KẾT QUẢ BIỆN LUẬN 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU NỘ I DUNG
3.1.6.Kết quả xác định giới tính
Bảng 3.6. Kết quả xác định giới tính phôi. Phương pháp PCR Số phôi Tỷ lệ (%)
Số phôi làm sinh thiết 65 100,00
Số phôi nguyên vẹn 27 41,53
Số phôi cái 12 43,75
Số phôi đực 13 48,96
Số phôi không xác định 02 7,29
Phương pháp LAMP Số phôi Tỷ lệ (%)
Số phôi làm sinh thiết 147 100,00
Số phôi nguyên vẹn 68 46,41
Số phôi cái 25 36,49
Số phôi đực 37 54,17
Số phôi không xác định 06 9,34
α < 0,05
Kết quả sinh thiết phôi ở cả hai phương pháp cho thấy có sự khác biệt về
mặt thống kê (α < 0,05), tuy nhiên, sự khác biệt này chưa đủ lớn. Ở phương pháp LAMP đòi hỏi phải có 2 cặp mồi thay vì một cặp mồi nhưở phương pháp PCR.
Theo một nghiên cứu khác trong nhóm (không đưa ra trong Báo cáo này), phương pháp LAMP có rất nhiều ưa điểm so với PCR. Phương pháp LAMP có thời gian tiến hành ngắn (chừng 1 – 1,5 giờ), trong khi đó phương pháp PCR tốn
đến 3-4 giờ. Phương pháp LAMP có độ nhạy cao hơn phương pháp PCR; nghĩa là có thể phát hiện được các mẫu có số lượng tế bào ít.
Tuy nhiên, trong nghiên cứu này của nhóm, việc sử dụng cặp mồi S4 trong phương pháp PCR lại cho kết quả với nhiều ưu điểm hơn so với phương pháp LAMP. Trong xác định giới tính, thông thường, người ta phải sử dụng 2 cặp mồi: 1 cặp mồi khuếch đại 1 trình tự chuyên biệt cho loài (sẽ dương tính cho cả 2 giới tính) và 1 cặp mồi khuếch đại 1 trình tự chuyên biệt cho giới tính (chỉ
dương tính trên phôi đực). Cặp mồi S4 là một phát hiện mới, chỉ một trình tự, thực hiện chỉ 1 phản ứng PCR nhưng sẽ cho 1 loại sản phẩm PCR đối với con cái và 2 loại sản phẩm PCR có kích thước khác nhau ở con đực.
Vì thế, trong nghiên cứu này nếu sử dụng PCR thì chỉ cần 1 tube cho 1 phôi, tiến hành PCR 1 lần sẽ cho kết quả. Trong khi đó, với phương pháp LAMP cần 2 tube cho 1 phôi, tiến hành phản ứng LAMP 2 lần.
Do vậy, các xét nghiệm xác định giới tính sau này, chúng tôi sử dụng phương pháp PCR.
Hình 3.6. Xác định giới tính phôi bò bằng phản ứng PCR. M: thang chuẩn, Giếng 1: thịt bò đực, Giếng 2: Thịt bò cái, Giếng 3, 4: Phôi đực, Giếng 5, 6,7: Phôi cái,
Hình 3.7. Xác định giới tính phôi bò bằng phản ứng LAMP
M: Thang chuẩn, Giếng 1: Thịt bò đực, Giếng 2: Thịt bò cái, Giếng 3,4,7,10: Phôi đực, Giếng 5, 6, 8, 9: Phôi cái. Giếng 5, 6, 8, 9: Phôi cái.