Thẩm Định Qui Trình Phân Tích Validation of Analytical Procedures. PGS.TS. Nguyễn Đức Tuấn Bộ môn Hóa Phân Tích – Kiểm Nghiệm

Thẩm Định Qui Trình Phân Tích Validation of Analytical Procedures PGS.TS Nguyễn Đức Tuấn Bộ mơn Hóa Phân Tích – Kiểm Nghiệm Khoa Dược – Đại học Y Dược TPHCM Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Thẩm Định Qui Trình Phân Tích Mục tiêu  Trình bày định nghĩa phân loại qui trình phân tích; cần thiết phải thẩm định qui trình phân tích  Thực tiêu cho việc thẩm định qui trình phân tích  Đánh giá qui trình phân tích sau thẩm định Nội dung  Qui trình phân tích  Thẩm định qui trình phân tích  Các tiêu thẩm định qui trình phân tích  Thẩm định qui trình định lượng dược chất dịch sinh học (tự đọc)  Một số ví dụ Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Thẩm Định Qui Trình Phân Tích Tài liệu tham khảo Quyết định Bộ Y tế số 44/2014/TT-BYT ngày 25 tháng 11 năm 2014 việc ban hành Thông tư Qui định việc đăng ký thuốc, phụ lục “Bộ hồ sơ kỹ thuật chung Asean (ACTD) hướng dẫn kỹ thuật” Quyết định Cục trưởng Cục Quản lý Dược, Bộ Y tế số 07/QĐ-QLD ngày 11 tháng 01 năm 2013 việc ban hành Sổ tay hướng dẫn đăng ký thuốc, phụ lục Asean guideline for validation of analytical procedures (2008), pp 1-17 Bộ mơn Hóa phân tích – Kiểm nghiệm, Kiểm nghiệm thuốc (2011), lần xuất thứ 1, nhà xuất Giáo dục Việt Nam, Hà Nội, tr 135 - 180 Quyết định Bộ trưởng Bộ Y tế số 1570/2000/QĐ-BYT ngày 22 tháng năm 2000 việc triển khai áp dụng nguyên tắc Thực hành tốt phòng kiểm nghiệm thuốc, tr 369 – 370 BP 2013, Apendix III, Chromatographic separation techniques, pp -11 ICH Harmonised tripartite guideline (2005), Validation of analytical procedures: text and methodology, pp – 13 Dược điển Việt Nam IV (2009), tr 2004, 462, 463, PL-119 – PL-123, PL-311 – PL-312 USP 35 (2013), Data elements required for validation, p 736 10 FDA (2001), Guidance for industry, Bioanalytical method validation, pp – 11 11 European Medicines Agency (2010), Guideline on validation of bioanalytical methods, pp - 13 12 Ludwig Huber (2007), Validation and qualification in analytical laboratories, second edition, pp 144, 146 Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Qui Trình Phân Tích  Qui trình thử nghiệm (test procedure)  Chỉ cách tiến hành phân tích  Mơ tả chi tiết bước cần thiết để thực phép thử phân tích  Chuẩn bị mẫu thử, mẫu chuẩn (đối chiếu), thuốc thử, cách sử dụng trang thiết bị, cách thiết lập đường chuẩn  Xử lý, tính tốn biện giải kết quả, v.v  Nhưng không giới hạn phần Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Qui Trình Phân Tích  Phân loại  Qui trình định tính: nhằm khẳng định có mặt chất phân tích mẫu thử Thường thực cách so sánh kết phân tích (phổ đồ, đáp ứng sắc ký, phản ứng hóa học, …) mẫu thử với chất chuẩn  Qui trình thử tạp chất: nhằm mục đích phản ánh xác mức độ tinh khiết mẫu thử  Định lượng hàm lượng tạp chất (quantitative test for impurities’ content)  Thử giới hạn tạp chất (limit tests for the control of impurities)  So với phép thử giới hạn tạp chất phép thử định lượng tạp chất yêu cầu thêm số tiêu thẩm định khác Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Qui Trình Phân Tích  Phân loại  Qui trình định lượng hoạt chất mẫu nguyên liệu thành phẩm thuốc hay nhiều thành phần chọn khác thành phẩm thuốc: nhằm mục đích đo lường chất phân tích có mặt mẫu thử (ngun liệu, chế phẩm, độ hòa tan, dược liệu, dịch sinh học, …)  Định lượng phép đo hàm lượng nhiều thành phần dược chất  Đối với thành phẩm thuốc: tiêu thẩm định tương tự áp dụng định lượng hoạt chất hay nhiều thành phần lựa chọn khác  Các tiêu thẩm định áp dụng cho phép định lượng liên quan đến qui trình phân tích khác (ví dụ: thử độ hòa tan)  Định lượng dược chất dịch sinh học có hướng dẫn thẩm định riêng Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Thẩm Định Qui Trình Phân Tích  Q trình thiết lập thực nghiệm thông số đặc trưng phương pháp  Chứng minh qui trình phân tích có phù hợp với mục đích ứng dụng không  Khi tiến hành thử nghiệm sai số mắc phải là nhỏ chấp nhận  Mục đích: giúp thực tiêu kiểm nghiệm tiêu chuẩn kiểm nghiệm  Cơng việc bắt buộc, có tính chất định kỳ nhằm đảm bảo phương pháp phân tích phù hợp kết phân tích đạt độ tin cậy suốt trình phân tích  Để đưa vào chuyên luận Dược điển tiêu chuẩn sở Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Thẩm Định Qui Trình Phân Tích  Tất số liệu liên quan thu q trình thẩm định cơng thức sử dụng để tính tốn đại lượng đặc trưng việc thẩm định cần đưa thảo luận  Các chất chuẩn (đối chiếu) sử dụng trình thẩm định cần phải đánh giá rõ ràng kèm theo tài liệu độ tinh khiết Mức độ tinh khiết phụ thuộc vào mục đích sử dụng  Thực tế: phác thảo công việc thực nghiệm nhằm xem xét tiến hành đánh giá cách thích hợp đồng thời nhiều thuộc tính để đưa hiểu biết khả qui trình phân tích (ví dụ: tính đặc hiệu, tuyến tính, khoảng xác định, độ đúng độ xác)  Những phương pháp phân tích theo dược điển khơng u cầu thẩm định tính phù hợp chúng phải kiểm chứng lại điều kiện sử dụng thực tế  Theo yêu cầu Asean: tất liệu liên quan đến tiêu thẩm định với tiêu chấp nhận tương ứng phải nộp cho quan quản lý dược phẩm Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Thẩm Định Qui Trình Phân Tích – Đăng ký thuốc Trường hợp đăng ký chất lượng theo tiêu chuẩn dược điển:  Khi đăng ký chất lượng theo dược điển thuộc nhóm dược điển tham chiếu (DĐVN, BP, USP, JP, IP (DĐQT), EP): Cần có báo cáo đánh giá phù hợp việc áp dụng quy trình phân tích dược điển đăng ký để kiểm tra chất lượng thuốc xin đăng ký Tùy trường hợp cụ thể, áp dụng 02 hình thức sau:  Bằng biện luận: Đưa biện luận quy trình phân tích áp dụng nhằm chứng minh kết phân tích thu không bị ảnh hưởng thành phần tá dược có mặt cơng thức thuốc xin đăng ký  Bằng thực nghiệm: Cung cấp số liệu thẩm định lại quy trình phân tích dược điển áp dụng cho thuốc xin đăng ký quy trình phân tích biện luận cho thấy cần thiết phải đánh giá phù hợp thực nghiệm Việc thẩm định lại quy trình phân tích dược điển tiến hành theo hướng dẫn thẩm định quy trình phân tích sau:  Định tính: Tính đặc hiệu  Định lượng (Định lượng hoạt chất thành phần chọn khác, tạp chất lượng hoạt chất giải phóng tiêu độ hịa tan): Độ đúng tính đặc hiệu  Thử giới hạn tạp chất: Tính đặc hiệu Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Thẩm Định Qui Trình Phân Tích – Đăng ký thuốc Trường hợp đăng ký chất lượng theo tiêu chuẩn dược điển:  Khi đăng ký chất lượng theo dược điển khơng thuộc nhóm dược điển tham chiếu: Cung cấp đầy đủ số liệu thẩm định quy trình phân tích quy định trường hợp đăng ký chất lượng theo tiêu chuẩn nhà sản xuất Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Thẩm định qui trình định lượng đồng thời paracetamol ibuprofen huyết tương Độ ổn định paracetamol ibuprofen sau làm lạnh rã đông Paracetamol Ibuprofen Nồng độ ban đầu (g/ml) Nồng độ tìm lại (g/ml) % Tìm lại Nồng độ ban đầu (g/ml) Nồng độ tìm lại (g/ml) % Tìm lại 0,230 0,227 0,223 0,224 0,221 TB RSD (%) 0,221 0,217 0,214 0,228 0,217 96,18 95,56 95,90 101,79 98,16 97,52 2,38 0,409 0,396 0,337 0,383 0,396 0,399 0,386 0,383 0,384 0,390 97,55 97,46 113,65 100,24 98,61 101,50 6,06 15,319 15,300 15,349 15,259 15,263 TB RSD (%) 15,224 15,283 15,253 15,216 15,222 99,38 99,89 99,37 99,72 99,73 99,62 0,21 24,597 24,409 24,476 24,401 24,408 23,741 23,518 23,771 23,630 23,500 96,52 96,35 97,12 96,84 96,28 96,62 0,36 Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Thẩm định qui trình định lượng đồng thời paracetamol ibuprofen huyết tương Độ ổn định cách ngày, bảo quản –20oC 60 ngày paracetamol ibuprofen Paracetamol Nồng độ mẫu ban đầu (g/ml) 0,225 Sau 20 ngày Hàm lượng tìm lại (g/ml) (%) 0,231 0,238 0,235 102,73 105,94 104,27 104,31 1,54 TB RSD (%) 15,298 TB RSD (%) Nguyễn Đức Tuấn Ibuprofen 15,147 15,154 15,217 99,02 99,06 99,50 99,18 0,25 Nồng độ mẫu ban đầu (g/ml) 0,384 Hàm lượng tìm lại (g/ml) (%) 0,391 0,375 0,374 101,73 97,67 97,44 98,95 2,44 24,690 24,633 24,661 100,02 99,78 99,90 99,90 0,12 TB RSD (%) 15,298 TB RSD (%) Đại học Y Dược TPHCM Thẩm định qui trình định lượng đồng thời paracetamol ibuprofen huyết tương Độ ổn định cách ngày, bảo quản –20oC 60 ngày paracetamol ibuprofen Paracetamol Nồng độ mẫu ban đầu (g/ml) 0,225 Sau 40 ngày Hàm lượng tìm lại (g/ml) (%) 0,212 0,221 0,206 94,10 98,13 91,74 94,66 3,41 TB RSD (%) 15,298 TB RSD (%) Nguyễn Đức Tuấn Ibuprofen 15,018 15,015 15,048 98,17 98,15 98,36 99,23 0,12 Nồng độ mẫu ban đầu (g/ml) 0,384 Hàm lượng tìm lại (g/ml) (%) 0,388 0,376 0,398 100,99 97,99 103,54 100,84 2,76 23,692 23,648 23,684 95,97 95,79 95,94 95,90 0,10 TB RSD (%) 15,298 TB RSD (%) Đại học Y Dược TPHCM Thẩm định qui trình định lượng đồng thời paracetamol ibuprofen huyết tương Độ ổn định cách ngày, bảo quản –20oC 60 ngày paracetamol ibuprofen Paracetamol Nồng độ mẫu ban đầu (g/ml) 0,225 Sau 60 ngày Hàm lượng tìm lại (g/ml) (%) 0,226 0,226 0,225 100,38 100,44 99,93 100,25 0,25 TB RSD (%) 15,298 TB RSD (%) Nguyễn Đức Tuấn Ibuprofen 15,148 15,040 15,107 99,02 98,32 98,75 98,70 0,36 Nồng độ mẫu ban đầu (g/ml) 0,384 Hàm lượng tìm lại (g/ml) (%) 0,395 0,376 0,950 102,81 98,11 101,71 100,88 2,43 23,928 23,817 23,775 96,93 96,48 96,31 96,57 0,33 TB RSD (%) 15,298 TB RSD (%) Đại học Y Dược TPHCM Thẩm định qui trình định lượng đồng thời paracetamol ibuprofen huyết tương 25 25 0 Minutes 10 12 14 1.580 1.687 2.080 25 0 mAU 50 25 11.327 6.860 2.413 mAU mAU 2.407 50 9.320 1.840 50 50 1.573 1.687 mAU 75 75 ibuprofen 75 75 (b) 1.867 Paracetamol 100 7.980 (a) 100 100 3.240 100 10 12 14 Minutes Sắc ký đồ mẫu huyết tương người tình nguyện trước uống (a) và sau uống thuốcTatanol Extra (b) Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Một số tình huống/câu hỏi liên quan đến thẩm định QTPT Câu 1: Có cần phải thẩm định QTPT xác định giới hạn chất bảo quản ? Nếu có có cần phải thẩm định đầy đủ tiêu qui trình định lượng dược chất ? Gợi ý trả lời - Tất QTPT phải thẩm định trước sử dụng - Thẩm định đầy đủ tiêu Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Một số tình huống/câu hỏi liên quan đến thẩm định QTPT Câu 2: Phương pháp HPLC xác định hàm lượng dược chất tiêu độ hòa tan tiêu định lượng khác thơng số thể tích tiêm mẫu bước sóng phát hiện, dung mơi pha mẫu Có cần tiến hành thẩm định QTPT riêng qui trình ? Gợi ý trả lời - Trường hợp dung môi pha mẫu khác nhau: cân nhắc tùy trường hợp - Các trường hợp khác: không chấp nhận Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Một số tình huống/câu hỏi liên quan đến thẩm định QTPT Câu 3: Khi sử dụng mẫu tự tạo gồm dược chất + tá dược để thẩm định độ đúng qui trình định lượng, sử dụng dược chất dạng nguyên liệu thay cho chất chuẩn dược chất để chuẩn bị mẫu tự tạo ? Nếu được, có cần cung cấp COA lô nguyên liệu dược chất đã dùng ? Gợi ý trả lời - Được Cần cung cấp thông tin nguyên liệu đã dùng thẩm định Tùy trường hợp yêu cầu bổ sung thêm COA lô nguyên liệu dùng thẩm định Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Một số tình huống/câu hỏi liên quan đến thẩm định QTPT Câu 4: Khi thẩm định qui trình thử độ hòa tan, tiến hành mẫu tự tạo xử lý mẫu bình định mức mà khơng hịa tan mẫu thiết bị thử độ hịa tan có khơng ? Có thể thay đổi lượng cân độ pha loãng mẫu vẫn đảm bảo nồng độ dung dịch đem phân tích theo đúng qui định QTPT không ? Gợi ý trả lời - Nên thực máy thử độ hịa tan - Có thể chấp nhận việc thẩm định định lượng phép thử độ hịa tan cách pha mẫu bình định mức, nhiên việc pha loãng mẫu phải tương tự qui trình thử tiêu chuẩn Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Một số tình huống/câu hỏi liên quan đến thẩm định QTPT Câu 5: Thẩm định QTPT SKLM có yêu cầu nộp ảnh chụp sắc ký đồ thu Nếu sở khơng có thiết bị chụp ảnh sắc ký đồ chụp máy ảnh thường không ? Gợi ý trả lời - Nên có ảnh chụp sắc ký đồ, chụp phương tiện miễn quan sát rõ hình ảnh sắc ký đồ Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Một số tình huống/câu hỏi liên quan đến thẩm định QTPT Câu 6: Thuốc thành phẩm có chứa dược chất Qui trình định lượng xây dựng để định lượng đồng thời dược chất Để thẩm định độ đặc hiệu QTPT này, mẫu giả dược bao gồm thành phần tá dược có đủ khơng ? Có cần phải đánh giá ảnh hưởng dược chất với qui trình định lượng đồng thời dược chất không ? Gợi ý trả lời - Nên đánh giá ảnh hưởng dược chất với qui trình định lượng đồng thời dược chất Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Một số tình huống/câu hỏi liên quan đến thẩm định QTPT Câu 7: Khoảng xác định phương pháp suy từ tính tuyến tính độ đúng khơng phải thực phân tích lặp lại dung dịch lần nồng độ qui định (ví dụ: định lượng tiêm lặp lại lần mẫu thử nồng độ 80% 120%) ? Gợi ý trả lời - Khoảng xác định phương pháp chấp nhận suy từ tính tuyến tính độ đúng Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Một số tình huống/câu hỏi liên quan đến thẩm định QTPT Câu 8: Có cần phải thẩm định thêm tiêu cho qui trình phát vết nội tiết tố không phương pháp tương tự phương pháp định lượng dược chất thành phẩm ? Gợi ý trả lời - Có Thẩm định thêm LOD LOQ Nồng độ tối đa cho phép dung dịch thử phải > LOQ Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Một số tình huống/câu hỏi liên quan đến thẩm định QTPT Câu 9: Hai thuốc thành phẩm có cơng thức tương tự nhau, khác tá dược màu bao phim Tiêu chuẩn thành phẩm thuốc áp dụng QTPT sử dụng chung số liệu thẩm định QTPT cho thành phẩm không ? Biết sắc ký đồ thu từ dung dịch thử thuốc giống hệt Gợi ý trả lời - Có thể sử dụng chung (trừ tính đặc hiệu), cần có biện luận rõ ràng Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM Một số tình huống/câu hỏi liên quan đến thẩm định QTPT Câu 10: Có thể sử dụng kết thẩm định độ đúng tiến hành mức nồng độ mẫu tự tạo, mức nồng độ lặp lại lần để đánh giá độ lặp lại QTPT không ? Nếu được, cần đánh giá kết ? Gợi ý trả lời - Chỉ nên chấp nhận việc thẩm định độ lặp lại gặp khó khăn khơng có mẫu thử đồng (ví dụ: thẩm định độ lặp lại qui trình thử độ hịa tan) mẫu tự tạo giống thuốc thành phẩm (vi dụ: thuốc dạng dung dịch) Các trường hợp lại nên thử trực tiếp mẫu thử thuốc thành phẩm Nguyễn Đức Tuấn Đại học Y Dược TPHCM