(ethanol 960 và aceton)
Tiến hành tủa với các tác nhân tủa: ethanol 960, aceton ở nồng ựộ thắch hợp, thời gian tủa tùy theo tác nhân tủa, thường trong khoảng 30 Ờ 45 phút, ựối với ethanol và aceton quá trình tủa phải ựảm bảo ở nhiệt ựộ lạnh.
đối với dung môi tủa là ethanol 960, aceton
Cơ chế: Khi cho dung môi vào dung dịch sẽ giảm hằng số ựiện ly của dung dịch, kết quả là làm giảm khả năng protein tan trong nước.
Nguyên nhân cơ bản của sự tạo quần thể protein có thể do các lực tỉnh ựiện, lực VanderWaals. Người ta thấy rằng, ở gần ựiểm ựẳng ựiện của protein, sự lắng diễn ra ở nồng ựộ dung môi hữu cơ thấp hơn. Khi cho dung môi hữu cơ vào ựể kết tủa xảy ra hiện tượng biến tắnh không thuận nghịch protein. Các phân tử protein chỉ thể hiện hoạt ựộ enzym khi nó tồn tại trong cấu trúc không gian nhất ựịnh, sao cho các gốc phân cực phân bố trên bề mặt của phân tử protein, còn các gốc kỵ nước không phân cực thì nằm trong phân tử.
Khi hằng số ựiện ly của môi trường giảm, phân tử protein có thể tự tháo gỡ và tạo thành dạng không hoạt ựộng, trong ựó các gốc kị nước lại tiếp xúc với dung môi. Nhiệt ựộ có ảnh hưởng rất lớn ựến quá trình này. Do ựó, thực hiện quá trình này phải ở trong ựiều kiện nhiệt ựộ thấp, thường ở 4 Ờ 100C.
Tiến hành
Bước 1: Thu dịch enzym từ canh trường giữ lạnh dịch enzym và dung môi hữu cơ (ethanol 960, aceton) sao cho nhiệt ựộ ựạt từ 0 Ờ 40C. Xác ựịnh với tỷ lệ
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 41
Bước 2: Tiến hành tủa. Cho từ từ dung môi hữu cơ vào dung dịch enzym và khuấy ựều, giữ ở nhiệt ựộ lạnh 30 Ờ 45 phút, ly tâm 5000 vòng/phút trong 15 phút, thu tủa, sấy khô ở nhiệt ựộ < 400C, cân trọng lượng chế phẩm enzym và bảo quản lạnh.