Chương 3 PHÂN TÍCH CÔNG CỤ 3.1 Phân tích đo điện thế
3.3.4. Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
Sắc ký lỏng là phương pháp sắc ký trong đó pha tĩnh là chất rắn, pha động là chất lỏng
a.Thời gian lưu (tR): là đại lượng đặc trưng cho mỗi chất phân tích, được tính từ thời điểm chất này được nạp vào cột đến lúc nó ra ở cột ở nồng độ cực đại. Thời gian lưu là thông tin định tính về mặt sắc ký đồ là hằng số đối với một cấu tử khi tiến hành sắc ký trong những điều kiện không đổi (cột, pha động, nhiệt độ...)
b. Hệ số dung lượng (k’)
Hệ số dung lượng cũng đặc trưng cho một chất, nhưng k’ không phụ thuộc vào tốc độ dòng cũng như chiều dài cột,k’ phụ thuộc vào bản chất chất phân tích, đặc tính của pha động và pha tĩnh.
c. Độ chọn lọc (α)
Hai chất chỉ tách được khi chúng có k’ khác nhau, α đánh giá hiệu quả tách của một hệ thống sắc ký.
d. Số đĩa lý thuyết N: là đại lượng đặc trưng cho một hệ thống phân tách.Đĩa lý thuyết được định nghĩa như là một khu vực của hệ thống phân tích mà trong đó một cân bằng nhiệt động học được thiết lậpgiữa nồng độ trung bình của một cấu tử trong pha tĩnh và trong pha động.
e. Độ phân giải R: đặc trưng cho chất lượng của quá trình tách, trên thực tế người ta sử dụng độ phân giải R giữa hai peak cạnh nhau.
3.3.4.2. Ứng dụng của HPLC
HPLC có khả năng tách các hợp chất như:
- Các hợp chất cao phân tử và ion thuộc các đối tượng nghiên cứu y sinhhọc - Các hợp chất tự nhiên không bền
- Các hợp chất kém bền nhiệt, các chất dễ nổ
Các hợp chất đó là: nucleozid, nucleotid, acid nucleic, acid amine, đường, polysaccaride, sắc tố thực vật, acid hữu cơ, lipide không phân cực và phân cực, phẩm màu thực phẩm, phẩm màu dược phẩm, chất hoạt động bề mặt, peroxide, các vitamin, chất chống oxy hóa, kháng sinh, alkaloid…
Định tính và thử độ tinh khiết: Việc định tính một chất dựa vào vị trí của peak của chất đó trên sắc đồ tức là dựa vào thời gian lưu tR.
Định lượng: Sắc ký là phương pháp thuận lợi để định lượng một chất trong hỗn hợp vì chất đó được tách ra khỏi các chất khác và được định lượng dựa vào việc đo chiều cao hay diện tích peak.