mạch tai thỏ hứng một giọt máu lam kính Xác định thời gian đơng máu bình thường (phút) - Tiêm chậm tĩnh mạch vành tai thỏ dung dịch heparin sodium với liều 0.1ml/kg (100IU/kg) Chờ sau phút, xác định lại thời gian đông máu sau dùng heparin sodium CHỈ TIÊU VÀ PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ - Đo thời gian máu đơng bình thường (gọi t1, tính bằng phút) - Thời gian máu đông sau dùng heparin sodium (gọi t2, tính bằng phút) NHẬN ĐỊNH KẾT QUA - So sánh t1 t2 Nêu đặc điểm tác dụng của heparin sodium giải thích chế, nêu ứng dụng lâm sàng của heparin sodium BÀI TÁC DỤNG CỦA THUỐC LÊN ĐỒNG TỬ MẮT MỤC ĐÍCH THÍ NGHIỆM Chứng minh tác dụng của atropin sulfat physostigmin đồng tử mắt thỏ tính đối kháng của thuốc CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM - Động vật thí nghiệm: thỏ nhà trưởng thành khỏe mạnh, có trọng lượng tương đương (2.0±0.2kg), không phân biệt giống, đủ tiêu chuẩn thí nghiệm - Thuốc thí nghiệm: + Dung dịch atropin sulfat 1.0% + Dung dịch physostigmin salicylat (eserin) 1.0% + Dung dịch natri clorid 0.9% - Dụng cụ thí nghiệm: lồng nhốt thỏ, đồng hồ bấm giây TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM - Nhốt thỏ vào một lồng Đo kích thước đồng tử mắt thỏ - Thử thuốc lần 1: + Thỏ 1: nhỏ vào mắt phải giọt dung dịch natri clorid 0.9%, mắt trái giọt dung dịch atropin sulfat 1.0% + Thỏ 2: nhỏ vào mắt phải giọt dung dịch natri clorid 0.9%, mắt trái giọt dung dịch physostigmin salicylat 1.0% - Thử chéo: + Thỏ 1: nhỏ vào mắt trái giọt physostigmin salicylat 1.0% + Thỏ 2: nhỏ vào mắt trái giọt atropin sulfat 1.0% CHỈ TIÊU VÀ PHƯƠNG PHÁP LƯỢNG GIÁ - Đo kích thước đờng tử bình thường mắt của thỏ (tính bằng mm) - Sự thay đổi kích thước đồng tử mắt của thỏ qua lần thử thuốc Ghi kết vào bảng theo mẫu 10 NHẬN ĐỊNH KẾT QUA - So sánh thay đổi kích thước đồng tử mắt của thỏ qua lần thử thuốc + Thử thuốc lần 1: so sánh kích thước đồng tử của mắt trái thỏ với thỏ so sánh với mắt nhỏ dung dịch natri clorid 0.9% (so sánh mắt so sánh thỏ) + Thử chéo: so sánh kích thước đồng tử của mắt thử chéo với kích thước đồng tử thử thuốc lần so sánh với mắt nhỏ dung dịch natri clorid 0.9% (so sánh mắt so sánh thỏ, sau so sánh lần làm thí nghiệm) - Nêu đặc điểm tác dụng của các thuốc atropin sulfat physostigmin đồng tử Giải thích chế - Nêu ứng dụng lâm sàng của các thuốc Bảng kết thử tác dụng của thuốc đồng tử mắt Thử thuốc lần Thỏ số Thỏ số Mắt phải: nhỏ dung dịch NaCl 0.9% Mắt trái: nhỏ atropin 1.0% Mắt phải: nhỏ dung dịch NaCl 0.9% Mắt trái: nhỏ physostigmin 1.0% Kích thước đồng tử Thử chéo (mm) Kích thước đồng tử (mm) Physostigmi n 1.0% Atropin 1.0% 11 Bài TÁC DỤNG GÂY TÊ DẪN TRUYỀN THẦN KINH CỦA PROCAINE MỤC ĐÍCH THÍ NGHIỆM Chứng minh tác dụng gây tê dẫn truyền thần kinh của procaine CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM - Động vật thí nghiệm: ếch đồng khỏe mạnh, nặng 150,0±15,0g, không phân biệt giống, đủ tiêu chuẩn thí nghiệm  - Thuốc thí nghiệm: thuốc Novocain 1,0% - Dụng cụ thí nghiệm: bộ phẫu thuật động vật nhỏ, bơm – kim tiêm các loại, lồng nhốt ếch, đồng hồ bấm giây, bông, kéo, giá đỡ TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM  - Cắt bỏ não ếch, treo hàm cuả ếch lên giá đỡ  Nhúng chân của ếch vào dung dịch HCL 1,0% Xác định thời gian ếch co chân (làm lần nhớ phải lau bàn chân ếch sau lầm thử phản xạ, lấy giá trị trung bình gọi t1) - Tiêm vào ổ bụng của ếch 2ml dung dịch procaine 3% chờ sau 10 phút sau nhúng bàn chân ếch vào HCL, Xác định thời gian ếch co chân lên gọi t2 sau phút ếch ko co chân đc, CHỈ TIÊU VÀ PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ: - Đánh giá hoạt đợng bình thường của ếch - Diễn biến quá trình thí nghiệm: lần lượt kích thích quan sát đáp ứng sau - Sự thay đổi cảm giác đau sau dùng procain NHẬN ĐỊNH KẾT QUA - So sánh trước thí nghiệm ( so sánh t1 t2) Nêu đặc điểm tác dụng gây tê của procain giải thích chế Ứng dụng lâm sàng của procain - Nếu ứng dụng lâm sàng của các thuốc kích thích thần kinh trung ương 12 BÀI ĐỘC TÍNH CẤP – XÁC ĐỊNH LIỀU LD50 ĐỘC TÍNH CẤP CỦA STRYCHNIN SULFAT MỤC ĐÍCH THÍ NGHIỆM Sau kết thúc thực tập, sinh viên - Tính toán pha chế dung dịch thuốc nồng độ cần thử nghiệm - Hiểu rõ các bước tiến hành thử nghiệm để xác định độc tính cấp LD 50 của một dược phẩm - Xác định liều LD50 theo phương pháp Karber Behrans dựa phản ứng tồn biến (sớng hay chết) xảy thú vật nhóm 2.CHUẨN BỊ THÍ NGHIỆM - Thú vật thí nghiệm: chuột nhắt phái, có trọng lượng xấp xỉ 1822g lứa tớt Cḥt được nhịn đói trước thử nghiệm - Th́c thí nghiệm + Ớng tiêm 1ml + kim số 26 + Cân, phễu thủy tinh + Dung dịch cái strychnin sulfat 0,1% (1mg/ml) TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM 3.1 Thử nghiệm xác định LD50 3.1.1 Thử nghiệm sơ khởi - Dùng khoảng lô chuột lô ít nhất - Nên chọn liều cấp số nhân để được logarit của liều cấp sớ cợng - Cḥt cho nhịn đói trước giờ, được cho dùng thuốc Theo dõi chuột sau 24 tìm được:  d1: liều tới đa dung nạp, khơng có thú vật chết  d2: liều tối thiểu làm chết tất thú vật thử nghiệm  d1 d2 giới hạn khoảng cách phải tìm liều để tiến hành c̣c thử nghiệm xác định 13 3.1.2 Thử nghiệm xác định - Dùng ít nhất lô, lô ít nhất 10 chuột + Ở liều gần LD50 nên gia tăng số lượng thú vật (ít nhất 20 con) để đo lường được chính xác + Liều khoảng d1 d2 nên chọn cấp số nhân - Quan sát thú vật ít nhất 48 sau cho dùng thuốc - Báo cáo kết thử nghiệm + Số lượng thú vật chết – sống lô sau 48 dùng thuốc + Liều LD50 xác định được + Ghi nhận triệu chứng gây chất khảo sát, có + Về cḥt: giớng, phái, trọng lượng, thời gian nhịn đói trước thử nghiệm + Về điều kiện ngoại cảnh: nhiệt đợ phịng thí nghiệm + Về phương cách cho thuốc vào thể: đường hấp thu, thể tích dược phẩm cho vào chuột (không thay đổi tất các lô không quá 0.5ml/20g trọng lượng thể) + Thời gian tiêm, nồng độ hoạt chất, loại dung môi 3.1.3 Tính LD50 bằng phương pháp Karber Behrens Df: liều tối thiểu làm chết tất thú vật a: số trung bình của sớ thú vật chết liều b: hiệu số liều n: số thú vật dùng liều số thú vật trung bình 3.2 Khảo sát đợc tính cấp của strychnin sulfat Thử nghiệm sơ khởi (SV không thực hiện) - Chuột được chia thành lô, lô 14 - Tiêm da - Sau 24h, xác định liều d1 d2 Kết cho biết: d1=1.1mg/kg d2=2.1mg/kg Thử nghiệm xác định - lô chuột, lô - Tiêm da dung dịch cái strychnin sulfat 1mg/ml - Liều khoảng d1 d2 (mg/kg) là: 1.3 – 1.5 – 1.7 – 1.9 - Quan sát 45 phút cịn sớng hay chết BÁO CÁO KẾT QUA THÍ NGHIỆM - Báo cáo kết quả, ghi rõ tất chi tiết liên quan + Chuột thử nghiệm + Điều kiện ngoại cảnh + Phương cách cho thuốc vào chuột - Tính LD50 theo phương pháp Karber Behrens + Lập bảng hiệu suất tử vong, liều + Cho kết LD50 Bài tập thí dụ Tính đợc tính LD50 của cocain clohydrat, tiêm tĩnh mạch đuôi chuột chuột nhắt Liều (mg/kg) Số thú vật /lô Số thú vật chết/lô Phân suất tử vong 0,015 20 0 0,020 69 11 16 0,025 95 50 53 0,030 78 61 78 0,035 44 37 84 0,040 20 20 100 15 a b ab 5,5 0,005 0,0275 30,5 0,005 0,1525 55,5 0,005 0,2775 49 0,005 0,2450 28,5 0,005 0,1425 LD50 = 0,04 – 0,0155 = 0,0245 mg/kg BÀI 7: THI THỰC HÀNH 16 ... vong 0,015 20 0 0, 020 69 11 16 0, 025 95 50 53 0,030 78 61 78 0,035 44 37 84 0,040 20 20 100 15 a b ab 5,5 0,005 0, 027 5 30,5 0,005 0,1 525 55,5 0,005 0 ,27 75 49 0,005 0 ,24 50 28 ,5 0,005 0,1 425 LD50.. .2 NỘI DUNG THỰC TẬP DƯỢC LÝ NĂM HỌC 20 16 – 20 17 TT Tên - Nội dung Bài 1:Vị trí tác dụng của strychnin tủy sống Bài 2: Tác dụng lợi niệu của furosemid... trung bình 3 .2 Khảo sát đợc tính cấp của strychnin sulfat Thử nghiệm sơ khởi (SV không thực hiện) - Chuột được chia thành lô, lô 14 - Tiêm da - Sau 24 h, xác định liều d1 d2 Kết cho biết: