để ựánh giá mức ựộ sinh trưởng của chủng vi khuẩn, chúng tôi chọn phương pháp ựo mật ựộ tế bào bằng máy ựo quang phổ ở bước sóng 620nm: chủng Bs4 ựược nuôi khởi ựộng trong ống nghiệm chứa 5ml môi trường LB lỏng, pH 7.0, lắc 180 vòng/phút, 300C, qua ựêm; sau ựó, chủng vi khuẩn ựược tiếp giống khoảng 2% vào bình trụ miệng nhỏ (V= 250ml) chứa 50ml môi trường LB lỏng. Tại thời ựiểm tiếp giống (0 giờ) ựạt OD620 = 0,115, nuôi lắc 180 vòng/phút, 300C, cứ sau 2h xác ựịnh mật ựộ tế bào bằng máy ựo quang phổ; tiến hành dựng ựường cong sinh trưởng của vi khuẩn. Kết quả ựược thể hiện trên hình 4.3.
Hình 4.3. đường cong sinh trưởng của chủng vi khuẩn Bs4 ở 300C
Chúng tôi nhận thấy ở ựiều kiện nuôi cấy bình thường, tốc ựộ sinh trưởng của chủng Bs4 nhanh. Với mật ựộ tế bào tại thời ựiểm bắt ựầu nuôi lắc có OD620 bằng 0,115, sau
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 46
khoảng 18 Ờ 20h thì chủng Bs4 ựang ở ựầu pha ổn ựịnh. Ở pha tiềm phát (0 Ờ 6h) mật ựộ tế bào tăng chậm hơn do giai ựoạn này tế bào mới thắch nghi với môi trường, kắch thước tế bào tăng dần lên. đến pha sinh trưởng (6 Ờ 18h) tế bào phát triển nhanh. Ở pha cân bằng (20 Ờ 32h và ựạt cực ựại lúc 30h) lượng tế bào không tăng nữa, lúc này lượng tế bào mới sinh ra bằng với lượng tế bào chết ựi. đến pha suy thoái từ 32h trở ựi, tỷ lệ giữa các tế bào chết ựi và các tế bào mới sinh ra tăng dần do môi trường không ựáp ứng ựủ lượng dinh dưỡng cần thiết cho quần thể các tế bào bên trong, hoặc cũng có thể do các sản phẩm ựược sinh ra trong quá trình sống của chúng sẽ ức chế chắnh bản thân chúng, gây chết tế bào.
Từ ựường cong sinh trưởng ngoài việc xác ựịnh quá trình sinh trưởng của chủng ựó là gồm có 4 pha sinh trưởng: pha tiềm phát, pha phát triển, pha cân bằng và pha suy vong, từ ựó cũng xác ựịnh ựược sự sinh trưởng cực ựại của chủng Bs4. Qua ựường cong ựó người ta có thể thực hiện ựược nhân giống với môi trường và xác ựịnh ựược thời ựiểm (15 - 18h) lấy dịch nhân giống tiếp vào nuôi cấy lên men tiếp theo.