2.3.1.1. Phương pháp thu thập số liệu
- Thu thập số liệu được tiến hành theo sơ đồ nghiên cứu.
- Các thông tin được thu thập được ghi chép theo mẫu bệnh án thống nhất.
Tất cả các bệnh nhân đủ tiêu chuẩn nghiên cứu sẽ được:
+ Hỏi bệnh: Hỏi tiền sử viêm gan B,C, uống rượu, dùng thuốc, các bệnh nội khoa và các triệu chứng diễn biến của bệnh.
+ Khám lâm sàng tỷ mỉ phát hiện các triệu chứng: gan to, lách to, hoàng đảm, cổ trướng, tuần hoàn bàng hệ ….
+ Được chỉ định làm các xét nghiệm:
- Công thức máu: Bạch cầu, hồng cầu, tiểu cầu.
- Sinh hóa máu: Ure, creatinin, glucose, AST, ALT, GGT, protein toàn phần, albumin, bilirubin toàn phần, bilirubin trực tiếp, cholesteron toàn phần,
- Xét nghiệm virus: HBsAg, anti HCV, HBV DNA, HCV RNA và các xét nghiệm khác tùy theo bệnh cảnh lâm sàng nghĩ tới.
- Siêu âm ổ bụng.
- Nội soi dạ dày,tá tràng.
2.3.1.2.Phân loại xơ gan
Theo thang điểm Child Pughnăm 1991.
Điểm Triệu chứng
1 2 3
Hội chứng não - gan Cổ trướng Bilirubin (mol/l) Albumin máu (g/l) Tỷ lệ prothrombin (%) Không Không có < 35 > 35 > 54 Nhẹ Có ít (dễ kiểm soát) 35 - 50 28 - 35 44 - 54 Hôn mê
Nhiều (khó kiểm soát) > 50
< 28 < 44 Tương ứng Child Pugh A: 5 - 6 điểm
Tương ứng Child Pugh B: 7 - 9 điểm Tương ứng Child Pugh C: ≥ 10 điểm Theo chỉ số MELD:
Công thức tính số điểm MELD là:
R= 9.6 x loge (creatinnin mg/dl) + 3.8 x loge (bilirubin mg/dl) + 11.20 x loge (INR) + 0.643 x (nguyên nhân xơ gan: 0 cho bệnh nhân gan do rượu và ứ mật; 1 cho viêm gan virus và bệnh gan khác).
Toàn bộ bệnh nhân nghiên cứu sẽ được chia thành 3 nhóm dựa vào điểm số như sau:
Nhóm 1: số điểm MELD 0 - 10. Nhóm 2: số điểm MELD 11 - 20. Nhóm 3: số điểm MELD > 20.
2.3.1.3. Định lượng vitamin D ở bệnh nhân xơ gan tại khoa Hóa sinh Bệnh viện Bạch Mai
Lấy 2ml máu tĩnh mạch vào ống máu có chống đông bằng EDTA, ly tâm tách huyết thanh.
* Định lượng 25(OH)D
Định lượng 25(OH)D huyết thanh bằng kỹ thuật xét nghiệm miễn dịch điện hóa phát quang: sử dụng kít 25-hydroxyvitamin D 05894913190V4 tiến hành trên hệ thống máy phân tích miễn dịch Cobas e 6000 của hãng Roche đang có tại khoa hóa sinh Bệnh viện Bạch Mai. Phản ứng miễn dịch điện hóa phát quang định lượng 25(OH)D sử dụng một protein gắn kết vitamin D (VDBP) như là protein bắt giữ để gắn kết vitamin D3 (25-OH) và vitamin D2 (25-OH).
Nguyên lý xét nghiệm: Nguyên lý cạnh tranh.
Toàn bộ các giai đoạn của xét nghiệm cần đến: 27 phút. + Thời kỳ ủ đầu tiên:
Bằng cách ủ mẫu (15 µL) với thuốc thử tiền xử lý 1 và 2, vitamin D (25-OH) gắn kết được phóng thích từ protein gắn kết vitamin D.
+ Thời kỳ ủ thứ hai:
Bằng cách ủ mẫu đã qua tiền xử lý với protein gắn kết vitamin D đánh dấu ruthenium, phức hợp giữa vitamin D (25-OH) và protein gắn kết vitamin D đánh dấu ruthelium được thành lập.
+ Thời kỳ ủ thứ ba:
Sau khi thêm các vi hạt phủ streptavidin và vitamin D (25-OH) đánh dấu biotin, các vị trí chưa gắn kết trên protein gắn kết vitamin D đánh dấu ruthelium bị chiếm giữ. Phức hợp gồm protein gắn kết vitamin D đánh dấu ruthelium và vitamin D (25-OH) đánh dấu biotin được tạo thành và trở nên gắn kết với pha rắn thông qua sự tương tác giữa biotin và streptavidin.
+ Hỗn hợp phản ứng được chuyển tới buồng đo, ở đó các vi hạt đối từ được bắt giữ trên bề mặt của điện cực. Những thành phần không gắn kết sẽ bị thải ra ngoài buồng đo bởi dung dịch ProCell/ProCell M. Cho điện áp vào điện cực sẽ tạo nên sự phát quang hóa học được đo bằng bộ khuếch đại quang tử.
+ Các kết quả được xác định thông qua một đường chuẩn xét nghiệm trên máy được tạo nên bởi xét nghiệm 2 điểm chuẩn và thông tin đường chuẩn chính qua mã vạch trên hộp thuốc thử.
Thuốc thử - dung dịch tham gia xét nghiệm:
Bộ thuốc thử (M, R1, R2) và thuốc tiền xử lý (PT1, PT2) được dán nhãn VITD-T. PT1 Thuốc tiền xử lý 1, 1 chai, 4ml.
Dithiothreitol 1 g/L, pH 5,5. PT2 Thuốc tiền xử lý 2, 1 chai, 4ml.
Natri hydroxide 55g/L.
M Vi hạt phủ Steptavidin, 1 chai , 6,5ml:
Vi hạt phủ Steptavidin 0,72 mg/ml; chất bảo quản. R1 Vitamin D binding protein – BPRu, 1 chai, 9ml:
Protein gắn kết vitamin D đánh dấu ruthelium (150 µg/L); đệm bis-tris propane 200 mmol/L; albumin (người) 25 g/L; pH 7,5; chất bảo quản.
R2 25- hydroxyvitamin D – biotin, 1 chai, 8,5ml: Vitamin D (25-OH) đánh dấu biotin (14µg/L).
Đánh giá kết quả nồng độ 25(OH)D.
Phân loại của Holick 2007: Nồng độ 25(OH)D [48]. < 10 ng/ ml: thiếu nặng.
10-20 ng/ ml: thiếu vừa. 20-30ng/ ml: thiếu nhẹ. ≥ 30 ng/ml: bình thường