- Chi Tetraselmis
a. Phân lập bằng kỹ thuật pha loãng (đối với các loài thuộc chi Chaetoceros)
Thu VTB từ các vùng bờ biển Hải Phịng, Khánh Hồ
Lưu giữ ở nhiệt độ 4 - 10oC
Phân lập bằng các phương pháp
Pha lỗng Ni cấy trên môi
trường thạch
Kiểm chứng mức độ đạt thuần chủng:
tách tảo ra khỏi môi trường phân lập và nuôi tảo trong các ống nghiệm (V = 10ml), xác định sự thuần chủng
Tạo giống thuần
Phân lập bằng kĩ thuật pha loãng dựa vào các mức độ pha loãng tối đa tại đó dung dịch chỉ chứa một tế bào (một cơ thể), một tế bào này được nuôi trong ống nghiệm hoặc trong bản nhựa 96 giếng được dùng cho nuôi cấy tế bào. Nếu biết được chính xác mật độ tế bào (MĐTB) thì sẽ tính được nồng độ pha lỗng.
Phương pháp nêu trên áp dụng hiệu quả cho việc phân lập các vi tảo chiếm
lượng lớn trong mẫu nhiễm. Nếu số lượng tế bào xấp xỉ trong mẫu cần phân lập mà
chúng ta khơng biết và khơng thể tính tốn ngay lập tức được khoảng MĐTB thì người phân lập cần phải tiến hành pha loãng liên tục mẫu theo cấp 10-1,10-2,10-3…sau khoảng
7 đến 10 lần pha loãng liên tục tùy thuộc vào nồng độ mẫu cũng như trạng thái mẫu
thì chúng ta cũng có thể thu được mẫu ni chỉ có 1 tế bào.
Các bước thực hiện như sau:
+/ Chuẩn bị các ống chứa mẫu (Eppendorf hoặc ống penicillin) đánh số thứ tự từ 100, 10-1, 10-2 ...10-10 hút 9ml môi trường nuôi tảo vào các ống trừ ống 100.
+/ Hút 10ml dịch mẫu thu từ ngoài tự nhiên cần phân lập vào ống 100 sau đó hút 1ml dịch tảo này sang ống 10-1, thay đầu pipette và hút 1ml dịch tảo từ ống 10-1 sang ống 10-2, lại thay đầu pipette và hút 1ml dịch tảo từ ống 10-2 sang ống 10-3, cứ tiếp tục quy trình như vậy cho đến 10-10.
+/ Các ống chứa mẫu pha lỗng được ni trong điều kiện ánh sáng yếu và thường xuyên kiểm tra xem tảo phát triển như thế nào.