I 2+ SO 2+ 2H2O = 2H + H2SO
4.2.5. Định lượng Fe bằng phương pháp UV-VIS với thuốc thử 1,10 phenaltroline
phenaltroline
a. Nguyên tắc
Fe(II) trong dung dịch, kết hợp với 1,10-phenaltroline thành một phức chất màu cam đỏ bền trong môi trường pH 3-9. Nếu muốn màu này không bị ảnh hưởng của thuốc thử dư và có mặt của các ion khác, phản ứng cần tiến hành ở pH 3,5-4,5.
Phức chất này gồm 3 phân tử 1,10-phenaltroline kết hợp với 1 ion Fe(II). Phản ứng đặc hiệu cho Fe(II) nên phải chuyển hết Fe(III) về Fe(II) bằng cách khử với hydroquinon hay hydroxylamin clohydric.
2NH2OH + 4Fe3+→ N2O + 4Fe2+ + 4H+ + H2O Phạm vi áp dụng: Áp dụng cho tất cả các loại thực phẩm.
Tài liệu trích dẫn: TCVN 6270:1997 b. Dụng cụ – Hóa chất – Thiết bị
− Dụng cụ thông thường của phòng thí nghiệm − Dung dịch hydroxylamine clohydric 1% − Dung dịch đệm pH 4,0
− Dung dịch 1,10-phenalthroline 0,1% − Dung dịch HCl tinh khiết
− Dung dịch HCl 20% − Giấy lọc − Bếp điện − Lò nung − Máy UV - VIS c. Cách tiến hành
Định lượng mẫu thử: Đồng nhất mẫu, cân thật chính xác khoảng 10g thực phẩm sao cho mẫu có chứa 50 ÷ 500 µg Fe, nung thành tro trắng. Hòa tro với 5ml HCl tinh khiết, đun cách thủy tới khô ở nồi cách thủy sôi. Làm lại lần thứ 2 như trên. Lần thứ 3 hòa tan trong 5ml HCl 20%, lọc trên giấy lọc không tro. Rửa nhiều lần cặn, giấy lọc và phễu bằng nước cất nóng. Dịch lọc và nước rửa cho tất cả vào bình định mức 100ml cho thêm nước cất đến khoảng 80 - 90 ml. Điều chỉnh đến pH 3,5-4,5 bằng CH3COONa 2M rồi với CH3COONa 0,2M. Sau đó cho nước cất vừa đủ 100ml.
Pha dung dịch Fe2+ chuẩn: Cân thật chính xác 8,6g phèn sắt amoni công thức (NH4)Fe(SO4)2.12H2O hoặc (NH4)2SO4.Fe2(SO4)3.24H2O (tương đương với 1g Fe2+)) hòa tan vào nước cất và cho nước vừa đủ 1000ml (1ml dung dịch = 1mg Fe2+)
Lấy 10ml dung dịch trên pha với nước cất cho vừa đủ 1000ml (dung dịch mẫu) (1ml dung dịch = 10µg Fe2+)
Cho lần lượt vào các bình định mức 25ml như bảng 4.1
Bảng 4.1. Dãy chuẩn để xác địnhhàm lượng Fe
DUNG DỊCH (mL) B1 B2 B3 B4 B5 Bmẫu
Dung dịchFe(II) 10 ppm 0 1 2 3 4 0
Dung dịch mẫu 0 0 0 0 0 10
Hydroxylamin 10% 1 1 1 1 1 1 (lắc 1 phút)
1,10-phenantroline 0.1% 1 1 1 1 1 1 Nước cất hai lần Lắc nhẹ, sau 5 phút mới dùng nước cất định mức tới vạch
CFe(II) (µg) 0 10 20 30 40 Cx
Sau 15 phút đem đo ở ở λ = 510nm
Đo mật độ quang ở máy UV-VIS bước sóng 510 nm. Vẽ đồ thị chuẩn với độ hấp thu ở trục tung và hàm lượng Fe ở trục hoành.
d. Tính kết quả
Kết quả đọc được đem so sánh với đồ thị chuẩn, nhân với hệ số pha loãng để được hàm lượng sắt trong 100g mẫu thử.
Người ta còn xác định hàm lượng sắt trong thực phẩm bằng phương pháp AAS.