gloeosporioides bằng lây bệnh nhân tạo trong phòng thí nghiệm
Colletotrichum gloeosporioides được nuôi cấy trên môi trường 1/5 PDA. Nấm sau khi cấy được ủ trong tủ ấm ở 28oC, sau 7 ngày tiến hành thu bào tử C. gloeosporioides vào eppendorf.
Thử khả năng gây bệnh trên quả xoài sau thu hoạch ở các nồng độ bào tử: 100
bào tử/ml, 103 bào tử/ml, 104 bào tử/ml và 105 bào tử/ml.
Nồng độ bào tử được xác định bằng buồng đếm hồng cầu [Phụ lục 3]
Thí nghiệm được tiến hành với 4 công thức (CT) và 3 lần lặp lại. Mỗi quả lây 10 vết, đồng đều ở tất cả các quả.
Mẫu xoài lành bệnh được mua về rửa sạch bằng nước, sau đó khử trùng bằng cồn 70o và rửa lại bằng nước cất vô trùng.
Đặt mẫu quả trên giấy vô trùng, đưa vào khay nhựa đã khử trùng bằng cồn 70o. Cho nước cất vô trùng vào giấy vô trùng để tạo môi trường ẩm.
Tiến hành lây 10 vết bệnh giống nhau trên mỗi quả. Sau đó dùng túi nilon bọc khay nhựa lại và ủ mẫu ở nhiệt độ 28oC.
Sau khoảng 1 đến 2 ngày khi vết bệnh bắt đầu hình thành, tiến hành theo dõi thời gian hình thành vết bệnh và đo đường kính các vết bệnh.
Bảng 2.3. Bố trí thí nghiệm xác định ngưỡng gây bệnh Colletotrichum
gloeosporioides trên quả xoài
Công thức Nồng độ bào tử C. gloeosporioides (bào tử/ml)
I(Đ/C) 0
II 103
IV 105
Các chỉ tiêu theo dõi
- Thời gian hình thành vết bệnh (h)
- Tốc độ phát triển và đường kính các vết bệnh (cm)
- Theo dõi tỷ lệ bệnh (TLB) ở các công thức. TLB của nhóm bệnh được tính theo công thức sau:
Tỷ lệ bệnh (%) = × 100
- Mức độ phát triển bệnh được xác định theo đường cong tiến triển bệnh AUDPC (Area Under Disease Progress Curve) theo Campbell và Madden (1990).
Trong đó:
AUDPC: Đường cong tiến triển chung của bệnh. yi, yi + 1: tỷ lệ bệnh trong lần theo dõi thứ i và thứ i +1. ti, ti+ 1: thời gian theo dõi bệnh ở lần thứ i và thứ i +1 (h). n: tổng số lần theo dõi bệnh.