4. Ý nghĩa khoa học, thực tiễn của đề tài
3.3. Xác định giới hạn phát hiện của phản ứng multiplexPCR phát hiện nhanh
nhanh và đồng thời Staphylococcus aureus và Salmonella typhi.
Để xác định giới hạn phát hiện của kỹ thuật multiplex PCR đã được xây dựng trong nghiên cứu này, dung dịch DNA tổng số của S. typhi và S. aureus
được trộn lẫn với nhau với hàm lượng tương đương sau đó được pha loãng thành các độ pha loãng khác nhau và cách nhau 10 lần. Hỗn hợp dung dịch DNA tổng số ở các độ pha loãng khác nhau được sử dụng làm khuôn cho phản ứng multiplex PCR. Sau phản ứng PCR, sản phẩm được điện di kiểm tra trên gel agarose 1,5%. Giới hạn phát hiện của kỹ thuật multiplex PCR là nồng độ DNA khuôn nhỏ nhất mà vẫn cho phép hình thành sản phẩm PCR đặc hiệu hoàn
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
toàn có thể quan sát bằng mắt thường. Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm của phản ứng multiplex PCR được thể hiện trong hình 3.9 dưới đây.
Hình 3.9. Kết quả điện di kiểm tra giới hạn phát hiện của phản ứng multiplex PCR phát hiện nhanh và đồng thời S. typhi và S. aureus.
Đường chạy 1: mẫu kiểm chứng âm tính; đường chạy 2, 3, 4, 5 và 6: sản phẩm PCR ở các nồng độ hỗn hợp DNA tổng số của S. typhi và S. aureus với các
nồng độ tương ứng là 1,8.10-1
ng/µl; 1,8.10-2 ng/µl; 1,8.10-3 ng/µl; 1,8.10-4 ng/µl; 1,8.10-5 ng/µl của S. typhi và 2,0.10-1 ng/µl; 2,0.10-2 ng/µl; 2,0.10-3
ng/µl; 2,0.10-4 ng/µl; 2,0.10-5 ng/µl của S. aureus.
Kết quả điện di sản phẩm PCR ở hình 3.9 cho thấy khi nồng độ DNA khuôn giảm thì cường độ băng điện di cũng giảm tương ứng. Khi nồng độ DNA khuôn giảm đến 1,8.10-5 ng/µl của S. typhi và 2,0.10-5 ng/µl của S. aureus thì sản phẩm PCR không còn xuất hiện trên ảnh điện di (ở đường chạy số 6). Vậy quy trình multiplex PCR được phát triển trong đề tài này có giới hạn phát hiện là 1,8.10-4 ng/µl DNA tổng số khi phát hiện nhanh S. typhi và 2,0.10-4 ng/µl DNA tổng số khi phát hiện nhanh S. aureus.