4. Ý nghĩa khoa học, thực tiễn của đề tài
3.2.1. Tách chiết DNA tổng số của các chủng vi khuẩn
Trong nghiên cứu này, DNA tổng số của các chủng tụ cầu vàng (S. aureus) và vi khuẩn thương hàn (S. typhi) được tách chiết bằng phương pháp sử dụng hóa chất theo các công bố trước đây. Sản phẩm DNA tổng số được tách chiết được hòa tan trong dung dịch đệm TE 1x và được điện di kiểm tra trên gel agarose 1%. Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm tách chiết DNA tổng số của các chủng nghiên cứu được thể hiện trong hình 3.2 dưới đây.
Hình 3.2. Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm tách chiết DNA tổng số của các chủng vi khuẩn nghiên cứu.
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
Đường chạy số 1-4: mẫu DNA tổng số của các chủng Staphylococcus aureus; đường chạy số 5-8: mẫu DNA tổng số của các chủng Salmonella typhi.
Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm tách chiết DNA tổng số ở hình 3.2 cho thấy, các băng đều xuất hiện tương ứng ở cả 8 đường chạy, băng hiện rõ nét, gọn, không bị đứt gãy, các băng nằm gần với vị trí của giếng điện di chứng tỏ đây là băng DNA tổng số. Các băng DNA tổng số không bị đứt gãy nên đủ điều kiện thực hiện các nghiên cứu tiếp theo.
Để xác định nồng độ DNA trong các mẫu phân tích, DNA tổng số của các mẫu phân tích được xác định hằng số mật độ quang OD ở bước sóng 260nm (OD260) và bước sóng 280nm (OD280). Cứ 1 đơn vị OD ở bước sóng 260nm tương đương với hàm lượng DNA mạch kép trong dung dịch là 50 g DNA/ml và tỷ lệ OD260 / OD280 = 1,8 - 2 là đảm bảo đủ độ tinh sạch cho nghiên cứu [1]. Kết quả xác định tỉ số OD260 nm / OD280 nm và nồng độ DNA tổng số của 8 chủng nghiên cứu được thể hiện trong bảng 3.2.
Bảng 3.1. Kết quả xác định nồng độ DNA tổng số của các chủng vi khuẩn nghiên cứu.
STT Tên chủng Giá trị OD260 Hàm lƣợng DNA tổng số (ng/µl) Giá trị OD260/OD280 1 S. typhi YD 0,036 18,0 1,85 2 S. typhi NL1 0,027 13,5 1,80 3 S. typhi NL2 0,034 17,0 1,89 4 S. typhi DP 0,029 14,5 1,82 5 S. aureus YD 0,051 25,5 1,82 6 S. aureus BK 0,039 19,5 1,93 7 S. aureus DP 0,036 18,0 1,86 8 S. aureus NL 0,041 20,5 1,91
Ghi chú: OD260 : giá trị mật độ quang ở bước sóng 260 nm OD280 : giá trị mật độ quang ở bước sóng 280 nm
Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
Kết quả xác định các giá trị OD260 và OD280 cho thấy tỷ số OD260/OD280
đều nằm trong khoảng 1,8 – 2 chứng tỏ sản phẩm tách chiết DNA tổng số của cả 4 chủng Salmonella typhi và 4 chủng Staphylococcus aureus trong nghiên cứu đảm bảo độ tinh sạch cho các bước nghiên cứu về sinh học phân tử.