Xét nghiệm huyết thanh chẩn đoán giang mai:
Phản ứng RPR (Rapid Plasma Reagin)
Nguyên lý: Kháng nguyên có tên là Cardiolipin đã gắn than hoạt khi cho tiếp xúc với huyết tương (hay huyết thanh) người bị giang mai sẽ cho phản ứng dương tính biểu hiện bằng hiện tượng lên bông.
Cách làm phản ứng
- Lấy 2ml máu tĩnh mạch vào ống thuỷ tinh sau đó tách huyết thanh. Huyết thanh phải trong, không vỡ hồng cầu.
- Nhỏ 0,05ml huyết thanh vào 1 vòng tròn trên bìa phản ứng - Dùng que dẹt dàn đều huyết thanh trong giới hạn vòng tròn. - Nhỏ 1 giọt kháng nguyên vào vòng tròn đã có huyết thanh (không khuấy trộn).
- Lắc tốc độ 100 vòng/phút trong 8 phút.
Nhận định kết quả
- Kết quả âm tính: Đám than hoạt mịn tập trung ở giữa vòng tròn, màu xám đồng nhất.
- Kết quả dương tính: có hạt kết cụm màu đen trên khắp vòng tròn bìa phản ứng.
Ưu điểm và ứng dụng:
- Dùng để sàng lọc phát hiện giang mai. - Đơn giản, dễ thực hiện.
Phản ứng TPHA (Treponema pallidum Hemagglutination)
Nguyên lý :
Tế bào đã gắn xoắn khuẩn sẽ tạo mạng ngưng kết với kháng thể khi cho tiếp xúc với huyết thanh bệnh nhân Giang mai.
Cách làm phản ứng:
- Lấy 2ml máu tĩnh mạch vào ống thuỷ tinh , tách lấy huyết thanh. Huyết thanh phải trong, không vỡ hồng cầu
- Pha loãng huyết thanh 1/20
- Nhỏ huyết thanh pha loãng 1/20 vào giếng, nhỏ dung dịch chứa tế bào có gắn kháng nguyên vào giếng
- Ủ ở nhiệt độ phòng, đặt khay nhựa trên mặt phẳng không có rung động tối thiểu là 45 phút.
Nhận định kết quả:
- Âm tính: khi thấy tế bào lắng tạo thành nút nhỏ ở đáy giếng. - Dương tính: tế bào ngưng kết dàn mỏng toàn bộ đáy giếng.
Ưu điểm và ứng dụng:
- Độ nhạy và độ đặc hiệu cao
- Nhận định kết quả dễ dàng bằng mắt thường. - Có thể thực hiện ở mọi tuyến cơ sở.
Xét nghiệm PCR chẩn đoán lậu và Chlamydia
Nguyên lý: PCR là sự tổng hợp ADN ngoài cơ thể, nhưng không tổng hợp toàn bộ sợi ADN mà chỉ tổng hợp đoạn ADN mà ta quan tâm (ADN đích), đó là đoạn ADN được giới hạn giữa hai mồi (primers). Kết quả là từ một vài đoạn ADN đích có trong bệnh phẩm, ta thu được một lượng lớn ADN để có thể dễ dàng phát hiện bằng các kỹ thuật thông thường.
Cách làm phản ứng
- Lấy bệnh phẩm: Bệnh phẩm chẩn đoán lậu và Chlamydia trong nghiên cứu là nước tiểu
- Tách ADN từ bệnh phẩm
- Tạo hỗn hợp phản ứng: gồm dung dịch ADN, dung dịch đệm, dNTP, Taq polymerase, MgCl2, mồi xuôi, mồi ngược, nước khử i-on. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Cho máy chạy.
- Điện di sản phẩm PCR : Dùng thạch agarose 1,5% trong dung dịch đệm TBE, có nhuộm bằng Ethidium Bromide, thường điện di kèm ADN marker.
- Kiểm tra sản phẩm PCR ở đèn tử ngoại, chụp ảnh.
Ưu điểm và ứng dụng: - Độ nhạy và độ đặc hiệu cao
- Chỉ thực hiện được ở các phòng xét nghiệm có trang bị dàn PCR và có cán bộ xét nghiệm được đào tạo
Xét nghiệm huyết thanh chẩn đoán HIV
Test nhanh:
- Nguyên lý: Kỹ thuật Determine HIV- ½ là xét nghiệm dựa trên nguyên lý miễn dịch sắc ký để phát hiện kháng thể HIV- 1 và HIV- 2.
- Đọc kết quả: Mẫu dương tính nếu vùng đọc vạch chứng hiện lên vạch màu đỏ và vùng đọc kết quả cũng hiện lên màu đỏ. Mẫu âm tính nếu vùng đọc vạch chứng hiện lên vạch màu đỏ và vùng đọc kết quả không có vạch hiện lên.
Kỹ thuật ELISA
- Nguyên lý: Phức hợp kháng nguyên-kháng thể được phát hiện nhờ enzym gắn với kháng thể tác động lên cơ chất đặc hiệu.
- Cách làm: Cho kháng nguyên và kháng thể kết hợp với nhau
Thông thường để kháng nguyên và kháng thể kết hợp với nhau đạt được hiệu quả người ta ủ ấm một thời gian. Cho phức hợp conjugate (bản chất là một enzym). Ủ ấm. Cho cơ chất, để ở buồng tối (thời gian dài hay ngắn lại phụ thuộc vào từng hãng sản xuất), dưới xúc tác của hydrogen peroxide, dung dịch chuyển thành màu xanh. Dừng phản ứng bằng acidsulfuric, dung dịch chuyển thành màu vàng.
- Đọc kết quả: đọc kết quả trên máy đọc ELISA trong vòng 30 phút.