Hình 2.6 : Cơ chế phương pháp đĩa Wilhelmy
Trong đó:
A xác định hoạt tính lipaza với cơ chất là các chuỗi chất béo mạch trung bình
B xác định hoạt tính lipaza với cơ chất là các chuỗi chất béo mạch dài với sự tham gia của β-cyclodextrin.
1. dụng cụ đựng phủ một lớp teflon . 2. màng teflon di động
3. dụng cụ đo áp suất bề mặt 4. bản mỏng bạch kim (Pt)
5. phân bố của màng film chất béo 6. ngăn phản ứng
7. ngăn chứa 8. kênh bề mặt 9. β-cyclodextrin E lipaza trong dung dịch
E* lipaza bị hấp thụ tới màng film lipid.
Trong số các phƣơng pháp xác định sức căng bề mặt thì kỷ thuật màng fiml đơn phân tử tại bề mặt tiếp xúc không khí- nƣớc đƣợc phát triển rộng rãi đƣợc sử dụng bởi
nhóm nghiên cứu fréderic beisson và brockman. Kỷ thuật này yêu cầu cần một dụng cụ đựng chứa đầy dung dịch nƣớc có phủ một lớp teflon (chống dính). một bản mỏng bạch kim nhúng trong bề mặt của pha nƣớc đƣợc gắn vào một dụng cụ để đo áp suất bề mặt (π) từ đó xác định sức căng bề mặt (γ ) bằng công thức :π= γo– γ với γo là giá trị tham khảo sức căng bề mặt không khí- nƣớc. Từ một dung dich chất béo trong dung môi bay hơi kém tan trong nƣớc ví dụ nhƣ chloroform thì một màng film đơn phân tử chất béo có thể phân bố trên bề mặt pha nƣớc. Dung dịch chất béo đƣợc thêm vào dạng giọt nhỏ. Khu vực lan truyền của màng film chất béo có thể đƣợc hạn chế và điều chỉnh bởi lớp teflon quét qua bề mặt của pha nƣớc. Vì vậy sức áp suất bề mặt có thể duy trì không đổi bằng cách dịch chuyển vị trí của lớp teflon. Lớp teflon đƣợc kiểm soát và điều chỉnh tùy thuộc vào kết quả xuất ra của thiết bị đo áp suất bề mặt. Nếu dịch chiết enzyme lipaza đƣợc đƣa vào pha nƣớc dƣới màng film chất béo thì áp suất bề mặt sẽ giảm do sản phẩm của phản ứng lipolytic. Khi mà lớp teflon di chuyển để duy trì áp suất bề mặt không đổi thì động học của phản ứng sẽ đƣợc theo dõi bằng cách ghi lại sự di chuyển của lớp teflon theo thời gian.
Màng film đơn phân tử tạo các sản phẩm hòa tan trong nƣớc trong quá trình phản ứng. Phƣơng pháp này phù hợp cho việc nghiên cứu phản ứng enzyme trên chất béo mà đƣợc phân bố tại bề mặt tiếp xúc không khí-nƣớc, phƣơng pháp này có độ nhạy cao, lƣợng chất béo thấp đáp ứng yêu cầu để thực hiện những phép đo động học đáng tin cậy.