thu nhận từ nội tạng tôm hùm xanh
Ủ mẫu enzyme từ nội tạng tôm hùm xanh đã đƣợc pha loãng bằng nƣớc cất tỷ lệ mẫu enzyme/ nƣớc cất : 1/5 (w/v) với 1ml các ion kim loại thay đổi lần lƣợt là : Ca2+, Mg2+, Hg2+, Zn2+ và Cu2+ ở nồng độ 1mM và 5 mM, không có mặt ion kim loại ở nhiệt độ tối thích và pH tối thích. Xác định hoạt tính lipza bằng phƣơng pháp chuẩn độ. Kết quả xác định hoạt tính lipaza nội tạng tôm hùm xanh khi ủ với các ion kim loại hóa trị II khác nhau ở nồng độ 1mM và 5mM. Kết quả đƣợc trình bày ở bảng 2.5, bảng 2.6 phụ lục 2 và đồ thị 4.5, đồ thị 4.6 dƣới đây:
Đồ thị 4.5 : Yếu tố Ion kim loại hoát trị II (nồng độ 1mM )ảnh hưởng đến hoạt tính lipaza mẫu enzyme nội tạng tôm hùm xanh
Đồ thị 4.6 : yếu tố Ion kim loại hoát trị II (nồng độ 5mM )ảnh hưởng đến hoạt tính lipaza mẫu enzyme nội tạng tôm hùm xanh
Nhận xét : từ đồ thị 4.5 và 4.6 cho thấy
Hoạt tính của enzyme lipaza trong nội tạng tôm hùm xanh bị ức chế mạnh bởi các ion kim loại nặng hóa trị II (nồng độ 1mM và 5mM) nhƣ : Hg2+, Zn2+ bị ức chế hoạt động ít hơn khi có sự hiện diện diện của ion kim loại Cu2+ , Mg2+ .Điều này do nhóm SH (nhóm sulfulhydryl) trong trung tâm hoạt động của enzyme lipaza có khả năng tƣơng tác rất mạnh với các ion kim loại hóa trị II đặc biệt là ion Hg2+. Khi có sự kết hợp này chúng sẽ chiếm vị trí của cơ chất trong trung tâm hoạt động của enzyme. Vì vậy cơ chất sẽ không còn cơ hội để tiếp cận với trung tâm này. Nhóm Hg2+ cồng kềnh can thiệp đến không gian tại vị trí hoạt động cơ chất tiếp cận với enzyme. Kết quả là hoạt tính của enzyme sẽ giảm. Các nghiên cứu trƣớc đây đã công bố cũng chỉ ra sự làm giảm hoạt tính của enzyme lipaza của các ion kim loại hóa trị II. Hg2+ làm giảm hoạt
tính của enzyme lipaza của mô mỡ chuột (Fredrikson et al., 1981). Ion Cu2+ , Mg2+
,Hg2+ , Zn2+ ức chế hoạt động enzyme lipaza trong cá đối xám(M.A.Islam et al(2008)) Đối với enzyme lipaza nội tạng tôm hùm xanh nhìn vào đồ thị trên ta có thể thấy khi ủ ion Hg2+ nồng độ 1mM và 5mM trong 2h thì hoạt tính bị giảm mạnh chỉ còn 26.03% và 14.86% so với hoạt tính lipaza cực đại khi không có sự có mặt của ion kim loại. Với ion Zn2+ nồng độ 1mM và 5mM trong 2h thì hoạt tính lipaza giảm chỉ còn 47.95%, 24.32% so với hoạt tính lipaza cực đại. Khi ủ với Ion Cu2+ , Mg2+ thì sự giảm hoạt tính ít hơn so với Hg2+ , Zn2+.
Hoạt tính của enzyme lipaza trong nội tạng tôm hùm xanh tăng nhẹ (tăng 9.59% so với hoạt tính lipaza cực đại ) khi ủ với ion Ca2+ (nồng độ 1mM ) trong 2h. Sự tăng nhẹ hoạt tính lipaza nội tạng tôm hùm xanh khi có mặt ion Ca2+ (nồng độ 1mM) có thể là do ion Ca2+ (nồng độ 1mM) làm cầu nối giữa enzyme và cơ chất bù đắp lực đẩy tỉnh điện tạo ra giữa enzyme và cơ chất . Tuy nhiên khi ủ với ion Ca2+ (nồng độ 5mM) thì làm giảm hoạt tính enzyme lipaza trong nội tạng tôm hùm xanh phù hợp với kết quả báo cáo ở một số nghiên cứu khác (Shastry and Raghavendra Rao, 1971). Đối với Ion Ca2+ có tác dụng hoạt hóa ở một nồng độ nhất định vƣợt qua nồng độ này chúng sẽ gây ức chế hoạt động của enzyme.